Name: הדמיה של שינוי צורה של התא ותנועתו ב תסיסנית Gastrulation שימוש Reporter DE-cadherin זבובים טרנסגניים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 42 s
Description: למדו שיטת הדמיה חיה לניתוח תנועות תאיות ושינוי צורה בגסטרולציה של Drosophila. השיטה מאפשרת זיהוי התכווצות אפיקלית וסידור מחדש של תאים בפיתוח עוברי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך על ידי קרן אסטלס לחקר הפרעות מטבוליות (HT), קרן טקדה למדע (HT) והתוכנית הנתמכת על ידי MEXT עבור קרן המחקר האסטרטגי באוניברסיטאות פרטיות (HT).

הערה: הזבובים המהונדסים נעשו שימוש במחקר זה כולל את הפעולות הבאות: DE-CAD :: GFP 10. 1. הכנת הצלחת האפלה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכינו תערובת של אגר 12.5 גרם, 125 מ&quot;ל 100% מיץ תפוחים זמינים מסחרית, 12.5 גלוקוז g, ו- 375 מ&quot;ל H 2 O. מחממים את התערובת במיקרוגל ויוצקים אותו לתוך צלחת תרבית תאים 3 ס&quot;מ. אחסן את התערובת על 4 מעלות צלזיוס לשימוש עתידי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הכנת צלחת התפוח, להוסיף שכבה דקה של ממרח שמרים לש ​​על גבי זה כדי לאפשר הזבובים להטיל ביצים. </li></ol> 2. הכנת עובר ופרוטוקול הדמיה חיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים כ 50 זבובים (25 זכרים ו -25 נקבות) בבקבוק להזדווג ובהמשך להטיל ביצים לילה על צלחת תפוח מכוסה שמרים לשה. הגדר את צלחת מיץ תפוחים בפתחו של הבקבוק. שמור את הבקבוק באינקובטור. עוטפים את בקבוקי פלסטיק תסיסנית המניות ברדיד אלומיניום כדי להנחות הדואר טס להטיל יותר ביצים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למחרת בבוקר, להחליף את צלחת מיץ תפוחים הישן בחדש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו הזבובים להטיל ביצים במשך 3 עד 4 שעות על ידי לפפה את הבקבוק בנייר אלומיניום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שלוש עד ארבע שעות מאוחר יותר, לאסוף את העוברים בתוך מסננת העובר מהצלחת מיץ תפוחים באמצעות רע מברשת או כותנה ולשטוף אותם עם PBS. לשטוף את העוברים 2 עד 3 פעמים יותר עם PBS במנות תרבות 12 גם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Dechorionate את העוברים עם אקונומיקה 50% במשך 5 דקות במנות תרבות 12 גם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות תהליך dechorionation, לשטוף את העוברים 2 עד 3 פעמים יותר עם PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את העוברים על צלחת תרבית תאים 3 ס&quot;מ המכיל הבמה PBS ובחר 5 עוברים תחת המיקרוסקופ מבוסס על רמת שקיפות גבולותיהן. פיפטה עובר המבוים באמצעות קצה פיפטה 200 μL. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב הבא, במקום שני עוברים שנבחרו על coverslip זכוכית, ולהסיר PBS העודף בנייר טישו מעוות דק. אוריינט עובר בצד הגבה עלאת coverslip באמצעות נייר טישו מעוות דק. לאחר מכן, לצרף את עוברי coverslip הזכוכית עם גריז סיליקון באמצעות מחט דקה ונייר דק מעווה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף טיפה קטנה של שמן halocarbon 700 על העוברים ומניחים את coverslip המכיל את העוברים במהופך בשקופית מסוכסך, משאיר קצת מקום בתחתית המגלשה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את העוברים באמצעות מערכת הדמיה confocal, לייזר ארגון / 488, אובייקטיבי טבילה-שמן (63X). הערה: זיהוי העובר בשלב ההתפתחותי המתאים חשובה ללכוד תמונות של אירוע gastrulation. בתנאים אלה, יש למלא אחר כמעט כל העוברים להתפתח בצורה תקינה עד לשלב לפחות 14. העובר נתח יכול להיות מתורבת להמשיך לפתח כמבוגר. </li></ol>

