Name: Microdialysis Probe עיצוב מותאם אישית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-21T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 38 s
Description: למדו כיצד לבנות בדיקת מיקרודיאליז מותאמת אישית כחלופה זולה לבדיקות מסחריות. שיטה זו מאפשרת מדידה מדויקת של נוירופפטידים ומולקולות קטנות במעבדה בעלות של פחות מעשר דולרים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים אסירי תודה לג' ברקה (SunChrom GmbH, פרידריכסדורף, גרמניה) על תמיכתו ועל אספקת דבק האפוקסי. יתר על כן, המחברים מודים ל-Fresenius Medical Care (באד הומבורג, גרמניה) על אספקת מסנן המודיה-נימי FXCorDiax. המימון הושג מאוניברסיטת גתה בפרנקפורט.

1. PTFE-צינורות הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקצר PTFE-צינורות לתוך חתיכת 2.5 סנטימטר. השתמש בנייר בקנה מידה להעריך ממדים פיזיים. (ראה איור 3 א) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך סוף אחד בזווית כדי להקל על חיבור של צינורות חשמל. (ראה איור 3 א) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> PTFE-צינורות לחספס על ידי שימוש בנייר הזכוכית כדי לאפשר דבקות של דבק אפוקסי. </li></ol> 2. הכנה התמזגו סיליקה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקצר סיליקה התמזגה לתוך חתיכת 2.25 סנטימטר. (ראה איור 3 א) </li></ol> 3. הכנסת סיליקה התמזגו לתוך PTFE-צינורות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס צינורית G 30 לסיבים החלולים PTFE לנקב אותו במרחק של 1 סנטימטר מהקצה השטוח. לכופף את PTFE-צינורות כדי לפשט את התהליך. (ראה איור 3 ב) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את סיליקה התמזגה לתוך PTFE-צינורות באמצעות הצינורית כמו הדרכה. (ראה איור 3 ג) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוצא בעדינות את הצינורית ולאבטח את סיליקה התמזגה. (ראה3D איור) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סיליקה התמזגה אמורה להקרין 5 מ&quot;מ בסוף השטוח. (ראה איור 3E) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דבק סיליקה התמזגה במקום באתר לנקב על ידי דבק cyanoacrylate ולאפשר לו להקשיח במשך הלילה. (ראה איור 3E) </li></ol> 4. אפוקסי דבק הכנה (שני רכיבי דבק) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 30 חלקי מקשה צהובה ל -70 חלקים של דבק אפוקסי שחור על ידי עזרה של מחט דקה ומערבבים אותו בעדינות. זה ישירות מוכן לשימוש. </li></ol> 5. מריחת ממברנה (כל צעדים נוספים יש לבצע מתחת למיקרוסקופ ונייר בקנה מידה המשמש להערכת ממדים פיסיים) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך את קרום polysulfone על סיליקה התמזגה בזהירות, ואז למשוך את הקרום לPTFE-צינורות ולהתאים את הקרום 5.5 מ&quot;מ באמצעות אזמל חד. (ראה איור 3F) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להגדיר נקודה על קרום סימון עם עט דק להגדיר את אורך החליפין של 2 מ&quot;ממהקצה של הקרום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למרוח כמות קטנה של דבק אפוקסי כדי לכסות את הקצה של הקרום בעזרת מחט דקה. (ראה איור 3G) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את משותף בין קרום הדיאליזה וPTFE סיבים על ידי עזרה של אותה מחט דקה המשמשת בשלב 5.3) עם דבק אפוקסי. (ראה איור 3G) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף מספיק דבק אפוקסי על הממברנה עד לנקודת הסימון כדי להבטיח אורך חליפין של 2 מ&quot;מ. לאפשר לו להקשיח במשך הלילה. (ראה איור 3G) לפני קביעת אורך החליפין, הקרום הוא 5.5 מ&quot;מ. לאחר החלת דבק אפוקסי על הקרום, רק 2 מ&quot;מ של הקרום זמין עבור דיפוזיה. </li></ol> 6. יישום שרוול המתכת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך מחט 25 G לחתיכות שרוול מתכת 1 סנטימטר על ידי עזרה של צבת כיפוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך את שרוול מתכת 1 סנטימטר (25 G) על החלק הנותר של סיליקה התמזגה. שרוול המתכת מאוחר יותר מאפשר חיבור של צינורות היניקה עם microdiaהבדיקה תמוגה. (ראה איור 3H) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאטום משותף בין שרוול המתכת וPTFE-צינורות עם דבק אפוקסי שנותר. לאפשר לו להקשיח לפחות 24 שעות. (ראה איור 3i) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מריחת דבק חם סביב ההסתעפות של החללית לקיבוע וייצוב נוספים. הערה: הנפח הפנימי הכניסה של החללית היא 0.045 μl והנפח הפנימי לשקע הוא 2.5 μl. לכן, עם קצב זרימה של μl 1 / דקה, זה לוקח כ 2.5 דקות לאחר חיבור צינור הכניסה להתחיל האוסף של dialysate. עם הפרוטוקול הנוכחי, הליך ההרכבה הבדיקה מניב בדיקות microdialysis כי הם 95% אמינות. </li></ol> 7. ביצוע ניסויים שחזור חוץ גופית ב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טובלים את הבדיקה עם חתך של 30 kDa ואורך חליפין של 2 מ&quot;מ לפתרון מניות המורכב מaCSF מכיל גלוקוז 1 מ&quot;מ וחומצת חלב 1 מ&quot;מ ו, בניסוי נפרד, לCSF המכיל 100ATP ננומטר ו -100 ננומטר אצטילכולין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Perfuse הבדיקות עם aCSF. הגדר קצב זרימה לμl / דקה 1 ולבצע ניסויים בטמפרטורת חדר (22 מעלות צלזיוס). לאפשר הבדיקות לאזן עבור שעה 1 בפתרון המניות, ולאסוף הדגימות כל 30 דקות לאחר מכן ולאחסן ב -80 ° C עד מדידה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחישוב החזרים במבחנה, להשוות את הריכוזים של analytes בdialysates עם ריכוזי אנליטי הידועים בפתרון המניות. הגעה תוצאות באחוזים של ריכוז חומר בdialysate לעומת פתרון מניות. </li></ol>

