Name: שיטה יעילה להשיג תאי Dedifferentiated שומן (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 11 s
Description: למד שיטת תרבית תאים יעילה ליצירת תאי שומן מופחתי-התמיינות (DFAT) באיכות גבוהה. הפרוטוקול משפר יישומים ברפואה מחזורית והנדסת רקמות עבור חוקרים בתחום.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך בחלקו על ידי התוכנית ליצירת סטארט-אפים ממחקר וטכנולוגיה מתקדמים (תוכנית START) של האגודה היפנית לקידום המדע (ST261006IP, TM) ועל ידי התוכנית לקרן המחקר האסטרטגי באוניברסיטאות פרטיות (2014-2019) (S1411018, TM) ממשרד החינוך, הספורט, המדע והטכנולוגיה.

דוגמאות של שומן תת עורי האנושי התקבלו מחולים שעברו ניתוח במחלקות לכירורגיה פלסטית, אורולוגיה, כירורגיה ילדים כירורגיה אורתופדית בבית החולים איטבאשי אוניברסיטת ניהון (טוקיו, יפן). החולים נתן הסכמה בכתב הודיע, וועדת האתיקה של אוניברסיטת ניהון לרפואה אישרה את המחקר. 1. רקמות הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תביאו את דגימת רקמה מחדר הניתוח למעבדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף 1-2 גרם של רקמה שומנית עם 5 מ&quot;ל של PBS (-) בטמפרטורת החדר (RT) פעם, בתוך שפופרת 50 מ&quot;ל ולאחר מכן הנח את הדוגמה צלחת פלסטיק 10 ס&quot;מ. </li></ol> 2. עיכול Collagenase <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את המדגם מתוך PBS (-), ולאחר מכן להוסיף 10 מ&quot;ל של 0.1% סטרילי (w / v) פתרון collagenase (סוג Collagenase השנייה) כדי בצלחת המכילה את דגימת רקמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרכך את הרקמה עם מספרי כירורגיות למשך כ 15 דקות, עד שהוא מגיע מחיה מורכבתency. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהמשך לכך, לעכל את הרקמה טחון ב -0.1% (w / v) פתרון collagenase על 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות (60 סל&quot;ד) בצינור 50 מ&quot;ל עם תסיסה עדינה על שייקר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סנן המדגם מתעכל דרך פילטר 100 מיקרומטר לתוך צינור 50 מ&quot;ל. לאחר מכן, להעביר 10 מ&quot;ל של DCM (ראו טבלה של חומרים) בתוספת 2% FBS דרך המסנן. </li></ol> בידוד תא 3. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה תאים המסוננים ב 100 XG דקות 1 ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב זה, להכין 5 מ&quot;ל של DCM בתוספת 2% FBS בתוך שפופרת 50 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב הבא, לצייר את תאי השומן צף בעזרת פיפטה 1,000 μl ולהוסיף את התאים במדיום המכיל 50 מ&quot;ל צינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהמשך לכך, לנער את שפופרת 50 מ&quot;ל בעדינות לתערובת המדיום DCM עם התאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן, צנטריפוגות הצינור ב 100 XG דקות 1 ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחק את המדיום בתחתית הצינור באמצעות מחט 18 G ו מזרק 20 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן, להוסיף 10 מ&quot;ל של DCM supplemented עם 2% FBS אל התאים שנאספו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים את DCM עם התאים על ידי טלטול שפופרת 50 מ&quot;ל בעדינות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה הצינור ב 100 XG דקות 1 ב RT. </li></ol> 4. תאי ציפוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 41 מ&quot;ל של DCM או DMEM בתוספת FBS 20% בבקבוק 12.5 ס&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן, בעזרת פיפטה 200 μl להוסיף 40 μl של תאי השומן אל הבקבוק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן, למלא את הבקבוק עם DCM או DMEM בתוספת 20% FBS. שלב קריטי: בשלב זה, להבטיח כי התאים מפוזרים ברחבי בינוני. ראייה לבדוק את התאים המנותקים ולאחר מכן לשמור את הבקבוק על המכסה של צלחת פטרי עגולה כדי לקבע אותו שטוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבסוף, הניחו את הבקבוק בתוך האינקובטור ולהשאיר אותה ללא הפרעה חממה 5% CO 2 ב 37 מעלות צלזיוס למשך 7 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שבוע של דגירה, להפוך את הבקבוק לאיתור תאי DFAT. לאחר מכן, להעריך שליטת דור תא DFAT כמתואר 10 מאז ב fibrobl בנקודה זותאי אס &#39;דמוי (תאי DFAT) ממוקמים באזורים מובחנים מתאי שומן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 5 מ&quot;ל של DCM או DMEM בתוספת 20% FBS אל הבקבוק לאחר הסרת המדיום תרבית תאים הקודמת. אפשר תאי DFAT לגדול במשך שבוע נוסף לאחר שינוי המדיום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות דלפק תא, לספור את מספר תאי DFAT שנוצרו בתנאי תרבית תאים שונים (DCM לעומת DMEM). </li></ol>

