Name: מיקרו-הפיצול האנושי של רקמת אדיפוז לפנוטיפים של תאים ואפיון (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-10-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 14 s
Description: למד שיטת מיקרו-הפיצול ללא אנזימים של רקמת שומן אנושית באמצעות מערכת סגורה. שיטה זו שומרת על המיקרו-וסקולטורה ומאפשרת שימוש בטיפולי תאים ורפואה רגנרטיבית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים רוצים להודות קלייר Cryer ו פיונה רוסי באוניברסיטת אדינבורו על הסיוע המומחים שלהם עם הזרימה cy, לנסות. אנו גם רוצים להודות לאנשי בית החולים Murrayfield שתרמו על ידי מתן דגימות רקמה.
עבודה זו נתמכת על ידי מענקים של קרן הלב הבריטית וליפואבני חן, אשר סיפק ערכות עיבוד רקמה ברקמת אדיפוז. דגימות רקמה של מבוגרים אנושיים הושגו עם הרשאת אתיקה מלאה של ועדת האתיקה של דרום מזרח סקוטלנד מחקר (התייחסות: 16/SS/0103).

<ol><li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multilineage+cells+from+human+adipose+tissue%3A+implications+for+cell-based+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Journal%22%5BJournal%5D)">Multilineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies.</a> Tissue Engineering Journal. 7 (2), 211-228 (2001).</li>
<li>Schäffler, A., et al. Concise review: Adipose tissue-derived stromal cells-basic and clinical implications for novel cell-based therapies. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSch%C3%A4ffler%2C+A+%22Stem+Cells%22">Stem Cells</a>. 25 (4), 818-827 (2007).</li>
<li>Bianchi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+non+enzymatic+method+and+device+to+obtain+a+fat+tissue+derivative+highly+enriched+in+pericyte-like+elements+by+mild+mechanical+forces+from+human+lipoaspirates%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplantation%22%5BJournal%5D)">A new non enzymatic method and device to obtain a fat tissue derivative highly enriched in pericyte-like elements by mild mechanical forces from human lipoaspirates.</a> Cell Transplantation. 2, 2063-2077 (2013).</li>
<li>Raffaini, M., Tremolada, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micro+fractured+and+purified+adipose+tissue+graft+%28Lipogems%29+can+improve+the+orthognathic+surgery+outcomes+both+aesthetically+and+in+postoperative+healing%5BTitle%5D)+AND+%22CellR4%22%5BJournal%5D)">Micro fractured and purified adipose tissue graft (Lipogems) can improve the orthognathic surgery outcomes both aesthetically and in postoperative healing.</a> CellR4. 2 (4), (2014).</li>
<li>Cestaro, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intersphincteric+anal+lipofilling+with+micro-fragmented+fat+tissue+for+the+treatment+of+faecal+incontinence%3A+preliminary+results+of+three+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Wideochir+Inne+Tech+Maloinwazyjne%22%5BJournal%5D)">Intersphincteric anal lipofilling with micro-fragmented fat tissue for the treatment of faecal incontinence: preliminary results of three patients.</a> Wideochir Inne Tech Maloinwazyjne. 10 (2), 337-341 (2015).</li>
<li>Fantasia, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfractured+and+purified+adipose+tissue+%28Lipogems+system%29+injections+for+treatment+of+atrophic+vaginitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Urology+Research%22%5BJournal%5D)">Microfractured and purified adipose tissue (Lipogems system) injections for treatment of atrophic vaginitis.</a> Journal of Urology Research. 3 (7), 1073-1075 (2016).</li>
<li>Saibene, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transnasal+endoscopic+microfractured+fat+injection+in+glottic+insufficiency%5BTitle%5D)+AND+%22B-ENT%22%5BJournal%5D)">Transnasal endoscopic microfractured fat injection in glottic insufficiency.</a> B-ENT. 11 (3), 229-234 (2015).</li>
