Name: הערכה של רשת Sarcoplasmic סידן סידן הדיאסטולי שימור, תאיים הסרת Cardiomyocytes חדרית מבודד (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min
Description: למדו להעריך את רזרבת הסידן ברשת הסרקופלזמית והסרת הסידן הדיאסטולית בתאי שריר לב מבודדים. שיטה זו מסייעת לחוקרים לחקור מנגנוני טיפול בסידן תוך-תאי בתנאים פתולוגיים כמו סוכרת ואי-ספיקת לב.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים קרן מדעי הטבע הלאומי של סין (מס 81100159, לאי Dongwu; 81401147, Juhong ג'אנג), הרפואי לבריאות המדע תוכנית של בפרובינצית ג'ה-ג'יאנג (201646246 מס, Dongwu Lai), ואת המדע הבריאות ו טכנולוגיה תוכנית העיר האנגג'ואו (2013A28 מס, לין בזבוזים ממשלתיים).

כל הניסויים בוצעו על פי פרוטוקולים אושרה על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועד שימוש מרכז מחקר ניסיוני, סין האקדמיה הסינית למדעי הרפואה, אונ' ג'יאנג.
 1-פתרון הכנה <ol><li>להכין את כל הפתרונות כפי שמתואר בטבלה 1.</li></ol>
 2. בידוד של שמאל חדרית (LV) Cardiomyocytes הערה: LV cardiomyocytes מבודדים enzymatically באמצעות מערכת זלוף Langendroff כפי שתואר לעיל 7 , 8 , 9 , 10 , 11-
<ol><li>להגדיר את המערכת זלוף Langendroff. למלא את המערכת זלוף פתרון רגיל Tyrode (NT) השוכן הטמפרטורה 36.5 ° C, לחסל את כל בועות האוויר בצינור.</li>
	<li>שוקל, עזים ומתנגד חולדה ספראג-Dawley בזריקה בקרום הבטן (ip) של מי כלורין (400 מ"ג/ק"ג). לאשר את מצב הרדמה על ידי הערכת התגובה קמצוץ הזנב או הבוהן לאחר 5 דק</li>
	<li>פתיחת חלל הבטן תחת הסרעפת עם מספריים כירורגיים להרים את הסרעפת, פתח את התיבה המספריים. להסיר את קרום הלב, מעט להרים את הלב עם מלקחיים מעוקל, לזהות את קשת אבי העורקים ולנתק את הלב על ידי מספריים מהשורש של אבי העורקים.</li>
	<li>להעביר את הלב תבשיל 60 מ מ, לשטוף אותו עם פתרון NT. להחזיק את העורקים עם מלקחיים לנתח מיקרו שני, הר זה על גבי הצינורית זלוף Langendorff ואת בחוזקה מאתרים ומפסיקים העורקים על גבי הצינורית בעזרת תפרים כירורגי. 
	הערה: מפעיל מיומן יכול לסיים את התהליך הזה בתוך 15 ס</li>
	<li>Perfuse את הלב עם 30 מ ל NT פתרון לשחזור זרימת העורקים הכליליים. לאחר מכן, לעבור את perfusate 30 מ ל Ca 2 +-חינם Tyrode פתרון (10 מ מ טאורין, 1 מ"ג/מ"ל BSA) להפסיק את פעימות הלב. בשלב הבא, לעבור את perfusate Collagenase A פתרון בידוד (0.6 מ"ג/מ"ל) אנזים עיכול. 
	הערה: השימוש Collagenase A עבור ניסויים עם עכברים סוכרתיים, או Collagenase II לניסויים ללא סוכרת חולדות.</li>
	<li>לאחר עיכול למשך 20-25 דקות, לשנות במהירות את הפתרון זלוף אל Ca 2 +-חינם Tyrode פתרון לעצור עוד יותר לעיכול. החזקת את הלב עם מלקחיים, מנותקת זה הצינורית, ולמקם את הלב בקערה 35 מ מ המכיל פתרון KB (ראה טבלה 1).</li>
	<li>לנתח את הקיר LV עם מלקחיים ומספריים. חתוך את אטריום, החדר הימני ואזור צומת atrioventricular. הרקמה הנותרת היא בעירוי; להעביר את זה לתוך תבשיל 35 מ מ חדש עם פתרון KB. מינצ הרקמה LV לחתיכות קטנות.</li>
	<li>בעדינות pipette החלקים עם טפי פלסטיק מסוננים, וכן להשעות מחדש בפתרון 10 מ"ל KB.</li>
	<li>לסנן את התאים עם 150 מיקרומטר צמצם נירוסטה המסנן, העברת שפופרת צנטרפוגה 15 מ"ל. צנטריפוגה-g x 150 עבור 30 s ו להשליך תגובת שיקוע. מחדש להשעות השריר בפתרון 10 מ"ל KB, חינם להסתפק 6 דקות, למחוק את תגובת שיקוע, וכן להשעות מחדש בגדר בפתרון 10 מ"ל KB. 
	הערה: כל הפעולות בוצעו ב 36 ° C בפתרונות בגז עם 100% O 2.</li>
</ol> 3. השבת בעלי חיים לטבע סידן <ol><li>לאחר שקאהן התיישב למשך 20 דקות בתמיסה KB, למחוק את תגובת שיקוע, וכן מחדש להשעות את השריר עם סידן השבת בעלי חיים לטבע פתרון A (0.3 מ מ Ca 2 +, 4.5 מ ל Ca 2 +-פתרון Tyrode חינם, פתרון 1.5 mL NT) עבור 10 דקות</li>
	<li>חוזר את ההליך הנ עם תמיסת סידן-השבת בעלי חיים לטבע B (0.3 מ מ Ca 2 +, 3 מ ל Ca 2 +-פתרון Tyrode חינם, פתרון 3 מ"ל NT).</li>
	<li>חוזר את ההליך הנ עם פתרון NT (1.2 מ מ Ca 2 +) לטהר את הזמינות של תאי שריר.. לאחסן את השריר LV מבודד בפתרון זה וללמוד אותם בתוך 4-6 ח'</li>
</ol> 4. הגדרת למעלה של זלוף מערכת <ol><li>לחבר את הצינור תזרים עם הפתרון NT עבור לשכת זלוף ( איור 1 א').</li>
	<li>עבור זלוף המחט של myocyte המטרה, לחבר את הטיפ סעפת חבית רב (למשל, עיפרון זלוף, המכונה העפרון מעתה ואילך), קבוע micromanipulator, השסתום מבוקרת זלוף המערכת. להוסיף של NT פתרון והפתרון קפאין 10 מ מ, כל עמודה של העיפרון ( איור 1 א').</li>
	<li>לפנות את כל בועות אוויר בתוך הצינורות כדי למנוע חסימת אוויר.</li>
	<li>למנות את מספר טפטוף מהקצה מיקרון של העיפרון 10 s, ולהתאים באופן ידני את וסת זרימה לשמור את מהירות הזרימה מהירות משוערת של 3 ס טפטוף/10</li>
</ol> 5. מדידות של תאיים Ca 2 + ארעי וקיצור סרקומר 7 , 8 , 9 <ol><li>פיפטה 10 µL תא ההשעיה בשקופית, לספור את מספרי הטלפון הנייד על ידי מונה תא מתחת למיקרוסקופ, לחשב את הצפיפות. לדלל נייטרלים ריכוז משוער של 50,000 תאים/mL-</li>
	<li>הוסף Fura-2 acetoxymethyl (AM) מניות (צבע רגיש של סידן) להשעיה 1 מ"ל של השריר כדי להביא את הריכוז הסופי 2 מיקרומטר להשאיר באפלה במשך 20 דקות בטמפרטורת החדר.</li>