<ol><li>Haruta, T., Warrior, R., Yonemura, S., Oda, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+proximal+half+of+the+Drosophila+E-cadherin+extracellular+region+is+dispensable+for+many+cadherin-dependent+events+but+required+for+ventral+furrow+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Cells%22%5BJournal%5D)">The proximal half of the Drosophila E-cadherin extracellular region is dispensable for many cadherin-dependent events but required for ventral furrow formation.</a> Genes Cells. 15 (3), 193-208 (2010).</li>
<li>Oda, H., Takeichi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution%3A+structural+and+functional+diversity+of+cadherin+at+the+adherens+junction%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Evolution: structural and functional diversity of cadherin at the adherens junction.</a> J. Cell Biol. 193 (7), 1137-1146 (2011).</li>
<li>Fernandez-Sanchez, M. E., Serman, F., Ahmadi, P., Farge, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+induction+in+embryonic+development+and+tumor+growth+integrative+cues+through+molecular+to+multicellular+interplay+and+evolutionary+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Mechanical induction in embryonic development and tumor growth integrative cues through molecular to multicellular interplay and evolutionary perspectives.</a> Methods Cell Biol. 98, 295-321 (2010).</li>
<li>Alderton, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastasis%3A+Epithelial+to+mesenchymal+and+back+again%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Metastasis: Epithelial to mesenchymal and back again.</a> Nat. Rev. Cancer. 13 (1), 3(2013).</li>
<li>Fabregat, I., Malfettone, A., Soukupova, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+Insights+into+the+Crossroads+between+EMT+and+Stemness+in+the+Context+of+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Med%22%5BJournal%5D)">New Insights into the Crossroads between EMT and Stemness in the Context of Cancer.</a> J. Clin. Med. 5 (3), (2016).</li>
<li>Serrano-Gomez, S. J., Maziveyi, M., Alahari, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+epithelial-mesenchymal+transition+through+epigenetic+and+post-translational+modifications%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Regulation of epithelial-mesenchymal transition through epigenetic and post-translational modifications.</a> Mol. Cancer. 15, (2016).</li>
<li>Yu, A. Q., Ding, Y., Li, C. L., Yang, Y., Yan, S. R., Li, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TALEN-induced+disruption+of+Nanog+expression+results+in+reduced+proliferation%2C+invasiveness+and+migration%2C+increased+chemosensitivity+and+reversal+of+EMT+in+HepG2+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Oncol.+Rep%22%5BJournal%5D)">TALEN-induced disruption of Nanog expression results in reduced proliferation, invasiveness and migration, increased chemosensitivity and reversal of EMT in HepG2 cells.</a> Oncol. Rep. 35 (3), 1657-1663 (2016).</li>
<li>Zheng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial-to-mesenchymal+transition+is+dispensable+for+metastasis+but+induces+chemoresistance+in+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Epithelial-to-mesenchymal transition is dispensable for metastasis but induces chemoresistance in pancreatic cancer.</a> Nature. 527 (7579), 525-530 (2015).</li>
<li>Kalluri, R., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+basics+of+epithelial-mesenchymal+transition%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">The basics of epithelial-mesenchymal transition.</a> J. Clin. Invest. 119 (6), 1420-1428 (2009).</li>
<li>Huang, J., Zhou, W., Dong, W., Watson, A. M., Hong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed%2C+efficient%2C+and+versatile+modifications+of+the+Drosophila+genome+by+genomic+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Directed, efficient, and versatile modifications of the Drosophila genome by genomic engineering.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 106 (20), 8284-8289 (2009).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

