Name: פיתוח מודל ישיר מכסת-זול עבור הערכת pulpal ריפוי פצע גיבוש מתקנת הדנטין של עכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-12T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 7 s
Description: למדו את פרוטוקול מכסת-זול ישירה בעכברים לחקר ריפוי פולפי ויצירת דנטין מתקן. שיטה זו מאפשרת מחקר ביולוגיה של הפולפה ופיתוח חומרים דנטליים משופרים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה מומן על ידי R01DE023348 (RHK) מ NIDCR / NIH ואת מענק מחקר הפקולטה (RHK) מהמועצה למחקר של הסנאט האקדמי של חטיבת לוס אנג&#39;לס של אוניברסיטת קליפורניה.

עכברים נרכשו מ ג&#39;קסון מעבדה ולעטוף ביבר חינם לפתוגן בחטיבת UCLA לרפואת בעלי חי מעבדה (DLAM). הניסויים בוצעו על פי ההנחיות מוסדיות המאושרות מן ועדת המחקר החי של הקנצלר (ARC # 2016-037). 1. עכבר הרדמה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בן שמונה שבועות הנקבה C57 / BL6 עכברים (n = 3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכברים באמצעות קטמין (80-120 מ&quot;ג / ק&quot;ג של משקל העכבר) / xylazine (5 מ&quot;ג / ק&quot;ג של משקל העכבר) פתרונות ולנהל intraperitoneally (IP) במינון של 10 מ&quot;ל / ק&quot;ג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן קטמין (80 - 120 מ&quot;ג / ק&quot;ג) / xylazine (5 מ&quot;ג / ק&quot;ג) פתרונות ולנהלם intraperitoneally (IP) במינון של 10 מ&quot;ל / ק&quot;ג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא עכברים בהרדמה מלאה על ידי ביצוע קמצוץ הבוהן. </li></ol> נוהל 2. מכסה-זולה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את בעל הפה בפה של העכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אבטח את בעל פה על השולחן כך שהואהמודעה פונה כלפי מעלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח את המיקרוסקופ (10X) על גבי הפה כך טוחן לסתי הראשונה הוא גלוי לחלוטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות ¼ הסיבוב ספחת בתוך ידית במהירות גבוהה ב 200,000 סל&quot;ד, הוצא את חלק האמייל של השן באמצע עד עיסת גלוי דרך הדנטין השקוף. אין לחשוף את העיסה עם הספחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כשאתה משתמש בקובץ-K endodontic 15 # (בקוטר של 150 מיקרומטר), לנקב דרך הדנטין ולחשוף את העיסה. הערה: טיפול מיוחד צריכה להילקח כך פסול הדנטין לא לקבל דחף לתוך העיסה. זה יכול להימנע על ידי החלפה של קובץ K רבעונים ואז מושך את K-להגיש החוצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים עם MTA סטרילי H 2 O על פי הוראות היצרן. לספק ומקום MTA על העיסה החשופה עם קצה Explorer. השתמש הצד האחורי של נקודת נייר (קנס) לארוז את MTA לתוך העיסה נחשפה על ידי הקשה עדינה. מן הצד הקהה של נקודת נייר שטוח ולכן מאפשרעבור העיבוי התקין של MTA לתוך העיסה החשופה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Etch השן במשך 15 שניות על ידי הנחת etchant חומצה זרחתית 35% שבו זה פשוט מכסה את השן. קח טיפול מיוחד כדי להגביל את המיקום של etchant, מכיוון שהוא עלול לגרום לגירוי רקמות חניכיים. הערה: etchant מגיע מזרק משמש לחספס את משטחי השן כך דבקים שיניים יכול לזרום לתווך מליטה micromechanical על השן. כי הם צמיגים, זה יכול להיות עצמאי על ידי החלת כמויות קטנות ישירות על גבי השן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש יניקה שלילית בלחץ להסיר את etchant. השתמש גלול כותנה, כי הוא שרוי קל באות O H 2 להסיר את שאריות etchant. חזור על שלב זה עד etchant נמחק לחלוטין מן השן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מטלית אוויר דחוס, לייבש את השן בעדינות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל דבקי השיניים באמצעות הישבן של נקודת נייר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך את שכבת דבק דקה באמצעות אוויר דחוס עבור 3 s. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cיור דבקי השיניים במשך 20 שניות באמצעות יחידת אור-ריפוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את מרוכבים flowable בכמויות קטנות על השן והוא היה אטום עם MTA. השתמש בקצה של החוקר לזרום המשולב לתוך חריצי השן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרפא את מרוכבים עבור 30 s באמצעות יחידת-ריפוי אור לפלמר אותו. ודא מרוכבים הוא נרפא לחלוטין וקשה באמצעות הסייר. </li></ol> 3. Post-op Care <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נהל carprofen (5 מ&quot;ג / קילו) תת עורי (SC) מייד לאחר הליך מכסה-העיסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח את העכברים על כרית חימום בהספק נמוך כדי לשמור על החיות חמות לפני שהם מתעוררים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזר את עכברי הביבר לדיור. </li></ol> רכש רקמות 4. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 5 - 6 שבועות, להרדים את העכברים על ידי נקע בצוואר הרחם תחת תנאי הרדמה מלאה עם isoflurane. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוציאים בזהירות את maxilla והוצא אותו מבסיס הגולגולת והכניס אותו לתוך צינור 50 מ&quot;ל. תקן את entirmaxilla דואר המכיל את שני שן העיסה-כתרי שן הסגורה והפתוחה הנגדית paraformaldehyde 4% ב- ​​PBS, pH 7.4, ב 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה, ולאחר מכן לאחסן אותו בתמיסת אתנול 70%. הערה: Paraformaldehyde הוא רעיל ומסרטן. Paraformaldehyde השימוש הנכון צריך להיות במעקב כפי שמתואר נהלי עבודה סטנדרטיים (SOP). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סרוק את maxillae העכבר באמצעות סריקת μCT. להבטחת maxillae במהלך הסריקה, לעטוף את דגימות עם גזה ספוגה 70% אתנול ו למקם אותם בצינור תרבית תאים של 15 מ&quot;ל. </li></ol> 5. סריקה μCT <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את הדגימות לסריקת μCT. בקצרה, לעטוף את דגימות עם גזה ספוגה 70% אתנול ו לאבטח אותם בתוך שפופרת חרוטי תרבית תאים הגנרית של 15 מ&quot;ל. הר הצינור לבמת סריקת μCT, כפי שמתואר בהוראות היצרן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את מקור רנטגן כדי זרם של 145 מיקרו-אמפר, מתח של 55 KVP ופעם חשיפת 200 ms. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע רכישת התמונה עם סורק μCT ברזולוציה 20 מיקרומטר עם מסנן 0.5 מ&quot;מ אל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשחזר את התמונה ולדמיין אותו 11. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הסריקה μCT ההתקנה, הפעל decalcification עם 5% EDTA ו -4 סוכרוז% ב PBS (pH 7.4) במשך 2 שבועות. </li></ol> עיבוד רקמות 6. מכתים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להטביע רקמות decalcified פרפין. לפני ההטבעה, חתוך את maxilla על ידי ביצוע חתך sagittal מייד קדמית הטוחן הראשונה. בעוד הטבעה, מקם המשטח הזה כלפי מטה, כך החתך לאורך של הטוחנת הראשונה הוא משטח החיתוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות microtome, להכין 5 שקופיות מיקרומטר בעובי. האזורים המגבילים עיסת בדרך כלל בקנה אחד עם distopalatal (DP) השורש, אשר ניתן להשתמש בהם כנקודת ציון. לקבוע את האזור המדויק של עניין על ידי בחינת היסטולוגיה במיקרוסקופ אור השוואת תמונות μCT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור H &amp; E מכתימה, deparaffinize ו רעננותם שקופיות עם קסילן (2x) ואתנול בדילול סדרתי (100% EtOH 2x, 95% EtOH 2x, ו -70% EtOH 1x). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את השקופיות במים זורמים מהברז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכתם עם פתרון Hematoxylin עבור 2.5 דקות ולשטוף עם מי ברז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טובלים את השקופיות אתנול 95% דקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כתם עם פתרון Eosin דקות 1 ולשטוף במים ברז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייבשים עם אתנול בדילול סדרתי (70% EtOH 1x, 95% EtOH 2x, ו -100% EtOH 3x) קסילן (3x). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר שקופיות עם פתרון הרכבה. </li></ol>