<ol><li>Lanzoni, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concise+review%3A+clinical+programs+of+stem+cell+therapies+for+liver+and+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Concise review: clinical programs of stem cell therapies for liver and pancreas.</a> Stem Cells. 31 (10), 2047-2060 (2013).</li>
<li>de Girolamo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem%2Fstromal+cells%3A+a+new+%22cells+as+drugs%22+paradigm.+Efficacy+and+critical+aspects+in+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Pharm.+Des%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem/stromal cells: a new "cells as drugs" paradigm. Efficacy and critical aspects in cell therapy.</a> Curr. Pharm. Des. 19 (13), 2459-2473 (2013).</li>
<li>Lindroos, B., Suuronen, R., Miettinen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+of+adipose+stem+cells+in+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell.+Rev%22%5BJournal%5D)">The potential of adipose stem cells in regenerative medicine.</a> Stem Cell. Rev. 7 (2), 269-291 (2011).</li>
<li>Yan, J., Tie, G., Xu, T. Y., Cecchini, K., Messina, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+as+a+treatment+for+peripheral+arterial+disease%3A+current+status+and+potential+impact+of+type+II+diabetes+on+their+therapeutic+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell.+Rev%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells as a treatment for peripheral arterial disease: current status and potential impact of type II diabetes on their therapeutic efficacy.</a> Stem Cell. Rev. 9 (3), 360-372 (2013).</li>
<li>Ringden, O., Keating, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stromal+cells+as+treatment+for+chronic+GVHD%5BTitle%5D)+AND+%22Bone+Marrow+Transplant%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stromal cells as treatment for chronic GVHD.</a> Bone Marrow Transplant. 46 (2), 163-164 (2011).</li>
<li>Matsumoto, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mature+adipocyte-derived+dedifferentiated+fat+cells+exhibit+multilineage+potential%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mature adipocyte-derived dedifferentiated fat cells exhibit multilineage potential.</a> J. Cell. Physiol. 215 (1), 210-222 (2008).</li>
<li>Lessard, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+human+adipose+stem+cells+through+dedifferentiation+of+mature+adipocytes+in+ceiling+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Generation of human adipose stem cells through dedifferentiation of mature adipocytes in ceiling cultures.</a> J. Vis. Exp. (97), (2015).</li>
<li>Lessard, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+dedifferentiating+human+mature+adipocytes+from+the+visceral+and+subcutaneous+fat+compartments%3A+fibroblast-activation+protein+alpha+and+dipeptidyl+peptidase+4+as+major+components+of+matrix+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Characterization of dedifferentiating human mature adipocytes from the visceral and subcutaneous fat compartments: fibroblast-activation protein alpha and dipeptidyl peptidase 4 as major components of matrix remodeling.</a> PLoS One. 10 (3), 0122065(2015).</li>
<li>Peng, X., et al. Phenotypic and Functional Properties of Porcine Dedifferentiated Fat Cells during the Long-Term Culture In Vitro. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPeng%2C+X+%22Biomed.+Res.+Int%22">Biomed. Res. Int</a>. 2015, 673651(2015).</li>
<li>Kono, S., Kazama, T., Kano, K., Harada, K., Uechi, M., Matsumoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+and+functional+properties+of+feline+dedifferentiated+fat+cells+and+adipose-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Vet.+J%22%5BJournal%5D)">Phenotypic and functional properties of feline dedifferentiated fat cells and adipose-derived stem cells.</a> Vet. J. 199 (1), 88-96 (2014).</li>
<li>Bellin, M., Marchetto, M. C., Gage, F. H., Mummery, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induced+pluripotent+stem+cells%3A+the+new+patient%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Induced pluripotent stem cells: the new patient.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 13 (11), 713-726 (2012).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

