Name: Contractility איזומטרי מדידה של עורק מצע המעי העליון העכבר באמצעות חוט Myography (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-20T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 42 s
Description: למדו מדידת כיווץ איזומטרי של עורק מצע המעי העכבר באמצעות מכשיר Myography. שיטה זו מאפשרת לבחון תרופות חדשות לטיפול בהיפרטנזיה ולחקור מנגנוני כיווץ שריר חלק כלי דם.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים ד ר Wei Qi הוא (אוניברסיטת שבחיים, סאזהאו, סין), ד ר יאן נינג קיאו (מחוזית האוניברסיטה, שיאן, סין) לסיוע טכני. עבודה זו נתמכה על ידי את נבחרת מדעי הטבע קרן סין (גרנט 31272311, 81373295 ו- 81473420), את הפרוייקט ממומן על ידי עדיפות תוכנית הפיתוח של ג'יאנגסו להשכלה גבוהה המוסדות האקדמיים (מענק מס ' ysxk-2016).

מניפולציות בעלי חיים אושרו על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועל שימוש הוועדה (IACUC) של האוניברסיטה מודל החיה מחקר מרכז של נאנג'ינג.
1. פתרון הכנה
<ol><li>להכין פתרון HEPES-Tyrode (H-T) באמצעות 137.0 מ"מ NaCl, מ מ 2.7 אשלגן כלורי, CaCl 1.8 מ מ2, 1 מ מ MgCl2∙6H2O, 5.6 מ מ D-גלוקוז ו 10 מ מ HEPES, pH 7.3-7.4.</li>
	<li>להכין HEPES-Tyrode פתרון ללא סידן (Ca2 +-חינם H-T) באמצעות מ"מ 140.6 NaCl, מ מ 2.7 אשלגן כלורי, 1 מ MgCl2∙6H2O, 5.6 מ מ D-גלוקוז ו- 10 מ מ HEPES, pH 7.3-7.4.</li>
	<li>להכין HEPES-Tyrode פתרון באמצעות 124 מ"מ אשלגן (K גבוה+) באמצעות 15.7 מ מ NaCl, 124.0 מ מ. אשלגן כלורי, מ מ 1.8 CaCl2, 1 מ MgCl2∙6H2O, 5.6 מ מ D-הגלוקוז, ו- 10 מ מ HEPES, pH 7.3-7.4.</li>
</ol>2. ניסוי הכנה
<ol><li>מחממים H-T ו פתרונות High-K+ שימוש באמבט מים 37 ° C.</li>
	<li>הפעל את מערכת myograph, נתוני רכישת חומרה ומחשב.</li>
	<li>למלא בקפידה צ'יימברס myograph כל 5 מ"ל של H-T פתרון לכל.</li>
	<li>למלא שתי צלחות פטרי עם 20 מ של 4 ° C H-T ו- Ca2 +-ללא פתרונות H-T, בהתאמה, ולאחסן על קרח.</li>
	<li>מילוי ס מ-10 מצופה פטרי עם 20 מ של H-T פתרון ולתחזק אותה בטמפרטורת החדר.</li>
</ol>3. מצע המעי העליון העכבר עורק
<ol><li>המתת חסד של 8-12-בת שבוע C57BL/6J נשית או גברית העכבר על ידי נקע בצוואר הרחם. להצמיד את העכבר עם הבטן שלו פונה כלפי מעלה.</li>
	<li>להרטיב את הבטן עם 70% אתנול. ואז, לחתוך את העור עם מספריים לאורך הקו האמצעי הגחון מהמפשעה, ולבצע חתכים מנקודת ההתחלה של החתך הראשוני כלפי מטה הרגליים משני הצדדים. משוך את העור בחזרה משני הצדדים; לעשות חתכים דומה לפתיחה של הצפק.</li>
	<li>בעזרת מספריים, חותכים את לוושט, המעי הגס, אחרים ורקמות לבודד לחלוטין על מערכת העיכול עם האכלה להערכת מן הגוף.</li>
	<li>עם מלקחיים, להעביר את המקטע מבודד המנה המכיל את הקור H-T מוכן בשלב 2.4, ולשטוף בעדינות את הרקמה בפתרון H-T מספר פעמים כדי לשטוף את הדם.</li>
	<li>להעביר את המקטע מבודד לתוך הפטרי מצופה מוכן בשלב 2.5, ולבצע עורק מצע המעי העליון בטמפרטורת החדר.</li>
	<li>להחליק את קיבה, מעי, מעי ו caecum בכיוון השעון, להצמיד את הבטן ואת caecum בצד ימין ועל שמאל, בהתאמה.</li>
	<li>למתוח את המיטה להערכת מצע המעי העליון ותקן המעי עם סיכות כדי לחשוף את העורקים מצע המעי העליון גזור. הערה: בתנאים אלה, העורקים הם מעל הורידים.</li>
