Name: העברת סטיאוטטי המאמצת של תאים חיסוניים ציטוטוקסיות במודלים מאתר של האדם Orthotopic גליובלסטומה Xenografts (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 15 s
Description: למד העברה אימוצית של תאים חיסוניים ציטוטוקסיים לטיפול בגליובלסטומה באמצעות מודל קסנוגרפיה אורתוטופית בעכברים NSG. שיטה זו מדגימה יעילות נגד גידול ואפשרות למסירת תרפיה תאית ישירות למוח.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים תודה הצוות של בית החולים האוניברסיטאי בעלי חיים המתקן (UTE) של נאנט על גידול בעלי חיים, טיפול הסלולר, tissular הדמיה מתקן הליבה של אוניברסיטת ננט (MicroPICell) עבור הדמיה, המתקן Cytometry (Cytocell) של נאנט לסיוע טכני מומחה שלהם. עבודה זו מומן על ידי INSERM CNRS, אוניברסיטת דה נאנט, Institut du הארצי לסרטן (האינקה #PLBio2014-155), le חדר מרווח וחדיש ליגה הלאומית לסרטן (AO InterRegional 2017), האיחוד האירופי עידן-Net Transcan2 (Immunoglio). הצוות ממומן על ידי Fondation pour la Medicale רשרש (DEQ20170839118). עבודה זו מומש בהקשר של LabEX IGO, התוכניות IHU-צ'סטי, נתמך על ידי Investissements סוכנות המחקר הלאומי d'Avenir באמצעות התוכניות ANR-11-LABX-0016-01 ו- ANR-10-IBHU-005, בהתאמה. הפרויקט IHU-צ'סטי נתמך גם על ידי נאנט Metropole ובאזור פיי דה לה לואר. המחברים מודים Chirine Rafia על מתן עזרה בתיקון כתב היד.