<li>Giori, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recovery+of+function+in+anal+incontinence+after+micro-fragmented+fat+graft+%28Lipogems%29+injection%3A+two+years+follow+up+of+the+first+5+cases%5BTitle%5D)+AND+%22CellR4%22%5BJournal%5D)">Recovery of function in anal incontinence after micro-fragmented fat graft (Lipogems) injection: two years follow up of the first 5 cases.</a> CellR4. 3 (2), (2015).</li>
<li>Tremolada, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+mesenchymal+stem+cells+and+regenerative+adipose+tissue+graft+%28Lipogems%29+for+musculoskeletal+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Muscoloskeletal+Diseases%22%5BJournal%5D)">Adipose mesenchymal stem cells and regenerative adipose tissue graft (Lipogems) for musculoskeletal regeneration.</a> European Journal of Muscoloskeletal Diseases. 3 (2), 57-67 (2014).</li>
<li>Striano, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-responsive+knee+pain+with+osteoarthritis+and+concurrent+meniscal+disease+treated+with+autologous+micro-fragmented+adipose+tissue+under+continuous+ultrasound+guidance%5BTitle%5D)+AND+%22CellR4%22%5BJournal%5D)">Non-responsive knee pain with osteoarthritis and concurrent meniscal disease treated with autologous micro-fragmented adipose tissue under continuous ultrasound guidance.</a> CellR4. 3 (5), (2015).</li>
<li>Randelli, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipogems+product+treatment+increases+the+proliferation+rate+of+human+tendon+stem+cells+without+affecting+their+stemness+and+differentiation+capability%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+International%22%5BJournal%5D)">Lipogems product treatment increases the proliferation rate of human tendon stem cells without affecting their stemness and differentiation capability.</a> Stem Cells International. 2016, (2016).</li>
<li>Bianchi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipogems%2C+a+new+modality+off+at+tissue+handling+to+enhance+tissue+repair+in+chronic+hind+limb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22CellR4%22%5BJournal%5D)">Lipogems, a new modality off at tissue handling to enhance tissue repair in chronic hind limb ischemia.</a> CellR4. 2 (6), (2014).</li>
<li>Benzi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfractured+lipoaspirate+may+help+oral+bone+and+soft+tissue+regeneration%3A+a+case+report%5BTitle%5D)+AND+%22CellR4%22%5BJournal%5D)">Microfractured lipoaspirate may help oral bone and soft tissue regeneration: a case report.</a> CellR4. 3 (3), (2015).</li>
<li>Crisan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+perivascular+origin+for+mesenchymal+stem+cells+in+multiple+human+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">A perivascular origin for mesenchymal stem cells in multiple human organs.</a> Cell Stem Cell. 3, 301-313 (2008).</li>
<li>Vezzani, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Higher+pericyte+content+and+secretory+activity+of+micro-fragmented+human+adipose+tissue+compared+to+enzymatically+derived+stromal+vascular+fraction%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Higher pericyte content and secretory activity of micro-fragmented human adipose tissue compared to enzymatically derived stromal vascular fraction.</a> Stem Cells Translational Medicine. 7 (12), 876-886 (2018).</li>
<li>Coleman, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+fat+grafting%3A+more+than+a+permanent+filler%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Structural fat grafting: more than a permanent filler.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 118 (3), 108S-120S (2006).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Editorial%3A+An+update+on+organoid+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Editorial: An update on organoid research.</a> Nature Cell Biology. 20 (6), 633(2018).</li>
</ol>