<ol><li>Dye, B., Thornton-Evans, G., Li, X., Iafolla, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+caries+and+tooth+loss+in+adults+in+the+United+States%2C+2011-2012%5BTitle%5D)+AND+%22NCHS+Data+Brief%22%5BJournal%5D)">Dental caries and tooth loss in adults in the United States, 2011-2012.</a> NCHS Data Brief. (197), 197(2015).</li>
<li>Bagramian, R. A., Garcia-Godoy, F., Volpe, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+global+increase+in+dental+caries.+A+pending+public+health+crisis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Dent%22%5BJournal%5D)">The global increase in dental caries. A pending public health crisis.</a> Am J Dent. 22 (1), 3-8 (2009).</li>
<li>Koliniotou-Koumpia, E., Tziafas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulpal+responses+following+direct+pulp+capping+of+healthy+dog+teeth+with+dentine+adhesive+systems%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent%22%5BJournal%5D)">Pulpal responses following direct pulp capping of healthy dog teeth with dentine adhesive systems.</a> J Dent. 33 (8), 639-647 (2005).</li>
<li>Tarim, B., Hafez, A. A., Cox, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulpal+response+to+a+resin-modified+glass-ionomer+material+on+nonexposed+and+exposed+monkey+pulps%5BTitle%5D)+AND+%22Quintessence+Int%22%5BJournal%5D)">Pulpal response to a resin-modified glass-ionomer material on nonexposed and exposed monkey pulps.</a> Quintessence Int. 29 (8), 535-542 (1998).</li>
<li>Tziafa, C., Koliniotou-Koumpia, E., Papadimitriou, S., Tziafas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dentinogenic+responses+after+direct+pulp+capping+of+miniature+swine+teeth+with+Biodentine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endod%22%5BJournal%5D)">Dentinogenic responses after direct pulp capping of miniature swine teeth with Biodentine.</a> J Endod. 40 (12), 1967-1971 (2014).</li>
<li>Dammaschke, T., Stratmann, U., Fischer, R. J., Sagheri, D., Schafer, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+histologic+investigation+of+direct+pulp+capping+in+rodents+with+dentin+adhesives+and+calcium+hydroxide%5BTitle%5D)+AND+%22Quintessence+Int%22%5BJournal%5D)">A histologic investigation of direct pulp capping in rodents with dentin adhesives and calcium hydroxide.</a> Quintessence Int. 41 (4), 62-71 (2010).</li>
<li>Jegat, N., Septier, D., Veis, A., Poliard, A., Goldberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short-term+effects+of+amelogenin+gene+splice+products+A%2B4+and+A-4+implanted+in+the+exposed+rat+molar+pulp%5BTitle%5D)+AND+%22Head+Face+Med%22%5BJournal%5D)">Short-term effects of amelogenin gene splice products A+4 and A-4 implanted in the exposed rat molar pulp.</a> Head Face Med. 3, 40(2007).</li>
<li>Paterson, R. C., Radford, J. R., Watts, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+response+of+the+rat+molar+pulp+of+two+proprietary+calcium+hydroxide+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Br+Dent+J%22%5BJournal%5D)">The response of the rat molar pulp of two proprietary calcium hydroxide preparations.</a> Br Dent J. 151 (6), 184-186 (1981).</li>
<li>Sela, J., Ulmansky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reaction+of+normal+and+inflamed+dental+pulp+to+Calxyl+and+zinc+oxide+and+eugenol+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Surg+Oral+Med+Oral+Pathol%22%5BJournal%5D)">Reaction of normal and inflamed dental pulp to Calxyl and zinc oxide and eugenol in rats.</a> Oral Surg Oral Med Oral Pathol. 30 (3), 425-430 (1970).</li>
<li>Maurice, C. G., Schour, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+cavity+preparations+in+the+molar+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">Experimental cavity preparations in the molar of the rat.</a> J Dent Res. 34 (3), 429-434 (1955).</li>
<li>Skyscan, N. V. NRecon user manual. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://bruker-microct.com/next/NReconUserGuide.pdf">http://bruker-microct.com/next/NReconUserGuide.pdf</a> (2011).</li>
<li>Sohn, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Role+of+ORAI1+in+the+Odontogenic+Differentiation+of+Human+Dental+Pulp+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">The Role of ORAI1 in the Odontogenic Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells.</a> J Dent Res. 94 (11), 1560-1567 (2015).</li>
<li>Kim, S., Shin, S. J., Song, Y., Kim, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vivo+Experiments+with+Dental+Pulp+Stem+Cells+for+Pulp-Dentin+Complex+Regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Mediators+Inflamm%22%5BJournal%5D)">In Vivo Experiments with Dental Pulp Stem Cells for Pulp-Dentin Complex Regeneration.</a> Mediators Inflamm. 2015, 409347(2015).</li>
<li>Gronthos, S., Mankani, M., Brahim, J., Robey, P. G., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+human+dental+pulp+stem+cells+%28DPSCs%29+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (25), 13625-13630 (2000).</li>
<li>Yu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odontogenic+capability%3A+bone+marrow+stromal+stem+cells+versus+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Odontogenic capability: bone marrow stromal stem cells versus dental pulp stem cells.</a> Biol Cell. 99 (8), 465-474 (2007).</li>
<li>Zhu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+dental+pulp+stem+cells+and+platelet-rich+plasma+for+pulp+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endod%22%5BJournal%5D)">Transplantation of dental pulp stem cells and platelet-rich plasma for pulp regeneration.</a> J Endod. 38 (12), 1604-1609 (2012).</li>