הליך מעורבים בעלי חיים הנושאים הבאים בוצעה בהתאם להנחיות מוסדיים (הסכם #00186.02; ועדת האתיקה האזורי של פיי דה לה לואר [צרפת]). PBMCs האנושי הם בודדו אותנו מהמתרחש הדם שנאספו מתורמים בריאים מושכלת (Etablissement פרנקאיס du שרו נאנט, צרפת). כל הצעדים מבוצעים בתנאים סטריליים.
1. שאינם ספציפיים התרחבות ציטוטוקסיות T לימפוציטים
<ol><li>להכין, להאיר מזין תאים ב- 35 Gy. על הגירוי של 2 x 105 - 4 x 105 תאים אפקטור, להכין 10 x 106 PBMCs BLCLs6 עונה 1 פרק 10 מתורמים שלושה ייחודי, בריא.</li>
	<li>Resuspend מזין תאים והן תאים אפקטור 15 מ"ל של RPMI בתוספת 10% לא פעיל חום FCS, 2 מ מגלוטמין, פניצילין (100 IU/mL), ואת סטרפטומיצין (0.1 µg/mL), il-2 רקומביננטי 300 IU/mL.</li>
	<li>להוסיף PHA-L-ריכוז הסופי של µg 1/mL, לערבב היטב והפצה µL 150 של התליה תא לכל טוב ב 96-ובכן להטלטל U צלחות.</li>
	<li>דגירה ב 37 מעלות צלזיוס, עם 5% CO2 באווירה humidified.</li>
	<li>מדי יום לבדוק את הצלחת עד תא גדול מתגבש בצורת הבארות תרבות (~ יום 7).</li>
	<li>העבר את התאים לתוך בקבוקון תרבות-עונה 1 פרק 106 תאים למ"ל במדיום תרבות טריים.</li>
	<li>לקבוע את מספר התאים הכולל על ידי ספירת (2 x שבוע) ולתחזק אותם-עונה 1 פרק 106 תאים למ"ל במדיום תרבות טריים. הערה: תאים חיסוניים אפקטור אמור להיות מוכן עבור המינהל טיפולית במצב מנוחה (בדרך כלל 3 שבועות לאחר הגירוי הראשוני הגברה). הטוהר, את תגובתיות של תאים אלה אפקטור צריך להיבדק לפני ויוו זריקות (למשל, עם מבחני במבחנה ).</li>
</ol>2. שטרם-נותחו אפקטור תאים הכנה
<ol><li>לאחר בדיקת ספירת אפקטור, לאסוף את התאים אפקטור בשפופרת 50-mL על ידי צנטריפוגה (300 x g למשך 5 דקות). הערה: כדי לפצות על אובדן, להכין את עודף של תאים (למשל, 50 x 106).</li>
	<li>בזהירות להסיר את תגובת שיקוע, resuspend התאים ב-15 מיליליטר וסטרילי PBS, צנטריפוגה למשך 5 דקות ב x 300 גרם כדי לבצע את השטיפה.</li>
	<li>ובזהירות לחלוטין להסיר את תגובת שיקוע, ואז resuspend בגדר תא ב 1 מ"ל של PBS סטרילי.</li>
	<li>העבר את התאים resuspended microtube 1.5-mL עבור צנטריפוגה ב x 300 גרם במשך 5 דקות.</li>
	<li>ובזהירות לחלוטין להסיר את תגובת שיקוע על-ידי pipetting לאט.</li>
	<li>Resuspend בגדר תא ב- µL 8 ל- PBS סטרילי לכל העכבר. הערה: זהו צעד קריטי.</li>
	<li>למדוד את עוצמת הקול של התליה תא על-ידי שימוש של micropipette. אם יש צורך, מוסיפים PBS סטרילי (20 x 106 תאים µL 15 ל- PBS למנה) ומערבבים היטב.</li>
	<li>לבדוק, באמצעות micropipette, כי אמצעי האחסון הסופי לכל העכבר הוא בין 15 ל-20 μL (imperatively µL < 20).</li>
	<li>לשמור את התאים על הקרח עד סטיאוטטי הזרקה. הערה: לא נבדקו יותר מ 3-h timepoints.</li>
</ol>3. הזרקת סטיאוטטי
<ol><li>
הגדרת ציוד
	<ol>
<li>להרכיב, לכייל מסגרת קטנה סטיאוטטי בעלי חיים על פי הוראות היצרן על מנת להבטיח את הדיוק של זריקות תוך-גולגולתי (למשל, מזרק, לנפח הרצוי בגודל קצב הזרקת). הערה: קצב איטי אינפוזיה מומלץ (קרי, 2-3 µL/min).</li>
		<li>התקן את החומר תחת מיקרוביאלי ביטחון cabinet (MSC) כדי לשמור על העקרות של המכשירים וכדי להגן על העכברים מפני זיהומים. הערה: במקום "גושי איזותרמי" באמבט מים בטמפרטורה 37 º C מערכת זו מגבילה להיפותרמיה של עכברים במהלך הניתוח. חימום רפידות, אשר נחוצים לטיפול procedural, יש להשתמש במהלך ה-ניטור טמפרטורה רציפה.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
הכנת בעלי חיים שטרם-נותחו
	<ol>
<li>עזים ומתנגד עכבר עם זריקה בקרום הבטן של קטאמין (10 mg/mL), חריגות השירותים הווטרינריים (0.1 מ"ג/מ"ל) ב- µL 10/גרם של משקל הגוף של העכבר.</li>
		<li>לבצע בדיקת קמצוץ הבוהן כדי להבטיח הרדמה מלאה של שיכוך כאבים של החיה. הערה: כל תנועה היא אינדיקציה עמוק ללא כאבים, ו, במקרה כזה, עוד כמה דקות נדרשים לפני הפעולה.</li>
		<li>ברגע העכבר כראוי מרדימים, להשתמש במספריים כדי להסיר את הפרווה באתר כירורגית (בין שתי האוזניים, עד האף).</li>
	</ol>
</li>
	<li>
תא שטרם-נותחו הכנה
	<ol>
<li>בזהירות resuspend התאים עם פיפטה (מספר פעמים) לפני כל זריקה למניעת תא כלשהו הצליעה.</li>
		<li>בזהירות למשוך נפח התאים הדרושים ההשעיה (15-20 µL) microsyringe 22-G כדי למנוע את השאיפה של בועות. הערה: שלב העמסה תא אל microsyringe זה חשוב לצמצם סטיות מוזרק בכמויות. מחדש תאים עבור כל זריקה בודדים בין הליכים כדי למנוע כל תא clumping וכדי להבטיח מספר זוגי של ניהול תאים אפקטור במדגם.</li>
		<li>אז, במקום את המזרק לתוך המשאבה מזרק מותאם.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
טיפול פרוצדורלי
	<ol>
<li>לחטא באתר כירורגית עם מטליות ספוג בתמיסה povidone יוד 5% לפחות 3 x.</li>
		<li>הצב משחה אופטלמולוגיות סיכה בעיניים של העכבר כדי למנוע התייבשות יש הקרנית.</li>
		<li>מיקום העכבר anesthetized על המסגרת סטיאוטטי, על בלוק איזותרמי חמים מכוסה בניילון סטרילי כדי לשמור על הטמפרטורה של העכבר במהלך הניתוח ולהגביל את התמותה. הערה: אף נשרי ושיניים של העכבר כראוי שנמצאת מעל הבר השן, כדי להבטיח זרימת הנשימה נאותה במהלך ההליך.</li>
		<li>ברגע כשהעכבר ממוקם מעל הבר השן, להדק את הסורגים באוזן בחוזקה תחת האוזניים של העכבר כדי לשתק את הראש. הערה: להיות זהירים כדי לא לגרום נזק את עור התוף או לסכן את הנשימה.</li>
		<li>עושים חתך בעור הפנים של קו האמצע 1-2 ס מ עם מספריים סטרילי לאורך החלק העליון של הגולגולת של והשתרשה עמוק בלבה את ישבנה לחשוף את הגולגולת.</li>
		<li>זיהוי הצומת של הווריד, הילתית התפרים (Bregma) כדי לשמש ציוני בלוקאליזציה סטיאוטטי לפני הזריקה (המוצג באיור1).</li>
		<li>מניחים את microsyringe מעל נקודה זו.</li>
		<li>להעביר את microsyringe הימנית 2 מ"מ ו- 0.5 מ מ קדמי של Bregma.</li>
		<li>משתמש של microdrill, לעשות חור קטן בתוך הגולגולת עם מקדחה סטרילי בנקודות הציון קבועה מראש. יש להיזהר נותרו שטחי על מנת למנוע כל פגיעה של המוח. הערה: ב פרוטוקול זה, תאים חיסוניים הוזרקו בתוך גידול הוקמה (שבוע לאחר הזרקת תאי הגידול). העור צריך להיות נפתח מחדש (צלקת) ההזרקה מתבצעת באותן קואורדינטות משמש את ההשתלה תא הגידול (החור הוא בדרך כלל עדיין נוכחים עד כדי 2 שבועות לאחר ההזרקה). קואורדינטות נבחרו עבור הזרקת תאי הגידול ו אפקטור ב המוח parenchyma13,14.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
הזרקה של תאי מערכת החיסון אפקטור
	<ol>
<li>הכנס את microsyringe לתוך החור קדח ובזהירות, שזזות באיטיות, קדימה מחט 3 מ מ למטה בתוך השכבה הקשה של המוח, ואחר לאחור 0.5 מ מ לעומק הסופי של 2.5 מ מ לפני הזרקת תאי אפקטור.</li>
		<li>הפעלת את הזריקה תא אפקטור ב- 2-3 µL/דקה ונטר העכברים לאורך זמן ההזרקה.</li>
		<li>לאחר הזריקה תושלם, לשלוף את המחט עבור רק 1 מ מ ולשמור את microsyringe במקום במשך דקה נוספת לפני לאט פורש לחלוטין את microsyringe, כדי למנוע כל זליגות אתר העירוי. הערה: בעקבות ההסרה של החיה מהמכשיר סטיאוטטי נקו מיד ציוד הזרקה ניסויים עתידיים.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
הטיפול לאחר הניתוח ומעקב של העכבר
	<ol>
<li>להסיר את החיה מן המסגרת סטיאוטטי מיד להחיל povidone יוד 5% פתרון באזור הניתוח, לסגור את העור עם תפירה המתאים.</li>
		<li>החל לידוקאין 2% ג'ל ישירות על הפצע, לנהל 0.15 µg/g של הבופרנורפין על-ידי זריקה תת עורית עבור procedural שיכוך כאבים.</li>
		<li>המקום בחזרה העכבר anesthetized לכלוב שלו מעל כרית החימום מוגדר 37 ° C כדי לשמור על טמפרטורת גוף של העכבר המתאים וכדי למנוע היפותרמיה בכל. הערה: דיור נפרדת אין צורך.</li>
		<li>לפקח על העכבר עד זה הוא התאושש לחלוטין מן ההרדמה, להעביר אותו חדר דיור. הערה: נכון להיום, פרוטוקול זה ישנה תמיכה כמו כמה סיבוכים בלתי צפויות התרחשו (< 5% של עכברים מוזרק).</li>
		<li>מדי יום לפקח על העכברים, להרדימם כאשר סימנים בריאות הפוחתת מובחנות (למשל, תנוחת שפופות, ניידות, השתטחות או ירידה במשקל הגוף משמעותית [≥ 15%]).</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Stupp, R., Roila, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malignant+glioma%3A+ESMO+clinical+recommendations+for+diagnosis%2C+treatment+and+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Malignant glioma: ESMO clinical recommendations for diagnosis, treatment and follow-up.</a> Annals of Oncology. 20 Suppl 4, 126-128 (2009).</li>
<li>Weller, M., Cloughesy, T., Perry, J. R., Wick, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standards+of+care+for+treatment+of+recurrent+glioblastoma--are+we+there+yet%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro-Oncology%22%5BJournal%5D)">Standards of care for treatment of recurrent glioblastoma--are we there yet?</a> Neuro-Oncology. 15 (1), 4-27 (2013).</li>
<li>Chen, S. H., Shine, H. D., Goodman, J. C., Grossman, R. G., Woo, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+for+brain+tumors%3A+regression+of+experimental+gliomas+by+adenovirus-mediated+gene+transfer+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Gene therapy for brain tumors: regression of experimental gliomas by adenovirus-mediated gene transfer in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (8), 3054-3057 (1994).</li>