	<li>הפעל את מקור האור שידור של מיקרוסקופ סטריאוסקופי, לנתח את העורקים מתחת למיקרוסקופ. ודא כי הרקמה כולה הוא שקוע הפתרון.</li>
	<li>תהדק את רקמות adipose סביב העורקים עם מלקחיים, לבודד את העורקים על ידי כריתת כל אל הרקמות במספריים לנתיחה. הימנע ופצעו את העורקים.</li>
</ol>4. עורקי הרכבה
<ol><li>העברה, לטבול את העץ עורק מצע המעי העליון לתוך קר Ca2 +-חינם פתרון H-T (להכין בשלב 2.4) על ידי מחבר חובק למעקה העורקים עודף עם מלקחיים.</li>
	<li>לחתוך חלק מ מ 1.4 של העורק proximal לקיר המעי של ארקייד מצע המעי העליון, והשתמש מלקחיים שני כדי לפתוח את שני הצדדים של קטע עורק זה בזהירות.</li>
	<li>להכין שני מקטעים של פלדת אל-חלד חוט 2.5 ס מ אורך, למקם אותם לתוך אותה המנה.</li>
	<li>הצמד בעדינות את קצה אחד של העורק באמצעות מלקחיים והוסף בקפידה שני חוטי לתוך לומן של העורק אחד עם עזרה של מלקחיים אחר. ודא החוטים נשמרים ישר אל תיגע של אנדותל.</li>
	<li>בעזרת מלקחיים שני, מהדק את שני חוטי פלדה מחוץ הספינה משורשרות בו זמנית, בזהירות להעביר את כלי הקיבול הפטרי לתא myograph מילא בעבר עם פתרון H-T (שלב 2.3).</li>
	<li>בורג הלסתות בנפרד כדי לפנות מקום עבור הרכבה. תהדק את שני הצדדים של אחד שני החוטים שנוספו באמצעות מלקחיים שני, ולמקם את כלי הקיבול הפער הלסת (איור 1 א').</li>
	<li>לעטוף את שני צידי החבל בחוזקה סביב הברגים של הלסת מחובר של מיקרומטר (איור 1B).</li>
	<li>לתקן את הבורג השמאלי על ידי סיבוך עם כיוון השעון. ישרו את החוט בעזרת המלקחיים הימנית ולאחר מכן לתקן את הבורג הימני על ידי סיבוך עם כיוון השעון (איור 1C). ודא כי הכלי הוא תמיד בתוך הפער הלסת, אבל אל תגעו הלסת כדי למנוע נזק.</li>
	<li>סגירת הלסתות שני שימוש של מיקרומטר (איור 1D). ודא כי שתי הלסתות נמצאים מספיק קרוב אבל זה שלא יגעו אחד את השני, כי החוט מבולבל הוא בראש החוט קבוע.</li>
	<li>עם המלקחיים הימנית, מקפלים את החוט מוברגת בפינה של הלסת מחובר כדי לאלץ את מתמר, ובזהירות לעטוף את זה עם כיוון השעון מסביב הבורג צד ימין (איור 1E). לאחר מכן, לתקן את הבורג. חזור על שלב זה בצד שמאל של התיל ולתקן את הבורג מצד ימין (איור 1F).</li>
	<li>להעביר את הלסתות פשוקות מתחלפות בקפידה את מיקרומטר (איור 1 ג'י). הימנע מתיחה הכלי. להשתמש מלקחיים כדי להעביר את החוט שבצד מיקרומטר במישור האופקי של החוט על הצד מתמר. לסובב את מיקרומטר בקפידה כך הפער בין שתי הלסתות יכול להכיל רק את שני החוטים.</li>
	<li>חזור על שלבים 4.2 – 4.11 להר העורקים על גבי התאים האחרים. להתחבר כל התאים הציוד, לכסות את התאים, לצרף את אספקת חמצן 100% ובדיקה טמפרטורה, להפעיל חימום כדי 37 מעלות צלזיוס. פתח את תוכנת יצירת תרשימים, לחץ על לחצן התחל על חלון תצוגת תרשים כדי להתחיל להקליט.</li>
	<li>Equilibrate למשך כ 20 דקות.</li>
</ol>5. נורמליזציה