CT הוא מייסד של ליפואבני חן.

נייר זה מתאר את המהומה הפיזית, באמצעות התקן מערכת סגור, של רקמת השומן האנושית לאשכולות קטנים המציגים מיקרואנטומיה רגילה של רקמת השומן.
באופן ידני מרעיף רקמה תת עורית ותמיסת מלח מלוחים לתוך גליל פלסטיק שקוף המכיל כדורים גדולים בסגנון פינבול מתכתי כי, על ניעור נמרץ של המכשיר, קרע את השומן לתוך תת מילימטר שברי. מסננים ועודפים מצורפים מאפשרים סילוק פסולת, דם ושומנים חינם MAT הוא נאסף במזרק המקושר למכשיר. כאן, MAT כבר בהצלחה מעובד נוסף עבור אימונוהיסטוכימיה, זרימה cy, לנסות ותרבות, למרות המכשיר הספ...

ברקמת אדיפוז, שימוש ממושך כמילוי בניתוחים קוסמטיים, הפכה לאחרונה לפופולרית יותר ברפואת ההתחדשות המוכרת כמקור לתאי גזע mesenchymal (MSCs)1. ליפופוטים הנתק אנזימטי לתוך תא יחיד השעיות בהספקויות התשואה של מסטרומה ללא שימוש מרובה וסקולרית (SVF) המשמשת בלתי מחולקת במטופל או, בדרך כלל, היא תרבותית במשך מספר שבועות לתוך MSCs2.
עם זאת, דיסוציאציה האנזים מרוכל את מיקרוסביבות הרקמה, secluding תאים הרגולציה השכנה מתאי משובי שוערת הפכו שונה במידה ניכרת על ידי תרבות מבחנה. כדי למנוע ממצאים ניסיוניים כאלה ושינויים פונקציונליים הסוגר, נעשו ניסיונות לעבד את רקמת האדיפוז לשימוש טיפולית תוך שמירה על התצורה הטבעית שלה בשלמותה ככל האפשר3,4. בעיקר, הפרעה ברקמה המכנית החלה להחליף את הדיסוציאציה האנזימטית. למטרה זו, מערכת סגורה טבילה מלאה מיקרו שברי ליפוף לתוך תת מילימטר, דם ושמן אשכולות רקמות (g., ליפופיטים) באמצעות רצף של סינון מסננת ושיבוש פלדה שיש מושרה3. השתלת אוטוולוגי של רקמת אדיפוז מקוטעת, באמצעות טכנולוגיית מערכת סגורה זו, הצליחה במספר רב של סימנים, מוצרי קוסמטיקה מורחבים, אורטופדיה, פרוטולוגיה ו גינקולוגיה4,5, 6,7,8,9,10,11,12,13.
השוואה בין מיקרו-רקמת השומן האנושי מפוצל (MAT) המתקבל עם התקן מערכת סגורה ואיזוגניים SVF חשף כי ביחס כלי דם/סטרומה הפצת תאים ופעילות הפרשה בתרבות, MAT מכיל יותר קרום הלב, אשר שוערת MSCs14, ו מפריש כמויות גבוהות יותר של גורמי צמיחה ציטוקינים15.
המאמר הנוכחי ממחיש את הפיצול נטול האנזימים של רקמת השומן התת עורית האנושית באמצעות מכשיר מערכת סגור, והעיבוד הנוסף של רקמת השומן המיקרובית הזאת לתרבות החוץ-גופית, ניתוח האימונוהיסטוכימיה ו-FACS, על מנת לזהות את סוגי התאים הקיימים ואת הגורמים המוסיסים (איור 1). השיטה המתוארת יוצרת באופן בטוח שיטת האדיפוז משני מילימטר המכיל אוכלוסיות של תאים בעלי שומן קיימא בנישה שלמה, המתאימה ליישומים ולמחקרים נוספים.