<li>Choi, P. J., Tubbs, R. S., Oskouian, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+Cellular+Therapies+for+Glioblastoma+Multiforme%5BTitle%5D)+AND+%22Cureus%22%5BJournal%5D)">Emerging Cellular Therapies for Glioblastoma Multiforme.</a> Cureus. 10 (3), e2305(2018).</li>
<li>Zhu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+and+Therapy+of+Glioblastoma+in+a+Mouse+Model+Using+Exosomes+Derived+From+Natural+Killer+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Targeting and Therapy of Glioblastoma in a Mouse Model Using Exosomes Derived From Natural Killer Cells.</a> Frontiers in Immunology. 9, 824(2018).</li>
<li>Chung, D. S., Shin, H. J., Hong, Y. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+hope+in+immunotherapy+for+malignant+gliomas%3A+adoptive+T+cell+transfer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology+Research%22%5BJournal%5D)">A new hope in immunotherapy for malignant gliomas: adoptive T cell transfer therapy.</a> Journal of Immunology Research. 2014, 326545(2014).</li>
<li>Vauleon, E., Avril, T., Collet, B., Mosser, J., Quillien, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+cellular+immunotherapy+for+patients+with+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Developmental+Immunology%22%5BJournal%5D)">Overview of cellular immunotherapy for patients with glioblastoma.</a> Clinical and Developmental Immunology. 2010, (2010).</li>
<li>Brown, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regression+of+Glioblastoma+after+Chimeric+Antigen+Receptor+T-Cell+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+of+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Regression of Glioblastoma after Chimeric Antigen Receptor T-Cell Therapy.</a> The New England of Journal of Medicine. 375 (26), 2561-2569 (2016).</li>
<li>Jarry, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereotaxic+administrations+of+allogeneic+human+Vgamma9Vdelta2+T+cells+efficiently+control+the+development+of+human+glioblastoma+brain+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Oncoimmunology%22%5BJournal%5D)">Stereotaxic administrations of allogeneic human Vgamma9Vdelta2 T cells efficiently control the development of human glioblastoma brain tumors.</a> Oncoimmunology. 5 (6), e1168554(2016).</li>
<li>Dutoit, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploiting+the+glioblastoma+peptidome+to+discover+novel+tumour-associated+antigens+for+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Exploiting the glioblastoma peptidome to discover novel tumour-associated antigens for immunotherapy.</a> Brain. 135 (Pt 4), 1042-1054 (2012).</li>
<li>Joalland, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-21+Increases+the+Reactivity+of+Allogeneic+Human+Vgamma9Vdelta2+T+Cells+Against+Primary+Glioblastoma+Tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunotherapy%22%5BJournal%5D)">IL-21 Increases the Reactivity of Allogeneic Human Vgamma9Vdelta2 T Cells Against Primary Glioblastoma Tumors.</a> Journal of Immunotherapy. 41 (5), 224-231 (2018).</li>
<li>Clemenceau, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effector+memory+alphabeta+T+lymphocytes+can+express+FcgammaRIIIa+and+mediate+antibody-dependent+cellular+cytotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Effector memory alphabeta T lymphocytes can express FcgammaRIIIa and mediate antibody-dependent cellular cytotoxicity.</a> The Journal of Immunology. 180 (8), 5327-5334 (2008).</li>
<li>Abdelwahab, M. G., Sankar, T., Preul, M. C., Scheck, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+implantation+with+subsequent+3D+in+vivo+bioluminescent+imaging+of+murine+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Intracranial implantation with subsequent 3D in vivo bioluminescent imaging of murine gliomas.</a> Journal of Visualized Experiments. (57), e3403(2011).</li>
<li>Jarry, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treg+depletion+followed+by+intracerebral+CpG-ODN+injection+induce+brain+tumor+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroimmunology%22%5BJournal%5D)">Treg depletion followed by intracerebral CpG-ODN injection induce brain tumor rejection.</a> Journal of Neuroimmunology. 267 (1-2), 35-42 (2014).</li>
<li>June, C. H., O'Connor, R. S., Kawalekar, O. U., Ghassemi, S., Milone, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CAR+T+cell+immunotherapy+for+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">CAR T cell immunotherapy for human cancer.</a> Science. 359 (6382), 1361-1365 (2018).</li>
<li>Baruch, E. N., Berg, A. L., Besser, M. J., Schachter, J., Markel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adoptive+T+cell+therapy%3A+An+overview+of+obstacles+and+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Adoptive T cell therapy: An overview of obstacles and opportunities.</a> Cancer. 123 (S11), 2154-2162 (2017).</li>
<li>Bryant, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+immunotherapeutic+potential+of+gammadelta+T-cells+in+patients+with+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro-Oncology%22%5BJournal%5D)">Characterization and immunotherapeutic potential of gammadelta T-cells in patients with glioblastoma.</a> Neuro-Oncology. 11 (4), 357-367 (2009).</li>
<li>Pereboeva, L., Harkins, L., Wong, S., Lamb, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+safety+of+allogeneic+innate+lymphocyte+therapy+for+glioma+patients+with+prior+cranial+irradiation%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunology%2C+Immunotherapy%22%5BJournal%5D)">The safety of allogeneic innate lymphocyte therapy for glioma patients with prior cranial irradiation.</a> Cancer Immunology, Immunotherapy. 64 (5), 551-562 (2015).</li>
<li>Bailey, S. L., Carpentier, P. A., McMahon, E. J., Begolka, W. S., Miller, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+and+adaptive+immune+responses+of+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Reviews+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Innate and adaptive immune responses of the central nervous system.</a> Critical Reviews in Immunology. 26 (2), 149-188 (2006).</li>
<li>Louveau, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+functional+features+of+central+nervous+system+lymphatic+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structural and functional features of central nervous system lymphatic vessels.</a> Nature. 523 (7560), 337-341 (2015).</li>
<li>Menei, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+and+sustained+delivery+of+5-fluorouracil+from+biodegradable+microspheres+for+the+radiosensitization+of+glioblastoma%3A+a+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Local and sustained delivery of 5-fluorouracil from biodegradable microspheres for the radiosensitization of glioblastoma: a pilot study.</a> Cancer. 86 (2), 325-330 (1999).</li>
<li>Menei, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereotaxic+implantation+of+5-fluorouracil-releasing+microspheres+in+malignant+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Stereotaxic implantation of 5-fluorouracil-releasing microspheres in malignant glioma.</a> Cancer. 100 (2), 405-410 (2004).</li>
<li>Salot, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large+scale+expansion+of+gamma+9+delta+2+T+lymphocytes%3A+Innacell+gamma+delta+cell+therapy+product%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Large scale expansion of gamma 9 delta 2 T lymphocytes: Innacell gamma delta cell therapy product.</a> Journal of Immunological Methods. 326 (1-2), 63-75 (2007).</li>
<li>Bennouna, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phase-I+study+of+Innacell+gammadelta%2C+an+autologous+cell-therapy+product+highly+enriched+in+gamma9delta2+T+lymphocytes%2C+in+combination+with+IL-2%2C+in+patients+with+metastatic+renal+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunology%2C+Immunotherapy%22%5BJournal%5D)">Phase-I study of Innacell gammadelta, an autologous cell-therapy product highly enriched in gamma9delta2 T lymphocytes, in combination with IL-2, in patients with metastatic renal cell carcinoma.</a> Cancer Immunology, Immunotherapy. 57 (11), 1599-1609 (2008).</li>
<li>Singh, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+human+brain+tumour+initiating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Identification of human brain tumour initiating cells.</a> Nature. 432 (7015), 396-401 (2004).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