	<li>צנטריפוגה-150 גרם 30 s ו להשעות מחדש cardiomyocytes NT פתרון 2 פעמים.</li>
	<li>התור תוריד את האור ולשמור את התאים בחושך. מקם את השריר בבית הבליעה זלוף למשך 15 דקות. לאחר מכן התחל את זלוף קאמרית (1.5 mL/min) עם פתרון NT. את קצב את השריר 1 הרץ שדה גירוי באמצעות ממריץ (גל משך 4.0 ms, הדופק משרעת 8.0 V) עבור 5 דק</li>
	<li>בחר את myocyte בצורה טובה (צורת מוט, חדות קצה ונקה לקווקוו קרוס), עווית מגורה יציב (אין התכווצות ספונטנית) תחת 10 x עדשה המטרה מיקרוסקופיים. הבא, שינוי רמת ההגדלה מיקרוסקופיים ל- 40 x, וסובב את כיוון מצלמת CCD לשמור את myocyte במצב אופקי.</li>
	<li>מסגרת myocyte בודד על-ידי התאמת המתאם מסגור תא. להבטיח כי הרקע הוא ברור.</li>
	<li>לחשוף את השריר אל האור הנפלטת מנורת קסנון, עם 340 או 380 nm גל עירור מסננים, ואת התמונה של השריר דרך יעד 40 x. לאתר פלורסצנטיות שידור-510 ננומטר. בינתיים, שימו לב עם השינויים באורך סרקומר השריר, להקליט באמצעות המודול רך-קצה בו זמנית.</li>
	זריחה <li>רשומה על-ידי מערכת האופטיקה כפול-עירור קרינה פלואורסצנטית. להפעיל את התוכנית הקלטה עבור הסידן מערכת הדמיה, לחץ על &#34; קובץ קובץ/חדש &#34; כדי ליצור קובץ הקלטה חדש, לחץ &#34; התחלה &#34; לחצן הרשומה באופן סינכרוני אורך פלורסצנטיות, סרקומר.</li>
</ol> 6. הערכה של SR Ca 2 + המילואים ו- Ca דיאסטולי 2 + הסרת פונקציה- 7 ,- 8 ,- 9 <ol><li>לביוקם &#34; Aux Out &#34; יציאות ב- ממריץ עם &#34; אנלוגי ב &#34; יציאות במערכת בקרה שסתום (למשל, מפקד שסתום, ראה טבלה של חומרים) באמצעות כבל BNC (כדי לסנכרן את האות TTL).</li>
	<li>מראש תוכנית עבור החלפת השסתומים זלוף באופן אוטומטי כפי שתואר לעיל 8 , 9; השלבים המפורטים עבור פעולה מפורטים להלן.
	<ol><li>מראש הפרמטרים בשסתום לשלוט תוכנה לפי טבלה 2, ולחץ &#34; להורדה &#34; כפתור כדי להוריד את הרצף טעון בתוכנית. לחץ &#34; Trigger &#34; כפתור כדי להפעיל את הפונקציה על ההדק. 
		הערה: מערכת בקרה שסתום יכולים לבצע את הרצף לאחר קבלת האות TTL.</li>
		<li>מוגדרת מראש את ממריץ למצב רצף וקבעו את הפרמטרים לפי טבלה 3-</li>
	</ol></li> <li>להגדיר את ממריץ-&#34; שלב S1 &#34; לצעוד בעירוי נייטרלים ב 1 הרץ. להתחיל את המחט זלוף במהירות של 1.5 mL/min עם פתרון NT. 
	הערה: בגלל המהירות של הנחל המחט הוא מהר יותר קאמרית זלוף, השבירה אור של הנחל המחט שונה השבירה אור של הקאמרית זלוף. ההבדל של השתברות האור מציין את טווח יעיל המחט זלוף, המקיף את myocyte היעד.</li>
	<li>בחר myocyte יעד תחת התצוגה מיקרוסקופיים צריכת חשמל נמוכה (לפי הרצף של הזרם לזרם במעלה), ודא כי ניתן להגיע על ידי מיקרו קצה העיפרון. לשנות את רמת ההגדלה של מיקרוסקופ 400 x. לסובב את כיוון מצלמת CCD לשמור על myocyte את המיקום האופקי. התאם את הצמצם מלבנית תחת המתאם מסגור תא חלון מתאים הממלאת השריר. ודא כי יש רקע מינימלי; אל תאפשר נייטרלים או שאריות תאים מתים בחלון זה אחרים.</li>
	<li>לכוונן את המיקום של העיפרון נעוצות את micromanipulator ולאחר בזהירות המקום את הטיפ מיקרו במרחק של הרדיוס של שדה הראייה myocyte המטרה תחת 400 x מיקרוסקופ הגדלה.</li>
	<li>התאמת טווח זרם המחט בעיקר לכסות את myocyte היעד ולוודא כי myocyte לא יכולה להיות נסחף על-ידי הזרם המחט.</li>
	<li>לאחר 60 s בסיסי צועד, לגלגל שהסמן ממריץ &#34; צעד D2 &#34;. 
	הערה: שאר פרוטוקול תבוצע באופן אוטומטי על ידי אחד האביזרים המקובלים לגירוי מערכת הבקרה שסתום. על סמך ההגדרה לעיל, הפרוטוקול היתה אפשרות לבצע באופן אוטומטי כמו דמות 2A, בסיסי צועד עם פתרון NT עבור 60 1 הרץ s. והשהיה צועד ועיכוב 2 s, לעבור במהירות 10 מ מ זלוף קפאין בשביל 15 s (לשחרר באופן פונקציונלי Ca 2 + אחסון SR), ולאחר מכן לעבור בחזרה לפתרון NT.</li>
	<li>בסוף ההקלטה, לזהות קרינה פלואורסצנטית את הרקע עבור נייטרלים בודדים. לחץ &#34; הפסקה &#34; כפתור להשהות את קובץ ההקלטה, להזיז את התצוגה מיקרוסקופיים על אזור ריק הסמוך. לחץ &#34; שיא &#34; כפתור כדי לחדש את ההקלטה שניות ולהקליט מספריים 340 ו 380 nm ערכי העוצמה לתיקון רקע.</li>
	<li>פתח &#34; מבצע/קבוע &#34; בתיבת הדו-שיח ולמלא את הערכים לתוך &#34; רקע &#34; טופס, בהתאמה; התוכנה ניתן לתקן Fura-2 יחס ערכים על-ידי חיסור הרקע.</li>
</ol> 7. ניתוח נתונים 9 <ol><li>למדידות של סידן תופעות מעבר, סרקומר קיצור בשלב בסיסי pacing, ממוצעות הפולסים עווית ולאחר מכן לנתח פרמטרים דינמיים, כגון סידן תופעות מעבר, זמן קבוע סידן ארעי דעיכה (טאו-1 הרץ), שימוש בתוכנה באופן אוטומטי. 
	הערה: אם התוכנה אינה מתאימה על קטע ריקבון. ובכן, לייצא את האיתור ירידה למדידות עקומה מעריכית-מונו ידני.</li>
	<li>סידן קפאין-induced פולסים, בחר רק את הדופק עם גל תלול לניתוח של הפונקציה הסרת סידן. לא לכלול תאים עם האות הפרעה, דופק נורמלי, או אלה שהוזרמו מידוויי משם.</li>
	<li>למדוד את משרעת של הדופק קפאין-induced סידן (Ca-קפאין, אינדקס של SRCa 2 + מילואים).</li>
	<li>לקבל את קבוע הזמן דעיכה של סידן קפאין-induced הדופק (טאו-קפאין) על-ידי עקומה מעריכית-מונו הולם (משך s 10) ידנית של התוכנה ( איור 2C).</li>
</ol>

