Name: דגם 3D Organotypic משותף תרבות תמיכה למניעת הפצת נשק מדולרי הרתי אפיתל תאים, התמיינות וביטוי גנים מופקר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 47 s
Description: למד שיטת תרבית תלת-ממדית לאפיתל תימי מדולרי באמצעות מערכת אורגנוטיפית משותפת. שיטה זו משפרת התמיינות, התפחות וביטוי גנים של תאי mTEC בהשוואה לתרביות דו-ממדיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי המרכז הגרמני לחקר הסרטן (DKFZ), קונסורציום האיחוד האירופי "סובלנות", ה-Deutsche Forschungsgemeinschaft (SFB 938) וה-Landesstiftung Baden-Württemberg.

מחקר זה אושר על ידי ועדת האתיקה של קרלסרוהה Regierungspräsidium. כל בעלי החיים שוכנו בתנאי הפתוגן ללא ספציפיים במרכז הגרמני לחקר הסרטן (DKFZ). לכל גורי עכבר ניסויי התרבות החל 1-7 ימים של גיל היו בשימוש. 1. בידוד של mTECs מקורנית הערה: שלבי העיכול הבאים בוצעו כפי שתואר לעיל 1 בתנאים סטריליים עם כמה שינויים כדלקמן. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לערוף את גורי העכבר ולהסיר את בלוטת התימוס. מניחים את thymi על קרח בצלחת פטרי המכילה בינוני RPMI 1640 (FCS המכיל 5%). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את thymi לחתיכות דקות, קטנות ומקום בצינור תחתון עגול עם ~ 5-30 מיליליטר תקשורת RPMI ומערבב בעדינות באמצעות מגנט במשך 10 דקות ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן, למזוג supernatant המכיל בעיקר thymocytes ולעכל את רצף הרקמה שנותר עם סיבוב של collagena אחדIV se הסוג (0.2 מ&quot;ג / מיליליטר ו -57 U / ml concentartion הסופי) במשך 15 דקות כל אחד על 37 מעלות צלזיוס, ואחריו collagenase / dispase (0.2 מ&quot;ג / מיליליטר וריכוז סופי 1.2 U / ml) במשך 25 דקות כל אחד ב 37 מעלות צלזיוס באמבט מים עם ערבוב מגנטי עד thymi מתעכל לגמרי. השתמש אנזים 1 מיליליטר ל02:58 thymi. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתסיס את הרקמה אחת לדקות 7-10 עם פיפטה פסטר. בריכת collagenase / השברים dispase ולסנן דרך גזה 70 מיקרומטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעשיר את mTECs ידי תא מגנטי מיון (MACS). לבצע הטיהור של mTECs ידי תא מגנטי מיון כפי שתואר לעיל 11, ומוצג באיור 1. הערה: למיון מגנטי של mTECs השתמשנו בנוגדנים הבאים: אנטי CD80-PE (16-10A1, שימוש ב1: 100 דילול) ואנטי-EpCAM-יו (G8.8, שימוש ב1: 100 דילול) 12. mTECs בוגר והבשל באמצעות MACS הוגדר כ: CD45 - EpCAM + CD80 - CD45 ו-- CD80 + respectivאיליי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר טיהור MACS (טוהר mTECs בוגר = 83.1 ± 6.3% וmTECs הבוגר = 79.23 ± 3.42%), זרע mTECs על תרבויות organotypic כמתואר להלן (סעיף 2.3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחלופין, סוג mTECs ידי FACS (באמצעות 100 זרבובית מיקרומטר) לאחר דלדול CD45 MACS באמצעות הנוגדנים הבאים: אנטי CD45-PerCP (30-F11, שימוש ב1: 100 דילול), אנטי-Ly51-FITC (6C3, להשתמש ב1 : 100 דילול), אנטי-EpCAM-Alexa647 (G8.8, שימוש ב1: 500 דילול) ושימוש אנטי CD80-PE (16-10A1, בשעה 1: 100 דילול). תכלול תאים מתים באמצעות יודיד propidium (1: 5,000) (יום 4). mTECs בוגר והבשל באמצעות FACS הוגדר כ: PI - CD45 - Ly51 - EpCAM + CD80 - וPI - CD45 - Ly51 - EpCAM + CD80 +, בהתאמה. </li></ol> 2. 3D Organotypic שיתוף תרבויות (OTCs) הערה: בונה 3D-עורי לטיפוח organotypic של keratinocytes הוכן כפי שתואר לעיל 9,13. בכל צעדי תאים הודגרו על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2. OTCs באמצעות mTECs הוכן עם שינויים קלים באופן הבא. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת fibroblasts האדם הערה: fibroblasts עורי האנושי התקבל מתרבויות explant של הדרמיס-epidermised דה כפי שתואר לעיל 9. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בקיצור, לחתוך רצועות של עור אנושי (~ 5 סנטימטר אורך) ולטפל בthermolysin (0.5 מ&quot;ג / מיליליטר מלוחים עם 10 7.4 מ&quot;מ Hepes pH) O / N ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן, להפריד את העור מהעור באמצעות מלקחיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דק לחתוך את העור לחתיכות קטנות, מקום בצלחת פטרי 10 סנטימטרים ולאפשר לו להתייבש במשך 1-2 שעות בזרימת אוויר סטרילי. להשלים את explants באופן קבוע עם DMEM המכיל 20% FBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפצל fibroblasts צמיחה החוצה כאשר מחוברות (בדרך כלל סביב 3 שבועות) באמצעות טריפסין 0.1% ולוודא כי explants ימשיך לדבוק הצלחת לקון נוסףסיבובי secutive של תולדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרחב את fibroblasts מאותו explants עד 3 פעמים בDMEM עם 10% FBS וcryo-לשמר אותם 14. השתמש באותה הקבוצה של פיברובלסטים לכל סדרת ניסויים. הערה: fibroblasts לא היו מוקרן להגדרה של שווה עורי. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת הפיגום <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את 0.4-0.6 מ&quot;מ ויסקוזה העבה, חומר סיבי לא ארוג (פרטי מוצר בתמיכת גיליון Excel) לעיגולים מסומנים היטב באמצעות אגרופן מתכת בקוטר 11 מ&quot;מ חד שיתאים בדיוק ל -12 מוסיף גם מסנן. אז למקם אותו לתוך 12 הוספת מסנן היטב (הקרום הנקבובית נימי פוליאסטר, גודל 3 מיקרומטר נקבובית) כפיגום. מניחים את התקנת מסנן המלאה לתוך צלחת 12 גם סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את הג&#39;ל הפיברין באמצעות דבק הפיברין-ערכה לניתוח המורכב משילוב של פיברינוגן ותרומבין. טרום לדלל fibrinogen- כמו גם תרומבין-הרכיב של הערכה 8 מ&quot;ג / מיליליטר ו -10יחידות / מיליליטר, בהתאמה. וליחיד של צלחת 12 גם פעל באופן הבא. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל 100 פיברינוגן μl (8 מ&quot;ג / מיליליטר) עם 100 שנאגרו מלוח פוספט μl (PBS) ללא Ca 2 + Mg 2 + ו, pH 7.0. לדלל 100 תרומבין μl (10 יחידות / מיליליטר) עם FCS 100 μl מכיל 270,000 fibroblasts. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לוותר 200 μl של תרומבין המכיל fibroblasts תא-לערבב על הפיגום, ולכך יש להוסיף פיברינוגן μl 200 (1: 1 תערובת), וכתוצאה מכך ריכוז סופי של פיברינוגן של 2 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​ושל תרומבין של 2.5 יחידות / מיליליטר. מערבבים היטב ולהפיץ באופן שווה על פני כל השטח של הפיגום על ידי pipetting העדין (יום 1). הערה: לאחר 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס קריש מצרף fibroblasts יהיה יצר, מילוי לחלוטין החללים הפנימיים של הפיגום ויצר משטח עליון חלק. </li></ol></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות משותפת עם mTECs <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטרום-תרבות, submerse תרבויות האיבר בDMEM עם 10% FBS, חומצת 50 מיקרוגרם / מיליליטר L-אסקורבית וng 1 / מיליליטר TGF-β1 עם שינוי בינוני בכל יום אחר במשך 4-5 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום זריעת Mtec, להחליף את המדיום על ידי מדיום rFAD (1: 1 DMEM + DMEM / F12) עם 10% FBS, 10 -10 רעלן הכולרה, 0.4 מ&quot;ג / מיליליטר הידרוקורטיזון, חומצה אסקורבית L-M 50 מיקרוגרם / מיליליטר, יגנד RANK (0.1 מיקרוגרם / מיליליטר) ו -500 יחידות / מיליליטר של Aprotinin, ובכך מונע פירוק פיברין מוקדמים על ידי פרוטאזות סרין מופרש על ידי fibroblasts. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 7-8 שעות מאוחר יותר, הגדרת שיתוף התרבויות על ידי זריעת 250,000 mTECs (או mTECs מלא, או CD80 הפלא ותת היי CD80), בהיקף של 100 לכל גם μl על גבי פיגום פיברובלסטים. ספירת התאים באמצעות תא נויבאואר (יום 4). הערה: בכל עת תרבויות organotypic 3D התימוס הם טבלו בתקשורת בניגוד OTCs עור אשר-הרים אוויר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי 24 שעות דגירה, לספק את התרבויות עם מדיום (תמורה כוללת בינונית) כאמור לעיל (שלב 2.3.2) עכשיו containing כמות מופחת של Aprotinin, 250 יחידות / מיליליטר (יום 5). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת להעריך את פעילות השגשוג של mTECs, להוסיף edu (6.7 מיקרומטר / מיליליטר, כלומר, 10 מיקרומטר / טוב) לOTCs במשך 4 שעות לפני סיום התרבויות. לבצע צביעת cryo-סעיפי OTC כפי שתואר בערכת edu ההדמיה בשילוב עם שיתוף הכתמה של קרטין 14. קביעת מדדי השגשוג של mTECs, או על ידי תאי K14 + edu + לספור בשני חלקים של כל דגימת תרבות או על ידי זרימה cytometry (edu cytometry זרימה, סעיף 1.7, אבל במקום Ly51-FITC להשתמש 15 CDR1-PB בדילול 1: 100 ו2.3.6.4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות 4-7 ימים של התרבות המשותפת, לסיים את OTCs ותהליך לבידוד RNA, cryo-חתך או ניתוח FACS (יום 8-11). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לסיים את התרבויות באמצעות מלקחיים, הפרדה המקבילה פיגום / עורי מהמסנן של להכניס גם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקריו-חתך, להטביע את כל OTC במתחם OCT ולהקפיא בliאדי חנקן לירות לפני cryo-חתך. הכן 5-7 מיקרומטר חלקים עבים OTC באמצעות cryostat ולאחסן ב -20 ° C עד שימוש. לאימונו-היסטוכימיה של OTCs בחתך cryo להשתמש אנטי-קרטין 14 (AF64, שימוש ב1: 1,000 דילול), ואנטי-vimentin (GP53, שימוש ב1: 100 דילול) נוגדנים. לבצע צביעת אימונו-היסטוכימיה העקיפה באמצעות נוגדנים משני בהתאמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבידוד RNA, להוסיף 1 מיליליטר Denaturing פתרון (המכיל פנול וthiocyanate guanidinium) בכובע בורג של צינור חופשי 2 מיליליטר RNase. חותך את כל OTC לחתיכות עם אזמל ולהוסיף לתוך הצינור המכיל פתרון denaturing. מכאני לגרוס OTCs עם מכשיר FastPrep פעמיים למשך 30 שניות במהירות של 6.0, מקום בין על קרח למשך 2 דקות (המדגם ניתן לאחסן ב -80 ° C לאחר שלב זה). אם קפוא ב -80 ° C, להפשיר על קרח. צנטריפוגה הצינורות ב11,500-13,000 סל&quot;ד במשך 10 דקות ב 4 מעלות צלזיוס. מעבירים את supernatant לצינור טרי, דגירה של 5 דקות ב RT וFפרוטוקולי בידוד RNA ollow באמצעות מיצוי thiocyanate-פנול, כלורופורם guanidinium חומצה כפי שתואר על ידי היצרן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לניתוח FACS, להסיר את הפיגום ולהפריד את הקרום מהפיברין / פיברובלסטים / ג&#39;ל Mtec. דק לחתוך ג&#39;ל עם אזמל ולעכל אותו בצינור FACS ל~ 20 דקות או עד שעכל לחלוטין עם 2 מיליליטר של collagenase / dispase על 37 מעלות צלזיוס באמבט מים עם ערבוב מגנטי. להתסיס את פתרון האנזים עם פיפטה פסטר פעם כל 5 דקות. לאחר עיכול שלם, לסנן את ההשעיה התא דרך מסנן 70 מיקרומטר; להכתים את ההשעיה התא בודדת באמצעות הנוגדנים כפי שתואר ב1.7 ולנתח ידי cytometry זרימה. </li></ol></li></ol></li></ol>