הערה: כדי לתקנן את התנאים ניסיוני וכדי להשיג אמין תגובתיות פיזיולוגית של כלי, הליך נירמול הוא הכרחי15. לפי היחס בין כוח פעיל לבין היקף פנימי של כלי השיט, מערכת myograph חוט יש תוכנית נורמליזציה סטנדרטי כדי להעריך את היקף פנימי (IC) של כלי הנטען5,8, 9. בקצרה, כדי לחשב IC (מיקרומטר), לקרוא את מיקרומטר, קלט את הערך כמו הערך של X והמתמר פלט כוח, קרי, נח קיר מתח (mN/מ מ), כמו Y הערך. התוכנית להחזיר עיקול מצויד של (X, Y) ולחשב את IC המתאים בלחץ transmural של 100 מ מ כספית (100IC). הספינה מוגדר היקף פנימי מנורמל (IC1) כאשר התגובתיות פעיל הוא מקסימלי.
<ol><li>הגדר כוחות כאפס עבור כל הערוצים במכשיר, equilibrate עוד 1-2 דקות.</li>
	<li>בחר הגדרות נורמליזציה של "תפריט DMT, ולהגדיר הפרמטרים כדלקמן: עינית כיול (מ מ/div): 0.36; המטרה לחץ (kPa): 13.3; IC-1-/IC-100: 0.9; באינטרנט בממוצע זמן (בשניות): 2; לעכב את זמן (בשניות): 60. לחץ על הלחצן אישור כדי לסגור את חלון הגדרות נורמליזציה DMT .</li>
	<li>בחר הערוץ של עניין DMT תפריט כדי לפתוח חלון נורמליזציה DMT עבור הערוץ המתאים. הזן את הערכים קבוע לתוך החלון כדלקמן: רקמת והגישור a1: 0.1; רקמות והגישור a2: 4; קוטר החוט (מיקרומטר): 40. החלון מציג את אורך הכלי מחושב 1.40 מ מ.</li>
	<li>קרא את מיקרומטר לשכת הרקמה המתאימה. הזן את הערך בתיבה קריאה מיקרומטר , ולחץ על לחצן הוסף נקודת . ערך זה הוא הערך ההתחלתי של X (X0). לאחר זמן השהיה s 60, החלון מציג את הכוח והלחץ יעיל (ERTP) המתאים לערך זה מיקרומטר. במקביל, תיבת מיקרומטר הקריאה הופכת לפעילה.</li>
	<li>למתוח את הכלי להיות מנורמל ע מיקרומטר נגד כיוון השעון. הזן את הערך מיקרומטר לתוך התיבה מיקרומטר קריאה , ולחץ על לחצן הוסף נקודת . לחכות זמן השהיה של 60 s שוב.</li>
	<li>חזור על שלב 5.5, להמשיך למתוח את כלי הקיבול, והוספת ערכי מיקרומטר עד החלון מציג את הערך של "מיקרומטר X1", אשר הוא ההגדרה מיקרומטר מחושב נדרש למתוח את כלי הקיבול שלו IC1.</li>
	<li>הגדר את מיקרומטר ל X ערך1 . הערה: המתח מנורמל בדרך כלל 1-2 mN.</li>
</ol>6. העורק התכווצות הקלטה
הערה: כל הפתרונות, כולל H-T ו- High-K+ פתרון להשתמש בסעיף זה, הוכנו בשלב 2.1.
<ol><li>לאחר נורמליזציה, equilibrate את כלי הקיבול בבית הבליעה למשך 15-20 דקות. הערה: אלה הוא אין צורך לשנות את הפתרון בשלב זה.</li>
	<li>לאתגר את הכלי עם פתרון גבוהה-K+ פעמיים.<ol>
<li>לאתגר את כלי הקיבול, החלף פתרון H-T 5 מ של High-K+ פתרון כדי לגרום להתכווצות למשך 10 דקות, ואחריו כביסה עם 5 מ של H-T פתרון 3 - 4 פעמים. הערה: התכווצות טיפוסי יש כוח מקסימלי 3 mN וכוח מתמשכת מתמיד סביב 2.5 mN12. אם האתגר הראשון יוצר כוח מקסימלי מתחת 2.5 mN או הכוח מתמשכת יורדת עם הזמן, או האתגר השני יוצר כוח נמוך הרבה יותר המינון בפעם הראשונה, כלי הקיבול נמחקת, לא ישמש לחקירה נוספת.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לאתגר את הכלי עם 5 מ של High-K+ פתרון כדי לגרום להתכווצות. לאחר 5 דקות, להוסיף 0.5 µL של מניות פתרון (10 מ מ דימתיל סולפוקסיד) neoliensinine14 אל החדר להירגע הלכנו לאכול ריכוז 1 מיקרומטר neoliensinine הסופי.</li>
	<li>כאשר הכוח הוא יציב (זה בדרך כלל לוקח מספר דקות), להוסיף עוד 0.5 µL של פתרון מניות neoliensinine לתוך החדר כדי להגדיל את ריכוז 2 מיקרומטר. להוסיף 1 µL של הפתרון מניות בכל פעם כדי להעלות את ריכוז 4, 6, 8 ו- 10 מיקרומטר לייצר t הוא מנה-תגובה עקומה. הערה: המניות ואת העבודה ריכוזים משתנים בין תרופות.</li>
</ol>