העברה המאמצת של נבחרת מקורית או תאים מהונדסים אפקטור המערכת החיסונית מייצג גישה מבטיחה לטפל ביעילות גידולים, כגון סרטן המוח infiltrative, מטפלת הגבלת reactivities נגד תאים שאינם טרנספורמציה15, 16,17,18. עם זאת, מערכת העצבים המרכזית, המהווה את המוח, יש מצב המערכת החיסונית מסוים, ובמיוחד בשל קיום מחסום הדם - מוח ואת חוסר ניקוז לימפטי קלאסית מערכת19,<sup class="...

GBM (מי כיתה אסטרוציטומה הרביעי), הוא סרטן המוח הראשית בתדירות גבוהה ואגרסיבי ביותר אצל מבוגרים. למרות טיפולים אגרסיביים המשלבות ניתוח וכימותרפיה -רדיו, GBM נשאר משויך מאוד פרוגנוזה (חציון ההישרדות של 14.6 חודשים ו 2-בן-התמותה > 73%)1. זה עדויות כי יש מעט התקדמות טיפולית יעילה מאומתים מעל העשור האחרון2. בין המועמדים על עיצוב האתר של יעיל יותר אסטרטגיות טיפוליות3,4,5, immunotherapies6 נידונות כעת לאתר ולחסל גידול פולשני ו רדיו/כימותרפיה-עמידים מאוד תאים, חשד על תרומתם מפתח גידול מהיר ולא קטלנית relapse7. אימונולוגי פוטנציאלים שונים היו מזוהה, המוצע עבור immunotherapies, מעורבים טבעי או αβ ששונו או לימפוציטים מסוג T ϒδ כגון GBM ספציפיים גידול אנטיגנים או מולקולות מפגינות8,9, 10. האפשרות לנהל שנבחרו effectors תא החיסון GBM-תגובתי מייצג הזדמנות ייחודית לספק כמויות מוגברות של לימפוציטים ישירות לתוך האתר של ממאירות שיורית. כדי לתמוך באסטרטגיה זו, לאחרונה הראינו כי מודלים בהתבסס על עכברים immunodeficient נושא xenografts orthotopic ראשי GBM האנושי בנאמנות מסכם את הדברים על התפתחות גידולים במוח ב- GBM חולים9,11. יתר על כן, מודלים אלה שימשו כדי להדגים את היעילות antitumor חזקה של לימפוציטים הועבר adoptively Vϒ9Vδ2T allogeneic אנושי.
פרוטוקול זה מתאר את השלבים ניסיוני קריטי להשגת סטיאוטטי immunotherapies של גידולים במוח, כגון GBM, המבוססת על העברת המאמצת של לימפוציטים מסוג T allogeneic. המאמר מציג: (i) ההגברה של טיפולית allogeneic המערכת החיסונית T לימפוציטים, כמו לימפוציטים אנושיים Vϒ9Vδ2T; (ii) הכנת אלה T לימפוציטים להזרקה; (iii) ההליך עבור ניהול סטיאוטטי בתוך המוח, ליד הגידול. מאמר זה גם מספק תובנה אופן הפעולה של אלה effectors הסלולר לאחר ההזרקה סטיאוטטי.
הגישה הטיפולית המובאת כאן מבוסס על ההזרקה של 20 x 106 אפקטור תאים לכל מנה עבור העכבר immunodeficient נושאות כל המוח. שלב ההרחבה הראשונית במבחנה נדרש לייצר כמויות גדולות של תאים חיסוניים. לכן, לא ספציפית תא הרחבות מבוצעות באמצעות phytohemagglutinin (PHA-L) וכן מוקרן allogeneic מזין תאים: תאים תאי הדם ההיקפית (PBMCs) מן התורמים בריא ותא טרנספורמציה-אפשטיין בר וירוס EBV B-lymphoblastoid קווים (BLCLs), הנגזר PBMCs על-ידי זיהום במבחנה המכילה EBV בתרבות supernatant משורת תאים מרמוסט B95-8, בנוכחות 1 µg/mL וציקלוספורין-א
תאים חיסוניים אפקטור GBM-תגובתי בהשוואה ונבחר במבחנה מבחני9. תאים אלה אפקטור מופעלים, הוגדל באמצעות פרוטוקולים סטנדרטיים, על פי הטבע שלהם (למשל, אדם Vγ9Vδ2 T לימפוציטים9 או וירוס אנטי-הרפס אנושית αβ T לימפוציטים12) עם טוהר המינימלי של > 80%, כמו באופן שגרתי נבדק על ידי ניתוח cytometric. ההליך הרחבה תא שיפורטו להלן חל על קבוצות משנה לימפוציטים אנושיים שונים.