Adipocytes מבוגרים שעוברים ב dedifferentiation במבחנה, תהליך המכונה תרבות תקרה, עלול לחזור פנוטיפ פרימיטיווי יותר ולהשיג יכולות שגשוג. תאים אלה מכונים שומן dedifferentiated כתאים (DFAT). פוטנציאל בידול multilineage של תאי DFAT הוערך. Cytometry זרימה חשף ניתוח ביטוי ניתוח גנים שתאי DFAT היו הומוגנית מאוד בהשוואה 6 ASCs. למעשה, הפרופיל אנטיגן פני קרום התא של תאי DFAT דומה מאוד לאלה שנמצאו ASCs 6. בהתאם לכך, תאי DFAT עשויים פועלים באופן דומה MS...

Cell טיפול והנדסת רקמות הם נושאים חמים בתחום של רפואה רגנרטיבית 1-5. בעוד שיטות טיפול אלה מחזיקות הבטחה גדולה, כמה בעיות טכניות כרגע לעצור בשימושו הקליני שלהם. בהקשר זה, כמו בדור של תאי שב&quot;ס, כל טיפולי הנדסת הרקמות חייבים לייצר תאים ללא transductions גן החיצוני על מנת לשמור על בטיחות חולה. בהתאם לכך, היינו הקבוצה הראשונה לייצר תאי DFAT אדם בהצלחה 6. מספר קבוצות מחקר אחרות מאז אמצו את השיטה שלנו כדי לייצר תאי DFAT ממוצא יונק 7-9, עוד המדגישות את התועלת של המודל שלנו. במהלך מספר מחקרים, מצאנו כי איכות סביבת תרבית תאים ניתן לשנות על ידי התאמת התוכן של המדיום הסלולרי. ממצא זה הוביל לעלייה בשיעור ההצלחה של ייצור תאי DFAT ואיכות תא משופר; הן גורמים קריטייםיצירת תאים ביעילות לניסויים קליניים עתידיים. בהקשר זה, מדיום תרבות משופר DFAT (DCM, מדיום דומה mesenchymal גזע מדיום סלולארי, המכיל אינסולין אנושי רקומביננטי, אלבומין, חומצת L-גלוטמית, כמה חומצות שומן, כולסטרול) שיטה לייצור תאי DFAT ו התפשטות פותחה (מידע נוסף על התוכן של DCM זמין לפי בקשה). שימוש זה תאי שיטה באיכות גבוהה DFAT נוצרו עם היכולת להתמיין לסוגי תאים שונים, הכוללים adipogenic, osteogenic, ותאי chondrogenic. בסך הכל, פרוטוקול תרבית תאי תוקף זה משפר את איכות תאי DFAT ועשוי להיות שימושי למדי עבור שיפור יישומים קליניים של טיפול בתאים והנדסת רקמות.