<ol><li>Bevan, J. A., Osher, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+direct+method+for+recording+tension+changes+in+the+wall+of+small+blood+vessels+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Agents+and+Actions%22%5BJournal%5D)">A direct method for recording tension changes in the wall of small blood vessels in vitro.</a> Agents and Actions. 2 (5), 257-260 (1972).</li>
<li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+properties+of+vascular+smooth+muscle+cells+in+situ%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ.</a> Nature. 260 (5552), 617-619 (1976).</li>
<li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contractile+Properties+of+Small+Arterial+Resistance+Vessels+in+Spontaneously+Hypertensive+and+Normotensive+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Contractile Properties of Small Arterial Resistance Vessels in Spontaneously Hypertensive and Normotensive Rats.</a> Circulation Research. 41 (1), 19-26 (1977).</li>
<li>Mulvany, M. J., Nyborg, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+increased+calcium+sensitivity+of+mesenteric+resistance+vessels+in+young+and+adult+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">An increased calcium sensitivity of mesenteric resistance vessels in young and adult spontaneously hypertensive rats.</a> British Journal of Pharmacology. 71 (2), 585-596 (1980).</li>
<li>Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMulvany%2C+MJ+%22Procedures+for+investigation+of+small+vessels+using+small+vessel+myograph%22">Procedures for investigation of small vessels using small vessel myograph</a>. , Danish Myo Technology. Denmark. (2004).</li>
<li>Halpern, W., Mulvany, M. J., Warshaw, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+properties+of+smooth+muscle+cells+in+the+walls+of+arterial+resistance+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Mechanical properties of smooth muscle cells in the walls of arterial resistance vessels.</a> The Journal of Physiology. 275, 88-101 (1978).</li>
<li>Michael, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+blood+pressure+arising+from+a+defect+in+vascular+function%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">High blood pressure arising from a defect in vascular function.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (18), 6702-6707 (2008).</li>
<li>Bridges, L. E., Williams, C. L., Pointer, M. A., Awumey, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenteric+artery+contraction+and+relaxation+studies+using+automated+wire+myography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Mesenteric artery contraction and relaxation studies using automated wire myography.</a> Journal of Visualized Experiments. (55), (2011).</li>
<li>del Campo, L., Ferrer, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3adel+Campo%2C+L+%22Wire+Myography+to+Study+Vascular+Tone+and+Vascular+Structure+of+Isolated+Mouse+Arteries%22">Wire Myography to Study Vascular Tone and Vascular Structure of Isolated Mouse Arteries</a>. , Springer. New York. (2015).</li>
<li>Fisher, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+smooth+muscle+phenotypic+diversity+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Genomics%22%5BJournal%5D)">Vascular smooth muscle phenotypic diversity and function.</a> Physiological Genomics. 42 (3), 169-187 (2010).</li>
<li>Crowley, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+roles+for+the+kidney+and+systemic+tissues+in+blood+pressure+regulation+by+the+renin-angiotensin+system%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Distinct roles for the kidney and systemic tissues in blood pressure regulation by the renin-angiotensin system.</a> The Journal of Clinical Investigation. 115 (4), 1092-1099 (2005).</li>
<li>Qiao, Y. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myosin+phosphatase+target+subunit+1+%28MYPT1%29+regulates+the+contraction+and+relaxation+of+vascular+smooth+muscle+and+maintains+blood+pressure%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Myosin phosphatase target subunit 1 (MYPT1) regulates the contraction and relaxation of vascular smooth muscle and maintains blood pressure.</a> The Journal of Biological Chemistry. 289 (32), 22512-22523 (2014).</li>
<li>He, W. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+myosin+light+chain+kinase+in+regulation+of+basal+blood+pressure+and+maintenance+of+salt-induced+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Role of myosin light chain kinase in regulation of basal blood pressure and maintenance of salt-induced hypertension.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 301 (2), H584-H591 (2011).</li>
<li>Yang, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+identification+of+a+tribenzylisoquinoline+alkaloid+from+Nelumbo+nucifera+Gaertn%2C+a+novel+potential+smooth+muscle+relaxant%5BTitle%5D)+AND+%22Fitoterapia%22%5BJournal%5D)">Isolation and identification of a tribenzylisoquinoline alkaloid from Nelumbo nucifera Gaertn, a novel potential smooth muscle relaxant.</a> Fitoterapia. 124, 58-65 (2018).</li>
<li>Slezák, P., Waczulíková, I., Bališ, P., Púzserová, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+Normalization+Factor+for+Wire+Myography+of+Rat+Femoral+Artery%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Research%22%5BJournal%5D)">Accurate Normalization Factor for Wire Myography of Rat Femoral Artery.</a> Physiological Research. 59 (6), 1033-1036 (2010).</li>
<li>Kearney, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+burden+of+hypertension%3A+analysis+of+worldwide+data%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Global burden of hypertension: analysis of worldwide data.</a> The Lancet. 365 (9455), 217-223 (2005).</li>
<li>Good, N. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogen+Ion+Buffers+for+Biological+Research%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Hydrogen Ion Buffers for Biological Research.</a> Biochemistry. 5 (2), 467-477 (1966).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

