Name: בינוני אוויר עצם: הכנה ומבדק (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 18 s
Description: למדו הכנת בינוני אוויר עצם מקוביות עצם של לסת חזיר ואת בדיקת הפעילות הביולוגית שלו בתרביות תאים. שיטה זו מאפשרת ניתוח שינויים בביטוי גנים באמצעות PCR בזמן אמת ומספקת כלי חשוב לחקר ביולוגיית העצם והנדסת רקמות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים רוצים להודות לקתרין סוליוז על עזרתה המיומנת.

1. הכנת BCM <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשיג לסתות חזיר מהקצב המקומי הטרי ככל האפשר. מניחים את הלסתות על משטח יציב ולשחרר דש בעובי מלא תשומת לב מיוחדת שלא להשאיר את כל רקמה רכה או periosteum מצורף לעצם. לעבוד בסביבה נקייה ללא הצורך לעבוד תחת מכסה המנוע הזרימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שדש בעובי מלא הוא שוחרר, להשתמש מגרד עצם לקצור את שבבי עצם מהצד הלחי. שים לב שמגרד העצם צריך להיות חד. ידית בחוזקה מגרד העצם ועם תנועות ארוכות לאסוף את העצם. בטל שבבי עצם קטנים יותר 1 מ&quot;מ ש. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לשמור על שבבי עצם ילידים, למקם ישירות שבבי העצם בצלחות פלסטיק של 10 ס&quot;מ קוטר עם המדיום של הנשר השתנה Dulbecco (DMEM) בתוספת אנטיביוטיקה 1% וantimycotics לא לתת להם להתייבש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להעריך את ההשפעה של עיבוד תרמי, שבבי עצם כפופים לפסטור למשך 30 דקות ב 80 מעלות צלזיוס אוהחיטוי במשך 20 דקות ב 121 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להעריך את ההשפעה של איבוד מינרלים, לנער שבבי עצם ב 1 M HCL במשך 4-6 שעות על 4 מעלות צלזיוס ולשטוף שוב ושוב עם מדיום התרבות עד pH ניטראלי. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח כולל של 5 גרם של שבבי עצם לDMEM הטרי 10 מיליליטר בתוספת אנטיביוטיקה 1% וantimycotics לתוך צלחת פלסטיק חדשה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את צלחות פלסטיק באווירת humidified על 37 מעלות צלזיוס במשך 24 שעות. לאחר מכן, BCM קציר. צנטריפוגה BCM ב XG 200 במשך 10 דקות כדי להסיר שאריות, לסנן אותה (ננומטר 0.2) סטרילי, ולשמור aliquots הקפוא ב -80 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להפשיר את מניית BCM מייד לפני השימוש ולהימנע ממחזורים חוזרים ונשנים של הקפאה והפשרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בניסויים שצוינו, לספוג קרומי קולגן עם מדיום BCM או סרום ללא עבור שעה 1 ב RT. לשטוף במרץ הקרומים עם PBS ולהכניס אותם לתוך 96 צלחות גם. קרומים רטובים הם זורעים עם תאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תהליך הכנת BCM מסוכם באיור 1. </li&gt; </ol> 2. bioassays המבוסס על תאי mesenchymal <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאי זרע אנושיים mesenchymal (לדוגמא תאי עצם, חניכיים ופיברובלסטים רצועת חניכיים) לתוך צלחת 12 גם עם ריכוז של 30,000 תאים / 2 סנטימטר. זרע התאים להשתמש מדיום גידול בהיקף של DMEM, 10% בסרום עגל עוברי ואנטיביוטיקה. בואו התאים לצרף N / O הצלחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחק את מדיום התרבות לשטוף את התאים עם PBS מראש חימם על 37 מעלות צלזיוס. לעורר את התאים על ידי הוספת תרבות בינוני סרום ללא מחוממת מראש עם ובלי BCM 20%. מניחים את התאים באווירת humidified על 37 מעלות צלזיוס במשך 24 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחק את מדיום התרבות, לשטוף את התאים עם PBS מראש חימם ולחלץ את RNA על פי הפרוטוקול המועדף עליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם את הריכוז של רנ&quot;א כדי שתהיה לה הכמות של RNA בכל דגימה. הכן cDNAs ולבצע qRT-PCR לנתח את הגנים שנבחרו באמצעות פריימרים מוצגים בטבלה 1. הערה: אלה הם דילולים של כל רכיב: 2x SYBR הירוק, 20x פריימר קדימה, 20x הפוך פריימר, מים DD סטרילי 5x, 5x cDNA. QRT-PCR מתבצע ב40 מחזורים של 95 מעלות צלזיוס 15 שניות ו -60 מעלות צלזיוס 1 דק &#39;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב את רמות הביטוי היחסית על ידי נרמול לGAPDH גן המשק בשיטת Δ (ΔCt) בי ΔCT היא יעד CT - CT GAPDH וΔ (ΔCT) הוא ΔCT המגורה - ΔCT שליטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר בקרת איכות זו, להוסיף BCM למדיום תרבות כדי לעורר את כל סוגי תאים, כולל תאי mesenchymal, תאי hematopoietic או תאי האנדותל. </li></ol>