<ol><li>Capel, R. A., Terrar, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+Ca+%282%2B%29-dependent+mechanisms+for+the+initiation+of+the+heartbeat%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">The importance of Ca (2+)-dependent mechanisms for the initiation of the heartbeat.</a> Front Physiol. 6, 80(2015).</li>
<li>Bers, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+cycling+and+signaling+in+cardiac+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Calcium cycling and signaling in cardiac myocytes.</a> Annu Rev Physiol. 70, 23-49 (2008).</li>
<li>Zhao, S. M., Wang, Y. L., Guo, C. Y., Chen, J. L., Wu, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+decay+of+Ca2%2B+homeostasis+in+the+development+of+diabetic+cardiomyopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Diabetol%22%5BJournal%5D)">Progressive decay of Ca2+ homeostasis in the development of diabetic cardiomyopathy.</a> Cardiovasc Diabetol. 13, 75(2014).</li>
<li>Pereira, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+signaling+in+diabetic+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+calcium%22%5BJournal%5D)">Calcium signaling in diabetic cardiomyocytes.</a> Cell calcium. 56 (5), 372-380 (2014).</li>
<li>Coppini, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Late+sodium+current+inhibition+reverses+electromechanical+dysfunction+in+human+hypertrophic+cardiomyopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Late sodium current inhibition reverses electromechanical dysfunction in human hypertrophic cardiomyopathy.</a> Circulation. 127 (5), 575-584 (2013).</li>
<li>Ferrantini, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((R4496C+RyR2+mutation+impairs+atrial+and+ventricular+contractility%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Physiol%22%5BJournal%5D)">R4496C RyR2 mutation impairs atrial and ventricular contractility.</a> J Gen Physiol. 147 (1), 39-52 (2016).</li>
<li>Li, L., Chu, G., Kranias, E. G., Bers, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+myocyte+calcium+transport+in+phospholamban+knockout+mouse+relaxation+and+endogenous+CaMKII+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cardiac myocyte calcium transport in phospholamban knockout mouse relaxation and endogenous CaMKII effects.</a> Am J Physiol. 274, H1335-H1347 (1998).</li>
<li>Cheng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CaMKII+inhibition+in+heart+failure%2C+beneficial%2C+harmful%2C+or+both%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">CaMKII inhibition in heart failure, beneficial, harmful, or both.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 302, H1454-H1465 (2012).</li>
<li>Lai, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Rho+kinase+inhibitor%2C+fasudil%2C+ameliorates+diabetes-induced+cardiac+dysfunction+by+improving+calcium+clearance+and+actin+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Med+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">The Rho kinase inhibitor, fasudil, ameliorates diabetes-induced cardiac dysfunction by improving calcium clearance and actin remodeling.</a> J Mol Med (Berl). 95 (2), 155-165 (2017).</li>
<li>Lai, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stretch+Current-Induced+Abnormal+Impulses+in+CaMKII%CE%B4+Knockout+Mouse+Ventricular+Myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cardiovasc+Electrophysiol%22%5BJournal%5D)">Stretch Current-Induced Abnormal Impulses in CaMKIIδ Knockout Mouse Ventricular Myocytes.</a> J Cardiovasc Electrophysiol. 24 (4), 457-463 (2013).</li>
<li>Xu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+of+L-type+calcium+current+and+cardiac+function+in+CaMKII%7Bdelta%7D+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Alterations of L-type calcium current and cardiac function in CaMKII{delta} knockout mice.</a> Circ Res. 107 (3), 398-407 (2010).</li>
<li>Roussel, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Palmitoyl-carnitine+increases+RyR2+oxidation+and+sarcoplasmic+reticulum+Ca2%2B+leak+in+cardiomyocytes%3A+Role+of+adenine+nucleotide+translocase%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Palmitoyl-carnitine increases RyR2 oxidation and sarcoplasmic reticulum Ca2+ leak in cardiomyocytes: Role of adenine nucleotide translocase.</a> Biochim Biophys Acta. 1852 (5), 749-758 (2015).</li>
<li>Yaras, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+diabetes+on+ryanodine+receptor+Ca2%2B+release+channel+%28RyR2%29+and+Ca2%2B+homeostasis+in+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Effects of diabetes on ryanodine receptor Ca2+ release channel (RyR2) and Ca2+ homeostasis in rat heart.</a> Diabetes. 54 (11), 3082-3088 (2005).</li>
<li>Hu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenovirus-Mediated+Overexpression+of+O-GlcNAcase+Improves+Contractile+Function+in+the+Diabetic+Heart%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Adenovirus-Mediated Overexpression of O-GlcNAcase Improves Contractile Function in the Diabetic Heart.</a> Circ Res. 96 (9), 1006-1013 (2005).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