<table><tbody><tr><td>4% פרפורמלדהיד חוצץ (PFA)</td> <td>כימיקלים VWR</td><td>9317.901</td><td></td></tr><tr><td>0.9% NaCl Solution</td><td>Baxter</td><td>3KB7127</td><td></td></tr><tr><td>AlexaFluor 555 עזים נגד עכבר IgG&nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>A21422</td><td></td></tr><tr><td>AlexaFluor 647 עזים נגד ארנב IgG</td><td>Life Technologies</td><td>&nbsp; A21245</td><td></td></tr><tr><td>אמוניום כלוריד</td><td>פישר כימיקלים</td><td>1158868</td><td></td></tr><tr><td>טכנולוגיות חיים</td><td>מדללות אנטיג'נט</td><td>3218</td><td></td></tr><tr><td>אנטי-עכבר Ig, &kappa;/בקרה שלילית (BSA) פיצוי בתוספת</td><td>BD Biosciences</td><td>560497</td><td></td></tr><tr><td>אבידין / ביוטין חסימת ערכת</td><td>חיים טכנולוגיות</td><td>4303</td><td></td></tr><tr><td>BD LSR Fortessa 5 לייזר זרימה ציטומטר נ.ב.פ;</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td>לייזר 405 ננומטר (סגול)/375 ננומטר (UV) &ndash; מסנן V450/50 לנוגדנים DAPI ו-V450; לייזר 561 ננומטר (צהוב-ירוק) &ndash; מסנן YG582/15 לנוגדני PE; לייזר 405 ננומטר (סגול)/375 ננומטר (UV) &ndash; מסנן V710/50 לנוגדנים BV711&nbsp;</td></tr><tr><td>ביוטינילציה Ulex europaeus לקטין</td><td>וקטור מעבדות</td><td>וקטור-B1065</td><td></td></tr><tr><td>BV711 עכבר IgG1, k בקרת איזוטיפ</td><td>BD Biosciences</td><td>563044</td><td></td></tr><tr><td>CD146-BV711</td><td>BD Biosciences</td><td>563186</td><td></td></tr><tr><td>CD31-V450</td><td>BD Biosciences</td><td>561653</td><td></td></tr><tr><td>CD34-PE</td><td>BD Biosciences</td><td>555822</td><td></td></tr><tr><td>CD45-V450</td><td>BD Biosciences</td><td>560367</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Life Technologies</td><td>D1306</td><td>ריכוז מלאי: 5 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>צינורית שאיבת שומן חד פעמית (LGI 13 G x185 מ"מ &ndash; AR 13/18) &nbsp;</td><td>ליפוגמס&nbsp;</td><td></td><td>מסופק בערכה הכירורגית Lipogems</td></tr><tr><td>Diva software 306 (v.6.0)</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM, גלוקוז גבוה, GlutaMAX ללא נתרן פירובט</td><td>Life Technologies</td><td>61965026</td><td></td></tr><tr><td>EGMTM-2 Endothelial Cell Growth Medium-2 BulletKitTM</td><td>Lonza&nbsp;</td><td>CC-3156</td><td></td></tr><tr><td>סרום עגל עוברי (FCS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F2442</td><td></td></tr><tr><td>FlowJo (v.10.0)</td><td>FlowJo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount G</td><td>SouthernBiotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>ג'לטין</td><td>אקרוס אורגני</td><td>410870025</td><td></td></tr><tr><td>Lipogems ערכה כירורגית Lipogems</td><td>&nbsp;</td><td>LG SK 60</td><td></td></tr><tr><td>עכבר אנטי אנושי- NG2</td><td>BD Biosciences</td><td>554275</td><td>ריכוז מלאי: 0.5 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>עכבר PE IgG1, &kappa; בקרת איזוטיפ</td><td>BD Biosciences</td><td>555749</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>פוספט חוצץ מלח (PBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>צינור תחתון עגול פוליסטירן 5 מ"ל עם מכסה הצמד מסננת תאים&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>352235, 25/חבילה</td><td></td></tr><tr><td>פוליסטירן תחתון עגול 5 מ"ל צינורות</td><td>BD Biosciences</td><td>352003</td><td></td></tr><tr><td>ארנב אנטי אנושי - PDGFRb</td><td>Abcam</td><td>32570</td><td>ריכוז מלאי: 0.15 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>סטרפטווידין מצומד-488</td><td>Life Technologies</td><td>&nbsp; S32354</td><td></td></tr><tr><td>סוכרוז</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>84100-5 ק"ג</td><td></td></tr><tr><td>צינורית חדירת רקמות (17 גרם x 185 מ"מ-VG 17/18)&nbsp;</td><td>ליפוגמס&nbsp;</td><td></td><td>מסופק בערכה הכירורגית של Lipogems</td></tr><tr><td>Tris base</td><td>fisher chemicals</td><td>BP152-500</td><td></td></tr><tr><td>Type- II קולגנאז</td><td>Gibco</td><td>17101-015</td><td></td></tr><tr><td>V450 Mouse IgG1, &kappa; בקרת איזוטיפ</td><td>BD Biosciences</td><td>560373</td><td></td></tr><tr><td>Widefield Zeiss observer</td><td>Zeiss</td><td></td><td>המטרה בשימוש: Plan-Apo 20x/0.8</td></tr><tr><td>Zeiss Colibri7 מקור אור LED (נוריות: 385, 475, 555, 590, 630 ננומטר)</td><td>Zeiss</td><td></td><td>DAPI: UV, עירור 385 ננומטר; 488: כחול, עירור 475 ננומטר; &nbsp; 555: ירוק, עירור 555 ננומטר; &nbsp; 647:אדום, עירור 630 ננומטר&nbsp;</td></tr></tbody></table>

מיקרו-הפיצול האנושי של רקמת אדיפוז לפנוטיפים של תאים ואפיון

Human Adipose Tissue Micro-fragmentation for Cell Phenotyping and Secretome Characterization