<ol><li>Buser, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+Stability+of+Early+Implant+Placement+with+Contour+Augmentation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+dental+research%22%5BJournal%5D)">Long-term Stability of Early Implant Placement with Contour Augmentation.</a> Journal of dental research. , (2013).</li>
<li>Chiapasco, M., Casentini, P., Bone Zaniboni, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((augmentation+procedures+in+implant+dentistry%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+journal+of+oral+%26+maxillofacial+implants.+24+Suppl%22%5BJournal%5D)">augmentation procedures in implant dentistry.</a> The International journal of oral & maxillofacial implants. 24 Suppl. , 237-259 (2009).</li>
<li>Giannoudis, P. V., Dinopoulos, H., Bone Tsiridis, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((substitutes%3A+an+update.+Injury%5BTitle%5D)+AND+%2236%2C+Suppl+3.+S20-S27%22%5BJournal%5D)">substitutes: an update. Injury.</a> 36, Suppl 3. S20-S27. , (2005).</li>
<li>Jensen, S. S., Broggini, N., Hjorting-Hansen, E., Schenk, R., Bone Buser, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((healing+and+graft+resorption+of+autograft%2C+anorganic+bovine+bone+and+beta-tricalcium+phosphate.+A+histologic+and+histomorphometric+study+in+the+mandibles+of+minipigs%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+oral+implants+research%22%5BJournal%5D)">healing and graft resorption of autograft, anorganic bovine bone and beta-tricalcium phosphate. A histologic and histomorphometric study in the mandibles of minipigs.</a> Clinical oral implants research. 17, 237-243 (2006).</li>
<li>Jensen, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+a+novel+biphasic+calcium+phosphate+in+standardized+bone+defects%3A+a+histologic+and+histomorphometric+study+in+the+mandibles+of+minipigs%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+oral+implants+research%22%5BJournal%5D)">Evaluation of a novel biphasic calcium phosphate in standardized bone defects: a histologic and histomorphometric study in the mandibles of minipigs.</a> Clinical oral implants research. 18, 752-760 (2007).</li>
<li>Grabowski, G., Bone Cornett, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((graft+and+bone+graft+substitutes+in+spine+surgery%3A+current+concepts+and+controversies%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+American+Academy+of+Orthopaedic+Surgeons%22%5BJournal%5D)">graft and bone graft substitutes in spine surgery: current concepts and controversies.</a> The Journal of the American Academy of Orthopaedic Surgeons. 21, 51-60 (2013).</li>
<li>Khan, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology+of+bone+grafting%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+American+Academy+of+Orthopaedic+Surgeons%22%5BJournal%5D)">The biology of bone grafting.</a> The Journal of the American Academy of Orthopaedic Surgeons. 13, 77-86 (2005).</li>
<li>Bohr, H., Ravn, H. O., Werner, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+osteogenic+effect+of+bone+transplants+in+rabbits.+The+Journal+of+bone+and+joint+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22British%22%5BJournal%5D)">The osteogenic effect of bone transplants in rabbits. The Journal of bone and joint surgery.</a> British. 50, 866-873 (1968).</li>
<li>Bone Urist, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((formation+by+autoinduction%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">formation by autoinduction.</a> Science. 150, 893-899 (1965).</li>
<li>Caballé-Serrano, J. D., Buser, D., Gruber, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+analysis+of+porcine+bone+conditioned+medium%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+journal+of+oral+%26+maxillofacial+implants%22%5BJournal%5D)">Proteomic analysis of porcine bone conditioned medium.</a> The International journal of oral & maxillofacial implants. , (2014).</li>
<li>Peng, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone-Conditioned+Medium+Inhibits+Osteogenic+and+Adipogenic+Differentiation+of+Mesenchymal+Cells+In+Vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+implant+dentistry+and+related+research%22%5BJournal%5D)">Bone-Conditioned Medium Inhibits Osteogenic and Adipogenic Differentiation of Mesenchymal Cells In Vitro.</a> Clinical implant dentistry and related research. , (2014).</li>