<table><tbody><tr><td>PBMCs</td><td></td><td></td><td>מ-3 תורמים בריאים שונים</td></tr><tr><td>BLCLs</td><td></td><td></td><td>מ-3 תורמים שונים</td></tr> מכון <tr><td>הזיכרון רוזוול פארק מדיום (RPMI)</td><td>גיבקו</td><td>31870-025</td><td></td></tr><tr><td>FCS</td><td>Dutscher</td><td>S1810-500</td><td></td></tr><tr><td>L-גלוטמין</td><td>גיבקו</td><td>25030-024</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין</td><td>גיבקו</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>IL-2</td><td>נוברטיס</td><td>פרולוקין</td><td></td></tr><tr><td>PHA-L</td><td>סיגמא</td><td>L4144</td><td></td></tr><tr><td>מסגרת סטריאוטקסית</td><td>Stoelting Co.</td><td>מתאם עכבר 51600</td><td></td></tr><tr><td>למסגרת סטריאוטקסית&nbsp; &nbsp;</td><td>סטולטינג ושות'</td><td>51624</td><td></td></tr><tr><td>מזרק משאבת מיקרו-מזרק&nbsp;</td><td>מזרק WPI</td><td>UMP3-4</td><td></td></tr><tr><td>NanoFil</td><td>WPI</td><td>NF34BV-2</td><td></td></tr><tr><td>עכברי NSG</td><td>צ'ארלס ריבר</td><td>NSGSSFE07S</td><td></td></tr><tr><td>קטמין</td><td>מריאל</td><td>Imalg&egrave; ne 1000</td><td></td></tr><tr><td>קסילזין</td><td>באייר</td><td>רומפור 2%</td><td></td></tr> <tr><td>מספריים</td><td>WPI</td><td>201758</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים</td><td>WPI</td><td>501215</td><td></td></tr><tr><td>OmniDrill 115/230V</td><td>WPI</td><td>503598</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 4-0</td><td>Ethicon</td><td>VCP397H</td><td></td></tr><tr><td>Xylocaine</td><td>Astrazeneca</td><td>3634461</td><td></td></tr></tbody></table>

העברת סטיאוטטי המאמצת של תאים חיסוניים ציטוטוקסיות במודלים מאתר של האדם orthotopic גליובלסטומה xenografts

Stereotactic Adoptive Transfer of Cytotoxic Immune Cells in Murine Models of Orthotopic Human Glioblastoma Multiforme Xenografts

גליובלסטומה (GBM), סרטן המוח הראשית בתדירות גבוהה ביותר אגרסיבי אצל מבוגרים, מזוהה בדרך כלל עם פרוגנוזה גרועה, טיפולים יעילים נדיר הוצעו במהלך העשור האחרון. בין המועמדים מבטיחה עבור תכנון אסטרטגיות טיפוליות מקוריות, immunotherapies הסלולר סומנו כמטרות לחסל פולשני ביותר, כימותרפיה-radioresistant תאים סרטניים, סביר מעורב התדרדרות מהירה, חמורה של סרטן זה. לפיכך, administration(s) של effectors תא החיסון GBM-תגובתי allogeneic, כמו לימפוציטים Vϒ9Vδ2 T האנושי, בסביבת הגידול מייצג הזדמנות ייחודית לספק יעיל, המרוכזת סוכני טיפולית ישירות לתוך אתר של גידולים ממאירים במוח. כאן, אנו מציגים את פרוטוקול על ההכנה ועל המינהל stereotaxic של לימפוציטים אנושיים allogeneic בעכברים immunodeficient נושאת גידולים במוח העיקרי אנושי orthotopic. מחקר זה מספק של פרה הוכחה הרעיון הכדאיות והן את היעילות antitumor של אלה immunotherapies הסלולר המסתמכים על זריקות סטיאוטטי של לימפוציטים אנושיים allogeneic בתוך intrabrain הגידול מיטות.