יתר לחץ דם הוא אתגר בריאות הציבור נפוצה בשל סיבוכים חמורים, כולל הלב וכלי הדם שלה מחלות כליה16. להבנת בפתוגנזה של יתר לחץ דם, לחקור יותר תרופות נגד יתר לחץ דם הפך להיות משימה דחופה בתחום זה. לחץ דם הוא נוצר ומתוחזק על ידי התנגדות היקפית של מחזור הדם. על פי החוק של Poiseuille, העורקים קטן יחסית לייצר חלק גדול של התנגדות הדם ולשמש המפיק הדומיננטי של לחץ דם3,10. לפיכך, מדידה של עורקים קטנים-התנגדות ולא עורקים גדולים מתאימה יותר מחקרים של לחץ ...

המערכת myograph כלי קטן המשמש כאן הייתה למדידת איזומטרי התכווצות של כלי התנגדות קטן עם קטרים פנימי 100 ועד 400 מיקרומטר. מבודד כלי שיט קטנים (כ-2 מ מ אורך) הוכנסו על ידי שני חוטים קוטר 40-מיקרומטר, היו אז רכוב על הלסתות מיקרומטר-צד וצד מתמר ברצף. טכניקה זו myograph היה הציע לראשונה בשנת 19721 ולאחר מכן פיתחו בעיקר על ידי Mulvany ו שלו עמיתים2,3,4,5,6. עכשיו זה טכניקה בוגרת עם ציוד יציב, ביצועים קל ו8,97,הליך סטנדרטי נורמליזציה. אנחנו מנוצל בשיטה זו עם כמה שיפורים עבור מידות עורק מצע המעי העליון העכבר.
השריר החלק בכלי הדם קווים הקירות של כמעט כל כלי הדם. הפונקציה הבסיסית שלהם היא לייצר כוחות באמצעות התכווצות בתגובה לגירויים שונים. Contractility נורמלי של השריר החלק בכלי הדם חיונית ויסות לחץ דם, תזונה תוספת של10. חריג ויסות לחץ דם תוצאות במגוון רחב של מחלות, כולל יתר לחץ דם, אי ספיקת לב, ischaemia. מספר מחקרים הראו כי לחץ דם חריג קשורה תמיד השריר החלק בכלי הדם מתפקדת contractility7,11,12,13. שיטת myograph מאפשרת חקירת contractility איזומטרי של העכבר כלי המושרה על ידי גירויים שונים כולל vasoconstrictors, מעכבי וסמים. מדידות מוצלחת של התכווצות יסייע לנו להבין את המנגנונים של לחץ דם ותחזוקה בפתוגנזה של מחלות הקשורות השריר החלק בכלי הדם, וכן לבחון גישות טיפוליות הרומן.
צמחי מרפא סיניים רבים היה בשימוש נרחב לטיפול קלינית של מחלות לב וכלי דם; עם זאת, למרכיביהם יעיל בדרך כלל נשאר לא ידוע. לפיכך, בידוד וזיהוי של הרכיבים יעיל הוא מאוד חשוב עבור פיתוח תרופות חדישות. האזנה מרובה myograph הטכנולוגיה מציעה גישה פשוטה לסינון הרכיבים הפעילים של עשבי תיבול. יש דיווח על מספר מחקרים באמצעות מערכת myograph כלי קטן לחקור התכווצות עורק מצע המעי העליון העכבר ואנו לזהות תרכובות טבעיות עם פעילות אנטי-יתר לחץ דם12,13,14. כאן, אנו מתארים את פרוטוקול עבור פעולת השירות myograph והערכת השפעת מרפה neoliensinine מבודדת מעוברים של זרע הלוטוס (GaertnNelumbo nucifera ). 14.

<table><tbody><tr><td>מערכת מיוגרף רב חוטית</td><td>DMT</td><td>610-M</td><td></td></tr><tr><td>חוט נירוסטה</td><td>DMT</td><td>400447</td><td></td></tr><tr><td>מספריים לדיסקציה של Geuder</td><td>DMT</td><td>400431</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים של Dumont</td><td>DMT</td><td>300413</td><td></td></tr><tr><td>PowerLab / 8SP</td><td>ADIמבצר</td><td>ML785</td><td></td></tr><tr><td>תוכנה</td><td>מעבדה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>SigmaAldrich</td><td>S5886</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>SigmaAldrich</td><td>P5405</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>SigmaAldrich</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2&middot; 6H2O</td><td>SigmaAldrich</td><td>M2393</td><td></td></tr><tr><td>D-גלוקוז</td><td>SigmaAldrich</td><td>G6152</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sangon Biotech</td><td>A100511-0250</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>SigmaAldrich</td><td>S8045</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>SigmaAldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr></tbody></table>

contractility איזומטרי מדידה של עורק מצע המעי העליון העכבר באמצעות חוט myography

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

הטכניקה myograph החוט משמש כדי להעריך את contractility של כלי הדם השרירים החלקים בתגובה depolarization, GPCR אגוניסטים/מעכבי, סמים. זה נמצא בשימוש נרחב מחקרים רבים בנושא פונקציות פיזיולוגיים של השריר החלק בכלי הדם, בפתוגנזה של כלי דם מחלות כגון יתר לחץ דם, ופיתוח של תרופות להרפיית שריר חלק. העכבר הוא חיה מודל נפוץ עם בריכה גדולה של מודלים של המחלה, זנים מהונדסים. הצגנו בשיטה זו כדי למדוד את התכווצות איזומטרי של העכבר עורק מצע המעי העליון בפירוט. קטע מ מ 1.4 של עורק מצע המעי העליון ההתנגדות העכבר היה מבודד, רכוב על תא myograph על-ידי העברת שני חוטי פלדה דרך לומן שלה. לאחר צעדים equilibration, נורמליזציה, קטע הקיבול היה potentiated על ידי פתרון גבוהה-K+ פעמיים לפני וזמינותו התכווצות. כדוגמה של היישום של שיטה זו של פיתוח תרופות, מדדנו את השפעת להרפיית הרומן חומר טבעי, neoliensinine, מבודד עשבים סיניים, העוברים של הזרע לוטוס (Nelumbo nucifera Gaertn..) על העכבר מצע המעי העליון העורקים. הקטעים כלי רכוב על תא myograph היו מגורה עם פתרון גבוהה-K+ . כאשר המתח כוח הגיעה תקופה ממושכת יציב, מינונים מצטברים של neoliensinine נוספו אל התא. מצאנו את שזה neoliensinine הייתה השפעה להרפיית למינון על התכווצות השריר החלק, ובכך רומז כי היא נושאת פעילות פוטנציאליות נגד יתר לחץ דם. בנוסף, כפי קטע הקיבול יכול לשרוד לפחות 4 שעות לאחר הרכבה ולתחזק contractility שנגזרות הפתרון גבוהה-K+ כי פעמים רבות, אנו ממליצים כי מערכת myograph תיל עשוי לשמש עבור התהליך זמן רב של והתרופות הקרנה.