<ol><li>Derbinski, J., Schulte, A., Kyewski, B., Klein, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Promiscuous+gene+expression+in+medullary+thymic+epithelial+cells+mirrors+the+peripheral+self%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Promiscuous gene expression in medullary thymic epithelial cells mirrors the peripheral self.</a> Nat Immunol. 2, 1032-1039 (2001).</li>
<li>Kyewski, B., Klein, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+central+role+for+central+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+review+of+immunology%22%5BJournal%5D)">A central role for central tolerance.</a> Annual review of immunology. 24, 571-606 (2006).</li>
<li>Bonfanti, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microenvironmental+reprogramming+of+thymic+epithelial+cells+to+skin+multipotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Microenvironmental reprogramming of thymic epithelial cells to skin multipotent stem cells.</a> Nature. 466, 978-982 (2010).</li>
<li>Kont, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+Aire+regulates+the+expression+of+tissue-restricted+antigens%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Immunology%22%5BJournal%5D)">Modulation of Aire regulates the expression of tissue-restricted antigens.</a> Molecular Immunology. 45, 25-33 (2008).</li>
<li>Mohtashami, M., Zuniga-Pflucker, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+architecture+of+the+thymus+is+required+to+maintain+delta-like+expression+necessary+for+inducing+T+cell+development%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional architecture of the thymus is required to maintain delta-like expression necessary for inducing T cell development.</a> J Immunol. 176, 730-734 (2006).</li>
<li>Palumbo, M. O., Levi, D., Chentoufi, A. A., Polychronakos, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+proinsulin-producing+medullary+thymic+epithelial+cell+clones%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of proinsulin-producing medullary thymic epithelial cell clones.</a> Diabetes. 55, 2595-2601 (2006).</li>
<li>White, A., Jenkinson, E., Anderson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reaggregate+thymus+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Reaggregate thymus cultures.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2008).</li>
<li>Stark, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidermal+homeostasis+in+long-term+scaffold-enforced+skin+equivalents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Investig+Dermatol+Symp+Proc%22%5BJournal%5D)">Epidermal homeostasis in long-term scaffold-enforced skin equivalents.</a> J Investig Dermatol Symp Proc. 11, 93-105 (2006).</li>
<li>Boehnke, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+fibroblasts+and+microenvironment+on+epidermal+regeneration+and+tissue+function+in+long-term+skin+equivalents%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Effects of fibroblasts and microenvironment on epidermal regeneration and tissue function in long-term skin equivalents.</a> Eur J Cell Biol. 86, 731-746 (2007).</li>
<li>Pinto, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+organotypic+coculture+model+supporting+proliferation+and+differentiation+of+medullary+thymic+epithelial+cells+and+promiscuous+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">An organotypic coculture model supporting proliferation and differentiation of medullary thymic epithelial cells and promiscuous gene expression.</a> J Immunol. 190, 1085-1093 (2013).</li>
<li>Gabler, J., Arnold, J., Kyewski, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Promiscuous+gene+expression+and+the+developmental+dynamics+of+medullary+thymic+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Promiscuous gene expression and the developmental dynamics of medullary thymic epithelial cells.</a> Eur J Immunol. 37, 3363-3372 (2007).</li>
<li>Farr, A., Nelson, A., Truex, J., Hosier, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+heterogeneity+in+the+murine+thymus%3A+a+cell+surface+glycoprotein+expressed+by+subcapsular+and+medullary+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22The+journal+of+histochemistry+and+cytochemistry+%3A+official+journal+of+the+Histochemistry+Society%22%5BJournal%5D)">Epithelial heterogeneity in the murine thymus: a cell surface glycoprotein expressed by subcapsular and medullary epithelium.</a> The journal of histochemistry and cytochemistry : official journal of the Histochemistry Society. 39, 645-653 (1991).</li>
<li>Stark, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Authentic+fibroblast+matrix+in+dermal+equivalents+normalises+epidermal+histogenesis+and+dermoepidermal+junction+in+organotypic+co-culture%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Authentic fibroblast matrix in dermal equivalents normalises epidermal histogenesis and dermoepidermal junction in organotypic co-culture.</a> Eur J Cell Biol. 83, 631-645 (2004).</li>
<li>Schoop, V. M., Mirancea, N., Fusenig, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidermal+organization+and+differentiation+of+HaCaT+keratinocytes+in+organotypic+coculture+with+human+dermal+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Epidermal organization and differentiation of HaCaT keratinocytes in organotypic coculture with human dermal fibroblasts.</a> J Invest Dermatol. 112, 343-353 (1999).</li>
<li>Rouse, R. V., Bolin, L. M., Bender, J. R., Kyewski, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+antibodies+reactive+with+subsets+of+mouse+and+human+thymic+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+journal+of+histochemistry+and+cytochemistry+%3A+official+journal+of+the+Histochemistry+Society%22%5BJournal%5D)">Monoclonal antibodies reactive with subsets of mouse and human thymic epithelial cells.</a> The journal of histochemistry and cytochemistry : official journal of the Histochemistry Society. 36, 1511-1517 (1988).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שום ניגוד כספי או מסחרי של עניין.