<ol><li>Feldberg, W., Malcom, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experiments+on+the+site+of+action+of+tubocurarine+when+applied+via+the+cerebral+ventricles%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Experiments on the site of action of tubocurarine when applied via the cerebral ventricles.</a> J Physiol. 149, 58-77 (1959).</li>
<li>Gaddum, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Push-pull+cannulae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Push-pull cannulae.</a> J Physiol. 155 (1 P), (1961).</li>
<li>Bito, L., Davson, H., Levin, E., Murray, M., Snider, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+concentrations+of+free+amino+acids+and+other+electrolytes+in+cerebrospinal+fluid%2C+in+vivo+dialysate+of+brain%2C+and+blood+plasma+of+the+dog%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">The concentrations of free amino acids and other electrolytes in cerebrospinal fluid, in vivo dialysate of brain, and blood plasma of the dog.</a> J Neurochem. 13 (11), 1057-1067 (1966).</li>
<li>Delgado, J. M., Lerma, J., Martín del Río, R., Solís, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dialytrode+technology+and+local+profiles+of+amino+acids+in+the+awake+cat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Dialytrode technology and local profiles of amino acids in the awake cat brain.</a> J Neurochem. 42 (5), 1218-1228 (1984).</li>
<li>Ungerstedt, U., Pycock, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+correlates+of+dopamine+neurotransmission%5BTitle%5D)+AND+%22Bull+Schweiz+Akad+Med+Wiss%22%5BJournal%5D)">Functional correlates of dopamine neurotransmission.</a> Bull Schweiz Akad Med Wiss. 30 (1-3), 44-55 (1974).</li>
<li>Ungerstedt, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis--principles+and+applications+for+studies+in+animals+and+man%5BTitle%5D)+AND+%22J+Intern+Med%22%5BJournal%5D)">Microdialysis--principles and applications for studies in animals and man.</a> J Intern Med. 230 (4), 365-373 (1991).</li>
<li>Bourne, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracerebral+microdialys%3A+30+years+as+a+tool+for+the+neuroscientist%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Pharmacol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Intracerebral microdialys: 30 years as a tool for the neuroscientist.</a> Clin Exp Pharmacol Physiol. 30 (1-2), 16-24 (2003).</li>
<li>Lietsche, J., Gorka, J., Hardt, S., Karas, M., Klein, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-built+microdialysis+probes+with+improved+recoveries+of+ATP+and+neuropeptides%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Self-built microdialysis probes with improved recoveries of ATP and neuropeptides.</a> J Neurosci Methods. 237, 1-8 (2014).</li>
<li>Chefer, V. I., Thompson, A. C., Zapata, A., Shippenberg, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+Brain+Microdialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Overview of Brain Microdialysis.</a> Curr Protoc Neurosci. 7, Unit 7.1(2009).</li>
<li>Neurochem, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+Microdialysis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Brain Microdialysis.</a> J. Neurochem. 52 (6), 1667-1679 (1989).</li>
<li>Jolly, D., Vezina, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+microdialysis+in+the+rat%3A+low+cost+and+low+labor+construction+of+a+small+diameter%2C+removable%2C+concentric-style+microdialysis+probe+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">In vivo microdialysis in the rat: low cost and low labor construction of a small diameter, removable, concentric-style microdialysis probe system.</a> J Neurosci Methods. 68 (2), 259-267 (1996).</li>
<li>Sumbria, R., Klein, J., Bickel, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+depression+of+energy+metabolism+after+microdialysis+probe+implantation+is+distinct+from+ischemia-induced+changes+in+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem+Res%22%5BJournal%5D)">Acute depression of energy metabolism after microdialysis probe implantation is distinct from ischemia-induced changes in mouse brain.</a> Neurochem Res. 36, 109-116 (2010).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