למרות שדיווחנו בעבר על הליך דומה לצילום תמונות חיות של תהליך הקיבה בדרוזופילה1, השיטה שאנו מתארים כאן מפורטת וקלה למעקב אחר ביטוי קדרין אנדוגני ולכן היא שימושית למדי לסריקה גנטית של גורמי מפתח המעורבים בקיבה. כדי למקסם את ההצלחה בהליך הדמיה זה, חיוני להשתמש בשקופית שקועה. לחץ מכני גורם לפעמים למוות עוברי. לכן, חשוב גם לטפל בעוברים בעדינות ככל האפשר מכיוון שכל לחץ מכני עלול לשבש את תהליך הקיבה העוברית. שימוש בכמות הנכונה של שומן במהלך קיבוע העובר ישפר עוד יותר את תוצאות הליך ההדמיה החיה. 
<p class=...

Gastrulation הוא הסט הראשון של אירועים דינמי מורפולוגית המתרחשים במהלך ההתפתחות העוברית של בעלי חיים רב-תאיים כגון תסיסנית 1,2. מעניין, המתעוררים הראיות עולה כי תהליך זה מוסדר באמצעות משחק הגומלין בין מנגנונים מכניים ומולקולרית 3. יתר על כן, אפיתל המעבר mesenchymal (EMT), שהוא תהליך מכריע gastrulation, הוא מעורב גם בתהליכי מחלות אנושיות כגון גרורות סרטן 4-8. כמו גנים כאלה, רבים השולטים התכווצות פסגה גם ידועים כגורמי מפתח EMT שנצפתה בסרטן גרור 9. לפיכך, מועקה הפסגה בעת gastrulation הוא מודל מצוין לחקור את מנגנוני ויסות הנ&quot;ל כדי לשפר את ההבנה שלנו של גרורות סרטניות. היתרון של שיטה זו הוא כי אנו יכולים לצפות תנועת התא בעת gastrulation בזמן אמת ולכן, אנחנו נהיהמסוגל להקרין גנים המעורבים gastrulation וכן גרורות סרטניות. למרות יחסית ידוע, תא אל התא הדבק הוא חשב לשחק תפקיד מרכזי התכווצות פסגת 1. גנטיקת תסיסנית מתאימה גם לחקירות ברמת התא בודדות לחקור מנגנונים מולקולריים רגולטוריות. מודל זה יאפשר לנו לחשוף את החשיבות של התכווצות הפסגה במהלך gastrulation. יתר על כן, שיטה זו יכולה לשמש מסך גנים המעורבים בהתפשטות גרורות סרטניות. תמונות חיות לכידות של gastrulation תסיסנית נוספת אפשרו לנו להבין ביתר פירוט את המנגנונים המולקולריים השולטים התארגנות רקמות. בזאת, אנו מספקים תיאור מקיף של שיטה פשוטה כדי להשיג זאת.

<table><tbody><tr><td>שמן Halocarbon 700</td><td>Sigma</td><td>MKBH 5726</td><td></td></tr><tr><td>גריז ואקום סיליקון</td><td>בקמן</td><td>335148</td><td></td></tr><tr><td>כיסוי זכוכית&nbsp;</td>עובי <td>זכוכית מטסונאמי</td><td>מס'</td><td>1 24 - 36 מ"מ</td></tr><tr><td>כוכב עובר</td><td>קורנינג קורנינג</td><td>3477</td><td></td></tr><tr><td>בקבוקי מלאי מפלסטיק דרוזופילה</td><td>Hitec</td><td>MKC-100</td><td></td></tr><tr><td>DE-Cadherin זבובי</td><td></td><td></td> דפיקה <td>REF (10)</td></tr></tbody></table>

הדמיה של שינוי צורה של התא ותנועתו ב תסיסנית gastrulation שימוש reporter de-cadherin זבובים טרנסגניים

Imaging of Cell Shape Alteration and Cell Movement in Drosophila Gastrulation Using DE-cadherin Reporter Transgenic Flies