לצד RTOCs, OTCs 3D היה עדיף בהרבה על ידי במונחים של בידול TEC ותחזוקה / אינדוקציה PGE (טבלה 1) בהשוואה לאחרים (i) &quot;תרבויות 3D פשוטות&quot; באמצעות - fibroblasts לבד בלי הפיגום; (Ii) מערכות 2D באמצעות - תאי פיברובלסטים / מזין שיתוף תרבותי עם Tecs 10, (iii) תאי 3T3-J2 בי השיבוטים TEC לפתח, אבל PGE הולכים לאיבוד, (iv) matrigel או (v) רכיבי ECM (נתונים שלא פורסמו). PGE נשמר לעד 7 ימים בOTCs 3D, להיות נקודת הזמן האופטימלית לאחר מכן 4 ימים, PGE מתחיל לרד...

thymocytes פיתוח מהווה כ 98% מהתימוס, ואילו 2% הנותרים מורכב ממגוון רחב של תאים שביחד מרכיב את סטרומה הרתי (כלומר, תאי אפיתל, תאים דנדריטיים, מקרופאגים, תאי B, fibroblasts, תאי האנדותל). התאים החיצוניים של קליפת המוח אפיתל (cTECs) להשיג הגירה של תאים פרו-T ממח העצם, האינדוקציה שושלת תא T בתאים טרום-T multipotent וסלקציה חיובית של עצמי MHC מוגבל thymocytes בשל. התאים הפנימיים הלשדיים הרתי אפיתל (mTECs) מעורבים באינדוקצית סובלנות של thymocytes אלה עם זיקה גבוהה TCR למתחמי פפטיד העצמי / MHC או על ידי בחירה שלילית התרמה או הסטייה שלהם לשושלת תא T רגולטורים. בהקשר של אינדוקציה סובלנות מרכזית, mTECs הם ייחודיים בכך שהם מבטאים מגוון רחב של-אנטיגנים עצמי מוגבל רקמה (Tras) כך שיקוף עצמי ההיקפית. תופעה זו נקראת ביטוי גנים מופקר (PGE)1,2. המחקרים העדכניים ביותר בסוג התא מרתק זו מסתמכים על תאים מבודדים vivo לשעבר, כמו מערכות תרבות 2D לטווח קצר שונות הביאו תמיד בהפסד של PGE ומולקולות רגולטור מפתח כמו כיתת MHC II, FoxN1 וAire בתוך 2 הימים הראשונים 3-6 . זה נשאר עם זאת ברור, שרכיבים ותכונות של meshwork 3D שלם של בלוטת התימוס מסוימים היו חסרות במודלי 2D. התרבות מחדש צבירת הרתי האיבר (RTOC) לא הייתה כל כך הרבה במערכת רק 3D, המאפשרת חקר התפתחות תאי T, מצד אחד, וביולוגיה של תא סטרומה, ומצד שני, במייקרו-סביבת הרתי שלם 7. ובכל זאת, יש לי RTOCs מגבלות מסוימות, כלומר, הם כבר מכילים תערובת מורכבת של תאים, דורשים ההזנה של תאי סטרומה עובריים ולסבול תקופה תרבות מקסימלי של 5 עד 10 ימים. חוסר רדוקציוניסט במערכות תרבות מבחנה עכב את המחקר שלכמה היבטים של organogenesis פיתוח התא והרתי T לפחות רגולציה לא המולקולרית של PGE והקשר שלה לביולוגיה התפתחותית של mTECs. בשל הקרבה-ההתייחסות של הארגון המובנה של תאי האפיתל של עור והתימוס, בחרנו מערכת 3D תרבות organotypic (OTC) שפותח במקור כדי לחקות את הבידול של קרטינוציטים במבחנה ובכך ליצור מקבילה עורי. מערכת OTC מורכבת ממטריצת פיגום אינרטי מעולף עם fibroblasts עורי שלכודים בג&#39;ל הפיברין, על שקרטינוציטים הם זורעים 8,9. כאן, החלפנו קרטינוציטים עם mTECs המטוהר. תוך שמירה על התכונות הבסיסיות של מודל זה, אנו מותאמים פרמטרים מסוימים. במודל OTC אימץ mTECs התרבו, עבר התמיינות מסוף ומתוחזק זהות Mtec וPGE, מחקה וכך באופן הדוק בפיתוח mTECs vivo <sup&gt; 10. הערה טכנית זה מספקת פרוטוקול מפורט המאפשר הגדרת השלבים של OTCs התימוס.