<table><tbody><tr><td>CSTI303-MSC בינוני&nbsp;</td><td>CSTI</td><td>87-671</td><td>מדיום זה מוגדר כ-DCM בטקסט</td></tr><tr><td>PBS(-)</td><td>Wako</td><td>166-23555</td><td>הוא אינו מכיל Mg2+ ו-Ca2+</td></tr><tr><td>DMEM בינוני</td><td>Gibco</td><td>11965-092</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>סיגמא</td><td>172012</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז סוג II</td><td>Sigma</td><td>C-6885</td><td></td></tr><tr><td>מספריים</td><td>Takasago תעשיה רפואית ושות', בע"מ</td><td>TKZ-F2194-1</td><td></td></tr><tr><td>שייקר</td><td>TAITEC</td><td>Bioshaker V.BR-36</td><td></td></tr><tr><td>מסננת תאי פלקון 100 &mu; מ צהוב</td><td>קורנינג מדעי החיים&nbsp;</td><td>DL 352360</td><td></td></tr><tr><td>פלקון 12.5 ס"מ&סופ2; בקבוק תרבית תאי צוואר מלבני עם מכסה בורג מאוורר כחול</td><td>CORNING LIFE SCIENCES&nbsp;</td><td></td><td></td>353107</tr><tr><td>מחט 18 גרם</td><td>NIPRO</td><td>02-002</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 20 מ"ל&nbsp;</td><td>NIPRO</td><td>08-753</td><td></td></tr><tr><td>Z סדרת קולטר מונה</td><td>בקמן קולטר</td><td>383550</td><td></td></tr></tbody></table>

שיטה יעילה להשיג תאי dedifferentiated שומן

An Efficient Method to Obtain Dedifferentiated Fat Cells

הנדסת רקמות טיפול בתאים להחזיק הבטחה גדולה קלינית. בהקשר זה, תאי מולטיפוטנטיים, כגון תאי גזע mesenchymal (MSCs), ניתן להשתמש לצורך טיפולי בעתיד הקרוב, כדי לשקם את תפקוד לאיברים פגומים. אף על פי כן, כמה בעיות טכניות, לרבות הליך פולשני מאוד לבודד MSCs ואת יעילות שמסביב הגברה שלהם, כרגע לעכב את השימוש הקליני הפוטנציאל של שיטות טיפול אלה. בזאת, אנו מציגים שיטה יעילה ביותר עבור הדור של תאי שומן dedifferentiated (DFAT), תאי MSC דמויים. מעניין לציין, כי תאים DFAT ניתן להבדיל לכמה סוגי תאים כולל adipogenic, osteogenic, ותאי chondrogenic. למרות קבוצות אחרות בעבר הציגו שיטות שונות להפקת תאי DFAT מרקמות שומן בוגרות, השיטה שלנו מאפשרת לנו לייצר תאי DFAT בצורה יעילה יותר. בהקשר זה, אנו מראים כי מדיום תרבות DFAT (DCM), בתוספת 20% FBS,הוא יעיל יותר ביצירת תאי DFAT מ DMEM, בתוספת 20% FBS. בנוסף, תאי DFAT המיוצרים על ידי שיטת תרבית תאים שלנו ניתן redifferentiated לתוך סוגי רקמות שונים. ככזה, מודל מעניין ושימושי מאוד לחקר dedifferentiation רקמות מוצג.

<html> במחקר זה, שיטת ערכת הכלים עבור דור תא DFAT השתפרו (איור 1). השיטה שלנו מאפשרת לנו לייצר תאי DFAT היא באמצעות DCM ו DMEM בינוני המכילים 20% FBS (איור 2 א). ככזה, השווינו את היעילות של DCM ו DMEM ביצירת תאי DFAT. בהקשר זה, DCM משופרת התפשטות תאים DFAT פי שלושה בהשוואה DMEM, ללא קשר למספר של adipocytes (איור 2 א &#39;וב&#39;). באמצעות 20% FBS גם משפר את צמיחת תאים בהשוואה פרוטוק...

שינינו את התנאים ליצירת תאי DFAT ומספקים כאן מידע לגבי השימוש במצע גידול משופר לייצור תאים אלה.