Gastrulation הוא הסט הראשון של אירועים דינמיים מורפולוגית המתרחשים במהלך ההתפתחות העוברית של בעלי חיים רבים-תאיים כגון תסיסנית. שינוי מורפולוגי זו מוכרת גם בשם אפיתל המעבר mesenchymal (EMT). חוסר ויסות של EMT קשורה סיסטיק ו גרורות סרטניות. יש ראיות המתעוררים כי EMT נשלטת על ידי מספר מנגנונים מולקולריים. כמו גנים מפתח כגון, רבים השולטים התכווצות הפסגה גם ידועים להיות מרכיב חשוב EMT ציין בהתפשטות גרורות סרטניות. כמו EMT במהלך gastrulation תסיסנית, תאי אפיתל יכולים להיגרם לשנות את צורתם ואת לתכנת מחדש להפנות תא גורל כלפי סוגי תאים שונים אחרים. כאן אנו מספקים שיטת הדמיה חזקה של gastrulation תסיסנית כדי assay את החניכה של תנועות הסלולר המוךפו&quot;גנטי שהולכות וזיהוי תאי גורל בשלב זה של התפתחות עוברית. באמצעות שיטה זו, אנו מזהים גell התארגנות בזמן gastrulation ולהפגין את החשיבות של התכווצות הפסגה במהלך gastrulation באמצעות GFP שכותרתו DE-cadherin.

כאן, אנו מציגים את אירועי gastrulation של עובר תסיסנית סקירה כללית של הליך הכנת עובר (איור 1). קרום התא מסומנים באמצעות DE-cadherin :: GFP ו הדמיה חיה של תנועות תא מתבצע בעת gastrulation תסיסנית (איור 2). מאז זבובי DE-cadherin GFP מאפשרים לנו לדמיין צמתים דבקות תא, אנו מסוגלים לעקוב אחר צורת תא פסגה ותנועות באמצעות מערכת זו. יתרה מכך, מערכת זו גם מאפשרת לנו להתחקות אחר דפוסי ביטוי DE-cadherin אנדוגני. ...

כאן אנו מתארים הליך ללכידת תמונות חיות של גסטרולציה של דרוזופילה. זה אפשר לנו להבין טוב יותר את ההתכווצות האפיקלית הכרוכה בהתפתחות מוקדמת ולנתח עוד יותר מנגנונים השולטים בתנועות התאים במהלך שינוי מבנה הרקמה.

הדמיה של שינוי צורה של התא ותנועתו ב תסיסנית Gastrulation שימוש Reporter DE-cadherin זבובים טרנסגניים

Gastrulation is the first set of morphologically dynamic events that occur during the embryonic development of multicellular animals such as Drosophila. ...