<table><tbody><tr><td>עכברים בהריון C57BL/6&nbsp;</td>עמודות <td>נהר צ'ארלס WIGA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>LS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>עמודות MS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>CD45 מיקרו-חרוזים, עכבר</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-052-301</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו-חרוזים נגד PE</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-048-801</td><td></td></tr><tr><td>סטרפטווידין מיקרו-חרוזים</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-048-101</td><td></td></tr><tr><td>EpCAM (G8.8 -Alexa 647 ו-biotin)</td><td>Ref. 12</td><td></td><td></td></tr><tr><td>נוגדן CD80-PE</td><td>BD Pharmingen</td><td>553769</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן CD45-PerCP</td><td>BD Pharmingen</td><td>557235</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן Ly51-FITC</td><td>BD Pharmingen</td><td>553160</td><td></td></tr><tr><td>CDR1-Pacific Blue</td><td>Ref. 15</td><td></td><td></td></tr><tr><td>נוגדן קרטין 14</td><td>Covance</td><td>PRB-155P</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן וימנטין</td><td>Progen</td><td>GP58</td><td></td></tr><tr><td>Cy3 מצומד AffiniPure Goat אנטי-ארנב IgG (H+L)</td> <td>Jackson ImmunoResearch&nbsp;</td><td>111-165-003</td><td></td></tr><tr><td>Alexa 488-מצומד AffiniPure F(ab')2 שבר עז אנטי-חזיר ניסיונות IgG (H+L)</td><td>Jackson ImmunoResearch&nbsp;</td><td>106-546-003</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן משני נגד ארנב עיזים IgG (H+L), Alexa Fluor 488</td><td>בדיקות מולקולריות מצומדות (Invitrogen GmbH)</td> <td>A-11008</td><td></td></tr><tr><td>Click-iT EdU Alexa Fluor 594 ערכת הדמיה</td><td>Invitrogen</td><td>C10339</td><td></td></tr><tr><td>Click-iT EdU Alexa Fluor 488 ערכת בדיקת ציטומטריית זרימה</td><td>Invitrogen</td><td>C10425</td><td></td></tr><tr><td>מוסיף מסנן 12 בארות (thincerts)</td> <td>Greiner bio-one</td><td></td><td></td>657631</tr><tr><td>צלחת 12 בארות</td><td>גריינר</td><td>665180-01</td><td></td></tr><tr><td>Jettex 2005/45</td><td>ORSA, ג'ורלה מינור, איטליה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פיברינוגן TISSUECOL-Kit אימונוס</td><td>בקסטר</td><td></td><td></td></tr><tr><td>תרומבין TISSUECOL-Kit אימונוס</td><td>בקסטר</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Serva</td><td>47302.03</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Lonza</td><td>BE12-604F</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>לונזה</td><td>BE12-719F</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Gibco</td><td>15630-049&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>FBS Gold</td><td>GE Healthcare</td><td>A11-151</td><td></td></tr><tr><td>אפרוטינין (טרסילול)</td><td>Bayer</td><td>4032037</td><td></td></tr><tr><td>רעלן כולרה</td>, <td>ביומול</td><td>G117</td><td></td></tr><tr><td>הידרוקורטיזון</td>, <td>סרומד (ביוכרום)</td><td>K3520</td><td></td></tr>, <tr><td>חומצה L-אסקורבית</td>, <td>סיגמא</td><td>A4034</td><td></td></tr>, <tr><td>TGF-&szlig; 1</td><td>Invitrogen</td><td>PHG9214</td><td></td></tr><tr><td>RANKL</td><td>R& D systems</td><td>462-TR-010</td><td></td></tr><tr><td>Thermolysin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>&nbsp; T-7902</td><td></td></tr><tr><td>OCT תרכובת</td><td>TissueTek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>טריזול (המכונה גם תמיסת דנטורינג - מיצוי חומצה גואנידיניום תיוציאנט-פנול-כלורופורם)</td><td>Invitrogen</td><td>10296028</td><td></td></tr><tr><td>FastPrep FP120</td><td>תרמו מדעי</td><td></td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז סוג IV&nbsp;</td><td>CellSystems</td><td>LS004189</td><td>0.2 מ"ג/מ"ל ו-57U/ml סופי</td></tr>.<tr><td>Neutrale Protease (Dispase)</td><td>CellSystems</td><td>LS002104</td><td>0.2 מ"ג/מ"ל ו-1.2U/ml סופי</td></tr>.<tr><td>DNase I&nbsp;</td><td>רוש</td><td>11 284 932 001</td><td>25 ומיקרו; g/ml conc סופי.</td></tr></tbody></table>

דגם 3d organotypic משותף תרבות תמיכה למניעת הפצת נשק מדולרי הרתי אפיתל תאים, התמיינות וביטוי גנים מופקר

3D Organotypic Co-culture Model Supporting Medullary Thymic Epithelial Cell Proliferation, Differentiation and Promiscuous Gene Expression