<li>Iohara, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dentin+regeneration+by+dental+pulp+stem+cell+therapy+with+recombinant+human+bone+morphogenetic+protein+2%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">Dentin regeneration by dental pulp stem cell therapy with recombinant human bone morphogenetic protein 2.</a> J Dent Res. 83 (8), 590-595 (2004).</li>
<li>Saito, K., Nakatomi, M., Ida-Yonemochi, H., Ohshima, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteopontin+Is+Essential+for+Type+I+Collagen+Secretion+in+Reparative+Dentin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">Osteopontin Is Essential for Type I Collagen Secretion in Reparative Dentin.</a> J Dent Res. , (2016).</li>
<li>Hunter, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt+Acts+as+a+Pro-Survival+Signal+to+Enhance+Dentin+Regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Miner+Res%22%5BJournal%5D)">Wnt Acts as a Pro-Survival Signal to Enhance Dentin Regeneration.</a> J Bone Miner Res. , (2015).</li>
<li>Goldberg, M., Kulkarni, A. B., Young, M., Boskey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dentin%3A+structure%2C+composition+and+mineralization%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Biosci+%28Elite+Ed%29%22%5BJournal%5D)">Dentin: structure, composition and mineralization.</a> Front Biosci (Elite Ed). 3, 711-735 (2011).</li>
<li>Nascimento, A. B., Fontana, U. F., Teixeira, H. M., Costa, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biocompatibility+of+a+resin-modified+glass-ionomer+cement+applied+as+pulp+capping+in+human+teeth%29%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Dent%22%5BJournal%5D)">Biocompatibility of a resin-modified glass-ionomer cement applied as pulp capping in human teeth).</a> Am J Dent. 13 (1), 28-34 (2000).</li>
<li>Bogen, G., Kim, J. S., Bakland, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+pulp+capping+with+mineral+trioxide+aggregate%3A+an+observational+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Dent+Assoc%22%5BJournal%5D)">Direct pulp capping with mineral trioxide aggregate: an observational study.</a> J Am Dent Assoc. 139 (3), 305-315 (2008).</li>
<li>Miller, R. A., Nadon, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+animal+use+for+gerontological+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gerontol+A+Biol+Sci+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Principles of animal use for gerontological research.</a> J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 55 (3), 117-123 (2000).</li>
<li>Shah, A., Song, M., Cao, Y., Kang, M. K., Kim, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoclasts+are+absent+in+pulpal+and+periapical+inflammatory+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">Osteoclasts are absent in pulpal and periapical inflammatory lesions.</a> J Dent Res. 95, 1503(2016).</li>
<li>Williams, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+bone+resorption+and+woven+bone+formation+are+associated+with+development+of+osteonecrosis+of+the+jaw-like+lesions+by+bisphosphonate+and+anti-receptor+activator+of+NF-kappaB+ligand+antibody+in+mice%29%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Impaired bone resorption and woven bone formation are associated with development of osteonecrosis of the jaw-like lesions by bisphosphonate and anti-receptor activator of NF-kappaB ligand antibody in mice).</a> Am J Pathol. 184 (11), 3084-3093 (2014).</li>
<li>McPherson, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+physical+map+of+the+human+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A physical map of the human genome.</a> Nature. 409 (6822), 934-941 (2001).</li>
<li>Gregory, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+physical+map+of+the+mouse+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A physical map of the mouse genome.</a> Nature. 418 (6899), 743-750 (2002).</li>
<li>Hilton, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Keys+to+clinical+success+with+pulp+capping%3A+a+review+of+the+literature%5BTitle%5D)+AND+%22Oper+Dent%22%5BJournal%5D)">Keys to clinical success with pulp capping: a review of the literature.</a> Oper Dent. 34 (5), 615-625 (2009).</li>
<li>Holmdahl, R., Bockermann, R., Backlund, J., Yamada, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+pathogenesis+of+collagen-induced+arthritis+in+mice--a+model+for+rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Ageing+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">The molecular pathogenesis of collagen-induced arthritis in mice--a model for rheumatoid arthritis.</a> Ageing Res Rev. 1 (1), 135-147 (2002).</li>
<li>Kalu, D. N., Chen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovariectomized+murine+model+of+postmenopausal+calcium+malabsorption%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Miner+Res%22%5BJournal%5D)">Ovariectomized murine model of postmenopausal calcium malabsorption.</a> J Bone Miner Res. 14 (4), 593-601 (1999).</li>
<li>Yokochi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+experimental+murine+model+for+lipopolysaccharide-mediated+lethal+shock+with+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Innate+Immun%22%5BJournal%5D)">A new experimental murine model for lipopolysaccharide-mediated lethal shock with lung injury.</a> Innate Immun. 18 (2), 364-370 (2012).</li>
<li>Abe, T., Hajishengallis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+ligature-induced+periodontitis+model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimization of the ligature-induced periodontitis model in mice.</a> J Immunol Methods. 394 (1-2), 49-54 (2013).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