המטרה הכוללת של הליך זה, היא להבין טוב יותר את הצורה והתנועה של התא, במהלך גסטרולציה של דרוזופילה. כאן אנו מספקים שיטת מדידה חסונה של גסטרולציה של דרוזופילה, כדי לבחון את התחלת התנועה התאית המורפוגנטית, בשלב זה של ההתפתחות העוברית. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שניתן לזהות סידור מחדש של תאים בזמן הקיבה, יחד עם התכווצות אפיקלית, במהלך הקיבה.כדי להתחיל בניסוי, הכינו תערובת של 375 מיליליטר מים. 125 מיליליטר 100% מיץ תפוחים זמין מסחרית. 12.5 גרם אגר.12.5 גרם גלוקוז. לאחר מכן, מחממים את התערובת במיקרוגל, עד שהאגר נמס. ושופכים אותו לתבנית תרבית תאים של שלושה סנטימטרים.אחסן את התערובת בחום של 4 מעלות צלזיוס, לשימוש עתידי. לאחר הכנת צלחת התפוחים מוסיפים מעליו שכבה דקה של רסק שמרים לישה, כדי לאפשר לזבובים להטיל ביצים. מניחים 25 זכרים ו -25 נקבות זבובים בבקבוק על צלחת תפוחים מכוסה בשמרים לישה.עטפו את בקבוקי הפלסטיק של Drosophilas בנייר אלומיניום כדי לעודד את הזבובים להטיל ביצים נוספות. שמור את הבקבוק הפוך באינקובטור למשך הלילה. למחרת בבוקר, החלף את צלחת מיץ התפוחים בצלחת טרייה.לאחר מכן עטפו את הבקבוק בנייר אלומיניום ואפשרו לזבובים להטיל ביצים במשך שלוש עד ארבע שעות. לאחר שהזבובים הטילו ביצים, שחררו את הביצים מהצלחת בעזרת ניצן כותנה. אספו את העוברים במסננת, ושטפו אותם עם מי מלח עם פוספט, או PBS.שטפו את העוברים שלוש פעמים נוספות עם PBS, בכלי תרבית של 12 בארות. Dechorionate את העוברים עם 50% אקונומיקה, בכלי תרבית של 12 בארות. לאחר תהליך הדכוריון, שטפו את העוברים שלוש פעמים נוספות עם PBS.העבירו את העוברים לצלחת תרבית תאים של שלושה סנטימטרים המכילה PBS. ולבחור עוברים בשלב 5 תחת המיקרוסקופ, על סמך רמת השקיפות בגבולותיהם. בעזרת קצה פיפטה של 200 מיקרוליטר, אוספים את העוברים המבוימים.לאחר מכן, הניחו שני עוברים נבחרים על פתק כיסוי זכוכית, והסירו עודפי PBS עם נייר טישו. בעזרת נייר טישו מעוות דק, כוון את הצד הגבי של העוברים כלפי מעלה אל החלקת הכיסוי. לאחר מכן חבר את העוברים לכיסוי הזכוכית עם שומן סיליקון בעזרת מחט דקה.הוסף טיפה קטנה של שמן פחמן חלול 700 על העוברים, והנח את הכיסוי המכיל את העוברים הפוך על השקופית השקועה. השארת מקום בתחתית השקופית. לאחר מכן הדביקו את תלוש הכיסוי לשקופית.לבסוף, בחנו את העוברים באמצעות מערכת הדמיה קונפוקלית, לייזר ארגון 488 ומטרה לטבילה בשמן. תמונות זמן-lapse צולמו מהדמיה חיה, תוך שימוש ב-DE-cadherin GFP של תנועת תאים במשך 500 שניות, כדי לנתח את האזורים האפיקליים של תאים בודדים, של דרוזופילה במהלך קיבה. לאחר 500 שניות, התכווצות אפיקלית ופלישה נראים בבירור.על ידי שימוש בשיטה שלנו. אנו יכולים להבין עוד יותר, את המנגנונים המולקולריים, של גסטרולציה של דרוזופילה, כמו גם, מעבר אפיתל למזנכימלי, המעורב בגרורות סרטניות.

imaging-cell-shape-alteration-cell-movement-drosophila-gastrulation

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

כאן אנו מתארים פרוטוקול לבחון את ההגירה של ותאי גלייה לתוך העין תסיסנית מתפתחות באמצעות ניתוח מיקרוסקופי לחיות יחד עם התאים GFP גליה מתויג.

הדמיה חיה של נדידת תאים גליה את הדיסק העין דמותי תסיסנית

Hemocytes תסיסנית לפזר מעל מכלול של העובר המתפתח. פרוטוקול זה מדגים כיצד הר התמונה באמצעות העברות אלה עוברים עם hemocytes שכותרתו fluorescently.

הדמיה חיה של תסיסנית melanogaster Hemocyte נדידות עובריים

כאן אנו מציגים פרוטוקול הרכבה...

הדמיה של זקופה תסיסנית עוברים

התפתחות מוקדמת של זבוב הפירות, דרוזופילה melanogaster, מאופיינת במספר שינויים בצורת התא כי הם גם מתאים גישות הדמיה. מאמר זה יתאר כלים בסיסיים ושיטות הדרושים הדמיה confocal חיים של עוברים תסיסנית, יתמקד בשינוי צורת התא הנקרא cellularization.