פיתוח תא T תוך-הרתי דורש meshwork תלת-ממדי מורכב מורכב מתאי סטרומה שונים, כלומר, תאים שאינם-T. Thymocytes לעבור פיגום זה בצו של זמן ומרחב מתואם מאוד בעת שעברה ברצף נקודות בדיקת חובה, כלומר, מחויבות שושלת תא T, ואחריו דור רפרטואר קולט תא T ובחירה לפני יצואם לפריפריה. שני סוגי תאי התושב גדולים ויוצרים פיגום זה הם תאים בקליפת המוח (cTECs) והלשדיים הרתי אפיתל (mTECs). תכונה מרכזית של mTECs היא הביטוי המופקר כביכול של אנטיגנים-מוגבל רקמות רבות. אנטיגנים-מוגבל רקמות אלו מוצגים לה בוסר thymocytes במישרין או בעקיפין על ידי mTECs או תאים דנדריטים הרתי, בהתאמה וכתוצאה מכך סובלנות עצמית. דגמים מתאימים במבחנה חיקוי המסלולים ופונקציות ההתפתחותי של cTECs וmTECs הם Lac כרגעהמלך. זה חוסר מודלים ניסיוניים נאותים יש למשל הקשו הניתוח של ביטוי גנים מופקר, שעדיין הוא הבין היטב ברמה התאית ומולקולרית. מתאמנים את מודל 3D organotypic שיתוף תרבות לתרבות לשעבר vivo mTECs המבודד. מודל זה תוכנן במקור כדי לטפח קרטינוציטים בדרך כגון כדי ליצור מקבילה עור במבחנה. מודל 3D נשמר תכונות פונקציונליות מרכזיות של ביולוגיה Mtec: התפשטות (i) ובידול מסוף של CD80 lo, Aire-השלילי להיי CD80, mTECs Aire-החיובי, (ii) היענות לRANKL, וכן (iii) ביטוי מתמשך של FoxN1, Aire וגנים-מוגבל רקמה בmTECs היי CD80.

אנחנו אימצנו מודל 3D organotypic התרבות המשותפת (3D OTC) שפותח במקור לתרבות לטווח ארוכה במבחנה של קרטינוציטים 9. mTECs המועשר MACS (ראה איור תכנית העשרת MACS 1) היו זורעים על פיגום הכולל ג&#39;ל הפיברין ופיברובלסטים בפח. Fibroblasts לספק המטריצה ​​חיונית תאית (ECM) התומכת mTECs במבחנה. MTECs עובדו בOTCs ל4-14 ימים בנוכחות RANKL בתרבויות שקועות בניגוד קרטינוציטים, שהם מחקים את הסביבה שלהם in vivo (ראה א...

חקר תאי אפיתל תימיים מדולריים במבחנה לא הצליח ברובו, מכיוון שמערכות התרבית הדו-ממדיות הנוכחיות אינן מחקות את תרחיש in vivo. מערכת התרבית התלת-ממדית המתוארת כאן - מודל תרבית אורגנוטיפית של עור שונה - הוכיחה את עצמה כעדיפה בסיכום התפשטות mTEC, התמיינות ותחזוקה של ביטוי גנים מופקר.

דגם 3D Organotypic משותף תרבות תמיכה למניעת הפצת נשק מדולרי הרתי אפיתל תאים, התמיינות וביטוי גנים מופקר

Intra-thymic T cell development requires an intricate three-dimensional meshwork composed of various stromal cells, i.e., non-T cells. Thymocytes traverse ...

