פיתוח ותחזוקה של גידול נגזר החולה פרה xenograft דגם לחקירת Novel טיפולים נגד סרטן

המטרה הכוללת של הליך קסנוגרפט גידול תת עורי זה היא לחקור את היעילות של טיפולים חדשים, גילוי סמנים ביולוגיים מנבאים ומסלולים עמידים לתרופות בגידולים. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום האונקולוגי האם תרופה מסוימת מציגה פעילות כנגד סוג גידול מסוים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שקסנוגרפים של גידולים שמקורם בחולה שומרים על ההטרוגניות המולקולרית, הגנטית וההיסטולוגית האופיינית לגידולי המקור, מה שהופך את המודל לרלוונטי יותר מבחינה קלינית.

תדגים את ההליך סטייסי באגבי, עוזרת מחקר מקצועית וטכנאית וטרינרית מוסמכת מהמעבדה שלנו. לאחר איסוף מיליליטר עד שניים של דם בצינור הפרדת תאי דם המכיל נתרן ציטראט, צנטריפוגה את הדגימות והעבירו את שכבת התאים החד-גרעיניים של הדם ההיקפי לצינור מיקרו-צנטריפוגה של 1.5 מיליליטר. מלאו את הצינור למעלה ב- PBS סטרילי.

לאחר מכן, סובב שוב את התאים. לאחר מכן שטיפה מהירה עם מיליליטר אחד של PBS, תוך הקפדה לא להפריע לכדור PMBC. לאחר מכן, השתמש בפיפטה כדי להעביר את הפלזמה מצינור איסוף תאי הדם לבקבוקון קריוגני סטרילי של 1.5 מיליליטר, ולאחסן את הפלזמה ואת כדור ה-PBMC בטמפרטורה שלילית של 80 מעלות צלזיוס.

העבירו את רקמת הגידול האנושי למתקן החי בכוס סטרילית המכילה מדיום שלם והניחו את הכוס במכסה זרימה למינרית. בהקדם האפשרי, לאחר הקטיף, העבירו את הרקמה לכלי חיתוך מפלסטיק סטרילי בכמות קטנה של מדיום האחזור. לאחר מכן, בעזרת מספריים ומלקחיים קטנים מעוקרים בחיטוי, חותכים את הרקמה לחתיכות של כשלושה על שלושה על שלושה מיליליטר ומניחים 10 עד 12 חתיכות לתוך צינור מיקרו-צנטריפוגה מעוקר של 1.5 מיליליטר המכיל 300 מיקרוליטר של תמיסת תערובת חלבון ג'לטינית על קרח לצורך ההשתלה.

לאחסון קפוא בזק, העבירו את המספר המתאים של חלקי הגידול לתוך צינור מיקרו-צנטריפוגה חדש של 1.5 מיליליטר והניחו את הבקבוקון במכשיר חנקן נוזלי. לאחר מכן, מכניסים למקפיא מינוס 80 מעלות צלזיוס. לקיבוע רשמי והטמעת פרפין, הניחו שלוש חתיכות גידול קטנות בכוס פורמלין של 10 מיליליטר 10% למשך 24 שעות.

לאחר עיבוד הרקמות לבלוקים משובצים בפרפין, העבירו את כל חלקי הרקמה שנותרו לתוך צינור קריוגני. לאחר מכן, הוסיפו לרקמה מיליליטר אחד של מדיום שלם בתוספת 10% DMSO ואחסנו את הצינורות על קרח עד שניתן יהיה להעביר אותם למיכל הקפאה של אלכוהול איזופרופיל. והכניסו את המיכל הזה למקפיא מינוס 80 מעלות צלזיוס.

כדי להזריק את רקמת הגידול, טען את חתיכות הגידול המאוחסנות בתמיסת תערובת החלבון הג'לטיני לתוך טרוקרים 12 מד חיטוי, תוך הקפדה שכל חתיכת גידול תוכנס לחלוטין לתוך הטרוקר. לאחר מכן, אשר חוסר תגובה לצביטה בבוהן בעכבר עירום אתימי בן שישה עד שמונה שבועות והעביר את העכבר לשדה נקי במכסה זרימה למינרי סטרילי. העבירו את הגידול F0 תת עורי לאזור הצוואר הגבי ולכל צד של צד העכבר, ולאחר מכן מתן תת עורי של משככי כאבים דיסטליים לאחד מאתרי הזרקת הגידול.