צורה הדמיה תא שינוי חיים תסיסנית עוברים

פרוטוקול זה מפרט שיטה יעילה המשמשת לביצוע הדמיה תא חי בהקשר של מוח זחל בשלמותה. גישות הדמיה תא חי הן לא יסולא בפז לחקר חלוקות תא גזע עצביים סימטריות כמו גם תהליכים עצביים והתפתחותיות אחרים, לחשוף באופן עקבי מנגנונים שהתעלמו בעבר.

הדמיה חיה של<em&gt; דרוזופילה</em&gt; הזחל Neuroblasts

המבנים הבוגרים של דרוזופילה נגזרים ממבנים דמויי שק הנקראים דיסקים דמיוניים. ניתוח דיסקים אלה מספק תובנה לגבי תהליכים התפתחותיים רבים כולל קביעת רקמות, קביעת גבול תאים, התפשטות תאים, מפרט גורל התא וקוטביות תאים מישוריים. פרוטוקול זה משמש להכנת דיסקים דמיוניים למיקרוסקופ אור/פלורסנט.

נתיחה וImmunostaining של דמותי דיסקים מ Melanogaster דרוזופילה

פרוטוקול זה מציג שיטה יעילה להדמיה של נוירואפיתל עין גולם חי של דרוזופילה. שיטה זו מפצה על תנועת רקמות וטופולוגיה לא אחידה, משפרת את ההדמיה של גבולות התא באמצעות שימוש בחלבוני צומת מרובים המתויגים ב-GFP, ומשתמשת במתקן הדמיה המורכב בקלות.

Live-הדמיה של דרוזופילה גלמי עין

פרוטוקול זה מדגים כיצד ליצור מסומן פלורסנטי, גידולים המשובטים מוגדר גנטית בעין תסיסנית / דיסקים דמותי מחושים (EAD). הוא מתאר כיצד לנתח את EAD והמוח מן הזחלים instar השלישי וכיצד לעבד אותם לחזות ולכמת שינויים בהתבטאות גנים הפולשנות הגידול.

ה<em&gt; תסיסנית</em&gt; דגם גידול דיסק דמותי: ויזואליזציה וכימות של ביטוי גנים סרטניים הפולשנות שימוש פסיפסים גנטי

פרוטוקול זה מיועד הדמיה וניתוח של הדינמיקה של כיוון התאים ואת צמיחת רקמות בתוך הבטן הדרוזולה epithelia כמו זבוב הפרי עובר מטמורפוזה. המתודולוגיה המתוארת כאן ניתנת להחלה על חקר שלבים, רקמות ומבנים תת-סלולאריים שונים בדרוזופילה או באורגניזמים אחרים במודל.

הדמיה וניתוח של כיוון רקמות ודינמיקה בפיתוח הדרוזולה אפיתליה במהלך שלבי pupal

פרוטוקול זה מתאר תיוג פלואורסצנטי מותאם אישית מבוסס נוגדנים והזרקה לעוברים מוקדמים של דרוזופילה כדי לאפשר הדמיה חיה של חלבונים בשפע נמוך או שינויים לאחר תרגום שמאתגרים לזיהוי באמצעות גישות GFP/mCherry-tag מסורתיות.

הדמיה של חלבונים בשפע נמוך ושינויים לאחר תרגום בעוברי דרוזופילה חיים באמצעות הזרקת נוגדנים פלואורסצנטיים

כאן, מוצג פרוטוקול להדמיה חיה ארוכת טווח של רגל הדרוזופילה בשלב הגולם, הכולל הסרה מלאה של הגולם. ניתן ליישם פרוטוקול זה גם על רקמות אחרות.

הדמיה חיה לטווח ארוך של התפתחות רגל גולם דרוזופילה לאחר הסרת פופריום

למדו שיטת הדמיה חיה לניתוח תנועות תאיות ושינוי צורה בגסטרולציה של Drosophila. השיטה מאפשרת זיהוי התכווצות אפיקלית וסידור מחדש של תאים בפיתוח עוברי.

הדמיה של שינוי צורה של התא ותנועתו ב תסיסנית Gastrulation שימוש Reporter DE-cadherin זבובים טרנסגניים

גלה סרטונים נוספים