איור 3 מראה הרכבה בדיקה למופת. ממדי קוטר פנימיים וחיצוניים נכונים שכדי לצפות מקרוב לצינורות (OD 1.6 מ&quot;מ; מזהה 350 מיקרומטר), סיליקה התמזגה (OD 105 מיקרומטר; מזהה 40 מיקרומטר) וקרום דיאליזה (OD 245 מיקרומטר; מזהה 210 מיקרומטר). כמו כן, חשוב לשמור על מרחב שבין הקרום וסיליקה התמזגה של (105 מיקרומטר) ובין הקרום וצינורות (105 מיקרומטר) גם כן. אם הערכים שונים, לחץ בבדיקה יכול לעלות ולגרום לדליפה של הקרום. <p class="jove_content" style=";text-align:right;directi...

Microdialysis היא טכניקה נפוץ במחקר מדעי מוח. במהלך 50 השנים האחרונות, טכניקת microdialysis המינימלית פולשנית שופרה ברציפות להפוך לשיטה מבוססת היטב כדי לפקח על ריכוזים מקומיים של תרכובות משקל מולקולריות קטנות במרחב החוץ תאי. כמעט בכל ביניים נוזל רקמה יכול להיחקר בבעלי חיים לנוע בחופשיות. Gaddum הציג טכניקת שכיבות למשוך ב -1960. הוא שונה מגישת et al פלדברג. בי tubocurarine היה perfused דרך צינורית המסתיימת בחדר לרוחב ואיסוף השפכים גם באמצעות צינורית 1. Gaddum פיתח את טכניקת דחיפה-המשיכה שבו צינורית המורכבת משתי מחטי פלדה קונצנטריים הושתלה באזורי המוח שונים וperfused ידי פתרון תוך הסרת בו זמנית נוירוטרנסמיטורים שוחררו מהנוירונים המקיפים את הקצה 2. למרבה הצער, Dama רקמהGE נגרמים על ידי הצינורית סביב הקצה מוגבל היישום של שיטה זו. כהתקדמות נוספת של שיטה זו, Bito ועמיתים לעבודה הציגו שיטת שקית דיאליזה שבפתרון שנאסף הופרד מהרקמה הסובבת על ידי קרום דיאליזה. הם מושתלים שק דיאליזה לרקמה התת עורית של צוואר כלב. התוכן של שקית הדיאליזה הוא ללא חלבון ויכול להיות מנותח שבועות רבים לאחר מכן ליונים וחומצות אמינו 3. הפיתוח הבא היה dialytrode, בדיקה microdialysis פרימיטיבית, אשר במקור היה שתוארה על ידי דלגאדו בשנת 1972 4. לבסוף, Ungerstedt ועמיתים שיפרו את העיצוב של חללית microdialysis כך שהוא היה קטן ועקורים פחות רקמה 5. בדיקה microdialysis קונצנטריים מתנהגת באופן דומה לנימי דם. מערכת perfused ללא הרף על ידי פתרון שמציעה את ההרכב היוני של נוזל הרקמה הסובב תוך חסר אנליטי של עניין. הקרום הדיאליזה דואר נחשף לפתרון או הרקמה החיצוני הוא חדיר למחצה. היא מאפשרת דיפוזיה פסיבית של חומרים לבדיקה לאורך מפל הריכוזים שלהם 6. החדירות תלויה במשתנים רבים כגון משקל מולקולרי, צורה, תשלום ו- pH של המתחם. כמו כן הוא מוגבל בשל תכונות חומר הקרום, נקבובית גודל של הקרום וקצב זרימת 7. איורים 1 ו -2 להראות בדיקה microdialysis קונצנטריים. נוזל זלוף נכנס דרך צינורות כניסה לתוך שרוול המתכת, המקיף את סיליקה התמזגה. בתוך שרוול המתכת, זה זרמים למטה לאורך סיליקה התמזגה ומשאיר אותו על הקצה שלה. במרחב שבין קרום הדיאליזה וpolytetrafluoroethylene (PTFE) -tubing (כגון טפלון) נוזל זלוף אז זורם כלפי מעלה. כאן, דיפוזיה של חומרים מרקמות מתרחשת המקיפה