מדידת ודפורמביליות והטרוגניות תא אדום בדם על ידי Ektacytometry

המטרה הכוללת של טכניקה זו היא למדוד עיוות של תאים אדומים והטרוגניות תאית על ידי אקטציטומטריה. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח באקטציטומטריה כגון עד כמה אריתרוציטים מעוותים, עד כמה הטרוגנית דגימת דם וכיצד הניסוי אכן משתנה כפונקציה של מחלה. היתרונות העיקריים של טכניקות אלה הם נגישות, נוחות ואמינות במדידת עיוות והטרוגניות של אוכלוסיות כדוריות דם אדומות.

הטכניקות עשויות להיות שימושיות לניטור התגובה לטיפול בחולי אנמיה חרמשית. מכיוון שעיוות והטרוגניות של תאים אדומים נמצאים בקורלציה עם הרכב וריכוז ההמוגלובין. ניתן ליישם שיטות אלה על מחלות אחרות המאופיינות בירידה בעיוות של תאי דם אדומים, כגון סוכרת, שבה ירידה בעיוות התאים האדומים עשויה לתרום למחלות מיקרו-וסקולריות.

התחל בחיבור הצינור האוסמולר האפס לתמיסת ה-PVP האוסמולרית הנמוכה, ואת הצינור האוסמולרי 500 לתמיסת ה-PVP האוסמולרית הגבוהה. ודא שהבוב מונמך לחלוטין לתוך הספל. הפעל את התוכנה והפעל את המכונה על-ידי בחירה בבדיקת חומרה ולאחר מכן התקן IO. אפשר למכשיר להשלים את מחזור ההתחלה.

לאחר השלמת המחזור, הרימי את הבוב מהכוס וייבשי לחלוטין את הבוב ואת הגביעונית עם טישו ניקוי מוך נמוך. מערבבים בעדינות דגימת דם מלאה שנלקחה טרייה על ידי היפוך הבקבוקון מספר פעמים. לאחר מכן, פיפטה 25 מיקרוליטר של דם מלא לחמישה מיליליטר של תמיסת PVP איזו-אוסמולרית

לאחר סגירת הבקבוקון, יש לערבב בעדינות על ידי היפוך שוב מספר פעמים. בחר יכולת עיוות מהתפריט הראשי של התוכנה, ולאחר מכן צור ניתוח חדש והוסף את פרטי הניסוי. לאחר מכן, הרם את מכסה האקטציטומטר, וודא שהבוב מונמך במלואו לתוך הכוס ושהכוס מסתובבת.

הכניסו מיליליטר אחד של תמיסת דם PVP לתוך החלל שבין הכוס לבוב. לאחר מכן הרם מעט את הבוב כדי להוריד את הדגימה. המתן עד שכל הבועות יצאו מהתמיסה, ואז סגור את המכסה לאקטציטומטר.

כוונן את הרווח ל-200 על ידי הזזת החץ לאורך פס הגלילה בתוכנה. כאשר הטמפרטורה יציבה על 37 מעלות צלזיוס ותמונת העקיפה יציבה, לחץ על התחל. התבונן בדפוסי העקיפה ככל שרכישת הנתונים מתקדמת כדי להבטיח שהם יישארו בצורת מעגלי, אליפטי או יהלום.

לאחר השלמת רכישת הנתונים, הדפס את הדוח ונקה. דפוס עקיפה המתקבל מדם בריא בתגובה למתח גזירה מראה את הדפוס האליפטי הצפוי. מדד ההתארכות מחושב באמצעות המשוואה המוצגת כאן.

כאשר הדגימה נשאבת, שטפו את הרווח בין הכוס לבוב על ידי התזת מים נטולי יונים לתוך החלל בזמן שהמכשיר נשאר במחזור הנקי. לאחר השלמת מחזור הניקוי, הרם את הבוב מהכוס וייבש לחלוטין את הבוב ואת הגביעונית עם טישו ניקוי מוך נמוך. ייבוש נכון הוא קריטי, מכיוון ששאריות מים יגרמו לכדוריות אדומות לייצר הפרעות.

בחר יצוא כדי לשמור את הדוח. לבסוף, לחץ על כפתור התפריט הראשי בתוכנה כדי לחזור לדף הראשי. לאחר טעינת דגימה נוספת לתוך האקטציטומטר כמו קודם, ודא שקיימת תמונת עקיפה יציבה על המסך.

כוונן את רווח המצלמה על ידי הזזת סרגל לאורך המסך עד שהוא מייצר גובה עקיפה של 3.8 ס"מ. השתמש בסרגל כדי לאמת את גובה התמונה על מסך המחשב. לאחר מכן, לחץ על התחל והתבונן ברכישת הנתונים כמו קודם.