נכון לעכשיו, ישנם מספר דגמים ניסיוניים שונים זמינים כדי לאמת את השפעות in vivo של חומרים דנטליים, פיגומים, או גורמי גדילה על בידול odontogenic של תאי גזע עיסת שיניים (DPSCs) 13. מודלים אלה כוללים בהשתלה עצמית אקטופי של DPSCs לתוך איבר, כגון הקפסולה כליות, או השתלה תת עורית של DPSCs לעכברים בעלי דיכוי חיסוני עם פיגומים 14,15. עם זאת, שיטות אלו מוגבלים כי אפקט odontogenic שלהם על DPSCs לא מבוצע בסביבה עיסת orthotopic. מצד השני, השתלת orthotopic לתוך נה...

עששת שיניים היא אחת ממחלות הפה הנפוצות ביותר והגורם המוביל להתערבויות כירורגיות לשיניים כמעט בכל האנשים1,2. הפרוגנוזה של התערבויות כירורגיות ושחזור שן תלויה במידה רבה בתגובה נכונה של מוך השן וריפוי פצעים מוצלח. ואכן, עששת שחודרת עמוק דרך האמייל והדנטין מובילה לעתים קרובות לחשיפת רקמת מוך השן הבסיסית שלעתים קרובות "מכוסה" בחומרים דנטליים, כגון סידן הידרוקסיד (Ca(OH)2) או צמנט סידן-סיליקט הידראולי (HCSCs), כולל אגרגטים מינרליים תלת-חמצניים (MTA). המטרה הסופית של הליך כזה של כיסוי מוך השן היא לזרז את ריפוי פצעי מוך השן על ידי חידוש דנטין מתקן, מחסום פיזי המתפקד כ"חותם ביולוגי" כדי להגן על רקמת מוך השן הבסיסית ולהגדיל את תוחלת החיים של השן ואת בריאות הפה הכללית. עם זאת, המנגנון הבסיסי של ריפוי פצעי מוך השן והיווצרות דנטין מתקנת אינו מובן במלואו.
כדי להבין טוב יותר את המנגנונים של ריפוי פצעי מוך השן והיווצרות דנטין משקם in vivo, נעשה שימוש בעבר במספר בעלי חיים, כולל קופים, כלבים וחזירים3-5. ביניהם, חולדות משמשות לעתים קרובות מכיוון שהן קטנות יחסית בגודלן בהשוואה לבעלי החיים האחרים, אך שיניהן גדולות מספיק כדי לבצע כיסוי ישיר של מוך השן ללא כל קשיים טכניים6-10. מודלים אלה של בעלי חיים הם חלופות אידיאליות למחקרים בבני אדם לבחינת תגובות מוך השן והיווצרות דנטין מתקן. עם זאת, השימוש בהם מוגבל למחקרים תצפיתיים ברמה התאית, והם בקושי מספקים תובנות מכניסטיות במהלך היווצרות דנטין מתקנת ברמה המולקולרית.
ההתקדמות הטכנולוגית האחרונה בהנדסה גנטית סיפקה כלי מחקר יקרי ערך וחיוניים - עכברים המכילים גן שמתבטא יתר על המידה או נמחק - שהם חיוניים לחקר מנגנונים מולקולריים של מחלות אנושיות in vivo. מספרם של זנים שונים של עכברים טרנסגניים או עכברי נוקאאוט הניתנים להשראה אסטרטגית באופן ספציפי לתא גדל ללא הרף בקהילה המדעית. לכן, בחינת ריפוי פצעי מוך השן והתחדשות דנטין מתקנת בעכברים אלה תעזור מאוד לזרז את הבנתנו את התהליכים הללו ברמה המולקולרית. עם זאת, השימוש בעכברים מצטמצם משמעותית, שכן ביצוע הליך כיסוי מוך השן על שן עכבר הוא מאתגר מבחינה טכנית בשל גודלו המיניאטורי. כאן, אנו מציגים את השיטה הניתנת לשחזור שלנו לביצוע מכסת מוך ישירה בעכברים להערכת ריפוי פצעי מוך השן והיווצרות דנטין מתקנת in vivo.