את הקרום. Dialysate עוזב את הבדיקה דרך PTFE-צינורות, אשר מחובר לשקע צינורות וניתן לאסוף. יש טכניקת microdialysis כמה יתרונות יחסי לאחרים בטכניקות vivo. הבדיקה מהווה מחסום פיזי וכתוצאה מכך dialysate אינו מכיל אנזימים או תאים. לכן, אין צורך בטיהור של eluate לפני הניתוח, ולא השפלה האנזימטית של analytes מתרחשת. השפלה חמצוני יכולה להתרחש במהלך המעבר של analytes בצינורות, אבל זה לעתים קרובות ניתן למנוע על ידי הוספת נוגדי חמצון (לדוגמא חומצה אסקורבית) לperfusate. לחלופין, נזק חמצוני לנוירו, למשל, דוכא ביעילות על ידי החלפת הצינור לשקע עם קצה לאסוף dialysate 8. Dialysate ניתן לחקור ישירות עם כמעט כל סוג של שיטה אנליטית ויכול להיות שנאסף analytes מרובה בו זמנית. מערכת זו יכולה לשמש בבעלי חיים ער, וכמעט כל האזורים במוח יכולים להיותבדק. יתר על כן, עירוי של תרופות דרך הבדיקה אפשרי (retrodialysis). עם זאת, יש גם מגבלות של טכניקת microdialysis. הרזולוציה הזמן מעט הנמוכה אינה מספקת מידע בזמן אמת בנוגע לשינויים עצביים. בגלל זה הוא טכניקה פולשנית, השתלת בדיקה גורמת טראומה ניתוחית והרדמה, אשר יכול להשפיע על ריכוזים עצביים, נדרש במהלך שלב זה 7,9,10. ריכוז המתחם בdialysate כולל רק כמות קטנה של ריכוז המתחם בפועל בנוזל החוץ תאי. לחישוב ריכוז המתחם ידוע בנוזל החוץ תאי, התאוששות היחסית במבחנה יש להיות מחושבת. קביעת ביחס אישי בהחלמת מבחנה לכל בדיקה וכל מתחם היא הכרחית לפני תחילת ניסוי in vivo. לצורך כך, הבדיקה הוא טבל תמיסה המכילהאנליטי של עניין ואילו נוזל זלוף הוא אותו הפתרון החסר אנליטי של עניין. לאחר קביעת ריכוזי מתחם בdialysate, הנתונים אלה יש התייחסו לריכוזם בנוזל המקיף. קביעות התאוששות במבחנה של כמה חומרים יכולות להיות מיושמות בו זמנית 9. קבוצות מחקר במדעי מוח רבות משתמשות בטכניקת microdialysis לחקור נוירוטרנסמיטורים ומטבוליטים במרחב החוץ תאי של אזורי מוח שונים. לפיכך, בדיקות מסחריות יש ביקוש גדול בסביבת מחקר מדעי המוח. יתרון גדול של בדיקות זמינות מסחרי הוא האמינות הפונקציונלית הגבוהה. ניסיוני ההגדרה לבדיקות מסחריות מבוססת היטב ומאומתים על נוירוטרנסמיטרים ומטבוליטים ידועים רבים. עם זאת, בעוד שציוד microdialysis זמין המסחרית הוא יקר ויש פחות גמישות ביישום 11, בההוא לעבוד הרכבה בדיקה microdialysis מוצגת בפירוט, אשר ניתן להתאים לכל יישום ויכול להיות מיוצר עבור פחות מ 10 $. בדיקה מותאמת אישית זה בדיקה microdialysis קונצנטריים נבדקה לחקירות באזורי מוח שונים 8. בהחלמת בדיקה מבחנה של חומרים עם משקל מולקולרי שונה (טווח של 100-1,600 Da) ועם מאפייני physicochemical שונים בהשוואה. התאוששות נחישות במבחנה של גלוקוז, חומצת החלב ואצטילכולין עם משקל מולקולרי פחות מ -200 דא, ATP עם משקל מולקולרי של כ -500 דה ואנגיוטנסין II נוירו, חומר P וסומטוסטטין עם משקל מולקולרי מעל 1,000 דה מבוצע.