במהלך העשור האחרון, השתלות רקמה באמצעות שימוש נרחב בכירורגיה פלסטית ובאורתופדיה כדי לשפר את הרקמה החוזרת של רקמות ו/או התחדשות. לפיכך, טכניקות לקציר ועיבוד של רקמת השומן האנושית התפתחו כדי להשיג במהירות וביעילות כמויות גדולות של רקמות. בין השאר, טכנולוגיית המערכת הסגורה מייצגת מערכת חדשנית וקלה לשימוש כדי לקצור, לעבד ולהזריק מחדש את רקמת השומן המעודנת בזמן קצר ובאותה התערבות (בשיתוף פעולה). רקמת אדיפוז נאסף על ידי שאיבת שומן, שטף, אמולסיה, שטיפת ובטחון מכני לתוך אשכולות תאים של 0.3 כדי 0.8 מ"מ. השתלת אוטוולוגי של רקמת אדיפוז בצורה מכנית הראתה יעילות יוצאת דופן בטיפולי שונות אינדיקציות כגון רפואה אסתטית וניתוח, אורתופדיה וניתוח כללי. אפיון מיקרו-רקמה מפוצלת חשף את נוכחותם של כלי קטן ללא פגע בתוך אשכולות האדיפוציטים; ולכן, הנישה הפריסקולרית נותרה לא מודאג. אשכולות אלה מועשרים בתאי וסקולריים (כלומר, תא גזע mesenchymal (MSC) אבות) ובניתוח חוץ גופית הראה שחרור מוגבר של גורמי גדילה וציטוקינים מעורבים תיקון רקמות והתחדשות, לעומת MSCs נגזר אנזימטי. הדבר מצביע על כך שהפוטנציאל הטיפולי המעולה של רקמת השומן המפוצלים מוסבר בתדירות גבוהה יותר של שוערת MSCs ופעילות הפרשה המשופרת. בין אם הוספת קרום הלב הוסיף במישרין לגורם גדילה גבוה יותר וייצור ציטוקין אינו ידוע. זו הליך מאושר קליני מאפשר השתלת שוערת MSCs ללא צורך התרחבות ו/או טיפול אנזימטי, ובכך לעקוף את הדרישות של הנחיות GMP, וצמצום העלויות עבור טיפולים מבוססי תאים.

דיסוציאציה מכנית של ליפותים ידנית הביא לייצור של מיקרו מפוצל רקמת אדיפוז (MAT), המורכב של צבירה של adipocytes עוטף רשת microvascular (איור 3). Immunofluorescence ניתוח של ג'לטין מוטבע ו קריוקבוע MAT מדגיש מבנה זה, מראה את הרשת כלי הדם מסומן על ידי סמן תא אנדותל Ulex europaeus 1 (ULEX-1) קולטן בעיקר המורכב של קטן, נימים כמו ספינות ( איור 4). בעיקר קרום הלב המבטא NG2 או PDGFRβ מופצים בדרך כלל, לנדן תאים אנדותל (<strong class="xfig"...

. בעזרת מכשיר מערכת סגור שיטה חדשה זו מאפשרת בידור של אשכולות תת-מילימטר של רקמת האדיפוז המתאימים להשתלה vivo, בתרבות החוץ-גופית ובבידוד תאים נוסף ואפיון.

In the past decade, adipose tissue transplants have been widely used in plastic surgery and orthopaedics to enhance tissue repletion and/or regeneration. ...