<li>Brolese, E., Buser, D., Kuchler, U., Schaller, B., Gruber, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+bone+chips+release+of+sclerostin+and+FGF-23+into+the+culture+medium%3A+an+in+vitro+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+oral+implants+research%22%5BJournal%5D)">Human bone chips release of sclerostin and FGF-23 into the culture medium: an in vitro pilot study.</a> Clinical oral implants research. , (2014).</li>
<li>Caballé-Serrano, J., Bosshardt, D. D., Gargallo-Albiol, J., Buser, D., Bone Gruber, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((conditioned+medium+enhances+osteoclastogenesis+in+murine+bone+marrow+cultures.+Clin+Oral+Impl+Res%3B+in%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Oral+Maxillofac+Surg%22%5BJournal%5D)">conditioned medium enhances osteoclastogenesis in murine bone marrow cultures. Clin Oral Impl Res; in.</a> Int J Oral Maxillofac Surg. , (2015).</li>
<li>Zimmermann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone-conditioned+medium+changes+gene+expression+in+bone-derived+fibroblasts%29%5BTitle%5D)+AND+%22IJOMI+accepted%22%5BJournal%5D)">Bone-conditioned medium changes gene expression in bone-derived fibroblasts).</a> IJOMI accepted. , (2014).</li>
<li>Fulzele, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelopoiesis+is+regulated+by+osteocytes+through+Gsalpha-dependent+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Myelopoiesis is regulated by osteocytes through Gsalpha-dependent signaling.</a> Blood. 121, 930-939 (2013).</li>
<li>Becerra, J., Andrades, J. A., Ertl, D. C., Sorgente, N., Nimni, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demineralized+bone+matrix+mediates+differentiation+of+bone+marrow+stromal+cells+in+vitro%3A+effect+of+age+of+cell+donor%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of%22%5BJournal%5D)">Demineralized bone matrix mediates differentiation of bone marrow stromal cells in vitro: effect of age of cell donor.</a> Journal of. 11, 1703-1714 (1996).</li>
<li>Kupcova Skalnikova,, H, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+techniques+for+characterisation+of+mesenchymal+stem+cell+secretome%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimie%22%5BJournal%5D)">Proteomic techniques for characterisation of mesenchymal stem cell secretome.</a> Biochimie. , (2013).</li>
<li>Romanello, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoblastic+cell+secretome%3A+A+novel+role+for+progranulin+during+risedronate+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Osteoblastic cell secretome: A novel role for progranulin during risedronate treatment.</a> , Bone. (2013).</li>
<li>Schuldt Filho,, G, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditioned+medium+of+demineralized+bone+matrix+activates+TGF-%CE%B2+signaling+pathways+in+mesenchymal+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cranio+Maxill+Surg%22%5BJournal%5D)">Conditioned medium of demineralized bone matrix activates TGF-β signaling pathways in mesenchymal cells in vitro.</a> J Cranio Maxill Surg. , (2015).</li>
<li>Buser, D., Chen, S. T., Weber, H. P., Belser, U. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+implant+placement+following+single-tooth+extraction+in+the+esthetic+zone%3A+biologic+rationale+and+surgical+procedures%29%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+journal+of+periodontics+%26+restorative+dentistry%22%5BJournal%5D)">Early implant placement following single-tooth extraction in the esthetic zone: biologic rationale and surgical procedures).</a> The International journal of periodontics & restorative dentistry. 28, 441-451 (2008).</li>
<li>Stoecklin-Wasmer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absorbable+collagen+membranes+for+periodontal+regeneration%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+dental+research%22%5BJournal%5D)">Absorbable collagen membranes for periodontal regeneration: a systematic review.</a> Journal of dental research. 92, progress. 773-781 (2013).</li>
</ol>