המטרה הכללית של נוהל זה היא לתרבית תאי אפיתל מדיולריים של הטימוס, או mtech, במערכת תרבית אורגנוטיפית תלת-ממדית או מערכת OTC. דבר זה מושג תחילה על ידי הנחת חומר פיגום סיבי לתוך רכיב סינון של 12 בארות, ולאחר מכן על ידי שכבה של ג'ל פיברין שהוכן טרי ומכיל פיברובלסטים של עור אנושי. לאחר ארבעה עד חמישה ימים של תרבית מקדימה, מניחים את ה-MTS על הפיגום ומגדלים אותם בתנאי תרבית שקועה.בסופו של דבר, ניתן לבצע אימונוהיסטוכימיה, בידוד RNA ובדיקות עובדות על התרביות המשולבות כדי להעריך את התפתחות ה-CED Mtech. היתרון המרכזי של מערכות תרבית משולבת אורגנוטיפיות בתלת-ממד לעומת מערכות תרבית דו-ממדיות קיימות הוא שהן עליונות בהרבה בשיחזור הדיפרנציאציה, הפרוליפרציה והשמירה על ביטוי גנים פרומיסקוסי של ה-mtech. היום תדגים טכניקה זו איריס מרטין, טכנאית מהמעבדה השותפה שלנו.כאשר הפיברובלסטים העוריים האנושיים מגיעים למצב של התלכדות (confluency), הכינו את סיבי הפיגום על ידי הרתחה, ייבוש וגיהוץ של חתיכות בעובי 0.4 עד 0.6 מילימטר של חומר סיבי לא ארוג מסוג visco. השתמשו במחורר מתכתי כדי לחתוך אותם לעיגולים בקוטר 11 מילימטר. הניחו את החומר הסיבי הגזור בין שתי זכוכיות כיסוי, עטפו את הזכוכיות בנייר אלומיניום והעבירו אותן באוטוקלאב.לאחר העיקור, מקמו את התבניות (inserts) בתוך בארות של פלטת 12 בארות סטרילית, ולאחר מכן מקמו כל פיגום (scaffold) בתבנית המתאימה לו. בשלב הבא, ערבבו 2.7 × 10⁵ פיברובלסטים ב-100 µL של סרום עגל עוברי (fetal calf serum) יחד עם 100 µL של תרומבין מהול טרי עבור כל פיגום. העבירו את תערובת התרומבין והפיברובלסטים על כל אחד מהפיגומים, ולאחר מכן הוסיפו 200 µL של פיברינוגן מהול טרי.לאחר מכן, ערבבו את תערובת התאים בתוך כל באער על ידי הפצה אחידה של התמיסה על פני כל הפיגום באמצעות פיפטינג עדין. התמונה מציגה את גידול הפיברובלסטים העוריים האנושיים עם ג'ל פיברין ביום הראשון וביום הרביעי של התרבית. הכינו ג'ל בדיקה בבאר בקרה ללא פיגום, כדי לעקוב במקביל גם אחר הזמן וההיווצרות של הקרישים בנקודת זמן זו.העריכו את היווצרות הקריש באמצעות קצה של פיפטה או על ידי היפוך של הפלטה; לאחר שהפיברובלסטים התקשרו לקריש, השקיעו את תרביות האיברים בתווך מודגש בחומצה סורבית וב-TGF beta one למשך ארבעה עד חמישה ימים. ביום זריעת ה-mtech, החליפו תווך זה בתווך RFAD המכיל 500 units per milliliter של a proin כדי למנוע פיברינוליזה מוקדמת. שבע עד שמונה שעות לאחר מכן, זרעו 2.5 × 10⁵ MT E התלויים ב-100 µL של RFAD על גבי כל פיגום, והדגירו את תרביות השיתוף למשך 24 שעות. למחרת, החליפו את התווך בתווך טרי המכיל 250 units per milliliter של a proin למשך ארבעה עד שבעה ימי תרבית נוספים.כדי להעריך את התפתחות ה-m Texs באמצעות אימונוהיסטוכימיה בסוף התרבית, השתמשו בפינצטה כדי להפריד את המקבילה העורית של הפיגום (scaffold dermal equivalent) מהפילטר של כל באר. הכניסו וטמנו את ה-OTCs בתרכובת OCT. הקפיאו את ה-OTCs בפאזה הגזית מעל חנקן נוזלי כדי לבודד את ה-O-T-C-R-N-A.לאחר הפרדת רקמת הפיגום מהמסננים, השתמש בסכין מנתחים כדי לחתוך את ה-OTCs לחתיכות והעבר אותן לשפחור נקי מ-RNA בנפח שני מיליליטר המכיל מיליליטר אחד של תמיסת דנטורציה. באמצעות מכשיר fast prep, גרוס מכנית את ה-OTCs פעמיים במהירות 6.0 למשך 30 שניות בכל פעם, עם הפסקה של שתי דקות על קרח בין גריסה לגריסה. לאחר מכן, בודד את ה-RNA באמצעות מיצוי acid guad dium thiocyanate phenyl chloroform כפי שמתואר על ידי היצרן.על מנת לנתח את ה-OTCs באמצעות ציטומטריית זרימה, הסר את הממברנה והפרד את הפיגום (scaffold) מהג'ל של הפיברין והפיברובלסטים. לבסוף, חתוך את הג'ל בעזרת סכין מנתחים כפי שהודגם כעת. העבר את הרקמה לשפופרת FACS.הוסף שני מיליליטר של משחת collagenase. לאחר מכן, הנח את המבחנה בבן-מריה בטמפרטורה של 37 °C עם ערבוב מגנטי למשך 20 דקות. ערבב בעזרת הפ pipette פעם בחמש דקות עד שהרקמה תעוכר לחלוטין.סננו את תרחיף התאים שהתקבל דרך מסננת של 70 micrometer וצבעו את התאים באמצעות הנוגדנים המתאימים כפי שמוצג. ניתן לזהות את ה-MTS על פי ביטוי keratin 14, מה שמאפשר להבדיל ביניהם בקלות מהפיברובלסטים החיוביים למנטון. באופן מעניין, תאי M Texs לא בשלים ובשלים מראים דפוסי צמיחה שונים אך בעלי הדירות גבוהה בתרבית.תאי ה-M Texs הבלתי בוגרים עם ביטוי נמוך של CD 80 D, למשל, נוטים להיווצר כשכבות כפולות במגע הדוק עם הפיברובלסטים. בעוד שתאי ה-MTS עם ביטוי גבוה של CD 80 D נוטים להיווצר כאגרגטים תאיים דחוסים המוגבלים על ידי הפיברובלסטים, תתי-האוכלוסיות של ה-mtech לא רק שורדים אלא גם שגשוגים בתנאי ה-3D OTC שהודגמו, כפי שמעידה התאגמות ה-EDU שלהם. באופן מעניין, תאי ה-MT techs עם ביטוי נמוך של CD 80 proliferated בקצב גבוה יותר בנוכחות rankl.בעוד שההפך נכון עבור MT techs עם ביטוי גבוה של CD 80, לאחר צפייה בסרטון זה, תגייע להבנה טובה של אופן גידול MT.Techs באמצעות 3D OTCs. זוהי שיטה העולה בהרבה על שימוש במערכות תרבית דו-ממדיות (2D) מבחינת התמיינות של ה-techs, שימור והשראה של PGE, עם פוטנציאל למחקר או מניפולציה של מספר פרמטרים.

3d-organotypic-co-culture-model-supporting-medullary-thymic

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

בסרטון זה הכנת 2-dGuo שטופלו reaggregate תרבויות התימוס מודגם.

Reaggregate תרבויות קורנית

וידאו זה מדגים את לנתיחה והסרה של בלוטת התימוס העובר, כמו גם הכנת תרבויות vivo לשעבר של 2-dGuo שטופלו התימוס.