באמצעות מערכת זו, אנו יכולים לאסוף את אשכולות תת מילימטר של רקמת שומן אנושית, שבו כל microenvironment של תאים רגנרטיביים הוא שלם. המערכת המיקרו-וסקולרית כולה גם היא שלמה, ולכן אנו יכולים להשתמש באיברים זעירים מסוג זה להשתלת in-vivo לתרבות במבחנה ולבידוד תאים לאפיון נוסף. הרציונל העיקרי לשימוש במערכת במעבדת המחקר הוא כי התהליך הוא נטול אנזימים לחלוטין, ולכן הוא מאפשר עיבוד מהיר ויעיל של רקמת שומן אנושית תוך שמירה על מיקרו ארכיטקטורה וזה יהיה microvasculature של הרקמה שלם לחלוטין.וכך אנו יכולים ללמוד ישירות מוצר טיפול בתא אשר הוכיח כבר מאוד שימושי במרפאה. טכנולוגיית מערכת סגורה זו היא טכניקה קלה לשימוש עבור קציר, עיבוד והזרקה מחדש של רקמת שומן מזוקקת תוך ניתוחית, והוא יכול להיות מיושם בהצלחה אורתופדיה קוסמטיקה, פרוקטולוגיה וגם גינקולוגיה. שיטה זו מאפשרת מחקר נוסף של ההשפעה של שומן התחדשות רקמות.ההליך יוצג על ידי ביאנקה Vezzani, עמית פוסט דוקטורט ועל ידי מריו גומז-סלזר, שהוא סטודנט לדוקטורט. עבודה תחת תנאים אספטיים בתוך 16 שעות של קציר, מניחים את מדגם abdominoplasty על גבי מטלית כירורגית עם העור פונה כלפי מעלה. השתמש ב cannula חדירת רקמה חד פעמית להזריק 50 עד 100 מיליליטר של 37 מעלות צלזיוס 0.9% פתרון נתרן כלורי לתוך רקמת השומן התת עורית.חבר מזרק מנעול לולר 10 מיליליטר לתוך cannula שאיבת שומן חד פעמית לתפוס את המדגם באזור עורי ליד קצה של המדגם, בזהירות להציג את העצם לתוך רקמת השומן. לאחר cannula הוא בתוך הרקמה, לחלץ את הבוכנה ולהזיז את cannula באופן רדינות בתוך מדגם רקמת השומן. חשוב לטפל ברקמת השומן בחוזקה במהלך שאיפת הליפו.אם לא נאסף מספיק שומן, שקול לבצע הזרקת מלוחים נוספת. כאשר המזרק מלא שאיבת שומן, להסיר בזהירות את cannula מן הרקמה ולהחליף את המזרק המלא עם מזרק ריק חדש עד סך של 60 מיליליטר של שאפתן נקצר. למיקרו-פיצול של שאיבת השפתיים, מוציאים את המכשיר מהחבילה ומוודאים שהיחידה הראשית מחוברת לשקית הפסולת.מניחים את שקית איסוף הפסולת על הקרקע, ולוודא כי השסתומים מאובטחים מכסות יחידת תהליך. פירס את יציאת חיבור התיק כדי לחבר את ספייק המסוף של קו הקלט לתוך שקית מלוחים ולמקם את שקית מלוחים גבוה יותר מאשר יחידת העיבוד. ודא שכל חמשת המהדקים המחוברים לצינורות המעגלים פתוחים, מקם את יחידת העיבוד במצב אנכי, אפשר לתמיסת מלח למלא את יחידת העיבוד, ואשר שהזרימה מגיעה לשקית הפסולת.לנער את יחידת העיבוד כדי להסיר את כל בועות האוויר ולמקם את היחידה במצב אנכי עם הכובע הכחול פונה כלפי מעלה. סגור את המהדק ליד קו הקלט וחבר מזרק של שאיבת שומן לשסתום occluding עצמית של מכסה הקלט הכחול כדי להתחיל להזריק את שאיבת שומן. שמירה על יחידת העיבוד אנכית, לאט לדחוף למטה על בוכנה מזרק עד כל שאיבת שומן הועבר ליחידה.כאשר כל שאיבת השפתיים הוזרקה, פתח את מהדק הקלט כדי לשחזר את זרימת התמיסת מלח ולנער במרץ את יחידת העיבוד במשך שתי דקות לפחות, בודק בקביעות את זרימת תמיסת מלח לתוך שקית הפסולת. כאשר תמיסת מלח ביחידת העיבוד הופכת לשקופה, מקם את היחידה עם הכובע האפור כלפי מעלה וסגור את המהדקים הממוקמים על הניקוז ליד הכובעים הכחולים והאפורים. הרקמה המעובדת תצוף למעלה.