מחקר זה מתאר את האסטרטגיה של העברות המאמצת של תאים אפקטור מערכת החיסון התאית בתוך המוח של עכברים נושא הגידול, בהתבסס על זריקות סטיאוטטי שבוצעו ישירות בתוך המיטה הגידול.
כדי למזער כל סיכון של פגיעה מוחית המשויך אמצעי הזרקה גדולים, התליה תא אפקטור צריך להיות מרוכז (20 x 106 תאים ב- 15-20 µL ל- PBS). כדי לבדוק אם שלב זה ריכוז תא עשוי להשפיע על הכדאיות של התאים אפקטור, תאים אלה היו מוכנים לפי הפרוטוקול המתואר, לטעון את mi...

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול על ההכנה ועל המינהל stereotaxic של לימפוציטים אנושיים allogeneic בעכברים immunodeficient נושאת גידולים במוח העיקרי אנושי orthotopic. מחקר זה מספק הוכחה-של-קונספט הכדאיות והן את היעילות antitumor של המועבר intrabrain immunotherapies הסלולר.

העברת סטיאוטטי המאמצת של תאים חיסוניים ציטוטוקסיות במודלים מאתר של האדם Orthotopic גליובלסטומה Xenografts

Glioblastoma multiforme (GBM), the most frequent and aggressive primary brain cancer in adults, is generally associated with a poor prognosis, and scarce ...

