הערכת זמינות המינרלים בהזנות דגים בשיטות משלימות המודגמת עם הדוגמה של אבץ בסלמון אטלנטי

חקרנו את הזמינות של מסיסות של מיקרו-מתכות כמו סלניום אבץ עם צורות כימיות שונות או מקורות, כפי שאנו מכנים את זה, בהקשר של שינוי הרכב ההזנה. בסוויטת רדיונוקלידים, שקול כ-0.2 גרם של דגימות מזון סלמון אטלנטי טחון, ומערבב אותו עם רדיוטרייזר אבץ של פעילות ספציפית ידועה בצינור דגימה של חמישה מיליליטר. הכן שישה aliquots אחרים של המאגר ולהוסיף אחת מחומצות האמינו המוצגות כאן לכל אחד להגיע לריכוז טוחנת סופית של חמישה מילימולר.

הוסף חוצץ זוהר מעיים מים מתוקים כדי להאכיל את המדגם. לאחר מכן, מוסיפים את חיץ הזוהר של המעיים במים מתוקים ל- aliquots המאגר המכיל את חומצות האמינו. סוגרים את הצינורות ומסובבים אותם על ספינר סיבובי במהירות של 25 סל"ד למשך 30 דקות.

לאחר מכן, צנטריפוגה ב 1, 157 x g במשך 10 דקות, כדי להפריד את השברים המסיסים ולא מסיסים. השתמש בקופת גמא כדי למדוד את הספירה לדקה של רדיוטריידר האבץ בשברים המסיסים והלא מסיסים. לשטוף את פורל הקשת נגזר קו תאי מעיים פעמיים עם מיליליטר אחד של פתרון EDTA, ולשאוב את הפתרון לאחר כל לשטוף באמצעות pipette.

לטפל בתאים שטופים עם פתרון 0.25%טריפסין. סובבו בעדינות את הבקבוק בזוויות חדות במשך שתי דקות. לאחר מכן להוסיף 10 מיליליטר של L-15 בינוני המכיל 5%FBS כדי לנטרל את טריפסין.

באמצעות פיפטה סטרילית, decant השעיית התא המתקבל לתוך צינור צנטריפוגה תחתון חרוטי. צנטריפוגה ב-130 על ג'י למשך שלוש דקות. לאחר מכן באמצעות hemocytometer, לקבוע את הצפיפות של התאים שנקטפו על ידי ספירה ידנית.

זרעו את התאים על 24 לוחות באר בצפיפות תאים של 50, 000 תאים למיליליטר, לבאר, ודגרו את הלוחות ב 19 מעלות צלזיוס תחת אווירה נורמלית במשך 48 שעות לפני הניסויים. לאחר האכלת הדגים במשך 11 ימים והמתת חסד, לאסוף מדגם מאוחסן של צואת הדג על ידי הפשטה מן הסנפיר הגחון לפי הטבעת ומניחים אותו על צלחת. השתמש מרית כדי להעביר את הצואה מהצלחת לתוך צינור חרוט 50 מיליליטר.

מיד לאחסן את הדגימות ב 20 מעלות צלזיוס. במחקר זה, הזמינות המינרלית של הזנת דגים מוערכת באמצעות מספר שיטות חינם. ניתוח מייצג של הזנת סלמון אטלנטית באמצעות שיטת הספקטרומטריה של מסת הפלזמה, המספק נתונים על המינים הכימיים של אבץ שנמצאו בשבר המסיס.

חמישה אבץ המכיל פסגות ניתן לראות בשבר זה, כל אחד עם משקל מולקולרי שונה. למינים הכימיים של אבץ שנמצאו בשבר המסיס יכולים להיות מקורות שונים, מכיוון שההזנה המשמשת מכילה מרכיבים ימיים ומבוססים על צמחים, והיא מתווספת. טווח המשקל המולקולרי של מינים אלה מצביע על כך שתרכובות אלה עשויות להיות מטאלופרוטאין.

בעוד המסיסות של אבץ 65 מוסף מגביר את נוכחותם של כל חומצות האמינו שנבדקו, מסיסות גבוהה יותר נמצא עם היסטידין וליצין. ספיגת אבץ אפית בתאי Arteca GC מושפעת באופן משמעותי על ידי נוכחות של L-Met או DL-Met בריכוזים שני מילימולרים. יתר על כן, ההשפעה של מת'יונין על ספיגת אבץ מושפעת לרעה על ידי נוכחות של BCH.

היתרון העיקרי של פרוטוקול זה הוא שניסינו לשלב גישות שונות במחקרים חזותיים, אנליטיים ונבונים, כדי להשוות ולהחמיא זה לזה בכל הנוגע ללימוד זמינות מינרלים.