אנו למדוד את contractility איזומטרי של עורק מצע המעי העליון העכבר באמצעות מערכת האזנה מרובה myograph, העריך את השפעת להרפיית neoliensinine מכל העוברים זרע הלוטוס (GaertnNelumbo nucifera ). 14. עורק מצע המעי העליון ההתנגדות העכבר היה מבודד, ניקה של רקמות החיבור ולחתוך לחלקים 1.4-mm. קטע עורק הוכנס על ידי שני חוטי פלדה ב Ca2 +-H-T הפתרון בצלחת פטרי החופשי ולאחר מכן הקטע היה רכוב על שתי מלתעות תא myograph (איור 2 א). ל...

הטכניקה myograph החוט משמש כדי לחקור פונקציות השריר החלק בכלי הדם, תרופות חדשות מסך. אנחנו מדווחים על פרוטוקול מפורט עבור מודדים את contractility איזומטרי של עורק מצע המעי העליון העכבר, הקרנת מרפה החדש של השריר החלק בכלי הדם.

Contractility איזומטרי מדידה של עורק מצע המעי העליון העכבר באמצעות חוט Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

המעבדה שלנו משתמשת בשיטת מיוגרף תיל למדידת התכווצות שרירים חלקים בכלי הדם במשך שנים רבות. אנו משתמשים בטכניקה זו כדי לחקור את מנגנון התכווצות השרירים החלקים. אנו משתמשים בשיטה זו כדי לחקור תרופות חדשות לטיפול ביתר לחץ דם.היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שקטע הכלי שורד לפחות ארבע שעות לאחר ההרכבה ושומר על ההתכווצות הנגרמת על ידי אשלגן גבוה פעמים רבות. המערכת הרב-ערוצית נותנת הזדמנות להקרנה טיפולית גבוהה של תרופות חדשות. הצמד את גופו של העכבר שהומת כשבטנו פונה כלפי מעלה והרטיב את הבטן באתנול 70%.לאחר מכן, לאחר שימוש במספריים כדי לחתוך את העור לאורך קו האמצע הגחוני מהמפשעה, בצע חתכים במורד כל רגל מתחילת החתך הראשון. משוך את העור לאחור משני הצדדים, ואז בצע חתכים דומים לפתיחת הצפק. לאחר מכן, השתמש במספריים כדי לחתוך את הוושט, המעי הגס ורקמות חיבור אחרות כדי לבודד לחלוטין את מערכת העיכול עם הזנת כלי דם מהגוף.לאחר שטיפת הדם ממערכת העיכול עם HEPES-Tyrode, או תמיסת H-T, העבירו את המקטע המבודד לצלחת פטרי מצופה לדיסקציה של העורק המזנטרי בטמפרטורת החדר. החליקו את הקיבה, הג'ג'ונום, האילאום והצקום בכיוון השעון והצמידו את הקיבה והצקום בצד שמאל וימין בהתאמה. הפעל את מקור אור השידור של מיקרוסקופ סטריאוסקופי וקבע את המעי בעזרת סיכות כדי לחשוף את העורקים המזנטריים המנותחים.לאחר מכן מהדקים את רקמות השומן סביב העורקים בעזרת מלקחיים ומבודדים בזהירות את העורקים על ידי ניתוק כל רקמות החיבור בעזרת מספריים לדיסקציה. אחוז בעורק עודף בעזרת מלקחיים והעביר וטבול את עץ העורק המזנטרי בתמיסת H-T קרה ללא יוני סידן. חתכו חלק של 1.4 מילימטר מהעורק הפרוקסימלי לדופן המעי של ארקייד מזנטרי והשתמשו בשני מלקחיים כדי לפתוח את שני צידי קטע העורק הזה בזהירות.הכינו שני קטעי חוט נירוסטה באורך 2.5 סנטימטרים והניחו אותם באותה צלחת. השתמש במלקחיים כדי להדק בעדינות קצה אחד של העורק. לאחר מכן השתמש במלקחיים נוספים כדי להכניס בזהירות שני חוטים ללומן העורק בזה אחר זה.ודא שהחוטים נשמרים ישרים ואינם נוגעים באנדותל. בעזרת שני מלקחיים, מהדקים את שני החוטים מחוץ לכלי הברגה בו זמנית ומעבירים בזהירות את הכלי מצלחת הפטרי לתא מיוגרף מלא בתמיסת H-T. הברג את לסתות החדר זו מזו כדי לפנות מקום להרכבה, ולאחר מכן אחוז בשני הצדדים של אחד משני החוטים המוכנסים באמצעות שני מלקחיים והנח את הכלי במרווח הלסת.עטפו את שני צידי החוט המהודק סביב ברגי הלסת המחוברים למיקרומטר. תקן את הבורג בצד שמאל על ידי סיבוב בכיוון השעון. לאחר מכן השתמש במלקחיים כדי ליישר את החוט.לאחר מכן, תקן את הבורג הימני על ידי סיבוב בכיוון השעון. ודא שהכלי נמצא תמיד בתוך מרווח הלסת אך אל תיגע בלסת כדי למנוע נזק. סגור את שתי הלסתות באמצעות המיקרומטר.ודא ששתי הלסתות קרובות מספיק אך שהן לא נוגעות זו בזו, ושהחוט הלא קבוע נמצא על גבי החוט הקבוע. בעזרת המלקחיים הימניים, קפלו בזהירות את החוט הלא מוברג בפינת הלסת המחוברת למתמר כוח ועטפו אותו בכיוון השעון סביב הבורג הימני. לאחר מכן, תקן את הבורג.