סידן פלאקס שוחררו את SR היא Ca2 + המקור העיקרי עבור סיסטולה בלב. במידה מסוימת, את משרעת של SR Ca2 + תוכן של ה-Ca החלקי2 + שוחרר את SR משקפים את SR Ca2 + שמורת זמין עבור התכווצות הלב. מצד שני, השמורה2 + Ca של SR תלויה ביכולת של SR Ca2 + ספיגה חוזרת, Ca2 + דליפה של SR ואיזון שלהם על פני SR במהלך diastole12,13,14. בניסוי שלנו, יישומים מהיר של 10 מ מ קפאין ...

סידן תאיים ([Ca2 +]אני) מיחזור ממלאת תפקיד קריטי בתקנה של תפקוד סיסטולי, דיאסטולי cardiomyocytes1. כפי שאנו יודעים, הנוצרות על-ידי סידן Ca2 + השחרור יוזם עירור-התכווצות מצמד, אשר תרגם את האות החשמלי התכווצות. ממברנה דפולריזציה הפעלת ה-Ca L-סוג sarcolemmal2 + ערוצי, אשר זירוז Ca2 + לשחרר from SR לתוך הציטופלסמה באמצעות קולטנים ryanodine 2 (RyR2). ארעי מוגברות cytoplasmic Ca2 + יוזם התכווצות של myofibrils. במהלך diastole, cytoplasmic Ca2 + היא reuptaken לתוך SR באמצעות SR Ca2 +-ATPase 2 (SERCA2) לפחות לא יצא cardiomyocyte דרך Na+-Ca2 + מחליף (NCX)2. תהליך זה מוביל להתכווצות-הרפיה מיחזור ב cardiomyocyte.
SR הלב היא רשת תאיים קרום העוטף את מכונות כויץ. היא משמשת מאגר2 + Ca עבור התכווצות, זה reabsorbs Ca תאיים2 + במהלך הרפיה. SR Ca2 + השמורה זמין עבור פעימות הוא קבוע עבור contractility לב. בינתיים, הסרת Ca תאיים2 + הוא קריטי עבור diastole הלב. בתנאים מסוימים הקשורים pathophysiological, כגון סוכרת, אי ספיקת לב, Ca2 + סיווג לקוי ו- SR Ca מדוכא2 + חנות cardiomyocytes עשויים להיות מעורבים בתהליך בתפקוד הלב2,3 ,4.
למדידת SR Ca2 + שחרור, Ca דיאסטולי2 + הסרת cardiomyocytes, ישנן שתי גישות בשימוש נרחב: השלמות של הזרם NCX המבוסס על תיקון-קלאמפ5,6ו- Ca קפאין-induced 2 + דופק בהתבסס על האישורים2 + זריחה הדמיה7,8,9. הגישה תלויה העובדה כי Ca2 + שוחררה מבית SR במידה רבה נשאבים מחוץ לתאים על-ידי NCX. עם זאת, גישה זו הוא מוגבל על ידי שלה הדרישה של המבצע מיומן וציוד מתקדם. במחקר הנוכחי, אנו מתארים גישה נוחה כדי להעריך SR Ca2 + שמורת Ca2 + הסרת השריר על ידי מדידת קפאין-induced Ca2 + דופק המבוסס על Ca2 + זריחה הדמיה מערכת. בקצרה, Ca תאיים2 + זריחה שציין Fura-2. על ידי interlinking על גירוי מערכת ומערכת זלוף, אנו מציגים תוכנית עבור החלפת את זלוף, צועד המערכת באופן אוטומטי. 10 מ מ קפאין הועסק לזירוז במהירות Ca2 + שחרור מוחלט האב קבועי זמן דעיכה מעריכית (טאו) של סידן שנחשולי וקטניות קפאין-induced סידן, התקבלו עקומה מעריכית-מונו מתאים, אשר משקפים את התרומה של SERCA ו- NCX הדיאסטולי Ca2 + להסרת בהתאם.