לאחר מכן, מלא מזרק מנעול לולר 10 מיליליטר עם תמיסת מלח, ולחבר את המזרק לשסתום הטעינה של הכובע הכחול. חבר מזרק ריק 10 מיליליטר לולר לוקס עם הבוכנה מוכנס לחלוטין לשסתום של הכובע האפור. בתקיפות להזריק את מלוחים לתוך יחידת העיבוד מן הכובע הכחול, בודק כי המזרק מחובר שסתום אפור הוא כתוצאה מכך מתמלא עם הרקמה המעובדת.כאשר כל מלוחים הוזרק, להסיר בזהירות את שני המזרקים ולחזור על עירוי מלוחים עד כל הרקמה המעובדת נאסף. בסוף העיבוד, להסיר את כל המזרקים, לסגור את כל המהדקים, לנתק את שקית מלוחים, ולהיפטר המכשיר על פי פרוטוקולים מקומיים. כאשר כל הרקמה המעובדת נאספה, מעבירים את רקמת השומן המיקרו-מקוטעת למיכל סטרילי ומוסיפים נפח שווה של אמצעי עיכול למיכל.מניחים את המיכל האטום באמבט מים רועד ב-37 מעלות, מוגדרים ל-120 סיבובים בדקה למשך 45 דקות, ועוצרים את העיכול עם נפח שווה של פתרון חסימה בסוף הדגירה. לסנן ברצף את המדגם, תחילה באמצעות מסננת תא 100 מיקרומטר ואחריו סינון דרך מסננת תא 70 מיקרומטר צנטריפוגה ההשעיה מסוננת במשך חמש דקות ב 200 פעמים g. אנחנו להשעות את גלולה בערך 5 מיליליטר של חיץ תזה אריתרוקיטים במשך 15 דקות בטמפרטורת החדר.עצור את התזה עם נפח שווה של פתרון חסימה וסנן את הפתרון באמצעות מסננת תאים של 40 מיקרומטר. לאחר מכן לאסוף את תאי רקמת שומן מיקרו מקוטע על ידי צנטריפוגה ואנחנו להשעות את גלולה בתותח חסימה טרי עם ערבוב קמח לספירה. לאחר דיסוציאציה וכתם נוגדנים, ניתן לקחת תאי שומן מיקרו-מפוצלים לציטומטר הזרימה לצורך ניתוח ו/או מיון תאים.ניתוק מכני של שאיבת שומן ידנית גורם לייצור רקמת שומן מיקרו-מקוטעת המורכבת ממצטבר של אדיפוציטים העוטפים רשת מיקרו-וסקולרית. ניתוח immunofluorescence של ג'לטין מוטבע ברקמת שומן מיקרו מקוטע cryofixed מדגיש את המבנה, מראה את רשת כלי הדם מסומן על ידי סמן התא אנדותל Ulex Europaeus Agglutinin 1 קולטן מורכב בעיקר של כלי קטן דמוי נימי. יש לציין, pericytes המביעים נוירון גליה אנטיגן 2 או טסיות דם נגזר קולטן קולטן בטא מופצים בדרך כלל, ensheathing תאים אנדותל.על ידי אי הכללת CD31 תאים אנדותל חיובי CD45 חיובי hematopoietic, הנוכחות של CD146 חיובי CD34 pericytes שלילי CD146 שלילי CD34 תאים חיוביים adventitial ניתן לזהות בתוך MAT. ידני lipo-שאיפה הוא חלק קריטי של ההליך חייב להתבצע בתנאים סטריליים לא יותר מ 16 שעות לאחר abdominoplasty. רקמת שומן מיקרו-מקוטעת יכולה להיות מעובדת עוד יותר על ידי כתמים אימונוהיסטוכימיים, תרבות במבחנה או ניתוח סודי כדי לקבל תובנה עמוקה יותר על ביולוגיה של רקמת שומן.טכניקה זו מאפשרת לימוד של רקמות מגוונות בסידור הטבעי, הטבעי והתלת מימדי שלהם כמעין אורגנואידים קטנים, שהם קטנים מספיק כדי להיות מושתלים בעכברים או להישמר בתרבות ארוכת טווח. ואנחנו משתמשים במערכת זו בעיקר כדי לגשת באופן ניסיוני למיקרו-וירוסים שונים הספציפיים לאיברים. תורמי רקמת השומן שלנו אינם ידועים כנשאים של זיהומים transmissible.עם זאת, בהיעדר כל הקרנה נוספת, כל הרקמות האנושיות צריכות להיחשב מזוהמות פוטנציאלית ומטופלות בהתאם.