חזור על הפתיחה והעטיפה של הצד השמאלי של החוט ותקן את הבורג בצד שמאל. לאחר מכן, הרחיקו מעט את הלסתות מבלי למתוח את הכלי על ידי סיבוב זהיר של המיקרומטר כך שהרווח בין שתי הלסתות יוכל להכיל את שני החוטים. לאחר מכן השתמש במלקחיים כדי להזיז את החוט בצד המיקרומטר למישור האופקי של החוט בצד המתמר.לאחר הרכבת עורקים בתאים האחרים, חבר את כל התאים לציוד וכסה את התאים. חבר את אספקת החמצן של 100% ובדיקת טמפרטורה והתחל לחמם ל-37 מעלות צלזיוס. פתח את תוכנת הגרפים.לחץ על כפתור התחל כדי להתחיל בהקלטה. בחר את ערוץ העניין מתפריט DMT כדי לפתוח את חלון הנורמליזציה של DMT עבור הערוץ המתאים. הזן את הערכים הקבועים הבאים לחלון:נקודות קצה רקמות a1, 0.1; נקודות קצה של רקמות a2, 4; קוטר חוט, 40.לאחר מכן החלון מציג את אורך הכלי המחושב כ-1.40 מילימטרים. קרא את המיקרומטר של תא הרקמות המתאים. הזן את הערך בתיבת הקריאה של המיקרומטר ולחץ על כפתור הוסף נקודה.ערך זה הוא הערך ההתחלתי של X.לאחר עיכוב של 60 שניות, החלון מציג את הכוח ואת הלחץ האפקטיבי המתאים לערך מיקרומטר זה. במקביל, תיבת הקריאה של המיקרומטר הופכת לפעילה. מתחו את הכלי המנורמל על ידי סיבוב המיקרומטר נגד כיוון השעון.הזן את ערך המיקרומטר בתיבת הקריאה של המיקרומטר ולחץ על כפתור הוסף נקודה. המתן שוב לזמן עיכוב של 60 שניות. המשך למתוח את הכלי ולהוסיף ערכי מיקרומטר עד שהחלון יציג את הערך של מיקרומטר X-one, שהיא הגדרת המיקרומטר המחושבת הנדרשת כדי למתוח את הכלי ל-IC-one שלו.הגדר את המיקרומטר לערך X-one. לאחר הנורמליזציה, יש לאזן את הכלי בתא למשך 15 עד 20 דקות. לאחר שיווי המשקל, אתגר את הכלי בתמיסת אשלגן גבוהה על ידי החלפת תמיסת H-T ב-5 מיליליטר של תמיסת אשלגן גבוהה כדי לגרום להתכווצות למשך 10 דקות.לאחר חזרה על הדגירה של 10 דקות בתמיסה טרייה עשירה באשלגן, יש לשטוף עם חמישה מיליליטר תמיסת H-T שלוש עד ארבע פעמים. שוב, אתגר את הכלי עם חמישה מיליליטר של תמיסת אשלגן גבוהה כדי לגרום להתכווצות. לאחר חמש דקות, הוסף 0.5 מיקרוליטר של תמיסת מלאי Neoliensinine לתוך החדר כדי להרפות את הכלי בריכוז סופי של מיקרו-מולרי אחד Neoliensinine.כאשר הכוח יציב לאחר מספר דקות, הוסף עוד 0.5 מיקרוליטר של תמיסת מלאי Neoliensinine כדי להגדיל את הריכוז לשתי מיקרומולר. הוסף מיקרוליטר אחד מתמיסת המלאי בכל פעם כדי להגדיל את הריכוז לארבעה, שישה, שמונה ו-10 מיקרומולר כדי ליצור את עקומת תגובת המינון. במהלך הליך הנורמליזציה, כלי השיט נמתח מספר פעמים עד שהגיע לערך של IC-100 וכל מחזור מתוח כלל התכווצות חזקה, הרפיה מהירה ותחזוקת כוח תוך 60 שניות.התכווצות השריר החלק בכלי הדם הנגרמת על ידי תמיסת אשלגן גבוהה הראתה בדרך כלל שני שלבים, שלב חזק ושלב מתמשך. תיארנו שיטה למדידת התכווצות איזומטרית של עורק מזנטרי של עכבר באמצעות מערכת מיוגרף רב-חוטית. ניתן להשתמש בשיטה זו כדי להעריך את תפקודי השריר החלק בכלי הדם ולסנן מרפי שריר חלק.ההבדל העיקרי בין שיטה זו לאחרות הוא בשלבי ההרכבה. שלב זה המשמש כאן קל לביצוע ואינו פוגע ברקמה או במכשיר. בעקבות הליך זה, ניתן להשתמש גם בממריצים אחרים כגון EP ואנגיוטנסין II כדי לעורר התכווצות שרירים חלקים על מנת למצוא כמה תרופות חדשות הרגישות לאגוניסט זה.

isometric-contractility-measurement-mouse-mesenteric-artery-using

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

שיטה myography אוטומטית עבור מדידות כוח בעורקים mesenteric מבודד מתואר. היא מעסיקה Mulvany-Wire הלפרן כפול אוטומטי Myograph 510A לקבוע התגובות phenylephrine וסידן תאיים. השיטה מאפשרת קביעת עקבית של תגובות איזומטרי כדי אגוניסטים בכלי קטן של קטרים ​​של 6-30 מיקרומטר, באופן עצמאי.