<table><tbody><tr><td>NaCl</td><td>Alfa Aesar</td><td>012314</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Alfa Aesar</td><td>012315</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Alfa Aesar</td><td>11595</td><td></td></tr><tr><td>HEPEs</td><td>Sigma</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>Alfa Aesar</td><td>A16828</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Alfa Aesar</td><td>A18395</td><td></td></tr><tr><td>KOH</td><td>Alfa Aesar</td><td>A18854</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>אלפא Aesar</td><td>011594</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>אלפא Aesar</td><td>3337</td><td></td></tr><tr><td>L-גלוטמי</td><td>אלפא Aesar</td><td>A15031</td><td></td></tr><tr><td>טאורין</td><td>אלפא Aesar</td><td>A12403</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma</td><td>E3889</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז A</td><td>Roche</td><td>10103586001</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז סוג II</td><td>וורת'ינגטון</td><td>LS004177</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>רוש</td><td>735094</td><td></td></tr><tr><td>קפאין</td><td>סיגמא</td><td>C0750</td><td></td></tr><tr><td>פורה-2 AM</td><td>Invitrogen</td><td>F1201</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ</td><td>אולימפוס</td><td>אולימפוס IX 71</td><td></td></tr><tr><td>מערכת לנגנדורף</td><td>בייג'ינג Syutime Technology Co</td><td>PlexiThermo-S-LANGC</td><td></td></tr><tr><td>מיקרומניפולטור</td><td>Marchauser</td><td>MM33 מקשר</td><td></td></tr><tr><td>תא זלוף</td><td>IonOptix</td><td>FHD</td><td></td></tr><tr><td>שסתום מבוקר מערכת זלוף כבידה</td><td>ALA</td><td>VC 3-8</td><td></td></tr><tr><td>תוכנת מפקד שסתומים</td><td>ALA</td><td>VC 3 1.0.1.2</td><td></td></tr><tr><td>ווסת זרימה מדויק</td><td>Delta Med</td><td>3204315</td><td></td></tr><tr><td>Multi-Barrel סעפת זלוף עיפרון</td><td>AutoMate Scientific</td><td>04-08-[360]</td><td></td></tr><tr><td>Micron Removable Tip</td><td>AutoMate Scientific</td><td>360um i.d.</td><td></td></tr><tr><td>מערכות מדידת פלואורסצנטיות ומימד תאים</td> תוכנת הקלטה <td>IonOptix</td><td>Hyperswitch</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>IonOptix IonWizard 6.2.59</td><td></td></tr><tr><td>ממריץ</td><td>IonOptix</td><td>MyoPacer EP</td><td></td></tr><tr><td>חולדות Sprague-dawley</td><td>בייג'ינג מעבדת נהר ויטל טכנולוגיה טכנולוגיה ושות'.</td><td>SCXK 2016-01-007436</td><td></td></tr></tbody></table>

הערכה של רשת sarcoplasmic סידן סידן הדיאסטולי שימור, תאיים הסרת cardiomyocytes חדרית מבודד

Assessment of Sarcoplasmic Reticulum Calcium Reserve and Intracellular Diastolic Calcium Removal in Isolated Ventricular Cardiomyocytes

סידן תאיים מיחזור שמשחק תפקיד בוויסות של תפקוד סיסטולי, דיאסטולי אצל cardiomyocytes. Sarcoplasmic הלב רשת (SR) משמש Ca2 + מאגר של התכווצות, אילו reuptakes תאיים Ca2 + במהלך הרפיה. SR Ca2 + השמורה זמין עבור פעימות קבוע עבור contractibility לב, הסרת Ca תאיים2 + היא קריטית לתפקוד לב diastolic. בתנאים מסוימים הקשורים pathophysiological, כגון סוכרת, אי ספיקת לב, סיווג לקוי סידן ו- SR Ca2 + בחנות cardiomyocytes עשויים להיות מעורבים ההתקדמות בתפקוד הלב. כאן, אנו מתארים את פרוטוקול להעריך SRCa2 + מילואים והסרה הדיאסטולי Ca2 + . בקצרה, cardiomyocyte יחיד הופרדה enzymatically, Ca2 + זריחה תאיים שמציין Fura-2 הוקלט על-ידי מערכת הדמיה סידן. להעסיק קפאין להשראת SR Ca2 + משחרר לגמרי, אנחנו מראש תוכנית מתג זלוף אוטומטית על-ידי interlinking מערכת גירוי ומערכת זלוף. לאחר מכן, ההתאמה עקומה מעריכית-מונו שימש לניתוח קבועי זמן דעיכה של סידן שנחשולי וקטניות קפאין-induced סידן. בהתאם לכך, את התרומה של SR Ca2 +-ATPase (SERCA) ו- Na+-Ca2 + מחליף (NCX) להסרת סידן הדיאסטולי הוערך.

כאן, אנחנו להמחיש streptozotocin (STZ) - induced חולדות סוכרתית (DM) ותואמים גיל-ספראג - Dawley (SD) חולדות לדוגמה. חולדות SD זכר בן שבוע 8 (± 200 20 גרם) קיבל זריקה אחת בקרום הבטן של STZ (70 מ"ג/ק"ג, ip) עבור מיט קבוצה או ציטראט המאגר עבור קבוצת הביקורת. שבוע אחרי STZ מינהל, חולדות עם הסוכר &#62; 16.7 mmol/L נחשבו סוכרתית. לאחר 8 שבועות, השריר LV היו מבודדים enzymatically. לאחר, השבת בעלי חיים, סידן לטבע יש כ 70-80% של השריר אשר נותרו במצב הישרדות. נייטרלים היחיד עם רוד-צורה, לקווקוו ברו...

סידן תאיים מיחזור שמשחק תפקיד בוויסות של תפקוד סיסטולי, דיאסטולי אצל cardiomyocytes. כאן, אנו מתארים את פרוטוקול כדי להעריך sarcoplasmic רשת Ca2 + שמורת ובפונקציה הסרת סידן הדיאסטולי ב cardiomyocytes מאת סידן מערכת הדמיה.