<table><tbody><tr><td>מיקרוסקופ סטריאו BM-LED</td><td>MEIJI טכנו</td><td></td><td>מיקרוסקופ&nbsp;</td></tr><tr><td>אופטימה MCX-LED&nbsp;</td><td>Bien Air Dental</td><td>1700588-001</td><td>מנוע מנוע חשמלי</td></tr><tr><td>isoflurane</td><td>הנרי שיין בריאות בעלי חיים</td><td>NDC 11695-0500-2</td><td></td></tr><tr><td>1/4 עגול בור</td><td>Brasseler</td><td>001092T0</td><td></td></tr><tr><td>אנדודונטי K-file</td><td>Roydent</td><td>98947</td><td></td></tr><tr><td>ProRoot MTA</td><td>Dentsply</td><td>PROROOT5W</td><td>MTA</td></tr><tr><td>נקודת נייר</td><td>הנרי שיין</td><td>100-3941</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-Etch</td><td>Ultradent מוצר בע"מ</td><td></td><td>תחריט חומצה זרחתית</td></tr><tr><td>OptiBond SoloPlus</td><td>Kerr</td><td>29669</td><td>דבקים</td></tr><tr><td>Coltolux LED</td><td>Coltene/whaledent Inc.</td><td>C7970100115</td><td>יחידת אור ריפוי</td></tr><tr><td>אפיון גוון</td><td>Bisco</td><td>T-14012</td><td>זרימה מרוכבת</td></tr><tr><td>Skyscan</td><td>Breuker</td><td>1275</td><td>uCT סורק</td></tr><tr><td>Microm</td><td>Thermo</td><td>HM355S</td><td>Microtome</td></tr><tr><td>Hematoxyline-1</td><td>Thermo Scientific</td><td>7221</td><td></td></tr><tr><td>Eosin-Y</td><td>Thermo Scientific</td><td>7111</td><td></td></tr><tr><td>פתרון</td><td>הרכבה</td> Cytoseal 60 <td>Thermo Scientific</td><td>8310-16</td></tr></tbody></table>