התכווצות העורקים mesenteric ללימודי הרפיה באמצעות Myography בנקאית אוטומטית

בmyography לחץ, קטע קטן בשלמות של כלי הוא רכוב על גבי שני cannulas קטן ודחוס כדי luminal לחץ מתאים. כאן, אנו מתארים את השיטה כדי למדוד את התגובה של vasorelaxation העכבר...

הערכת תפקוד עורקי התנגדות Murine באמצעות לחץ Myography

myography לחץ משמש כדי להעריך vasoactivity של עורקים קטנים המתפתחים התכווצות מתמשכת כאשר לחץ. כתב יד זה מספק פרוטוקול מפורט להעריך במגזרים בודדים של עורקי mesenteric קטנים מחולדות, vasoactivity ואת ההשפעה של לחץ intraluminal על קוטר כלי דם.

הערכת myogenic תגובה וVasoactivity בעורקי ההתנגדות mesenteric שימוש Myography לחץ

שריר פפילרי חדרית עזב Murine יכול לשמש כדי לחקור התכווצות לב במבחנה. מאמר זה מתאר בפירוט את הבידוד ופרוטוקולי ניסוי ללמוד מאפייני התכווצות לב.

מדידות התכווצות שרירים בpapillary מבודדים לחקירת הלב Inotropy בעכברים

הפרוטוקול מתאר את השימוש במיגרפיה תיל כדי להעריך את המתח האיזוגרפי של העורקים המסריים מבודדים מעכברים, עם שיקול מיוחד של האפנון על ידי גורמים שפורסמו מתאי האנדותל ורקמות השומן הפריסקולרית.

הערכה של תגובתיות וסקולרית באמצעות העורקים המבודדים הבודדים באמצעות התמקדות באפנון על ידי פריסקולרית של הרקמות

הפרוטוקול הנוכחי מתאר את המושגים והיישום הטכני של טכניקת המיוגרפיה הטנסומטרית באמצעות מערכת מיוגרף רב-תאית בהערכת ex vivo ניסיונית של תפקוד אנדותל אבי העורקים של עכבר.

מדידה של כלי דם תלויי אנדותל באבי העורקים החזי של העכבר באמצעות מיוגרפיה של תא נפח קטן טנסומטרי

אנו מדגימים את הוידאו שיטה לייצור באמצע חסימה בעורק המוח בעכברים בוגרים באמצעות monofilament intraluminal. כמו כן, אנו מראים כיצד להעריך את מידת אוטם מוחי על ידי מכתים 2,3,5-triphenyltetrazolium כלוריד (TTC).

עכבר דגם ספיגה התיכון עורק מוחי

התיכון קשירת מוחין (MCA) עורק היא טכניקה כדי ללמוד איסכמיה מוחית מוקד במודלים של בעלי חיים. בשיטה זו, עורק המוח האמצעי הוא נחשף על ידי craniotomy ו ligated על ידי צריבה. שיטה זו נותנת כרכים האוטם לשעתקו מאוד והגדילה שלאחר הניתוח שיעורי ההישרדות בהשוואה לשיטות אחרות שקיימות.

היישום של קשירת העורקים התיכון הקבע מוחין העכבר

שכבת פני שטח glycocalyx / אנדותל האנדותל היא למד באופן אידיאלי באמצעות מיקרוסקופ intravital. מיקרוסקופיה Intravital טכני מאתגרת באיבר מרגש כגון ריאות. אנחנו מדגימים איך brightfield סימולטני ומיקרוסקופיה ניאון ניתן להשתמש כדי להעריך את עובי שכבת פני שטח האנדותל שבנע...

במדידת vivo של שכבת פני שטח האנדותל ריאתי המאוסה

המעי הדק הוא לעתים קרובות נחשף לרעלים שיכולים להשפיע על זרימת דם ולהשפיע לרעה על מזין קליטה. שימוש בעורק multimyograph וmesenteric ווריד מבודד, תרכובות או רעלים של עניין יכול להיות מוקרן לvasoactivity.

בידוד ושימוש בסעיפים של עורקי שור mesenteric ווריד כמבדק לבדיקת Vasoactivity במעי הדק

למדו מדידת כיווץ איזומטרי של עורק מצע המעי העכבר באמצעות מכשיר Myography. שיטה זו מאפשרת לבחון תרופות חדשות לטיפול בהיפרטנזיה ולחקור מנגנוני כיווץ שריר חלק כלי דם.

Contractility איזומטרי מדידה של עורק מצע המעי העליון העכבר באמצעות חוט Myography

גלה סרטונים נוספים