הערכה של רשת Sarcoplasmic סידן סידן הדיאסטולי שימור, תאיים הסרת Cardiomyocytes חדרית מבודד

Intracellular calcium recycling plays a critical role in regulation of systolic and diastolic function in cardiomyocytes. Cardiac sarcoplasmic reticulum ...

המטרה הכללית של הליך זה היא להעריך את רזרבת הסידן ברשת הסרקופלזמית ואת תפקוד פינוי הסידן הדיאסטולי התוך-תאי בתאי שריר לב (cardiomyocytes) מבודדים. שיטה זו יכולה לסייע במתן תשובות לשאלות מפתח בנוגע למנגנון הטיפול בסידן התוך-תאי תחת תנאים פתופיזיולוגיים מסוימים, כגון סוכרת ואי-ספיקת לב. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא הנוחות, והיא פחות מוגבלת מבחינת הטכניקה והציוד.כדי להתחיל בהליך זה, הגדירו את מערכת הפרפוזיה של Langendorff. מלאו את מערכת הפרפוזיה בתמיסת NT, קבעו את הטמפרטורה ל-36.5 degrees Celsius, והסירו בועות אוויר מהצינור. לאחר מכן, פתחו את חלל הבטן מתחת לתהליך החרב (xiphoid process), הרימו את תהליך החרב ופתחו את בית החזה באמצעות מספריים.לאחר מכן, הסר את הפריקרדיום, הרם מעט את הלב באמצעות פינצטה מעוקלת, זהה את קשת האאורטה ונתק את הלב משורש האאורטה. לאחר מכן, העבר את הלב לצלחית בנפח 60 millimeter ושטוף אותו בתמיסת NT. החזק את האאורטה באמצעות שתי פינצטות למיקרו-דיסקציה וחבר אותה לקנולה של פרפוזיית Langendorff.לאחר מכן, קשרו בחוזקה את האורטה לקנולה באמצעות תפרים כירורגיים. בהמשך, בצעו פרפוזיה ללב עם 30 milliliters של תמיסת NT כדי להחזיר את זרימת הדם בעורקי הכליליים. לאחר מכן, החליפו את נוזל הפרפוזיה ב-30 milliliters של תמיסת Tyrode נטולת סידן כדי להפסיק את פעימות הלב.לאחר מכן, החליפו את נוזל הפרפוזיה לתמיסת בידוד collagenase A לצורך עיכול אנזימטי. לאחר עיכול של 20 עד 25 דקות, החליפו במהירות את תמיסת הפרפוזיה לתמיסת Tyrode נטולת סידן כדי להפסיק את העיכול. לאחר מכן, החזיקו את הלב באמצעות פינצטה, גזרו אותו מהקנולה, והניחו את הלב בצלחת של 35 מילימטר המכילה תמיסת KB.לאחר מכן, אתרו את שטח החדר השמאלי. חתכו והסירו את העלייה, החדר הימני ואת אזור המפגש בין העליות לחדרים. לאחר מכן, העבירו את החדר השמאלי לצלחית חדשה של 35 millimeter עם תמיסת KB וקטעו את הרקמה לחתיכות קטנות.העבירו בעדינות את החלקים באמצעות טפטפת פלסטיק עם מסנן. לאחר מכן, סננו את התאים באמצעות מסנן פלדת אל-חלד עם פתחים של 150 micron והעבירו אותם לשפופרת צנטריפוגה של 15 milliliter. לאחר מכן, סובבו את הדגימה בצנטריפוגה במהירות של 150 times g למשך 30 seconds והסירו את הנוזל העליון (supernatant).שחזר את המיוציטים ב-10 milliliters של תמיסת KB והנח להם לשקוע במשך שש דקות. לאחר מכן, השלך את העלייה ושחזר את המשקע ב-10 milliliters של תמיסת KB למשך 20 דקות. לאחר השקעה בתמיסת KB למשך 20 דקות, השלך את העלייה ושחזר את המיוציטים עם תמיסת החזרת סידן A. חזור על ההליך לעיל עם תמיסת החדרת סידן B. לאחר מכן, חזור על ההליך לעיל עם תמיסת NT כדי לטהר את המיוציטים הזמינים.יש לאחסן את המיוציטים המבודדים מה-LV בתמיסה זו ולבחון אותם בתוך ארבע עד שש שעות. לאחר מכן, יש להוסיף תמיסת NT ותמיסת caffeine בריכוז 10 millimolar לכל עמודה בעט. יש לשאוב בועות אוויר מהמבחנות כדי למנוע חסימות אוויר.כעת, חברו את צינור הכניסה עם תמיסת ה-NT לצורך פרפוזיה של התא. עבור פרפוזיה באמצעות מחט של המיוציט המטרה, חברו את קצה המניפולד רב-החלילים למערכת הפרפוזיה הנשלטת על ידי שסתום. לאחר מכן, ספרו את מספר הטיפות היוצאות מקצה המיקרון של העיפרון במשך 10 שניות, וכוונו ידנית את ווסת הזרימה כדי לשמור על מהירות זרימה של כ-3 טיפות ל-10 שניות.בפרוצדורה זו, הוסיפו את תמיסת המלאי של fura-2-acetoxymethyl למיליליטר אחד של תרחיף המיוציטים כדי להביא את הריכוז הסופי ל-2 µM. השאירו אותם בחושך למשך 20 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, השליכו את הנוזל העליון ותלו את הקרדיומיוציטים עם תמיסת NT פעמיים.