שיטה יעילה להשיג תאי Dedifferentiated שומן

Tissue engineering and cell therapy hold great promise clinically. In this regard, multipotent cells, such as mesenchymal stem cells (MSCs), may be used ...

המטרה הכוללת של שיטת תרבית התאים החדשנית הזו היא להפיק תאי שומן שעברו דה-דיפרנציאציה (dedifferentiated) ביעילות רבה יותר. השיטה שלנו עשויה לסייע לחוקרים הפועלים בתחום הרפואה הרגנרטיבית לענות על שאלות מרכזיות בנוגע לתהליכים השונים המעורבים בייצור תאים אדיפוגניים, אוסטאוגניים וכונדרוגניים. מכיוון שהיתרון העיקרי של פרוטוקול תרבית התאים שלנו הוא שיפור איכותם של תאי DEFAT, ניתן יהיה ליישמו בעתיד הקרוב כדי לשפר יישומים נוכחיים בתרפיה תאית ובהנדסת רקמות.לאחר העברת דגימת השומן התת-עורי של המטופל מחדר הניתוח למעבדה, שקלו את הרקמה והעבירו דגימה של 1 עד 2 גרם של רקמת שומן למבחנה של 15 מיליליטר. לאחר מכן, שטפו את הדגימה עם 5 מיליליטר של PBS והעבירו את הדגימה לפתית פלסטיק של 10 סנטימטר. הסירו את ה-PBS.לאחר מכן, הוסיפו לצלחת המכילה את הדגימה 10 milliliters של collagenase סטרילי בריכוז של 0.1%weight per volume. לאחר מכן, השתמשו במספריים כירורגיים כדי לקצץ את הרקמה עד להגעה לסמיכות של פירה. העבירו את הרקמה הקצוצה ואת תמיסת ה-collagenase לפ mencegah centrifuge של 15 milliliter ובצעו עיכול בטמפרטורה של 37 degrees Celsius למשך 30 דקות, תוך써 ניעור במהירות של 60 RPM.לאחר העיכול, סננו את הדגימה המעוכלת דרך מסנן של 100 micron לתוך מבחנה נקייה של 15 milliliter. לאחר מכן, העבירו 10 milliliters של מצע גידול DEFAT המועשר ב-2%FBS דרך המסנן. כדי לבודד את תאי השומן מתלי התאים, סבבו תחילה את התאים המסוננים בצנטריפוגה במהירות של 100 times g למשך דקה אחת בטמפרטורת החדר.במהלך הסבוב במרכז פוגה, הכינו חמישה מיליליטר של DCM בתוספת 2% FBS במבחנה בנפח 15 מיליליטר. לאחר מכן, השתמשו בפיפט של 1000 מיקרוליטר כדי לשאוב את תאי השומן הצפים מהמבחנה שעברה סבוב והוסיפו את התאים למבחנה בנפח 15 מיליליטר המכילה מצע. נערה את המבחנה בעדינות כדי לערבב את מצע ה-DCM עם התאים.לאחר מכן, סבבו את המבחנה בצנטריפוגה ב-100 ×g למשך דקה אחת בטמפרטורת החדר. לאחר הסבוב, השתמשו במחט gauge 18 ובמזרק של 20 milliliter כדי להסיר את המצע מתחתית המבחנה. לאחר מכן, הוסיפו לתאים 10 milliliters של DCM מועשר ב-2%FBS וערבבו על ידי ניעור עדין של המבחנה.סובב את התאים שוב בצנטריפוגה ב-100 ×g למשך דקה אחת בטמפרטורת החדר. כדי להתחיל את הזריעה, הוסף 41 milliliters של DCM או DMEM המועשיר ב-20% FBS לבקבוק תרבית של 12.5 סנטימטרים. לאחר מכן, השתמש בפיפטה של 200 microliter כדי לשאוב 40 microliters של תאי שומן והוסף אותם לבקבוק.לאחר מכן, מלאו את הבקבוק ב-DCM או ב-DMEM בתוספת 20%FBS. זה קריטי שהתאים יהיו מפוזרים לאורך כל המצע. הניחו את הבקבוק על המכסה של צלחת פטרי עגולה כדי לשמור עליו במצב שטוח.לבסוף, הניחו את הבקבוק בתוך אינקובטור המכוון ל-5% carbon dioxide ו-37 degrees Celsius והשאירו אותו ללא הפרעה למשך שבעה ימים. לאחר שבוע של דגירה, הפכו את הבקבוק ובדקו אם קיימים תאי שומן שעברו דה-דיפרנציאציה. לאחר מכן, שאבו את המצע והוסיפו לבקבוק חמישה מיליליטרים של DCM או DMEM המועשרים ב-20% FBS.אפשרו לתאי ה-DEFAT לגדול למשך שבוע נוסף לאחר החלפת המצע. לאחר שבוע, השתמשו בסופר תאים כדי לספור את מספר תאי ה-DEFAT שנוצרו תחת תנאי תרבית שונים. תמונה זו מציגה מושבות של תאי DEFAT לאחר 14 ימי תרבית ב-DMEM.כאן מוצגים תאי DEFAT לאחר 14 ימי תרבית ב-DCM. בכל מקרה, סרגל המقياس מייצג 200 microns. השגחתו של תאי DEFAT כומתה באמצעות סופר תאים, והיעילות של DCM ו-DMEM ביצירת תאי DEFAT הושוותה.כפי שנראה כאן, נצפתה פרוליפרציה תאית מוגברת בשימוש ב-DCM. כאן, תאי DEFAT אנושיים, שהופקו באמצעות DCM, תורבדו במשך שלושה שבועות במצעי השראה מתאימים כדי להעריך את יכולות הדיפרנציאציה והדיפרנציאציה מחדש של תאי DEFAT. התאים היו חיוביים ליכולת אוסטאוגנית על ידי צביעת פוספטאזה עיורית וצביעה ב-Alizarin Red S. לבסוף, יכולת אדיפוגנית הודגמה באמצעות צביעת Oil Red O.חשוב מאוד להבטיח כי both הטיפול בקולגנאז עם השאריות ובידוד תאי השומן יבוצעו בזהירות מרבית, וזאת כדי להפיק בהצלחה תאי DEFAT באיכות גבוהה. באמצעות מאמצים אלו, שיטת תרבית התאים המהודקת שלנו שואפת להקל על מאמצי מחקר נוכחיים ועתידיים בתחומי הביולוגיה ההתפתחותית והרפואה הרגנרטיבית.

