תוך ורידי, אינטרה-שפיר בתוך הרחם השתלת במודל מאתר

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בעוברים, ריפוי גנטי והשתלת תאי גזע. יתרון לטכניקה זו הוא שהיא מאפשרת ניתוח של ההשפעות של טיפולים ניסיוניים שונים על עוברי מורין. הדגמת הליך זה יהיו הרופאים ניקולס אן, וברברה קונס, רופאים ועמיתים מחקר במעבדה שלנו.

לפני תחילת ההליך, טיפה חמש עד 10 microliters של PBS סטרילי לתוך ומחוץ קצה המחט כירורגית, פעמיים עד שלוש פעמים כדי לנקות אותו מכל פסולת אפשרית. הבא למלא את המחט עם reagent של עניין בנפח הניסוי המתאים וריכוז. ולחץ על כפתור המצב שלוש פעמים על מזרק מיקרו כדי להתקדם למסך כיול ההזרקה.

הוסף מרווחי זמן של 10 או 100 אלפיות שניה כדי להתאים את זמן ההזרקה ולחץ על לחצן המצב פעמיים נוספות. לחץ על כפתור האיזון ולחץ על דוושת הרגל פעם אחת. לאחר מכן לחץ על הדוושה שוב ולהעריך איזה נפח של פתרון מתרוקן מתוך המחט לכל דחיפה.

כאשר מזרק מיקרו מכויל לנפח הניסיוני המתאים, למלא את המחט לרמה הנכונה עבור הזריקה. כאשר כל המחטים נוקו, לאשר חוסר תגובה קמצוץ בוהן של העכבר הנשי בהריון חודשיים עד שישה חודשים. לגלח את הבטן, לדאוג לא לפגוע בפטמות, ולהעביר את החיה כרית חימום בתדר supine.

החל משחה על העיניים של החיה ולאבטח את הגפיים על כרית החימום עם סרט הדבקה. ולחטא את העור החשוף. לאחר מכן להזריק הרדמה מקומית כגון 100 microliters של 0.25%Bupivacaine תת עורית.

לאחר מכן, בצע חתך עור של 1 עד 2 ס"מ כך שהגבול התחתון אינו קרוב יותר מס"מ אחד לתוך ההקדמה, וזהה את קו האמצע של הפאשיה, תוך הקפדה שלא לפגוע בכלי האפיגסטרה שמסביב. באמצעות מדפים אדסון, לצבוט את fascia מבלי לתפוס את כל האיברים או העוברים הבסיסיים, ולפתוח את הרקמה עם מספריים. פעם בבטחה בתוך חלל הבטן, להאריך את החתך fascial לאורך החתך בעור, ולהשתמש applicators קצה כותנה להעביר את המעיים לחלק העליון של הבטן כדי לחשוף את הרחם gravid.

מוציאים את הרחם דרך החתך ומזהים בקפידה את השחלות הימנית והשמאלית כדי להבטיח שכל העוברים ייספרו. מניחים את הרחם השמאלי בחזרה לתוך הבטן, כך שרק הרחם הימני חשוף, כדי לשמור על העוברים שאינם מוזרקים חם. ותפסו בעדינות את שאק מי השן הצדדי ביותר בין האגודל לאצבעות האינדקס של היד הלא דומיננטית.

מקם את מיקרוסקופ הניתוח על החיה והתאם את המיקוד והתאורה להדמיה טובה יותר של העובר לפי הצורך. עבור זריקה תוך וריד לסובב את הרחם, כך לשווא vitelline, להיות מוזרק מקביל קצה המחט. ולהניח את המחט על הרחם בזווית של חמש מעלות כדי לנקב את קיר הרחם.

עם הקצה בין קיר הרחם לשיק מי השן, מניחים את הקצה ישירות על גבי לשווא vitelline ובזווית כמעט משיק, להחליק את המחט על לשווא עד השיקוע מתקדם לתוך הכלי. זה הכרחי שהזווית תישאר נמוכה כך המחט לא לחדור את הקיר האחורי של הכלי. כאשר נקודה של דם נצפתה בקצה המחט, ללחוץ על דוושת הרגל כדי להזריק את מלוא נפח החומר המעניין לתוך הכלי.

להזרקה תוך-מיתנית, סובבו את שאק מי המיצוק עד שנמצא מיקום נטול כלי דם. כוון את המחט בניצב לקיר הרחם ונקב את המחט דרך שאק החלמון הרחם, ושאק מי שפיר דואג לא לחדור כל רקמת העובר. לאחר מכן להזריק את הנפח המתאים של חומר הרצוי.

לאחר כל סוג של הזרקה, למשוך את המחט מאתר ההזרקה לאחר הנפח הרצוי מועבר. ולהמשיך לעובר הבא עד שכל העוברים של קרן הרחם הימנית יוזרקו. ואז להחזיר את קרן הרחם הימנית לתוך הבטן.

ולהסיר את קרן הרחם השמאלית מהבטן. כאשר כל העוברים בקרן השמאלית הוזרקו להחזיר את הרחם כולו אל הבטן, דואג להימנע הרחם או volvulus המעי. השתמש פיפטה העברה חד פעמית לוותר על שני מיליליטר של PBS סטרילי לתוך הבטן, כדי להחליף את כל ההפסדים בלתי הגיוניים.

ולהשתמש 4-0 פוליגלקטין 910 תפרים כדי לסגור את fascia והבטן בשכבה רציפה אחת. לאחר מכן להעביר את העכבר לכלוב נקי תחת מנורת חום עם ניטור עד שליטה מלאה. בניסוי אימון זה הכבדים של העוברים שקיבלו השתלת הרחם על ידי חניך הציגו רמות פלואורסצנטיות נמוכות יותר 24 שעות לאחר ההזרקה, בשל חריטה נמוכה יותר של תאי GFP המושתלים, מאשר כבדים שהוזרקו על ידי מדריך מנוסה.

ניתוח ציטומטרי זרימה עבור תאים תורמים חיוביים GFP גם בקורלציה עם הרמה הנמוכה יותר של פלואורסצנטיים שנצפו תחת מיקרוסקופיה פלואורסצנטי. היכולת של וקטורים נגיפיים המועברים דרך המסלול האינטר-מי השפיר להתמר תאים במגע עם מי השפיר. מודגם על ידי התמרה של תאי אפיתל 48 שעות לאחר הזרקת ברחם של וירוס אדנו נושאת את הטרנסג'נדר GFP ביום ההריון 12.5 עוברים.

לאחר השליטה בטכניקה זו יכול להשלים ב 15-25 דקות לכל עכבר בהריון. לאחר צפייה בסרטון זה אתה צריך הבנה טובה של איך בבטחה וביעילות לספק טיפולים שונים לעוברים העכבר.