גליובלסטומה מולטיפורמה נותרה גידול המוח הראשוני השכיח והאגרסיבי ביותר בקרב מבוגרים. למרות טיפולים אגרסיביים המבוססים על ניתוח ואחריו רדיו וכימותרפיה, GBM קשור לפרוגנוזה גרועה ביותר והישרדות חציונית נמוכה מ-15 חודשים. מכיוון שמעט התקדמות טיפולית נעשתה בעשור האחרון, אימונותרפיה תאית נחקרת כיום כדי לחסל תאי GBM פולשניים ועמידים מאוד המעורבים ככל הנראה בהישנות מהירה של הגידול.מתן של גורמים אימונוטוקסיים ציטוטוקסיים נבחרים בקרבת הגידול יכול לייצג הזדמנות ייחודית לספק אימונותרפיה תאית מרוכזת, ישירות לאתר הממאירות השיורית. קבוצתנו הראתה לאחרונה כי עכברי NSG חסרי חיסון הנושאים GBM אנושי ראשוני אורתוטופי מסכם GBM להתפתחות רבה יותר בחולים. מודלים אלה של GBM שימשו להערכת היעילות של אפקטורים חיסוניים ציטוטוקסיים על זריקות תוך גידוליות.פרוטוקול זה מתאר את התהליך הטיפולי שלנו המבוסס תחילה על בידוד והגברה של תאי אפקטור חיסוני תגובתי GBM. שנית, התפשטות תאי אפקטור אלה להזרקה בין גולגולתית. ושלישית, ההזרקה הסטריאוטקטית שלהם לאתר הגידול בתוך מוח העכבר.כמו כן נחקרה התנהגות האפקטור החיסוני לאחר הזרקה אורתוטופית. שלושה שבועות לאחר גירוי העובר PHA, תאי אפקטור, היוצרים גוש תאים בתחתית הבקבוק, היו אמורים לחזור למצב מנוחה ומוכנים לשימוש. לאחר בדיקת ספירת תאי האפקטור, השעו ואספו תאים בצינור של 115 מיליליטר וצנטריפוגה אותם.הסר בזהירות ובשלמות נוזל על. ולהשעות תאים ב-PBS סטרילי ובצנטריפוגה כדי לשטוף אותם. הסר בזהירות ובשלמות את הסופרנטנט.ואז השעו מחדש תאים במיליליטר אחד של PBS סטרילי. העברת תאים במיקרו-צינור לצנטריפוגה. שוב, הסר בזהירות ובשלמות את הסופרנטנט על ידי פיפטינג איטי.השלב הבא הוא קריטי, השעו מחדש תאים במחצית מהנפח הסופי של PBS סטרילי והומוגניזציה ברכות ובזהירות. ודא את הנפח הסופי עם מיקרופיפטה, הנפח הסופי לעכבר צריך להיות בין 15 ל -20 מיקרוליטר עבור 20 מיליון תאים. ודא שהוא לא יעלה על 20 מיקרוליטר לעכבר.שמור את התאים על קרח עד להזרקה. ודא שהחיה מורדמת כראוי על ידי צביטה בבוהן ולאחר מכן הסר פרווה ממקום הניתוח, בין שתי האוזניים ועד האף. השעו תאים לאט כדי למנוע גוש תאים והעמיסו את תרחיף התאים למזרק בזהירות רבה כדי למנוע נוכחות של בועות.לאחר מכן, הנח את המזרק במשאבת המזרק המותאמת. יש לחטא את מקום הניתוח בתמיסת מלח ויוד פובידון 5% ולהניח משחת עיניים מסככת בעיני העכבר למניעת ייבוש הקרנית. לאחר מכן, מקם את העכבר המורדם על המסגרת הסטריאוטקטית על בלוק חם.מקם כראוי את האף והשיניים של העכבר מעל מוט השיניים. הדק היטב את מוטות האוזניים באוזני העכבר כדי לשתק את הראש. היזהר לא לפגוע בעור התוף, לפגוע בנשימה ולוודא שהראש משותק היטב.בצע חתך עור סגיטלי בקו האמצע עם מספריים סטריליות לאורך החלק העליון של הגולגולת כדי לחשוף את הגולגולת. זהה את ההצטלבות של המבנים הסגיטליים והעטרתיים כדי לשמש ציוני דרך ללוקליזציה סטריאוטקטית, ומקם את המזרק מעל נקודה זו. הזז את המזרק בקואורדינטות שנקבעו מראש.שני מילימטר ימני לרוחב, ו -0.5 מילימטר קדמי של בעזרת מקדחה מיקרו, צור חור קטן בגולגולת בעזרת מקדחה סטרילית. היזהר להישאר שטחי על מנת למנוע פגיעה מוחית. הכנס את המזרק בזהירות לחור הקדוח.הזיזו לאט קדימה את המחט שלושה מילימטר למטה בדורה, ואז 0.5 מילימטר אחורה לעומק סופי של הזרקת תאים של 2.5 מילימטר. הפעל את הזרקת התאים בשניים או שלושה מיקרוליטר לדקה, ופקח על העכברים לאורך כל זמן ההזרקה. לאחר השלמת ההזרקה, משוך את המחט למילימטר אחד בלבד והשאר את המזרק במקומו למשך דקה נוספת לפני הוצאת המזרק לאט לחלוטין כדי למנוע דליפה ממקום העירוי.הסר בזהירות את החיה מהמסגרת הסטריאוטקטית. יש לסגור את העור עם תפר כירורגי מתאים ולמרוח ג'ל לידוקאין 2% ישירות על הפצע. העבר את העכבר המורדם לכלוב המתאים שלו מעל כרית החימום המוגדרת ל-37 מעלות צלזיוס כדי לשמור על טמפרטורת גוף העכבר המתאימה עד להחלמה מלאה מההרדמה.מכיוון שהתרחיף מרוכז מאוד, נבדקו כדאיות התא והתגובתיות. תאי אפקטור הועמסו במזרק על מנת לחקות הזרקה in vivo. התאים נאספו מיד או 10 דקות לאחר מכן ונותחו על ידי ציטומטריית זרימה לצביעה של פרופידיום יודיד.כפי שאתה יכול לראות, ההכנה והטעינה לא השפיעו על הכדאיות של תאי אפקטור ב -24 שעות. התגובתיות נגד תאי גידול גליובלסטומה נבדקה גם באמצעות תאים לא מוכנים או אפקטורים שהוכנו ונשארו שלוש שעות על העיניים. התגובתיות מנוטרת על ידי צביעה חיובית של סמן ההפעלה CD107A.תוצאות אלו מדגימות כי התגובתיות של תאי האפקטור לא הושפעה מההכנה. שבעה ימים לאחר הזרקת תאי האפקטור, מוחות העכברים נאספו, נחתכו ונצבעו לצביעה המטית כדי לאפשר זיהוי של מבנה הגידול. ואז צביעת CD3 אנטי אנושית אפשרה לוקליזציה של תאי אפקטור.מעניין שתאי אפקטור נמצאו סביב הגידול ובליבת הגידול, אך גם בחצי הכדור הנגדי. תאי T אפקטורים אנושיים שבודדו ממוח עכבר 48 שעות לאחר ההזרקה מייצגים 2% מתאי המוח. הם עדיין הצליחו להתרבות בנוכחות PHA, מזינים וגירוי IL2, עם טוהר של 99% לאחר הגברה.הודות לפרוטוקול זה, תאי אפקטור אנושיים במנוחה יכולים לשרוד ולפטרל עם פרנכימה של מוח עכבר במשך מספר ימים לאחר ההזרקה הסטריאוטקסית. לסיכום, העברה מאמצת של תאי אפקטור אנושיים על ידי זריקות סטריאוטקטיות מייצגת גישות מבטיחות לטיפול יעיל בגידולי מוח ממאירים חודרניים עם השפעות מזיקות מוגבלות על תאים בריאים. דרך מתן זו מנצלת את העובדה שתאים אנושיים מועברים קרוב לאתר הגידול, ומגבילה את דילולם בתוך הרקמות והאורגניזם.כאן תיארנו את ההליך לאחר העברת כמות גדולה של תאים חיסוניים בתוך גידול המוח ללא השפעות מזיקות על תאי אפקטור וחשוב מכך, ללא כל השפעה מזיקה נראית לעין על עכברים. יתר על כן, תאי חיסון מוזרקים מקומית במוח עכבר לא רק מסוגלים לשרוד ולשמור על יכולתם להיות מופעלים ומוגברים ex vivo, אלא גם לחסל ולחסל תאי גידול מפוזרים ברקמת המוח שמסביב. באופן קולקטיבי, תכונות אלה חיוניות כדי לאפשר חיסול של תאי גידול חודרניים חזקים המאפיינים גידולי GBM.פרוטוקול זה פותח הזדמנות חדשה להקמת הליך העברה מאמצת במודל עכברים של גידול במוח. שלב חיוני לפני ששוקלים תקליטור קליני.

stereotactic-adoptive-transfer-cytotoxic-immune-cells-murine-models

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

אנו מתארים שיטה משולבת להשתלה המדויקת, stereotactic של תאי multiforme glioblastoma אדם לתוך המוח של עכברים בעירום וסידורי...

השרשה ותוך גולגולת Stereotactic<em&gt; בחי</em&gt; הדמית bioluminescent של xenografts גידול במערכת מודל עכבר של multiforme glioblastoma

סרטון זה מדגים טכניקת הזרקה סטריאוטקסית למתן לימפוציטים מסוג T לתוך מודל מורין הנושא גידול במוח אנושי. עם מיקום עכבר מורדם הנושא גידול על מסגרת סטריאוטקטית ויצירת חור בור במיקום ההזרקה על הגולגולת, מוזרקים לימפוציטים מסוג T באתר הגידול.