<table><tbody><tr><td>דבק אפוקסי</td><td>SunChrom GmbH, Fiedrichsdorf, גרמניה</td><td></td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>מזהה סיליקה התמזגה 40 ומיקרו; m OD 105 ומיקרו; מ</td><td>צימר-כרומטוגרפיה, מנהיים, גרמניה</td><td>אמנות. מס': 6.040105</td><td></td></tr><tr><td>קרום פוליסולפון (מסנן המודיאליזה FX Cor Diax 600)</td><td>Fresenius Medical Care AG & Co. KGaA, באד הומבורג, גרמניה</td><td>REF: דבק</td> ציאנקרילט F00001593 <td></td></tr><tr><td>(Pattex&reg; פלסטיק דבק-על)</td> <td>Henkel AG&Co. KGaA, D&uuml; סלדורף, גרמניה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>צינורות טפלון 1.6 x 0.35 מ"מ</td><td>SunChrom&reg; GmbH, פרידברג, גרמניה</td><td>אמנות. מס': 969-195.219</td><td></td></tr><tr><td>אזמל (Feather&reg; להב כירורגי מס' 10)</td> <td>pfm medical ag, קלן, גרמניה</td><td>אמנות. מס' 07310</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ</td><td>MEIJI Techno&nbsp;</td><td>EMZ-8TR</td><td></td></tr><tr><td>צינורית 30 גרם x 11 אינץ' (0.3 x 25 מ"מ) &nbsp; Sterican&reg; Z</td><td>B.Braun Melsungen AG, Melsungen, גרמניה</td><td>REF: 9324500</td><td></td></tr><tr><td>25 G x 11/2 אינץ' (0.5 x 40 מ"מ) צינורית 100 Sterican&reg;</td><td>B.Braun Melsungen AG, Melsungen, גרמניה</td><td>REF: 9186166</td><td></td></tr><tr><td>עט משובח (Stabilo point 88 fine 0.4)</td><td>Schwan-STABILO Schwanh&auml; u&szlig; er GmbH & Co. KG</td><td>Art. מס': 88/36</td><td></td></tr><tr><td>דבק חם&nbsp; (מקלות דבק ULTRA Power x 11 מ"מ)</td><td>שטיינל&רג; GmbH, Herzebrock-Clarholz, גרמניה</td><td>אמנות. מס': נייר זכוכית 4007841046910</td><td></td></tr><tr><td>P60 230 x 280</td><td>Robert Bosch GmbH, Gerlingen-Schillerh&ouml; he, גרמניה</td><td>מספר קטלוגי: 2608605397</td><td></td></tr></tbody></table>

microdialysis probe עיצוב מותאם אישית

Custom-made Microdialysis Probe Design

Microdialysis היא טכניקה נפוץ במחקר מדעי מוח. לכן בדיקות מסחריות יש ביקוש גדול לעקוב אחר שינויים פיסיולוגיים, תרופתיים ופתולוגיים בנוזל השדרתי. למרבה הצער, בדיקות מסחריות יקרות לקבוצות מחקר במוסדות ציבור. בעבודה זו, הרכבה בדיקה הוא הסביר בפירוט לבנות חללית אמינה, קונצנטריים, מחוייט microdialysis פחות מ 10 $. הבדיקה microdialysis מורכבת מקרום polysulfone עם חתך מולקולרי של 30 kDa. בדיקה במבחנה החלמה של חומרים עם משקל מולקולרי שונה (בטווח של 100-1,600 Da) ומאפייני physicochemical שונים בהשוואה. הבדיקה תשואות התאוששות במבחנה של כ -20% לרמת הסוכר בתרכובות קטנות, חומצת החלב, אצטילכולין ו- ATP. החלמה במבחנה לנוירו עם משקל מולקולרי בין 1,000-1,600 סכום דה ל2-6%. וכך, בעוד w המולקולרי גבוה יותרשמונה של נוירו הורידו בערכי התאוששות מבחנה, דיאליזה של תרכובות בטווח הנמוך (עד 500 Da) של משקולות מולקולריות אין השפעה גדולה על במבחנה קצב ההתאוששות. השיטה הנוכחית מאפשרת ניצול של קרום דיאליזה עם ערך חתך אחר וחומר קרום. לכן, יש הרכבה בדיקה מותאמת אישית זה היתרון של גמישות מספיק כדי דיאליזת חומרים במגוון רחב משקל מולקולרי. הנה, אנחנו מציגים בדיקה microdialysis עם אורך חליפין של 2 מ&quot;מ, אשר ישים עבור microdialysis באזורים במוח עכבר וחולדה. עם זאת, ממדים של החללית יכולים בקלות להיות מותאמים לאורכי תמורה גדולים יותר לשימוש בבעלי חיים גדולים יותר.