בשלב הבא, כבו את האור והשאירו את התאים בחשיכה. הניחו את המיוציטים בתא הפרפוזיה למשך 15 דקות לפני הפרפוזיה בתמיסת NT. בצעו קוצביות למיוציטים באמצעות גירוי שדה בתדר של 1 Hz למשך חמש דקות בעזרת סטימולטור.כעת, בחרו מיוציט בעל צורה טובה ובתגובת התכווצות (twitch) יציבה תחת עדשת מיקרוסקופ של 10X. לחצו על File New File כדי ליצור קובץ הקלטה חדש. לאחר מכן, שנו את הגדלת המיקרוסקופ ל-40X וסובבו את כיוון מצלמת ה-CCD כדי להשאיר את המיוציט במצב אופקי.לאחר מכן, מסגרו את המיוציט הבודד על ידי כיוון מתאם מסגור התאים וודאו שהרקע נקי. לאחר מכן, חשפו את המיוציטים לאור הנפלט ממנורת Xenon עם מסנני עירור באורך גל של 340 או 380 ננומטר, וצלמו את המיוציטים באמצעות עדשה אובייקטיבית 40X. גלו אות פלואורסצנציה ב-510 ננומטר.לחצו על כפתור ה-Start כדי להקליט באופן סינכרוני פלואורסצנציה ואורך סרקומר באמצעות מערכת פוטו-מכפיל (photomultiplier) של פלואורסצנציית עירור כפולה. שימו לב לשינויים באורך הסרקומר של המיוציטים והקליטו אותם בו-זמנית באמצעות מודול ה-soft edge. בהליך זה, חברו את יציאת ה-aux out בסטימולטור לכניסה האנלוגית במערכת בקרת השסתומים באמצעות כבל BNC.בשלב הבא, הגדירו מראש את הפרמטרים בתוכנת הבקרה של השסתום, לחצו על כפתור ההורדה להורדת הרצף שנטען בתוכנית, ולחצו על כפתור ההפעלה (trigger) כדי להפעיל את פונקציית ההפעלה. לאחר מכן, הגדירו את הסטימולטור למצב רצף (sequence mode) וקבעו את הפרמטרים. לבסוף, הגדירו את הסטימולטור בשלב S1 כדי לבצע קוצב (pace) לתאי שריר הלב (myocytes) של ה-LV בתדר של one hertz.התחילו פרפוזיה באמצעות מחט במהירות של 1.5 milliliters per minute עם תמיסת NT. בחרו מיוציט מטרה תחת תצוגה מיקרוסקופית בהגדלה נמוכה וודאו שניתן להגיע אליו באמצעות החוד המיקרוסקופי של העיפרון. לאחר מכן, שנו את הגדלת המיקרוסקופ ל-400X.סובבו את כיוון מצלמת ה-CCD כדי להשאיר את המיוציט (myocyte) במצב אופקי. לאחר מכן, כווננו את המפתח המלבני שמתחת למתאם למסגור התאים לחלון מתאים הממלא את השטח במיוציטים. בשלב הבא, כווננו את מיקום העיפרון המקובע למיקרו-מניפולטור והניחו בזהירות את המיקרו-טיפ (microtip) במרחק של רדיוס שדה הראייה מהמיוציט המטרה.לאחר מכן, כווננו את טווח זרימת המחט כך שיכסה ברובו את המיוציט המטרה, וודאו כי המיוציט אינו נסחף על ידי זרימת המחט. לאחר 60 שניות של קצב בסיסי (basic pacing), העבירו את סמן הגירוי לשלב D2. שאר הפרוטוקול יבוצע באופן אוטומטי על ידי הגירוי ומפקד השסתומים.לחצו על כפתור ההפסקה (Pause) כדי להשהות את הקלטת הקובץ והזיזו את תצוגת המיקרוסקופ לאזור ריק סמוך. לאחר מכן, לחצו על כפתור ההקלטה (Record) כדי להסמיך את ההקלטה למשך שניות רבות ולהקליט ערכי עוצמה מספריים של 340 ו-380 nanometer לצורך תיקון רקע. לאחר מכן, פתחו את תיבת הדו-שיח של קבועי הפעולה (Operation Constant) והזינו את הערכים לטופס הרקע.התוכנה יכולה לתקן ערכי יחס של fura-2 על ידי הפחתת הרקע. מוצגת כאן הדגמה של הפרוטוקול להחלפת שסתומי פרפוזיה ומערכת קצב באופן אוטומטי. איור זה מציג את ערכי הסטטיסטיקה של רזרבת הסידן ברשת הסרקופלזמית ושחרור סידן חלקי עבור כיווצים בגירוי של 1 Hz בקבוצות הסוכרת וה-Sprague Dawley.הקבוצה הסוכרתית הראתה ירידה משמעותית ברזרבת הסידן של ה-SR ובשחרור הסידן השברי של ה-SR בהשוואה לקבוצת ה-Sprague Dawley. כאן, לוח התוכנה מציג התאמה ידנית של עקומת אקספוננציאל יחיד עבור קבוע הזמן של דעיכת פולס הסידן המושרה על ידי קפאין. גרפים של עמודות אלו משווים את Tau-caffeine ואת Tau-1Hz/Tau-caffeine בין הקבוצה הסוכרתית לקבוצת ה-Sprague Dawley.הקבוצה הסוכרתית הראתה ערכים גבוהים באופן מובהק של Tau-caffeine ושל Tau-1Hz/Tau-caffeine בהשוואה לקבוצת ה-Sprague Dawley. הליך זה מספק כלי מעשי ונוח לבחינת מנגנוני הטיפול בסידן התוך-תאי בתפקוד לקוי של הלב. בעת ביצוע הליך זה, יש לשים לב למספר נקודות מפתח, כגון היצמדות יציבה של המיוציטים לצלוחית, סגירה של מתג הערוץ, ובקרת מהירות הזרימה של הפרפוזיה מהמחט והמרחק המתאים בין קצה המחט למיוציט המטרה.