הכנת 2-dGuo שטופלו תרבויות איברים קורנית

סרטון זה מדגים פרוטוקול ליצירת תאי T פונקציונליים ספציפיים לאנטיגן מתאי T לא בוגרים שמקורם ב-iPSC באמצעות מערכת תרבית תימית תלת-ממדית. תרבית משותפת של תאי T לא בוגרים שמקורם ב-iPSC עם עכברים אנדוגניים מדולדלי לימפוציטים, אונות תימיות עובריות, הביאה להבשלה מוצלחת של תאי T ליצירת CD8αβ+ MHC class I+ iPSC שמקורם במהגרים תימיים (iTEs).

מערכת תרבות תימית תלת-ממדית ליצירת מהגרים תימיים שמקורם ב-iPSC

כתב יד זה מתאר טכניקה רכה המבוסס ליתוגרפיה להנדס מערכים אחידים של תלת ממדי (3D) רקמות אפיתל של גיאומטריה מוגדרת מוקפות תאי מטריקס. שיטה זו ניתנת למגוון רחב של סוגי תאים והקשרים ניסיוניים מאפשרת הקרנת תפוקה גבוהה של משכפל זהה.

הנדסה תלת מימדי רקמות אפיתל Embedded בתוך מטריקס

אנו מתארים את הכנת פרוסות הרתי, בשילוב עם cytometry זרימה, יכול לשמש מודל בחירה חיובית ושלילית לפתח תאי T. פרוסות הרתי ניתן להתאים גם לניתוח באתרו של הגירה thymocyte, לוקליזציה, ואיתות באמצעות immunofluorescence ושני פוטון מיקרוסקופית.

הכנה ויישומים של תרבויות Organotypic הרתי Slice

מאמר זה מתאר את השיטה הרומן לייצר אנטיגן הגידול-ספציפי המושרה ביותר תאים גזע מהגרים הרתי (iTE) על ידי תלת מימדי (3D) מערכת התרבות הרתי. iTE הינם תת-קבוצה הומוגנית של תאי T הקשורים היטב לתאי T תמימים עם יכולת התפשטות, היווצרות הזיכרון ודיכוי הגידול.

תלת מימדי הרתי תרבות מערכת לייצר Murine המושרה תא גזע Pluripotent-הגידול הנגזר אנטיגן-מהגרים ספציפיים הרתי

כאן, ארבע שיטות ליצירת אורגנואידים אשכים מתאי אשכים מורין ילודים ראשוניים מתוארים כלומר, מטריצה חוץ תאית (ECM) וסביבות תרבות 2D ותלת-מיוד ללא ECM. טכניקות אלה יש יישומי מחקר מרובים והם שימושיים במיוחד ללימוד פיתוח האשכים ופיזיולוגיה במבחנה.

אקסטרה סלולר מבוסס מטריצה ודור נוסף ללא מטריקס סלולרי של אורגנואידים אשכים Murine

פרוטוקול זה מציע הוראות מפורטות לביסוס אורגנואידים של המעי הדק של מורין, בידוד תאי לימפואידים מולדים מסוג 1 מהלמינה פרופריה של המעי הדק מורין, והקמת תרביות משותפות תלת-ממדיות (3D) בין שני סוגי התאים כדי לחקור אינטראקציות דו-כיווניות בין תאי אפיתל במעי לבין תאי לימפואידים מולדים מסוג 1.

תרבית משותפת של אורגנואידים אפיתליאליים של המעי הדק של מורין עם תאי לימפה מולדים

פרוטוקול זה מתאר בידוד של תימוציטים שליליים כפולים מתימוס העכבר ולאחר מכן התמרה רטרו-ויראלית ותרבית משותפת על מערכת תרבית משותפת של קו תאי סטרומה דמוי מח עצם דמוי דלתא (OP9-DL4) לניתוח פונקציונלי נוסף.

תרבית משותפת והתמרה של תימוציטים מורינים על תאי סטרומה דמויי דלתא המבטאים 4 כדי לחקור אונקוגנים בלוקמיה של תאי T

במאמר זה אנו מתארים פרוטוקול להיווצרות אורגנואידים אנושיים של בלוטת התימוס המופקת מתאי גזע פלוריפוטנטיים (iPSC) הגדלים בהידרוג'לים תלת-ממדיים של פיברין, במטרה לתמוך בהבשלת תאי אפיתל תימיים (TEC) ובתחזוקה ממושכת, כמו גם במבחנה, כמו גם במבחנה.

היווצרות אורגנואידים של בלוטת התימוס האנושית בהידרוג'לים תלת מימדיים של פיברין

כדי לחקור התמיינות ותפקוד תאי T של CD8 במבחנה, ניתן לבודד את תאי ה-CD8 T מהעכבר כדי לעבור תרבית משותפת לטווח ארוך עם אורגנואידים אפיתליים נרתיקיים של עכברים שנדבקו מראש. כאן, אנו מתארים תהליך זה ומעריכים את רכישת סמני תאי T בזיכרון התושבים במהלך קו-קולטורציה.

In-Vitro התמיינות תאי T בזיכרון תושב CD8 באמצעות מערכת קו-קולטורציה של תא אורגנואיד-T אפיתל

למד שיטת תרבית תלת-ממדית לאפיתל תימי מדולרי באמצעות מערכת אורגנוטיפית משותפת. שיטה זו משפרת התמיינות, התפחות וביטוי גנים של תאי mTEC בהשוואה לתרביות דו-ממדיות.

דגם 3D Organotypic משותף תרבות תמיכה למניעת הפצת נשק מדולרי הרתי אפיתל תאים, התמיינות וביטוי גנים מופקר

גלה סרטונים נוספים