human-adipose-tissue-micro-fragmentation-for-cell-phenotyping

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

שומן לבן (וואט) יש ליקויים קריטי הדגמים תרבות הראשי הנוכחי שלה, הפרעה מטבולית מחקרים ופיתוח תרופתי. כאן, אנו מציגים פרוטוקול לייצר מערכת microphysiological אדיפוז מאת וואט sandwiching בין גליונות של תאי סטרומה. מבנה זה מספק פלטפורמה יציבה וניתנת להתאמה לתרבות וואט העיקרי.

פלטפורמה Microphysiologic שומן אנושי: דחוקה שומן לבן

פרסום זה מתאר פרוטוקול לבידוד של גרעינים מאדיפוציטים בוגרים, טיהור על-ידי מיון המופעל באמצעות קרינה פלואורסצנטית ורמת תא בודדת מופעלת.

בידוד של שאדיפוז של גרעיני הרקמה עבור יישומים גנומית של תא יחיד

פרוטוקול זה מתאר את הגישה הטכנית לבידוד תת-אוכלוסיות תאי סטרומה אדיפוגניים ופיברו-דלקתיים ממחסני רקמת שומן לבן תוך בטני (WAT) על ידי מיון תאים המופעלים על ידי פלואורסצנטיות או הפרדת חרוזים אימונומגנטית.

בידוד תת-אוכלוסיות תאי סטרומה אדיפוגניים ופיברו-דלקתיים ממחסני שומן תוך-בטניים של מורין

אנו מציגים שיטה פשוטה לבודד תאי אב שומן קיימא מאוד מרפידות שומן אפידיליות עכבר באמצעות מיון תאים המופעלים פלואורסצנטיות.

הכנת תאי אדיפוס אבות מרקמות שומן אפידימליות עכבר

פרוטוקול זה מספק שיטת עיכול יעילה של collagenase לבידוד של אדיפוציטים בני קיימא ותאי SVF של מקטע כלי דם סטרומה משומן בטני אנושי בתהליך יחיד, כולל מתודולוגיה להשגת RNA באיכות גבוהה מאדיפוציטים ופנוטיפפיקציה של SVF-מקרופאגים באמצעות צביעה של סמנים מרובים הקשורים לממברנה לניתוח על ידי ציטומטריית זרימה.

בידוד אדיפוציטים בני קיימא ומקטע כלי דם סטרומלי מרקמת השומן הקרבית האנושית המתאימה לניתוח RNA ופנוטיפ מקרופאגים

מחקר זה מתאר שיטה חדשה לבידוד אדיפוציטים חומים מורין לניתוח ביטוי גנים וחלבונים.

בידוד אדיפוציטים חומים מרקמת שומן חום אינטרסקפולרית של מורין לניתוח ביטוי גנים וחלבונים

פרוטוקול זה מתאר מתודולוגיה לבידוד וזיהוי תאי גזע מזנכימליים (MSC) שמקורם ברקמת שומן מחולדות Sprague Dawley.

בידוד וזיהוי תאי גזע מזנכימליים שמקורם ברקמת שומן של חולדות Sprague Dawley

פרוטוקול זה מתאר את הבידוד החצי-אוטומטי של מקטע כלי הדם סטרומה (SVF) מרקמת השומן של מורין כדי להשיג קדם-אדיפוציטים ולהשיג התמיינות אדיפוציט במבחנה. שימוש בדיסוציאטור רקמות לעיכול קולגנאז מפחית את השונות הניסיונית ומגביר את יכולת הרבייה.

בידוד חצי אוטומטי של מקטע כלי הדם הסטרומלי מרקמת השומן הלבנה באמצעות דיסוציאטור רקמות

כאן, אנו מציגים פרוטוקול שיכול להפוך רקמת שומן אוטולוגית לחומרים מרכיבי שומן שונים בעלי תכונות ותפקודים פיזיקוכימיים שונים.

פיצול רקמת שומן חדשני להפיכת שומן לרכיבים מיוחדים

כאן אנו מציגים שיטה סטנדרטית לבידוד יעיל של תאי גזע ומגדלי שומן שמקורם בשומן, המאופיינת בהפחתה של &gt;90% בזמן העיבוד, חיוניות תאית גבוהה ותאימות רחבה.

בידוד יעיל של תאי גזע ושומנים שמקורם בשומן מרקמת שומן חזיר

למד שיטת מיקרו-הפיצול ללא אנזימים של רקמת שומן אנושית באמצעות מערכת סגורה. שיטה זו שומרת על המיקרו-וסקולטורה ומאפשרת שימוש בטיפולי תאים ורפואה רגנרטיבית.

מיקרו-הפיצול האנושי של רקמת אדיפוז לפנוטיפים של תאים ואפיון

גלה סרטונים נוספים