הבדיקה microdialysis מחוייט קונצנטריים מורכבת מקרום polysulfone עם חתך מולקולרי של 30 kDa. ההרכבה הבדיקה מתוארת באיור 3. זה הציג התאוששות במבחנה לגלוקוז מטבוליטים אנרגיה הקטנה (180.16 Da) וחומצת החלב (112.06 Da) של 19.10 ± 1.2% ושל 21.2 ± 1.6%, בהתאמה. לאצטילכולין הטעון חיובי עם משקל מולקולרי של 181.66 דא, זה הראה במבחנה התאוששות ערך של 22.6 ± 1.4%. ATP עם משקל מולקולרי של 551.6...

Microdialysis היא טכניקה נפוץ במחקר מדעי מוח. לכן בדיקות מסחריות נמצאות בdemand.In הגדול עבודה זו הרכבה בדיקה הוא הסבירה בפירוט לבנות חללית אמינה, קונצנטריים, מחוייט microdialysis פחות מ 10 $.

Microdialysis Probe עיצוב מותאם אישית

Microdialysis is a commonly used technique in neuroscience research. Therefore commercial probes are in great demand to monitor physiological, ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לתאר את הייצור של גשש מיקרודיאליזה בהתאמה אישית. זאת על ידי חיתוך ראשוני של צינור polytetrafluoroethylene וסיליקה מותכת (fused silica) לממדים המתאימים. השלב השני הוא החדרת הסיליקה המותכת לתוך הצינור תוך שימוש בקנולה כמנחה.בשלב הבא, ממбраנת דיאליזה ממוקמת מעל הסיליקה המותכת. השלב הסופי הוא להחליק את השרוול המתכתי על החלק הנותר של הסיליקה המותכת ולהשתמש באפוקסי כדי לסגור את החיבורים ולהבטיח אורך חליפין של שני מילימטרים. בסופו של דבר, ההוראות בסרטון זה יראו כיצד לבנות גשש מיקרודיאליזה מותאם אישית, חסון ואמין, כחלופה לגשש מסחרי, המסוגל למדוד במדויק התאוששות in vitro של נוירופפטידים ומולקולות קטנות.היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שניתן להתאים את הרכבת גשש המיקרודיאליזה המוצגת כאן בפירוט לכל יישום, וניתן לייצר אותה בעלות של פחות מ-10. ראשית, חתכו חתיכה של צינור polytetrafluoroethylene בעובי 1.6 millimeter וקוטר פנימי של 350 micron למקטעים באורך 2.5 centimeter. חתכו קצה אחד של המקטע בזווית של 45 מעלות כדי להקל על חיבור צינור היציאה.בשלב הבא, השתמשו בנייר זכוכית כדי להחשין את פני השטח החיצוניים של צינור ה-PTFE כדי לקדם את ההדבקה של דבק אפוקסי. חיתכו מקטע של סיליקה מותכת (fused silica) לחתיכה באורך 2.25 סנטימטרים. הכניסו מחט בכי মাপ 30 לתוך סיב ה-PTFE החלול, סנטימטר אחד מהקצה השטוח.כופפו את ה-PTFE ונקבו את המעטפת בנקודת הכיפוף. הכניסו את הסיליקה המותכת לתוך צינור ה-PTFE באמצעות קנולת המחט כמדריך. לאחר מכן, הסירו בעדינות את קנולת המחט ומקמו את הסיליקה המותכת כך שחמישה מילימטרים בלטו מהקצה השטוח של צינור ה-PTFE.השתמשו בטיפה של דבק ציאנואקרילט כדי לקבע את הסיליקה המותכת במקומה באתר הדקירה והמתינו להתקשחות במהלך הלילה. הכינו את דבק האפוקסי על ידי הוספה של 30 חלקים של מקשה צהוב ל-70 חלקים של דבק אפוקסי שחור וערבוב עדין. לאחר מכן, משכו ממברנת דיאליזה מפוליסולפון עם סף חיתוך של 30 kilodalton, בעלת קוטר פנימי של 210 microns וקוטר חיצוני של 245 microns.בזהירות מעל הסיליקה המותכת. משכו את הממברנה לתוך צינור ה-PTFE וכסמו את הממברנה לאורך של 5.5 מילימטרים באמצעות סכין מנתחים חדה. סמנו נקודה על הממברנה בעזרת עט עדין כדי להגדיר אורך חילופים של שני מילימטרים מקצה הממברנה.לאחר מכן, השתמשו במחט דקה כדי למרוח כמות קטנה של דבק אפוקסי לכיסוי קצה הממברנה. בשלב הבא, השתמשו בדבק אפוקסי כדי לאטום את החיבור בין ממברנת הדיאליזה לבין סיב ה-PTFE. כעת, חזרו לממברנה והוסיפו דבק אפוקסי בכמות מספיקה עד לנקודת הסימון.כדי להבטיח אורך חילוף דיפוזיה של שני מילימטרים בלבד, המתינו לייבוש מלא של דבק האפוקסי במהלך הלילה. השתמשו בפלייר כדי לשבור בזהירות חתיכות באורך של סנטימטר אחד ממחט במידה 25 gauge, במטרה ליצור שרוולים ממתכת. לאחר מכן, השליכו את השרוול המתכתי על החלק הנותר של הסיליקה המותכת, והשתמשו ביתרת דבק האפוקסי כדי לאטום את החיבור בין השרוול המתכתי לבין צינור ה-PTFE.השרוול המתכתי מאפשר מאוחר יותר את חיבור צינור הכניסה עם גשש המיקרודיאליזה. לבסוף, מרחו דבק חם מסביב למפגש של הגשש לצורך קיבוע וייצוב נוספים של המכשיר. סכמה זו מציגה תצורה מקרוב של מנגנוני הפעולה הפנימיים של גשש המיקרודיאליזה.שני מילימטרים של ממбраסת דיאליזה מפוליסולפון חשופים בקצה הגשושית, מה שמאפשר התאוששות של מטבוליטים בעלי משקל מולקולרי נמוך כגון גלוקוז, ATP ואצטילכולין. כאן מוצגת יכולתה של הגשושית להשיג התאוששות של מולקולות קטנות בעלות משקל מולקולרי נמוך כגון גלוקוז, לקטט, אצטילכולין ו-ATP in vitro. אחוז ההתאוששות גבוה בהרבה עם מולקולות אלו, שמשקלן סביב 500 Daltons, מאשר עם מולקולות גדולות יותר כגון אנגיוטנסין 2, substance p וסומטוסטטין, שמשקלן מעל 1000 Daltons.לאחר צפייה בסרטון זה, יהיה לכם הבנה טובה כיצד לבנות גששי מיקרודיאליזה חסונים ואמינים כחלופה לאלו המסחריים.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