יש המחברים אין לחשוף. ג&#39;ורדי Caballé-סראנו קיבל מלגה מטעם הקרן למחקר לרפואת שיניים וחינוך, באזל, שווייץ.

בינוני-מותנה עצם משקף את הפעילות המסחרית של שתלי עצם בשלבים המוקדמים של התחדשות עצם השלבים. הפרוטוקול המתואר כאן ניתן להתאים ללמוד את תגובת סוגים שונים של תאים מעורבים בהתחדשות עצם של. יתר על כן, הפרוטוקול יכול לשמש כדי להכין מדיום מותנה ממילוי עצם או עצם מעובד. השיטות קלים לביצוע ומסתמך על רעיון פשוט: הגורמים שוחררו מעצם ילידי מעובד ושונים. ההבנה כיצד BCM משפיעה על תאי mesenchymal יכולים לעזור כדי ללמוד עוד על איחוד שתל ומאפיינים של autografts עצם. בהתבסס על תפיסה זו שצברנו ידע ע...

עצם אוטולוגית נעשה שימוש נרחב לגשר פגמים שנפלו כתוצאה ממום, ניתוח resective, ניתוח שחזור טראומה, ולפני מיקום שתל 1,2. הבנת העקרונות הביולוגיים של כמה תלי עצם לתמוך בתהליך של איחוד שתל היא לא מפתח היחיד להבין מדוע autografts נחשב סטנדרטי בניתוח שחזור הזהב, הוא גם יונית לעיצוב המשופר של תחליפי עצם 3. ובכל זאת, איחוד שתל הוא מהיר יותר עם ​​עצם אוטולוגית לעומת עצם תחליפי 4,5. לפיכך, הוא הכרחי כדי לחשוף את המנגנונים המולקולריים ותאיים שגורמים עצם אוטולוגית כל כך יעיל לתמיכה בהתחדשות עצם. ישנם שלושה מאפייני ספר לימוד של autografts שנחשבים לתמיכה בתהליך האיחוד 6,7. העצם ראשון, אוטולוגית הוא osteoconductive, מתן הדרכה לעצם החדש שנוצר לגדוללפגם. שנית, עצם אוטולוגית הוא osteogenic, כלומר הוא מכיל תאי mesenchymal שיכול להתמיין לosteoblasts 8. עצם שלישי, אוטולוגית הוא osteoinductive כגורמי גדילה כמו חלבוני המוךפו&quot;גנטי העצם קבורים במטריצה ​​יכולים להתחיל בתהליך של endochondral או אפילו יצירת עצם intramembranous 9. יש היבט נוסף: שבבי עצם מוכנים טרי להחזיק פונקציה אוטוקריני מבוססת על התצפיות במבחנה עם &quot;בינוני מותנה עצם&quot; 10-15. גם את ההשפעה של myelopoiesis יצוין 16. טווח דומה &quot;בינוני עצם demineralized מיזוג מטריצה&quot; כבר נטבע בשנת 1996 ותומך ברעיון הכללי של פונקציה אוטוקריני של עצם, גם כאשר מעובד על ידי איבוד מינרלים 17. למטרות שלנו, BCM יכול להיות מוכן מחזיר טרי לסתות 10,11. ניתוחי proteomic של BCM חשפו את ההרכב המורכב, הכוללים למעשה צמיחהORS ומרכיבים של מטריקס 10, גם הרחבת ידע הקיים בפרוטאזום של כל עצם 18,19. לפיכך, BCM צריך לשקף את הפעילות המסחרית של שינויים שונים של שתלי עצם במבחנה. מה קורה כאשר תאי mesenchymal, למשל אלה מבודדים משבבי עצם או מרקמות רכות בעל פה, נחשפים לBCM? במבחנה, BCM מפחית osteogenic ובידול adipogenic, ומעורר עלייה חזקה של ביטוי IL11 11. הגנום microarray הרחב גילה גנים רבים יותר לבוא לידי ביטוי באופן דיפרנציאלי בתאי mesenchymal בתגובה לBCM. בין הגנים הללו adrenomedullin (ADM) הם, IL11, IL33, מונואמין NADPH 4 (NOX4), פרוטאו 4 (PRG4, או lubricin) וpentraxin 3 (PTX3) 15. BCM מתקבל משבבי עצם autoclaved לא הצליח לשנות את הביטוי של גנים בהתאמה 14. BCM משבבי עצם שעברו פסטור והקפאה היה מסוגללשנות ביטוי גני 14. בינוני גם מותנה של מטריצת demineralized עצם (DBM-CM) משנה את הביטוי של TGF-β-מוסדרת גנים 20. מעניין לציין, קרומי מחסום קולגן משמשים להגן על שבבי עצם מהרקמות הרכות סביב 21,22, נספחים אותם חלקים של BCM שאחראים לשינויים בביטוי הגנים 23. מחקר BCM יכול להתארך עד סוגי תאים אחרים מעורבים בהתחדשות עצם כגון osteoclasts resorbing-עצם ותאי האנדותל, עד כמה שם. בסך הכל, במבחנה נתוני צבירה לספק את הבסיס המדעי לעיצובו של מחקר פרה-קליני. הפרוטוקול הנוכחי הוא כפול: ראשית, הוא מראה כיצד להכין BCM. שנית, הוא מראה איך לבדוק הפעילות הביולוגית שלה מבוסס על תאי mesenchymal במבחנה.