לאחר מכן, החזר את העכבר לכלוב שלו עם ניטור עד להתאוששות מלאה. עקוב אחר הגדילה והבריאות של העכברים המושתלים בקסנוגרף לפחות פעם בשבוע, ורשום את גדלי הגידול, יצירת הגידול, תאריך הזרקת הגידול ובריאות העכברים במערכת מעקב מתאימה. כאשר גידול מגיע לגודל של כ-1,500 עד 2,000 מילימטר מעוקב, השתמש במספריים ומלקחיים אוטומטיים כדי לכרות את הגידול ולהעביר את הגידול F1 לדור הבא של חמש חיות, כפי שהודגם זה עתה, תוך הקפדה על איסוף פורמלין קפוא ודגימות גידול ברות קיימא כפי שהודגם עבור כל גידול.

כאשר העכברים הנותרים מקבוצת הגידול F0 מציגים גידולים בגודל של כ-1,500 עד 2,000 מילימטר מעוקב, אסוף את הגידולים הללו כפי שהודגם זה עתה לאיסוף. כאשר מגיעים לשלב יצירת הגידול F15, השתמש בדור המוקדם ביותר של חלקי גידול ברי קיימא הזמינים באחסון חנקן נוזלי לסדרה הבאה של זריקות הגידול. כאשר הגידול הרצוי גדול מאוד, 1,500 עד 2,000 מילימטרים מעוקבים, בצע את ההליכים לעיל כדי לאסוף את הגידול ולהרחיב אותו לכמות הרצויה של עכברים.

מינון העכברים עם התרופה ושקילה ומדידה פעמיים בשבוע. לחלק את העכברים באופן אקראי לקבוצות טיפול עם 10 גידולים לקבוצה, ונפח גידול קבוצתי ממוצע של 100 עד 300 מילימטרים מעוקבים בכמה סטיות תקן זה מזה. לאחר מכן, מיין את העכברים לקבוצות המתאימות לטיפול.

הכלאה של פלואורסצנציה בצבע כפול באתרה עבור DNA אחד של אדם ועכבר שנתפס מדגים כי תאי הסטרומה האנושיים בגידול F0 מוחלפים בתאי הסטרומה של העכבר בגידול F1. בעוד שכל גורם גדילת הפטוציטים שמקורו בבני אדם בדור F0 מוחלף בגורם גדילת הפטוציטים של עכבר בדור F1, ליגנד גורם הגדילה האנדותל של כלי הדם מורכב מחלבון אנושי ועכבר בדור F1. הטיפול בדורות שונים של אותו גידול אינו משנה את תגובת הטיפול.

כאשר העמידות או הרגישות של הגידול נראית כזן גידול ולא ספציפי ליצירת הגידול. יתר על כן, תדירות המוטציות בגנים המוטנטיים השכיחים הללו דומה מאוד בין אטלס גנום הסרטן לבין בנק קסנוגרף הגידול שמקורו בחולה המעי הגס. מה שמצביע על כך שהמוטציות השכיחות שנצפו באוכלוסיית חולי המעי הגס מיוצגות היטב במודל ההשתלה שמקורו בחולה המעי הגס.

לאחר שליטה, ניתן להשלים טכניקה זו תוך שעה עד שעתיים, אם היא מבוצעת כראוי. בעת הניסיון בהליך זה, חשוב שיהיה צוות קליני מגובש לזיהוי וקבלת הסכמה מחולי הסרטן ולהסרה וגלישה של רקמת הגידול. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות, כמו חקירה של תרכובות אנטי-סרטניות כסוכנים בודדים או משולבים, כדי לענות על שאלות נוספות לגבי הכדאיות של אסטרטגיות אלה עבור חולים עם סוג גידול מסוים.

לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום האונקולוגיה לחקור טיפולים חדשים בסרטן, הטרוגניות של גידולים, מנגנונים עמידים לטיפול, ביולוגיה של תאי גזע סרטניים ואינטראקציות סטרומליות של גידולים. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לפתח ולתחזק מודל קסנוגרף גידול שמקורו בחולה להערכת טיפולים חדשים בסרטן.