פיתוח מודל ישיר מכסת-זול עבור הערכת pulpal ריפוי פצע גיבוש מתקנת הדנטין של עכברים

Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice

מוך השן הוא איבר חיוני בשן המוגן באופן מלא על ידי אמייל ודנטין. כאשר מוך השן נחשף עקב פציעות קריוגניות או יאטרוגניות, הוא מכוסה לעתים קרובות בחומרים תואמים ביולוגית על מנת לזרז את ריפוי פצעי המוך. המטרה הסופית היא לחדש את הדנטין המשקם, מחסום פיזי שמתפקד כ"אטימה ביולוגית" ומגן על רקמת מוך השן הבסיסית. למרות שהליך כיסוי ישיר זה של מוך השן נמצא בשימוש מזה זמן רב ברפואת שיניים, המנגנון המולקולרי הבסיסי של ריפוי פצעי מוך השן והיווצרות דנטין משקם עדיין אינו מובן היטב. כדי לגרום לדנטין מתקן, מכסת מוך השן בוצעה באופן ניסיוני בבעלי חיים גדולים, אך פחות בעכברים, ככל הנראה בשל גודלם הקטן והקשיים הטכניים הנובעים מכך. כאן, אנו מציגים שיטה מפורטת, שלב אחר שלב, לביצוע הליך מכסת מוך בעכברים, כולל הכנת חלל דמוי Class-I, מיקום חומרי מכסה מוך השן והליך השיקום באמצעות חומר מרוכב דנטלי. מודל העכבר שלנו יהיה חיוני בחקירת המנגנונים המולקולריים הבסיסיים של ריפוי פצעים במוך השן בהקשר של דנטין in vivo מתקן, על ידי מתן אפשרות לשימוש בעכברים טרנסגניים או נוקאאוט הזמינים באופן נרחב בקהילת המחקר.

הנה, הראינו את שלב-אחר-צעד נהלים לבצע עיסת מכסת על השיניים עכברים. אחד ההיבטים המרכזיים של עיסת מכסה בעכברים הוא לקבל את המנגנון המתאים. בהקשר זה, שיש מיקרוסקופ עם הגדלה כוח 10X חיוני (איור 1 א). כדי ליצור הכנת Class-I-כמו השן, השתמשנו בר ¼-סיבוב במאבק ידית במהירות גבוהה חשמלית ב 200,000 סל"ד (איור 1B). לחלופין, כל מנועי החיפוש האחרים, כולל אלה שמשתמשים אוויר דחוס, שניתן להשתמש בהם כדי להכין שן. <p class="jove_...

אנו מתארים שיטת צעד אחרת צעד ביצוע עיסה ישירה מכסה על שיני עכברים להערכת ריפוי פצע pulpal והיווצרות הדנטין מתקן in vivo.

Dental pulp is a vital organ of a tooth fully protected by enamel and dentin. When the pulp is exposed due to cariogenic or iatrogenic injuries, it is ...

המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא להציג את הליך מכסת מוך השן הישיר בעכברים. שיטה זו יכולה לעזור לכם לענות על שאלות מפתח בביולוגיה של מוך השן, כגון, כיצד מוך השן מתרפא, או כיצד נוצר דנטין מתקן, כאשר אתם מניחים חומרים לכודים על מוך השן החשוף. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהליך כיסוי מוך השן הישיר המבוצע בבני אדם יכול להיעשות גם בעכברים, בדיוק באותו אופן.ההשלכות של טכניקה זו משתרעות על שיפור תכונות החומר להצלת שיניים שאחרת נידונו להיות טיפולים פולשניים יותר, כגון טיפול שורש. לאחר הרדמה נכונה של העכבר לצורך ההליך, מקם את מחזיק הפה בפיו ואבטח את הקצה השני לשולחן כך שהראש פונה כלפי מעלה. בעזרת תאורה טובה וסטריאוסקופ, התבונן בשן המקסילרית הראשונה.לאחר מכן, באמצעות הבור הרבע עגול בידית במהירות גבוהה ב-200,000 סל"ד, הסר את האזור המרכזי של אמייל השן עד שהמוך נראה דרך הדנטין השקוף. היזהר לא לחדור לעיסה. לאחר מכן, באמצעות לא.15 קובץ K אנדודונטי, מחורר דרך הדנטין וחושף את המוך. אל תדחף פסולת לתוך העיסה; ניתן להימנע מכך על ידי סיבוב קובץ ה-k מדי רבעון, ולאחר מכן משיכת קובץ ה-k החוצה. כעת, הכן את ה-MTA, ובאמצעות הסייר, העביר את ה-MTA, ולאחר מכן ארוז אותו באזור החשוף באמצעות הצד האחורי של נקודת הנייר והקשה עדינה.לאחר מכן, השתמשו במזרק עמוס בתחריט חומצה זרחתית 35%, כסו את השן בתחריט, הימנעו מרקמות החניכיים, ותנו לחריטה לעבוד למשך 15 שניות. לאחר 15 שניות, מצצו את התחריט מהשן והשתמשו באפליקטור כותנה רטוב במים כדי לנגב את כל התחריט שנותר. למצוץ ולנגב עד להסרת כל התחריט.לאחר מכן יש למרוח את הדבקים הדנטליים באמצעות הצד האחורי של חוד הנייר. הפוך את שכבת הדבק לדקה על ידי ניפוחה באוויר דחוס למשך מספר שניות. לאחר מכן רפאו את הדבק למשך 30 שניות עם האור המתאים.כעת, הניחו כמויות קטנות של קומפוזיט על השן באמצעות קצה החוקר כדי להזרים את הקומפוזיט לתוך חריצי השן. לאחר המריחה, יש לרפא את הקומפוזיט למשך 30 שניות. לאחר המתת חסד של העכבר והסרת כל הלסת העליונה, הנח את הלסת לתוך 4% פרפורמלדהיד ב-PBS ב-pH 7.4.שמור את הרקמה על 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה, ולמחרת בבוקר העבירו אותה ל-70% אתנול לאחסון עד שניתן יהיה לעבד אותה. כדי לבצע סריקת מיקרו CT של הלסת העליונה, אבטח אותה תחילה בגזה ספוגה באתנול 70%, ולאחר מכן ארז אותה בצינור תרבית תאים של 15 מיליליטר. לאחר מכן הרכיב את הצינור על שלב סריקת המיקרו CT.לאחר מכן, הגדר את מקור קרני הרנטגן לספק זרם של 145 מיקרו-אמפר עם 55 קילו-וולט שיא למשך 200 אלפיות השנייה. בעזרת פילטר אלומיניום 0.5 מילימטר, רכשו תמונות ברזולוציה של 20 מיקרון. לאחר השלמת הסריקות, התחל להסיר את הלסת העליונה עם 5% EDTA ו-4% סוכרוז ב-PBS, ב-pH של 7.4.הניחו לתגובה הזו להימשך שבועיים ב-4 מעלות צלזיוס. לאחר הטמעת הלסת העליונה, צרו פרוסות בעובי של חמישה מיקרון. אזורי מכסי העיסה חופפים בדרך כלל לשורש החך הדיסטלי, שיכול לשמש כציון דרך.קביעת תחום העניין המדויק על ידי בחינת ההיסטולוגיה תחת מיקרוסקופ האור, והשוואת התוצאות לסריקות המיקרו CT. לצביעת H&E, הסר את הפרפין, והרטיב את השקופיות עם שתי אמבטיות בקסילן למשך מספר דקות כל אחת. לאחר מכן העבירו אותם דרך סדרה של אתנול מדולל סדרתי.יש למרוח כל אמבטיה למשך דקה אחת בלבד. יש לעקוב אחר ההתייבשות עם שטיפה. ואז למרוח את תמיסת ההמוטוקסילין למשך שתי דקות וחצי.הסר את הצבע בשטיפה, ולאחר מכן הכניס את השקופיות לאתנול 95% למשך דקה אחת. לאחר מכן, הכתים את השקופיות בתמיסת אאוזין למשך דקה אחת ואז שטוף אותן. הפוך את שלבי ההידרציה כדי לייבש את הרקמות המוכתמות, החל מאתנול.לאחר מכן, טפל בהם בקסילן. לאחר מכן ניתן להרכיב ולצלם את השקופיות. באמצעות ההליכים המתוארים, בוצעה מכסת מוך השן בעכברים בני 8 שבועות.שישה שבועות לאחר מכן, הלסת העליונה שלהם נקצרה ונבדקה. באופן מוזר, צביעת H&E חשפה היווצרות דנטין בכל תא מוך השן ותעלות השורש. באופן יחסי, הטוחנת הלא מכוסה לא הראתה את אותה היווצרות דנטין.בשן הטוחנת המכוסה היו מאפיינים של היווצרות דמוית דנטין ודמוית עצם, שכן גם צינורות דנטין וגם אוסטאוציטים נמצאו בדנטין המשקם, מה שמרמז על כך שעיסה פצועה עשויה להיות מינרלית הן על ידי אודונטובלסטים שוכנים והן על ידי אוסטאובלסטים מהגרים. השימוש בצביעה אימונוהיסטוכימית DMP1 אישר עוד יותר את הפעילות המוגברת של תאים היוצרים דנטין מתקן. בדיוק כמו פרקטיקות קליניות אמיתיות של שיניים, עוזר מועיל מאוד.לדוגמה, עם עוזר, טכניקה זו יכולה להיעשות תוך עשר דקות בלבד, לאחר שליטה. חשוב לציין, כאשר אתה חושף את מוך השן, זכור להשתמש באנדופיל, לא בבור. וכשאתה מוסר את ה-MTA, היזהר.אל תשכח שעבודה עם מקבעים כמו פרפורמלדהיד יכולה להיות מסוכנת ביותר. יש לנקוט תמיד באמצעי זהירות כגון לבישת ציוד מגן אישי.

development-direct-pulp-capping-model-for-evaluation-pulpal-wound

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

סרטון זה מציג טכניקה לביסוס תרבית משותפת של נוירונים טריגמינליים ותאי מוך שיניים ראשוניים באמצעות מסנן טרנסוול. במצב זה של הפרדה פיזית, תאים מזנכימליים המתקבלים מרקמת מוך השן מפרישים מולקולות איתות פרקריניות החוצות דרך הנקבוביות, ומקדמים התמיינות ונדידה של נוירונים לעבר התאים המזנכימליים היוצרים מערכת תרבית משותפת.

