הדמיית תהודה מגנטית משופרת ניגודיות דינמית של דגם orthotopic סרטן לבלב עכבר

המטרה הכוללת של הליך זה היא ליישם הדמיית תהודה מגנטית משופרת בניגודיות דינמית או D-C-E-M-R-I על השתלות גידול לבלב אורתוטופיות בעכברים. זה מושג על ידי הוצאת הלבלב מהבטן ולאחר מכן החדרה איטית של תאי סרטן הלבלב האנושיים לזנב הלבלב. לאחר מכן הלבלב חזר לבטן, וכאשר הגידול בקוטר של חמישה עד שבעה מילימטרים, מניחים לוח פלסטיק וסליל משטח על גבי מסת הרקמה.

בסופו של דבר, ניתן לדמיין את המיקרו-וסקולרי של קסנוגרפט הגידול על ידי D-C-E-M-R-I. היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטה קונבנציונלית כמו D-C-M-R-I, של קסנוגרפט גידול תת עורי, הוא שמודלים אורתוטופיים של גידול לבלב מאפשרים הערכה של מיקרו-סביבה ראשונית של הגידול, כולל אספקת דם ניאו-וסקולריזציה ופלישת תאי גידול. ההליך יודגם על ידי שרון סמואל, שותפה למחקר ומארי וורן, טכנאית מחקר, שתיהן מהמעבדה שלנו.

התחל בהנחת עכבר ים מורדם בן שמונה שבועות על כרית חימום לאחר אישור רמת ההרגעה המתאימה על ידי צביטת הבוהן. לאחר מכן, הסר את השיער מהרבע העליון השמאלי של בטן החיה ומתן תרופה משכך כאבים לעור באמצעות מספריים ישרים לקשתית. בצע חתך של סנטימטר אחד בעור ובצפק, והרם בעדינות את הלבלב דרך החתך.

לאחר מכן השתמש במזרק אינסולין של 0.5 מיליליטר, המצויד במחט בגודל 28 כדי להחדיר לאט לאט 2.5 מיליון תאי סרטן לבלב אנושיים ב-30 מיקרוליטר של DMEM לזנב הלבלב. ודא שנוצר גוש קטן בראש הלבלב על ידי התמיסה. לאחר מכן הניחו בעדינות את הלבלב בחזרה לבטן וסגרו את הצפק בעור בשכבה אחת עם שני חמישה תפרי פרולין אפס קטועים.

בדוק את גודל הגידול מדי יום עם מישוש שתי אצבעות של אזור הניתוח. הגידולים בדרך כלל מרגישים צפופים וגבשושיים יותר מהרקמות והאיברים שמסביב. עקוב אחר בעלי החיים מדי יום לאיתור סימני מחלה.

כאשר הגידול מגיע לקוטר של חמישה עד שבעה מילימטרים, הכנס מחט חדה בגודל 30 לקצה אחד של צינור מיקרו פוליאתילן וקצה מחט קהה בגודל 30 לקצה השני. חבר מזרק מיליליטר אחד המכיל חומר ניגוד MRI טרי שהוכן לקצה המחט הקהה, ולחץ לאט על הבוכנה כדי למלא את כל הצינור. לאחר מכן הרחב את ורידי הזנב של החיה מתחת למנורת חום והשתמש במלקחיים של קלי כדי לתפוס את הפיר של המחט החדה בגודל 30.

הכנס בזהירות את המחט לאחד מוורידי הזנב המורחבים והדביק גם את הזנב וגם את הצינור על חתיכת פלסטיק בגודל 10 על 100 מילימטר כדי לשמור על הזנב ישר. לאחר מכן, הניחו את העכבר במיטת בעלי חיים המצוידת במים חמים במחזור כדי לווסת את טמפרטורת הגוף של החיה במהלך ההדמיה. הכנס בדיקת טמפרטורת פי הטבעת גם בשלב זה.

כאשר החיה נמצאת במקומה, יש למרוח לוח פלסטיק מכופף אורתוגונלי לאזור הבטן, לוודא שהגידול ממוקם מאחורי הקצה העליון של הלוח, ולאחר מכן למשוך את הלוח כלפי מטה כשני מילימטרים כדי להבטיח שהגידול נתפס בחוזקה הדביקו את הלוח למיטת החיה. לאחר מכן הדביקו מתמר כרית הנשמה על אזור החזה כדי לעקוב אחר הנשימה של החיה במהלך ההדמיה. כעת הנח את סליל פני השטח בחלק העליון של אזור הגידול והדביק אותו היטב למיטת החיה.

לאחר מכן דחף את מיטת החיה לתוך סורק ה-MR עד שאזור הגידול נמצא במרכז סליל הנפח. החל MRI משוקלל T שני כדי לאתר את הגידול, ואחריו MRI משוקלל T אחד עם זוויות היפוך שונות למיפוי T אחד. לאחר מכן עבור הדמיית D-C-E-M-R-I, יש למרוח T MRI משוקלל אחד עם זווית היפוך קבועה ברציפות לפני, במהלך ואחרי הזרקת ניגודיות ה-MRI המבוססת על גדוליניום.

עקוב אחר הנשימה וטמפרטורת הגוף של בעל החיים באופן רציף במהלך ההדמיה בסוף ההדמיה, הסר את המחט ובדיקות אחרות והנח את החיה מתחת למנורת חום תוך עיסוי רך של אזור הבטן התחתונה. עד שהחיה מתעוררת כמותית. ניתן ליישם בהצלחה D-C-E-M-R-I עבור השתלות גידול לבלב אורתוטופיות.

באמצעות מודל אזור הייחוס, למשל, מפות ניגודיות אלה מדגימות את אזור הגידול בסולם צבעים בדקה אחת לפני הזרקת ה-MR. חומר ניגוד. ובחמש ו-40 דקות לאחר חפיפה עם T שתי תמונות MR במשקל בסולם אפור. העכבר בניסוי זה נשא גידול לבלב אנושי אורתוטופי xenograft.

עקומות שיפור הניגודיות הללו היו ממוצעות מאזור הגידול ואזור השריר הפרה-חולייתי. מפות kts ו-KEP אלה עבור הגידול מדגימות את קצב השטיפה והשטיפה של חומר Mr.Contrast בעת ניסיון הליך TCMI זה, חשוב לוודא שהגידול ממוקם מאחורי הקצה העליון של הלוח.