assessment-sarcoplasmic-reticulum-calcium-reserve-intracellular

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

ניתן לבודד קרדיומיוציטים בודדים מעכברים פראיים ועכברים מוטנטיים מהלב על מנת לחקור את ההתכווצות שלהם ואת מעברי הסידן שלהם. זה מאפשר לאפיין את התרומה של תפקוד לקוי של התאים לתפקוד לקוי של הלב מכל סיבה שהיא.

בידוד ופיזיולוגי ניתוח של שריר לב העכבר

מאמר זה מתאר את הפרוטוקול מפורט וציוד הכרחי למיפוי כפול אופטי של (מ 'V) פוטנציאל הטרנסממברני וחופשי רשתית תוך-sarcoplasmic (SR) Ca 2 + בלב ארנב Langendorff-perfused. שיטה זו מאפשרת לתצפית ישירה וכימות של מטר V ו2+ דינמיקת Ca SR בלב שלם.

מיפוי אופטי של Intra-sarcoplasmic reticulum Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; ופוטנציאל הטרנסממברני בלב ארנב Langendorff-perfused

נכון לעכשיו, רוב מדדי הסידן הזמינים משמשים לכימות מעברי סידן ציטופלזמיים כמדדים עקיפים של סידן המשתחרר מהרטיקולום הסרקופלזמי בתאי שריר חלק מתורבתים. פרוטוקול זה מתאר את השימוש באינדיקטור ספציפי מבוסס FRET המאפשר מדידה ישירה של אותות סידן בתוך לומן הרטיקולום הסרקופלזמי.

מדידת תנודות סידן בתוך הרטיקולום sarcoplasmic של בתאי שריר חלק בתרבית באמצעות מבוססי סריג הדמיה Confocal

מאמר זה מתאר פרוטוקול המעריך את השינויים ברגישות לשריר Ca2+ במהלך התכווצות במיוציטים לבביים מבודדים מלב חולדה. יחד עם אלקטרופיזיולוגיה של הלב, רמות ציטוזול סיסטולי/דיאסטולי Ca2+ והתכווצות/הרפיה, מדידה זו הכרחית בבסיס המנגנונים המתווכים צימוד עירור-התכווצות לב בלב בריא וחולה.

הערכת Myofilament Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; עירור-התכווצות לב ביסוד רגישה זיווגים

כאן, אנו מתארים הליך ממוטבת, המבוססים על Langendorff על בידודו של תא בודד cardiomyocytes פרפור ממודל עכברוש מטבוליות הקשורות תסמונת באי ספיקת לב עם שבריר פליטה משומר. תקנה ידנית בלחץ intraluminal של חללים לב מיושם להניב המתאימים עירור-התכווצות-מצמד לימודי תקין מבחינה פונקציונלית נייטרלים.

בידוד של פרפור Cardiomyocytes ממודל עכברוש מטבוליות הקשורות תסמונת באי ספיקת לב עם שבריר פליטה משומר

אנו מציגים את המתודולוגיה עבור בידוד של מוציטים מורטין וכיצד להשיג מתח או סימני הסידן במקביל עם הקיצור סרקומר באמצעות מכשירי האור הפלואורסצנטית עם מדידות הגיאומטריה הדיגיטלית בו.

הדמיה אופטית של מודציטים מבודדים המוח החדרית

פרוטוקול זה נועד לתאר צעד אחר צעד את הטכניקה של מיצוי והערכה של תפקוד הלב באמצעות cardiomyocytes עור. מתודולוגיה זו מאפשרת מדידה ואימודולציה חריפה של תפקוד myofilament באמצעות ביופסיות קפואות קטנות שניתן לאסוף ממקומות לב שונים, מעכברים לגברים.

להערכת ויטרו של תפקוד הלב באמצעות קרדיומיוציטים עור

מוצג הוא פרוטוקול לבידוד של קרדיומיוציטים חדריים אנושיים ובעלי חיים מפרוסות שריר הלב לחתוך vibratome. תפוקות גבוהות של תאים סובלניים סידן (עד 200 תאים / מ"ג) ניתן להשיג כמויות קטנות של רקמה (&lt;50 מ"ג). הפרוטוקול ישים על שריר הלב החשוף לאישמיה קרה עד 36 שעות.

בידוד של קרדיומיוציטים חדריים אנושיים מפרוסות שריר הלב ויסטום-לחתוך

מודלים עכבריים מאפשרים ללמוד מנגנוני מפתח של arrhythmogenesis. לשם כך, קרדיומיוציטים באיכות גבוהה נחוצים לביצוע מדידות מהדק תיקון. כאן מתוארת שיטה לבידוד מיוציטים פרוזדוריים וחדרי מורין באמצעות זילוח לנגנדורף מבוסס אנזים מדרדר, המאפשר מדידות בו זמנית של סידן חולף וזרם סידן מסוג L.

בידוד מיוציטים פרוזדוריים וחדריים באיכות גבוהה למדידות בו זמנית של Ca2+ Transients וזרם סידן מסוג L

מוצגת סדרה של פרוטוקולים המתארים את מדידת פונקציית ההתכווצות באמצעות זיהוי אורך סרקומר יחד עם מדידת סידן (Ca2+) במיוציטים של חולדות מבודדות. היישום של גישה זו למחקרים במודלים של בעלי חיים של אי ספיקת לב נכלל גם הוא.

ניתוח של תפקוד לקוי של התכווצות הלב ו- Ca2 + טרנזיינטים במיוציטים של מכרסמים

פרוטוקול זה מתאר שיטה למדוד בו זמנית סידן ציטוסולי, חופשי [Ca2+]i וקוטר כלי הדם בהתכווצות כלי הלימפה בזמן אמת ולאחר מכן לחשב ריכוזי Ca2+ מוחלטים וכן פרמטרים של התכווצות/ריתמוס. פרוטוקול זה יכול לשמש לחקר Ca2+ ודינמיקה של התכווצות במגוון תנאי ניסוי.

הערכה בזמן אמת של Ca2+ מוחלט, ציטוסולי, חופשי והתכווצות מקבילה בכלי לימפה מבודדים בלחץ

למדו להעריך את רזרבת הסידן ברשת הסרקופלזמית והסרת הסידן הדיאסטולית בתאי שריר לב מבודדים. שיטה זו מסייעת לחוקרים לחקור מנגנוני טיפול בסידן תוך-תאי בתנאים פתולוגיים כמו סוכרת ואי-ספיקת לב.

הערכה של רשת Sarcoplasmic סידן סידן הדיאסטולי שימור, תאיים הסרת Cardiomyocytes חדרית מבודד

גלה סרטונים נוספים