באמצעות טומוגרפיה מיקרו שחושבת הערכת התפתחות גידול ומעקב של תגובה לטיפול במודל עכברי של סרטן הריאות

מטרת העל של סרטון זה היא לזהות את היתרונות של שימוש במיקרו CT, להערכת התפתחות הגידול, התגובה לטיפול וניסויים אחרים במודלים של סרטן ריאות בעכברים. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום סרטן הריאות בעת שימוש במודל עכברים, כגון מתי הגידולים מתחילים לגדול, קצב הצמיחה והתגובה להתערבויות טיפוליות. טכניקה זו מאפשרת לנו לזהות אילו בעלי חיים יש להוציא מהמחקר שלנו, תוך זיהוי שינויים בזמן אמת בגודל הגידול שלהם.

הטכניקה חוסכת זמן ומאמץ, ומפחיתה באופן ניכר את מספר העכברים בקבוצת המחקר. מסורק ה-Micro-CT, גש לבקרת המחשב ופתח את חבילת התוכנה בשם RMCT2"לאחר מכן, התחל את מחזור החימום. לאחר מכן, הכינו את מיטת הדגימה של הסורק, עבור העכבר, על ידי עטיפתה בניילון.

לאחר מכן, יש להרדים את העכבר באמצעות איזופלורן ולאשר שהוא מורדם באמצעות צביטה בעור. די בצביטה עדינה של קפל עור קטן. לאחר מכן, מרחו משחה עיניים למניעת יובש בקרנית.

כעת הניחו את העכבר, הצד הגבי כלפי מעלה, על מיטת הדגימה. החזק את ראש העכבר ומשוך את הגוף כלפי מטה מהגפיים התחתונות כדי למתוח וליישר את הגוף בצורה סימטרית. לאחר מכן, נתב את גז ההרדמה לתא, ומקם את צינור הגז ליד האף של החיה, כדי לתת הרדמה רציפה.

לאחר מכן, עטפו את העכבר ומיטת הדגימה בניילון, כדי לשמור על העכבר במקומו. ודא שהעכבר מאובטח מכיוון שכל תנועה או פיתול במהלך הסריקה יגרמו לתמונות מעורפלות ובלתי שמישות. כעת, סגור את החדר, כוונן את המערכת ל-90 קילו-וולט ו-160 מיקרו-אמפר, והגדר את זמן הסריקה ל-4.5 דקות.

הגדר את טווח התמונה ל- 24 מילימטרים. לאחר מכן, הגדר את המערכת במצב סינכרוני לפעימות לב. כעת, צור תיקיה חדשה במסד הנתונים עבור התמונות החדשות והתחל את הסריקה.

לאחר השלמת הסריקה, העבירו את העכבר לכלוב ריק והתבוננו בו עד שיחזור להכרה. אל תחזיר אותו לשותפיו לבית עד שהוא יתאושש לחלוטין מההרדמה. פתח את קבצי התמונות המיקרו CT הסדרתי בתמונה J.גלול בין כל התמונות של כל עכבר מהצוואר ועד הבטן או להיפך.

כעת, באמצעות סריקות של עכברים נאיביים מסוג בר, זהה את הצפיפות של אזורים שונים ומבנים אנטומיים נורמליים בחזה. גלול למעלה אל קרביים וסרעפת הבטן הלבנבנה, וזהה אזור דרך החזה, ומעלה עד הצוואר. שימו לב לציוני הדרך של כלוב החזה הגרמי, עצם החזה והחוליות והצלעות.

לאחר מכן, זהה את הלב בקדמת החזה, ואת כלי הדם העיקריים ליד הלב ובמדיאסטינום. לומן קנה הנשימה הוא עיגול כהה קטן בגובה הצוואר והחזה העליון, המתפצל לסמפונות הראשיים הימניים והשמאליים, ואז ממשיך להסתעף לסמפונות קטנים יותר ויותר. שימו לב שכל סימפונות קשורים קשר הדוק לשניים או שלושה כלי דם.

כעת, התחל לבחון את הסריקות של עכברי DT לא מושרים וזהה נוכחות של חריגות כלשהן. אל תכלול בניסוי עכברים עם צללי ריאות חריגים לפני האינדוקציה, כגון גושים או בולות אמפיזמטיות. לניסוי זה, השתמש בעכברים עם סריקות ריאות רגילות שיכולות לייצר גידולים המושרים על ידי FGF9.

כדי לגרום לגידולים, ספק דוקסיציקלין בצ'או שלהם ב-200 חלקים למיליון. לאחר 10 שבועות, בצע סריקת מיקרו-CT שנייה של עכברים אלה כדי לאשר התפתחות קשריות גידול בריאות שלהם. לאחר מכן, חלקו את העכברים לשתי קבוצות.