<table><tbody><tr><td>לסת תחתונה</td><td>חזיר מגרד</td> עצמות מקומי Hu-Friedy <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>PPBUSE2/36</td><td></td></tr><tr><td>אנטיביוטיקה & Antimicotics</td><td>All Life Technologies</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>ממברנות קולגן (Bio-Gide)</td><td>Geistlich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>סרום עגל עוברי</td><td>Invitrogen Corporation</td><td>16030074</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen Corporation</td><td>21885-025</td><td></td></tr><tr><td> ערכת בידוד RNA טהורה גבוהה</td><td>Roche</td><td>11828665001</td><td></td></tr><tr><td>Transcriptor First ערכת סינתזה של Strand cDNA</td><td></td><td></td> פריימרים 4379012001 <td></td></tr><tr><td></td><td>Roche Microsynth</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SYBR Green (עבור Q-RT-PCR)</td><td>Roche</td><td>4673484001</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Roche</td><td>11666789001</td><td></td></tr></tbody></table>

בינוני אוויר עצם: הכנה ומבדק

Bone Conditioned Medium: Preparation and Bioassay

שתלי עצם אוטולוגית נמצאים בשימוש נרחב בניתוח, אורתופדיה, וtraumatology פה והלסתות. שתלי עצם אוטולוגית לא רק להחליף עצם חסר, הם גם תומכים בתהליך המורכב של התחדשות עצם. התנהגות חיובית זו של autografts מיוחסת לשלושה מאפיינים: osteoconductivity, osteogenicity, וosteoinductivity. עם זאת, יש היבט נוסף: העצם שתל לשחרר מספר עצום של מולקולות, כולל גורמי גדילה, אשר יכול למקד תאי mesenchymal המעורבים בהתחדשות עצם. המאפיינים אוטוקריני של שתלי עצם ניתן ללמוד במבחנה על ידי השימוש במדיום מיזוג עצם (BCM). כאן אנו מציגים פרוטוקול על איך להכין מדיום מיזוג עצם מעצם קליפת המוח חזיר ילידים, ועצם שעבר תהליך עיבוד או איבוד מינרלים תרמיים. תאים יכולים להיות חשופים ישירות לBCM או זורעים על ביו-חומרים, כגון ממברנות קולגן, ספוג בעבר עם BCM. אנחנו נותנים דוגמאות במבחנת bioassaי&quot;ש עם תאי mesenchymal בביטוי של גנים מוסדרים TGF-β. הפרוטוקולים שהוצגו לעודד לחשוף עוד יותר את ההשפעות אוטוקריני של שתלי עצם במהלך התחדשות עצם ולפתוח נתיב למחקר translational בתחום הרחב של ניתוח שחזור.

