21 ביולי 2015
Microdialysis היא טכניקה נפוץ במחקר מדעי מוח. לכן בדיקות מסחריות נמצאות בdemand.In הגדול עבודה זו הרכבה בדיקה הוא הסבירה בפירוט לבנות חללית אמינה, קונצנטריים, מחוייט microdialysis פחות מ 10 $.
המטרה הכוללת של הליך זה היא לתאר את היצרן של בדיקת מיקרודיאליזה בהתאמה אישית. זה מושג על ידי חיתוך ראשון של צינורות פוליטטרפלואורואתילן והתמזגות סיליקה למידות הנכונות. השלב השני הוא הכנסת הסיליקה המותכת לתוך הצינור באמצעות צינורית כהנחיה.
לאחר מכן, קרום דיאליזה ממוקם מעל הסיליקה המותכת. השלב האחרון הוא למשוך את שרוול המתכת אל החלק הנותר של הסיליקה המותכת ולהשתמש באפוקסי כדי לסגור מפרקים ולהבטיח אורך החלפה של שני מילימטרים. בסופו של דבר, ההוראות בסרטון זה יראו כיצד לבנות בדיקת מיקרודיאליזה יציבה ואמינה בהתאמה אישית כחלופה לבדיקה מסחרית, שיכולה למדוד במדויק התאוששות במבחנה של נוירופפטידים ומולקולות קטנות.
היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שניתן להתאים את מכלול בדיקת המיקרודיאליזה המוצג בפירוט לכל יישום וניתן לייצר אותו בפחות מ-10. כדי להתחיל, חותכים חתיכה של צינור פוליטטרפלואורואתילן בעובי 1.6 מילימטר בקוטר פנימי של 350 מיקרון לקטעים באורך 2.5 סנטימטר. חותכים קצה אחד של הקטע בזווית של 45 מעלות על מנת להקל על חיבור צינור היציאה.
לאחר מכן, השתמש בנייר זכוכית כדי לחספס את המשטח החיצוני של צינור ה-PTFE כדי לקדם הידבקות של דבק אפוקסי. חותכים קטע של סיליקה התמזגה לחתיכה באורך 2.25 סנטימטר. הכנס מחט בגודל 30 לתוך סיב ה-PTFE החלול סנטימטר אחד מהקצה השטוח.
כופפו את ה-PTFE ונקבו את הנדן בעיקול. הכנס את הסיליקה המותכת לתוך צינור ה-PTFE באמצעות צינורית המחט כהנחיה. לאחר מכן הסר בעדינות את צינורית המחט ומקם את הסיליקה הממוזגת כך שחמישה מילימטרים מקרינים החוצה את הקצה השטוח של צינור ה-PTFE.
השתמש בטיפת דבק ציאנואקרילט כדי להדק את הסיליקה המותכת במקומה במקום הניקוב ולאפשר לה להתקשות למשך הלילה. הכן את דבק האפוקסי על ידי הוספת 30 חלקים של מקשה צהוב ל -70 חלקים של דבק אפוקסי שחור וערבוב עדין. לאחר מכן משוך קרום דיאליזה פוליסולפון חיתוך של 30 קילו-דלטון בקוטר פנימי של 210 מיקרון וקוטר חיצוני של 245 מיקרון.
בזהירות מעל הסיליקה ההתמזגה. משוך את הממברנה לתוך צינור ה-PTFE והתאם את הממברנה ל-5.5 מילימטרים באמצעות אזמל חד. סמן נקודה על הממברנה בעזרת עט עדין כדי להגדיר את אורך ההחלפה של שני מילימטרים מקצה הממברנה.
לאחר מכן השתמש במחט דקה כדי למרוח כמות קטנה של דבק אפוקסי כדי לכסות את קצה הממברנה. לאחר מכן, השתמש בדבק אפוקסי כדי לסגור את המפרק בין קרום הדיאליזה לסיבי ה-PTFE. כעת חזור והוסף מספיק דבק אפוקסי על הממברנה עד לנקודת הסימון.
כדי להבטיח אורך חילופי דיפוזיה של שני מילימטרים בלבד, אפשר לדבק האפוקסי להתקשות בן לילה. השתמש בזוג צבת כדי לשבור בזהירות חתיכות סנטימטר אחד של מחט בגודל 25 על מנת ליצור שרוולי מתכת. לאחר מכן משוך את שרוול המתכת אל החלק הנותר של הסיליקה המותכת והשתמש בדבק האפוקסי שנותר כדי לאטום את המפרק בין שרוול המתכת לצינור ה-PTFE.
שרוול המתכת מאפשר מאוחר יותר את חיבור צינור הכניסה עם בדיקת מיקרודיאליזה. לבסוף, יש למרוח דבק חם סביב התפצלות הגשושית לקיבוע וייצוב נוסף של המכשיר. סכימה זו מציגה תקריב של פעולתה הפנימית של בדיקת המיקרודיאליזה.
שני מילימטרים מקרום הדיאליזה של פוליסולפון נחשפים בקצה הבדיקה, מה שמאפשר התאוששות של מטבוליטים קטנים במשקל מולקולרי כמו גלוקוז, TP ואצטילכולין. היכולת של הגשושית לשחזר מולקולות קטנות במשקל מולקולרי נמוך כמו גלוקוז, לקטט, אצטילכולין ו-TP במבחנה מוצגת כאן. אחוז ההתאוששות גבוה בהרבה עם מולקולות אלה, שהן בסביבות 500 דלטון מאשר מולקולות גדולות יותר כמו אנגיוטנסין 2, חומר p וסומטוסטטין, שהן מעל 1000 דלטון.
לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לבנות בדיקות מיקרודיאליזה יציבות ואמינות כחלופה למסחריות.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
מאמר זה מתאר את התהליך של ייצור חוד מיקרודיאליזה בהתאמה אישית, שהוא חלופה חסכונית לחודים מסחריים. הנוהל מתאר את השלבים הנחוצים ליצירת חוד אמין המסוגל למדוד נוירופפטידים ומולקולות קטנות in vitro.
Custom microdialysis probe fabrication offers a cost-effective solution for neuroscience research, enabling precise monitoring of neurochemical dynamics in cerebrospinal fluid. By reducing probe expenses below $10, this method enhances accessibility for public institutions and supports scalable deployment across preclinical studies. The approach facilitates target validation and mechanistic de-risking by providing reliable recovery data for small molecules and neuropeptides, informing go/no-go decisions in early discovery pipelines.
The method integrates into the discovery continuum from hypothesis testing through lead identification, providing quantitative neurochemical readouts that support mechanistic understanding and compound prioritization.