an-efficient-method-to-obtain-dedifferentiated-fat-cells

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

אדיפוציטים בוגרים עשויים להוות מקור שופע לתאי גזע באמצעות דה-דיפרנציאציה, מה שמוביל לאוכלוסייה הומוגנית של תאים דמויי פיברובלסטים. עיכול קולגנאז משמש לבידוד אדיפוציטים בוגרים משומן אנושי. מטרת הפרוטוקול שלנו היא להשיג תאי שומן רב-עוצמתיים ומפורקים מתאי שומן בוגרים אנושיים.

דור של תאי גזע שומן האדם דרך Dedifferentiation של מבוגרים adipocytes בתרבויות תקרה

הבידול של adipocytes לבן ובייז של רקמת שומן אבות כלי הדם נושא פוטנציאל שיפור חילוף החומרים ההשמנה. נתאר פרוטוקולים של CD34 + CD31 + בידוד תאי אנדותל של שומן אנושי ואת הבאים במבחנה הרחבה, בידול לתוך לבן ובייז adipocytes. הם דנו מספר יישומים במורד הזרם.

בידוד, הרחבה, אינדוקציה Adipogenic CD34 + CD31 + תאי אנדותל של אדם עם פגיעה ו התת-עורית שומן

שומן לבן (וואט) יש ליקויים קריטי הדגמים תרבות הראשי הנוכחי שלה, הפרעה מטבולית מחקרים ופיתוח תרופתי. כאן, אנו מציגים פרוטוקול לייצר מערכת microphysiological אדיפוז מאת וואט sandwiching בין גליונות של תאי סטרומה. מבנה זה מספק פלטפורמה יציבה וניתנת להתאמה לתרבות וואט העיקרי.