בינוני אוויר עצם מוכן משבבי עצם חזירי טריים. סקירה כללית של התהליך להכנת BCM ולהשתמש בביו-חומרים בשילוב עם BCM מוצגת באיור 1 ואיור 2 בהתאמה. במהלך הכנת BCM, חשוב להשיג שבבי עצם גדולים עם תנועות ארוכות כתנועות קצרות או שבבי עצם קטנים מאוד יכול להשפיע על האיכות של BCM הסופי. איכות של BCM יכולה להיות נשלטה על ידי ניתוח ביטוי גנים של גני מטרת BCM: ADM, PTX3, IL11, IL33, NOX4 וPRG4 (איור 3). ADM וPTX3 מוסדרים מטה-מטה ל -0.4 פי וIL11, IL33, NOX4 וPRG4 י...

אנו מתארים כאן כיצד להכין מדיום מיזוג עצם (BCM) ולבדוק את פעילותו במבחנה.

Autologous bone grafts are widely used in oral and maxillofacial surgery, orthopedics, and traumatology. Autologous bone grafts not only replace missing ...

המטרה הכוללת של סרטון זה היא לתאר כיצד להכין מדיום מותנה בעצם, ולבדוק את פעילותו במבחנה. זה מושג על ידי קצירת שבבי עצם מהלסת התחתונה של חזיר באמצעות מגרד עצם. השלב השני הוא טיפול בחום, דה-מינרליזציה או לא לעשות דבר לשבבי העצם לפני הדגירה שלהם במדיום תרבית למשך 24 שעות.לאחר מכן, נאסף המדיום המותנה בעצם המכיל את כל הגורמים המשתחררים משבבי העצם. השלב האחרון הוא לעורר תאים עם המדיום המותנה בעצם או לדגור מראש חומר ביולוגי עם המדיום המותנה בעצם ותאי זרע עליו לאחר תקופת הדגירה. בסופו של דבר, נעשה שימוש ב-PCR כמותי בזמן אמת כדי להראות שינויים בביטוי הגנים של התאים לאחר הטיפול.שימוש בשתלי עצם אוטולוגיים לבד או בשילוב עם ביו-חומרים אחרים ממריץ את התחדשות העצם בפגמים בעצם סביב השתל, ובכך מבטיח תוצאות טובות לטווח ארוך. סרטון זה מציג בדיקה ביולוגית במבחנה, השימושית בקביעת התגובה הגנטית של תאים מסיביים לביו-מולקולות במצב העצם. מדיום מצב עצם בינוני יכול לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום הטראומה, הלסתות והשיניים, כגון מדוע עצם אוטולוגית היא המטרה של השתל הסטנדרטי בהתחדשות העצם.הכנת מדיום מצב מעצם מעובדת, כמו השתלת עצם אוטומטית שטופלה בחום או מטריצת עצם מעובדת יכולה להיות קשה לסטנדרטיזציה. לכן, חשוב לדייק. כדי להתחיל, השיגו לסתות תחתונות טריות מקצב מקומי והניחו אותן על משטח יציב.לאחר מכן, השתמש בפריא

bone-conditioned-medium-preparation-and-bioassay

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

סרטון זה מדגים את ההערכה של הפעלות קספז מרובות במקרופאגים שמקורם במח עצם באמצעות גירוי עם נגיף השפעת. בעקבות ליזה מקרופאגים, נטרול חום של ליזט וצנטריפוגה, נאספים קספזות תוך תאיות לניתוח חיסוני עוקב.

הערכת ההפעלה של קספזות מרובות במקרופאגים

סרטון זה מדגים את הייצור של תווך מותנה אוליגודנדרוציטים (OCM) מתאי שושלת אוליגודנדרוציטים על ידי הדגשה שלהם כדי להגביר את שחרורם המולקולרי למדיום. התווך הזה, שעשיר בגורמי גדילה, ציטוקינים ומולקולות ביו-אקטיביות אחרות, יכול להתווסף לתרביות נוירונים כדי לקבל תובנה לגבי ההשפעה של גורמים המופרשים על-ידי אוליגודנדרוציטים על הפיזיולוגיה והקישוריות העצבית.