הסרטון מדגים את תהליך השימוש בבדיקת מיקרודיאליזה לאיסוף חלבונים חוץ-תאיים מהנוזל הבין-תאי (ISF) של מוח עכבר. בדיקת מיקרודיאליזה, המצוידת בקרום חדיר למחצה חתוך במשקל מולקולרי גבוה, מוחדרת למוחו של עכבר מורדם באמצעות צינורית מנחה מושתלת. הגשושית, המחוברת למשאבות, מאפשרת לחצץ פיזיולוגי לחלחל את רקמת המוח ולהתערבב עם ה-ISF. חלבונים ב-ISF מתפזרים על פני הממברנה החדירה למחצה ונאספים לניתוח.

מיקרודיאליזה של נוזל אינטרסטיציאלי ממוח עכבר לבידוד חלבונים חוץ-תאיים

מקור: Vanegas, M. I., et al. מערכת מיקרו-הזרקה לעירוי תרופות משולב ואלקטרופיזיולוגיה. J. Vis. Exp. (2019)סרטון זה מדגים מכשיר מיקרופלואידית מבוסס מיקרואלקטרודה המספק תמיסת תרופות דרך צינור נימי, תוך שימוש בתמיסת סמן על בסיס שמן למעקב מדויק אחר נפח ומאפשר הקלטה עצבית ועירוי תרופות בו זמנית.

מערכת מיקרו-הזרקה מבוססת מיקרופלואידית לעירוי תרופות משולב ואלקטרופיזיולוגיה

הבנת המצעים העצביים של ההתנהגות דורשת רישום של אנסמבל מעגלי המוח. בגלל יכולת המעקב הגנטית שלו, העכבר מציע מודל לדיסקציה של מעגלים וחיקוי מחלות. כאן מתוארת שיטה לתכנון וייצור בדיקות ממוזערות המתאימה למיקוד מבנה המוח העמוק בעכבר.