יש לתת את חוסם ה-FGFR, AZD4547, לקבוצה אחת דרך צינור קיבה. עשו זאת במשך 6 ימים בשבוע במשך 10 שבועות. תנו לקבוצה השנייה פלצבו.

עקוב אחר השינויים בצללים הנודולריים על ידי ביצוע סריקה שלישית ארבעה עד חמישה שבועות לאחר הטיפול. מאוחר יותר, בתום הטיפול המלא של 10 שבועות, בצע סריקה רביעית. לאחר מכן, זהה שינויים דינמיים בגושי הגידול, בתגובה לטיפול, על ידי השוואת מיקומים דומים בתמונות הסריקה הסדרתית בנקודות הזמן השונות.

חפש את המראה או ההיעלמות של צללים חריגים. התמצאות נכונה לאותו מיקום אנטומי היא קריטית לפירוש התוצאות. השתמש בציוני דרך אנטומיים מזוהים בקלות בתוך החזה, כגון קנה הנשימה, התפצלותו, הסמפונות הראשיים הימניים והשמאליים, אבי העורקים וכלי הדם הגדולים והסרעפת.

בגלל הטיות הגוף, עצמות הן ציוני דרך פחות שימושיים. לאחר המתת חסד של עכבר, וגישה לצווארו ולריאותיו, חתכו את הלב ובלוטת התימוס. הכנס מלקחיים מאחורי קנה הנשימה כדי להפריד אותו מהוושט.

לאחר מכן, קנול קנה הנשימה באמצעות צינורית G24, ואבטח את הצינורית על ידי קשירת תפר המונח סביב קצה קנה הנשימה. כעת, נפחו וקבעו את הריאה באמצעות 4% PFA קר כקרח דרך הצינורית עם עמוד 25 ס"מ. לאחר מכן, נתק את הצינורית והדק את הקשר על קנה הנשימה כדי למנוע דליפת PFA.

כעת, חתכו את קנה הנשימה העליון, כולל הצמדתו לגרון. ותוך כדי משיכת קנה הנשימה מחוט התפר, נתח את קנה הנשימה והריאות מכל הקבצים המצורפים. לאחר מכן, הסר את קנה הנשימה עם הריאות en blanc.

יש להניח את הטישו בשפופרת של 15 מ"ל המכילה 5 מ"ל של טמפרטורת החדר 4% PFA. השאירו את הריאות ב-PFA למשך הלילה לחדירת רקמות מלאה וקיבוע. לאחר מכן, עבד את הרקמה כרגיל.

בעכברי DT בני 8-12 שבועות למחקר זה, כמחציתם הראו חריגות ריאתיות בסריקת המיקרו-CT, מה שהופך אותם לבלתי מתאימים להכללה. לצורך המחקר, השראת הגידול הופעלה למשך 10 שבועות, ולאחר מכן טיפול. עכברים שקיבלו את מעכב ה-FGFR, AZD4547, במשך 10 שבועות הראו היעלמות או ירידה בגודל הגושים שנראו בסריקות שלפני הטיפול.

מצד שני, עכברי ביקורת שקיבלו פלצבו לא הראו שינוי, עלייה בגודל הגוש ו/או הופעת גושים חדשים. הערכה היסטולוגית של נקודת הסיום של הריאות מאשרת את דיוק הממצאים שנעשו בסריקת מיקרו-CT. לעכברים שנתפסו כבעלי ריאות נקיות, היו היסטולוגיה תקינה של הריאות.

ואילו עכברים שהראו חריגות, הראו שינויים היסטולוגיים שונים כולל בולות וגושים. לאחר 10-12 שבועות של אינדוקציה עם דוקסיציקלין, נצפו גושי אדנוקרצינומה מרובים, עם גדלים ומיקומים משתנים, בכל בעלי החיים. טיפול עוקב עם 10-12 שבועות של חוסם FGFR, הראה פחות ופחות גושים קטנים יותר.

לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להשתמש במיקרו-CT כדי להעריך את התפתחות הגידול בריאות העכבר. ולעקוב אחר כל שינוי בגידולים אלה, בתגובה להליכים ניסיוניים שונים. לאחר הפעלת העכבר, ניתן לבצע סריקות תוך פחות מ-10 דקות לכל עכבר.

בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור לשמור את העכבר תחת הרדמה עמוקה, ועטוף היטב למיטת הדגימה כדי למזער את התנועה במהלך הסריקות. לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום סרטן הריאה ותאי גזע סרטניים לחקור את היקף התפתחות הגידול, רגרסיה מתקדמת והגדרת ניסויים שונים. אל תשכח שעבודה עם קרני רנטגן עלולה להיות מסוכנת.

במכונה סטנדרטית יש לנקוט תמיד בהליכי הפעלת מכונה בעת ביצוע הליך זה.