שיטה ליצירת מדיום מותנה אוליגודנדרוציטים

צלחת הרצפה היא מבנה חיוני של תאי העצב מתפתח בעמוד השדרה, ומספקים אותות diffusible לאבות ומבדל. אנו מתארים שיטה להפקה בינונית מותנים בקומת צלחת, כדי להחיל אותו על רקמת חוט השדרה טרי, ועל מנת להעריך את ההשלכות על חלבונים של עניין על ידי ביוכימיה.

תרבות של רקמות מבודדות פלייט מקיר לקיר וייצור בינוני אוויר כדי להעריך את התכונות פונקציונליות של איתותים שפורסם פלייט מקיר לקיר

כתב יד זה מתאר מערכת מודל ex vivo המורכבת ממדיה מותנית איברים שמקורה בבלוטת הלימפה, העצם, הריאה והמוח של עכברים. ניתן להשתמש במערכת מודל זו כדי לזהות ולחקור גורמים מסיסים שמקורם באיברים והשפעותיהם על טרופיזם האיברים וההתנהגות הגרורתית של תאים סרטניים.

דור של איברים ממוזגים מדיה ויישומים עבור לימוד השפעות איבר ספציפי על התנהגות סרטן שד גרורתי

המספר של הרומן biomaterials מתוכנן עבור תיקון גדול עצמות נגעים מתרחבת באופן רציף, במטרה לשפר את עצם ריפוי ולהתגבר על הסיבוכים עם השתלת עצם. כאן, אנו מציגים אסטרטגיה רב תחומיים לניסויים קליניים הביו של biomaterials לתיקון העצם.

פרופיל תאימות ביולוגית על Biomaterials עבור התחדשות העצם

פרוטוקול זה מציג בדיקת ספיגת חומצות אמינו עם תווית רדיו, אשר שימושית להערכת צריכת חומצות אמינו בתאים ראשוניים או בעצמות מבודדות.

הערכת צריכת חומצות אמינו בתאי עצם מתורבתים ובצירי עצם מבודדים

בדיקת שטף מטבולי של תאים בזמן אמת מודדת את קצב צריכת החמצן ואת קצב ההחמצה החוץ-תאית, המתאים לייצור אדנוזין טריפוספט מיטוכונדריאלי וגליקוליטי, באמצעות חיישני pH וחמצן. כתב היד מסביר שיטה להבנת מצב האנרגיה של אוסטאובלסטים ואפיון ופרשנות של המצב הביו-אנרגטי התאי.

שימוש במנתח שטף מטבולי של תאים בזמן אמת לניטור ביו-אנרגיה של אוסטאובלסט

פרוטוקול זה מתאר שיטה מקיפה להערכת הפעלת קספאז (קספאז-1, קספאז-3, קספאז-7, קספאז-8, קספאז-9 וקספאז-11) בתגובה הן למודלים במבחנה והן ב-in vivo (בעכברים) של זיהום, עלבונות סטריליים וסרטן כדי לקבוע את התחלתם של מסלולי מוות תאי, כגון פירופטוזיס, אפופטוזיס, נקרופטוזיס ו-PANoptosis.

הערכת הפעלת קספז להערכת מוות מולד של תאי מערכת החיסון

אנו מציגים פרוטוקול דו-שלבי לבידוד מיטוכונדריה באיכות גבוהה התואם לגילוי וכימות חלבונים בקנה מידה של פרוטאום. הפרוטוקול שלנו אינו דורש הנדסה גנטית ולכן מתאים לחקר מיטוכונדריה מכל תא ורקמות ראשוניים.

בידוד דו-שלבי ללא תגים של מיטוכונדריה לשיפור גילוי וכימות חלבונים

וידאו זה מתאר שיטה לטיהור Wolbachia pipientis מקו תא אנופלס gambiae ואז culturing endosymbiont במדיום הסלולרי חינם. Assay עבור הכדאיות של החיידק הוא הוכיח.

שמירה ב Wolbachia בינוני סלולרי חינם

למדו הכנת בינוני אוויר עצם מקוביות עצם של לסת חזיר ואת בדיקת הפעילות הביולוגית שלו בתרביות תאים. שיטה זו מאפשרת ניתוח שינויים בביטוי גנים באמצעות PCR בזמן אמת ומספקת כלי חשוב לחקר ביולוגיית העצם והנדסת רקמות.

בינוני אוויר עצם: הכנה ומבדק

גלה סרטונים נוספים