העברת לימפוציטים מסוג T לעכברים הנושאים גידולי מוח אנושיים

גליומות ממאירות מהוות קבוצה הטרוגנית של ניאופלסמות גליה מסתננות מאוד עם תכונות קליניות ומולקולריות מובהקות. קסנוגרפטים אורתוטופיים ראשוניים מסכמים מחדש את התכונות ההיסטופתולוגיות והמולקולריות של תת-סוגים ממאירים של גליומה במודלים פרה-קוליניים של בעלי חיים.

גליומה אורתוטופית ראשונית קסנוגרפטים recapitulate צמיחה הסתננות איזוציטראט דהידרוגנאז אני מוטציה

אסטרוציטים מסוג פרא פנוטיפי ותאי גזע עצביים שנאספו מעכברים שהונדסו עם אללים אונקוגניים מותנים ומותנים ועברו טרנספורמציה ויראלית יכולים לשמש למודל פתוגנזה של אסטרוציטומה במבחנה ובגוף החי על ידי הזרקה אורתוטופית של תאים שעברו טרנספורמציה למוחם של חברים סינגניים בעלי יכולת חיסונית.

דוגמנות אסטרוציטומה פתוגנזה במבחנה ו בVivo שימוש בקליפת מוח האסטרוציטים או בתאי גזע עצביים מעכברים מותנים, מהונדסים גנטי

המוח הוא אתר ייחודי עם איכויות שאינם מיוצגות היטב על ידי במבחנה או ניתוחים מחוץ לרחם. מודלים עכבר orthotopic עם מאפייני מיקום וצמיחה לשחזור ניתן ליצור באופן אמין עם זריקות תוך גולגולתי באמצעות מכשיר קיבוע stereotaxic ומשאבת מזרק בלחץ נמוך.

יצירה אנטומית מדויק והשחזור תוך גולגולת xenografts של גידולים במוח אדם

ניתן למנף את ההשפעות הלימפודו-דפלטיביות והאימונומודולטוריות של טיפול סטנדרטי בכימותרפיה והקרנות כדי לשפר את היעילות האנטי-גידולית של אימונותרפיה של תאי T. אנו מתארים שיטה ליצירת תאי T קולטני אנטיגן כימריים ספציפיים ל-EGFRvIII (CAR) ומתן אותם בהקשר של סטנדרט הטיפול בגליובלסטומה.

דור של תאי T CAR למאמצת תרפיה בהקשר של גליובלסטומה טיפול סטנדרטי

שוחרת הגידול טיפולית בתאי גזע mesenchymal (MSCs) מבטיחים לטיפול פולשני גליובלסטומה. השתלת אופטימלית כולל משלוח של MSCs לתוך חלל כריתה הגידול על פיגומים. כאן, טכניקות פרה כדי ללמוד טיפול MSC גליובלסטומה הינם מסופקים לרבות: כריתה הגידול תמונה מונחה; השרשת נזרע MSC פיגומים; טיפול לאחר הניתוח מעקב.

תמונה מונחה כריתה של גליובלסטומה, ההשתלה תוך-גולגולתי של פיגומים נזרע תאי גזע טיפולית

במאמר זה אנו מתארים מודל עכבר אורתוטופי פרה-קליני עבור GBM, שהוקם על ידי הזרקה תוך-גולגולתית של תאים שמקורם בגידולי מודל עכבר מהונדסים גנטית. מודל זה מציג את סימני ההיכר של המחלה של GBM אנושי. עבור מחקרים תרגומיים, הגידול במוח העכבר נמצא במעקב על ידי MRI in vivo והיסטופתולוגיה.

מודלים אורתוטופיים תרגומיים של גליובלסטומה מולטיפורמה

פיתוח מודלים אורתוטופיים של גידולי מוח בילדים דורש דיוק קפדני, תוך שימוש במכשיר סטריאוטקסי להשתלת תאים סרטניים בצורה מדויקת. המתודולוגיה המוצגת כאן מתארת את השלבים הכרוכים בהכנת תאי גידול במוח, ביצוע זריקות תוך גולגולתיות ויישום מערכת ניטור לאחר ניתוח להערכת השתלת גידול מוח.

הקמת מודלים אורתוטופיים של קסנוגרפט שמקורם בחולה לגידולי מוח באמצעות מכשיר סטריאוטקסי

גליובלסטומה היא צורה הרסנית של סרטן מוח ראשוני, וטיפול תרמי אינטרסטיציאלי בלייזר מתגלה כחלופה מבטיחה לכריתה כירורגית קונבנציונלית לגליובלסטומה שאינה ניתנת לניתוח. פרוטוקול זה מתאר מודל עכבר פרה-קליני אופטימלי שניתן להשתמש בו כדי לחקור את השפעות הטיפול או טיפולים משלימים וקומבינטוריים.

מודל עכברי בעל יכולת חיסונית לטיפול תרמי אינטרסטיציאלי בלייזר בגליובלסטומה

מטרת פרוטוקול זה היא לספק לחוקרים טכניקה שניתנת לשחזור גבוה להשתלות תוך-גולגולתיות.

השתלה תוך-גולגולתית סטריאוטקטית של גליובלסטומה קווי תאי זנוגרפט שמקורם בחולה בעכברים

למד העברה אימוצית של תאים חיסוניים ציטוטוקסיים לטיפול בגליובלסטומה באמצעות מודל קסנוגרפיה אורתוטופית בעכברים NSG. שיטה זו מדגימה יעילות נגד גידול ואפשרות למסירת תרפיה תאית ישירות למוח.

העברת סטיאוטטי המאמצת של תאים חיסוניים ציטוטוקסיות במודלים מאתר של האדם Orthotopic גליובלסטומה Xenografts

גלה סרטונים נוספים