תמונה זו מציגה דפוס עקיפה של 3.8 ס"מ שהתקבל מדם מחולה אנמיה חרמשית. לאחר ניקוי האקטאציטומטר כפי שהוצג קודם לכן, חזור על ההליך כדי לקבל דפוסי עקיפה בגבהים של 4.5 ס"מ ו-5.4 ס"מ. עיוות דפוס עקיפה מתרחש בדגימות דם הטרוגניות מכיוון שתאים אדומים קשיחים אינם מתיישרים כראוי עם תאים מעוותים, וכתוצאה מכך דפוס עקיפה בצורת יהלום.

דפוס עיוות זה ניתן לזיהוי יותר ויותר ככל שהגבר המצלמה מותאם ליצירת דפוסי עקיפה גדולים יותר. עבור אקטאציטומטריה של שיפוע אוסמוטי, התחל בהוספת 250 מיקרוליטר דם מלא לבקבוקון המכיל חמישה מיליליטר של PVP איזו-אוסמולר וערבב בעדינות. בחר Osmoscan מהתפריט הראשי בתוכנה.

לאחר מכן הנח את הבקבוקון המכיל את תמיסת ה-PVP בדם מתחת למחט בצד שמאל של המכונה. הורד את המחט עד שהיא נוגעת בתחתית הבקבוקון. ודא שהצינור מחובר כהלכה לתמיסות האוסמולריות הנמוכות והגבוהות לייצור שיפוע.

סגור את המכסה לאקטציטומטר ופתח את הדלת בחצי התחתון כדי לאפשר מבט על הדם הנכנס לצינור. לחץ על ניתוח חדש והקלד את פרטי הניסוי. לאחר התאמת רווח המצלמה ל-200, אפשר למכונה לפעול עד שדם נכנס לכוס מהצינור שמתחת למכשיר.

כאשר מסך המחשב מציג דפוס עקיפה יציב, התחל ברכישת נתונים על ידי לחיצה על כפתור התחל עכשיו בתיבת הדו-שיח. אפשר לאקטציטומטר לרכוש נתונים עד כ-500 מיליאוסמול לקילוגרם, ולאחר מכן לעצור את המכשיר. הדפס את הדוח.

לאחר מכן, הסר את בקבוקון הדם הישן של PVP והחלף אותו בבקבוקון נקי המכיל מים נטולי יונים. הורד את המחט כלפי מטה כך שתיגע בתחתית הבקבוקון, ולאחר מכן לחץ על כפתור השטיפה בתיבת הדו-שיח כדי לשטוף את מערכת השיפוע. לאחר השלמת השטיפה, לחץ על אפשרות הניקוי בתיבת הדו-שיח בצג המחשב ובחר ייצוא כדי לשמור את הדוח.

יבש את הבוב והספל כמו קודם. אוכלוסיות דם הומוגניות, כפי שנמצאו אצל מתנדבים בריאים, אינן מייצרות עקומות עיוות שונות כאשר נמדדים גדלי עקיפה. לעומת זאת, אוכלוסיות דם הטרוגניות כמו דם מחולים עם אנמיה חרמשית, מראות ירידה משמעותית במדדי העיוות כפונקציה של גודל דפוס העקיפה.

בדם חרמשי, כאשר מידת עיוות דפוס העקיפה נמדדת כפונקציה של EI max, היא מתואמת עם המוגלובין S, ועם וריאנט ההמוגלובין הבוגר, המוגלובין A2. עירוי מתקן את העיוות, כפי שמעיד הקשר ההפוך שלו עם אחוז ההמוגלובין הבוגר הנורמלי בדם. בין אם מידת העיוות של דפוס העקיפה נמדדת כפונקציה של מתח הגזירה הנדרש להשגת עיוות חצי מקסימלי, או כפונקציה של EI max, היא מתואמת עם המוגלובין עוברי. פרמטרים מרכזיים של אקטציטומטריית שיפוע אוסמוטי, כגון EI max, EI min ו-O min, מספקים מידע נוסף על ההידרציה התאית, יחסי פני השטח לנפח והשבריריות האוסמוטית, בהתאמה.

לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקות אלה תוך כשעה, אם מבוצעות כראוי. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כמו מיקרוסקופיה, כדי לענות על שאלות נוספות הנוגעות לעיוות של אריתרוציטים בודדים. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד למדוד עיוות והטרוגניות בסרום בדגימות דם.