פלטפורמה Microphysiologic שומן אנושי: דחוקה שומן לבן

פרוטוקול זה מתאר את הגישה הטכנית לבידוד תת-אוכלוסיות תאי סטרומה אדיפוגניים ופיברו-דלקתיים ממחסני רקמת שומן לבן תוך בטני (WAT) על ידי מיון תאים המופעלים על ידי פלואורסצנטיות או הפרדת חרוזים אימונומגנטית.

בידוד תת-אוכלוסיות תאי סטרומה אדיפוגניים ופיברו-דלקתיים ממחסני שומן תוך-בטניים של מורין

אנו מציגים שיטה פשוטה לבודד תאי אב שומן קיימא מאוד מרפידות שומן אפידיליות עכבר באמצעות מיון תאים המופעלים פלואורסצנטיות.

הכנת תאי אדיפוס אבות מרקמות שומן אפידימליות עכבר

הפרוטוקול מאפשר יצירת אוכלוסיית אדיפוציט טהורה מתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים (iPSCs). חומצה רטינואית משמשת להתמיינות iPSCs לתאי גזע מזנכימליים (MSCs) המשמשים לייצור אדיפוציטים. לאחר מכן, גישת מיון המבוססת על צביעה אדומה של הנילוס משמשת להשגת אדיפוציטים טהורים.

התמיינות איתנה של תאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים אנושיים לאוכלוסייה טהורה של אדיפוציטים כדי לחקור הפרעות הקשורות לאדיפוציטים

פרוטוקול זה מתאר את הבידוד החצי-אוטומטי של מקטע כלי הדם סטרומה (SVF) מרקמת השומן של מורין כדי להשיג קדם-אדיפוציטים ולהשיג התמיינות אדיפוציט במבחנה. שימוש בדיסוציאטור רקמות לעיכול קולגנאז מפחית את השונות הניסיונית ומגביר את יכולת הרבייה.

בידוד חצי אוטומטי של מקטע כלי הדם הסטרומלי מרקמת השומן הלבנה באמצעות דיסוציאטור רקמות

פרוטוקול זה מתאר את הבידוד של אבות פיברו-אדיפוגניים של שרירי השלד והלב (FAPs) מעכבר קוצני (Acomys) באמצעות דיסוציאציה אנזימטית ומיון תאים המופעלים על ידי פלואורסצנציה. FAPs המתקבלים מפרוטוקול זה ניתן להרחיב ביעילות ולהבדיל למיופיברובלסטים ואדיפוציטים.

בידוד, הרחבה והבחנה של אב פיברו-אדיפוגני ממודל העכבר הקוצני

כאן, אנו מציגים פרוטוקול שיכול להפוך רקמת שומן אוטולוגית לחומרים מרכיבי שומן שונים בעלי תכונות ותפקודים פיזיקוכימיים שונים.

פיצול רקמת שומן חדשני להפיכת שומן לרכיבים מיוחדים

כאן אנו מציגים שיטה סטנדרטית לבידוד יעיל של תאי גזע ומגדלי שומן שמקורם בשומן, המאופיינת בהפחתה של &gt;90% בזמן העיבוד, חיוניות תאית גבוהה ותאימות רחבה.

בידוד יעיל של תאי גזע ושומנים שמקורם בשומן מרקמת שומן חזיר

למד שיטת תרבית תאים יעילה ליצירת תאי שומן מופחתי-התמיינות (DFAT) באיכות גבוהה. הפרוטוקול משפר יישומים ברפואה מחזורית והנדסת רקמות עבור חוקרים בתחום.

שיטה יעילה להשיג תאי Dedifferentiated שומן

גלה סרטונים נוספים