הקמת תרבית משותפת של תאי מוך השן ונוירונים טריגמינליים לתקשורת צולבת

מודל עכברי של ריפוי פצע עורי שניתן להשתמש כדי להעריך את התרכובות טיפוליות בהגדרות פיסיולוגיות וpathophysiological.

מודל עכברי של ריפוי פצע

כאן, אנו מציגים פרוטוקול מקומי לגרום חניכיים פסגה בעכברים. אנו מראים כיצד לקדוח חור בשן העכבר ולחשוף את הציפה שלו, כדי לגרום לדלקת מקומית. ניתוח שיטות לחקור את טבעו של דלקת זו, כגון מיקרו-CT ו היסטולוגיה, מומחש גם.

לגרימת חניכיים הרשמי בעכברים

כאן, שני מודלים מורתיים ריפוי הפצע מתוארים, אחד שנועד להעריך את התגובה התאית הפצע ריפוי והשני כדי לכמת את שיעור סגירת הפצע. שיטות אלה ניתן להשתמש עם דגמי מחלות מורכבות כגון סוכרת כדי לקבוע מנגנונים של היבטים שונים של ריפוי הפצע המסכן.

הערכה של ריפוי בפצע חריפה באמצעות השרכה העור מפוליויניל כוהל של הרקמה העורית והזנב Excisional הפצע מודלים.

פרוטוקול זה מדגים שלב אחר שלב פרטים כיצד לחלץ את הטוחנת הראשונה המנדיבולרית בעכבר. הוא מספק שיטה חלופית לחוקרים המתמקדים בריפוי והתחדשות עצם הלסת.

הקמת מודל ריפוי שקע מיצוי מולארי מנדיבולרי מורין

מאמר זה מציג פרוטוקול יעיל לביסוס מודל דלקת מוך בעכברים באמצעות גאג פה חדשני, ואחריו ניתוח היסטולוגי עוקב.

הקמת מודל חשיפה למועיסת מוך עם פיו חדשני לחקר דלקת הדוכן

מחקר זה מציג שתי טכניקות ניסיוניות חיוניות: בניית מודל פצע עכברים להערכת סגירת פצע והכנת תרחיפים חד-תאיים מעור העכברים כדי לשמר את כדאיות התאים.

מודלים של פצעים בעכברים והכנת תרחיפי תאים בודדים

מיקרו-קשיות היא תכונה מכנית ופרמטר אינפורמטיבי להערכת פתופיזיולוגיה של רקמות קשות. כאן, אנו מדגימים פרוטוקול סטנדרטי (הכנת דגימה, ליטוש, משטח שטוח ואתרי הזחה) לניתוח מיקרו-קשיות בעצם השן והנאדית במודלים של מחלות פה מכרסמים, כלומר פלואורוזיס דנטלי, וספיגת עצם חניכיים הנגרמת על ידי ליגטורות.

מדידות מיקרו-קשיות על עצם השן והנאדית במודלים של מחלות פה של מכרסמים

פצעים מייצגים אתגר בריאותי עולמי. מחקר זה פיתח תא צילום סטנדרטי המשתמש בפלנימטריה דיגיטלית כדי למזער את שונות מדידת הפצעים. ניטור פצעים בעכברים במשך 14 יום חשף עלייה ראשונית באזור הפצע ובהיקפו, ואחריו סגירה הדרגתית. מתודולוגיה זו עשויה לסייע בהערכת קינטיקה של סגירת פצע במודלים פרה-קליניים.

פלנימטריה דיגיטלית להערכת קינטיקה של סגירת פצע במודל עכבר

כדי לחקור השתלה משולבת של איברים מוצקים וכלי דם, אנו מתארים מודל חדש של השתלת דופן חזה הטרוטופית, בלוטת התימוס ולב בעכברים באמצעות טכניקת שרוול צוואר הרחם ללא תפרים.

Microsurgical דגם חדשני לHeterotopic, כמקשה אחת בחזה קיר, קורנית, ולב השתלה בעכברים

למדו את פרוטוקול מכסת-זול ישירה בעכברים לחקר ריפוי פולפי ויצירת דנטין מתקן. שיטה זו מאפשרת מחקר ביולוגיה של הפולפה ופיתוח חומרים דנטליים משופרים.

פיתוח מודל ישיר מכסת-זול עבור הערכת pulpal ריפוי פצע גיבוש מתקנת הדנטין של עכברים

גלה סרטונים נוספים