עיצוב וייצור של Ultralight משקל, בדיקות Multi-אלקטרודה מתכוונן לקלטות אלקטרו בעכברים

פרוטוקול זה מתאר את השימוש של אסטרטגיית מיקרופלואידיקה מבוסס אינרציאלית חיץ החליפין לטהר תאים מהונדסים מיקרו / ננו-חלקיקים עם דלדול יעיל של חלקיקים מאוגד.

Microfluidic מאגר Exchange להנדסת תאים ללא התערבות מיקרו / Nanoparticle

Microdialysis in vivo אפשרה אוסף של מולקולות נוכח נוזל בין-תאי המוח (הקרן) מבעלי ער, להתנהג בחופשיות. על מנת לנתח מולקולות גדולות יחסית של הקרן הלאומית למדע, המאמר הנוכחי מתמקד במיוחד בפרוטוקול microdialysis באמצעות רגשים עם משקל מולקולרי גבוה לחתוך את הממברנות.

אין ויוו Microdialysis שיטת איסוף גדול חלבונים חוץ-תאית נוזל בין-תאי המוח עם משקל מולקולרי גבוה ניתוק רגשים

כאן, אנו מתארים שיטה ויוו microdialysis לניתוח שחרור אספרטט ולא גלוטמט בהיפוקמפוס הגחון של חולדות אפילפסיה ואפילפטי, בשילוב עם הקלטות EEG. חוץ-תאית ריכוזי אספרטט גלוטמט יכול להיות בקורלציה עם השלבים השונים של המחלה.

Microdialysis של חומצות אמינו מעוררות במהלך ההקלטות EEG בחופשיות העברת חולדות

פלטפורמת מניפולציה משולבת תא מפותחת לשימוש בשילוב עם התקנה בודדת המסה בדיקה מאסיבית עבור ניתוח מקוון של תאים ההשעיה בודדים תחת תנאי הסביבה.

משולב תאים מניפולציה פלטפורמה ביחד עם יחיד-בדיקה עבור ניתוח ספקטרומטר המסה של תרופות מטבוליטים בתאים ההשעיה יחיד

אנו מציגים מערכת microinjectrode מיועד אלקטרופיזיולוגיה וסיוע משלוח של בדיקה ניסויית (כלומר, ננוחיישנים, microאלקטרודות), עם עירוי תרופה אופציונלי. רכיבים במיקרופלואידיג זמינים באופן נרחב לצינורית המכילה את הגשוש. פרוטוקול שלב אחר שלב עבור הבנייה microinjectrode הוא כלול, עם תוצאות במהלך עירוי מוסקימול בקליפת מקוק.

מערכת microinjectrode לטיפול בתרופות אינפוזיה ואלקטרופיזיולוגיה של התרופה

נייר זה מפרט את פרוטוקול הייצור של שבבים מיקרופלואידיים שפותחו להתגבשות  חלבונים על שבב בשיטת הדיאליזה ובניסויי עקיפת קרני רנטגן. תהליך microfabrication מאפשר לשלב קרום דיאליזה תאית מתחדשת למחצה עם כל משקל מולקולרי מנותק, בין שתי שכבות של השבב.

התגבשות חלבונים על שבב על ידי מיקרודיאליזה עבור In Situ רנטגן עקיפה מחקרים

פרופיל מיקרודיאליזה מתואר כדי לדגום מומסים של מי נקבוביות מומסים על פני ממשק קרקע-מים אוקסיק-אנוקסי באתרו עם הפרעה מינימלית. מכשיר זה נועד ללכוד שינויים מהירים בפרופילי עומק ריכוז הנגרמים על ידי הפרעות בממשק קרקע-מים ומעבר לו.

דגימת מומס מומס על פני ממשק קרקע-מים אוקסיק-אנוקסי באמצעות פרופילי מיקרודיאליזה

כאן, אנו מציגים מערכת שתלי בדיקה קלת משקל וחסכונית לאלקטרופיזיולוגיה כרונית במכרסמים המותאמת לקלות שימוש, שחזור בדיקה, רב-תכליתיות ניסיונית ותאימות להתנהגות.

שתל DREAM: מערכת שתלים קלה, מודולרית וחסכונית לאלקטרופיזיולוגיה כרונית בעכברים מקובעים ראש ומתנהגים בחופשיות

למדו כיצד לבנות בדיקת מיקרודיאליז מותאמת אישית כחלופה זולה לבדיקות מסחריות. שיטה זו מאפשרת מדידה מדויקת של נוירופפטידים ומולקולות קטנות במעבדה בעלות של פחות מעשר דולרים.

Microdialysis Probe עיצוב מותאם אישית

גלה סרטונים נוספים