מיקרו-הפיצול האנושי של רקמת אדיפוז לפנוטיפים של תאים ואפיון

באמצעות מערכת זו, אנו יכולים לאסוף את אשכולות תת מילימטר של רקמת שומן אנושית, שבו כל microenvironment של תאים רגנרטיביים הוא שלם. המערכת המיקרו-וסקולרית כולה גם היא שלמה, ולכן אנו יכולים להשתמש באיברים זעירים מסוג זה להשתלת in-vivo לתרבות במבחנה ולבידוד תאים לאפיון נוסף. הרציונל העיקרי לשימוש במערכת במעבדת המחקר הוא כי התהליך הוא נטול אנזימים לחלוטין, ולכן הוא מאפשר עיבוד מהיר ויעיל של רקמת שומן אנושית תוך שמירה על מיקרו ארכיטקטורה וזה יהיה microvasculature של הרקמה שלם לחלוטין.

וכך אנו יכולים ללמוד ישירות מוצר טיפול בתא אשר הוכיח כבר מאוד שימושי במרפאה. טכנולוגיית מערכת סגורה זו היא טכניקה קלה לשימוש עבור קציר, עיבוד והזרקה מחדש של רקמת שומן מזוקקת תוך ניתוחית, והוא יכול להיות מיושם בהצלחה אורתופדיה קוסמטיקה, פרוקטולוגיה וגם גינקולוגיה. שיטה זו מאפשרת מחקר נוסף של ההשפעה של שומן התחדשות רקמות.

ההליך יוצג על ידי ביאנקה Vezzani, עמית פוסט דוקטורט ועל ידי מריו גומז-סלזר, שהוא סטודנט לדוקטורט. עבודה תחת תנאים אספטיים בתוך 16 שעות של קציר, מניחים את מדגם abdominoplasty על גבי מטלית כירורגית עם העור פונה כלפי מעלה. השתמש ב cannula חדירת רקמה חד פעמית להזריק 50 עד 100 מיליליטר של 37 מעלות צלזיוס 0.9% פתרון נתרן כלורי לתוך רקמת השומן התת עורית.

חבר מזרק מנעול לולר 10 מיליליטר לתוך cannula שאיבת שומן חד פעמית לתפוס את המדגם באזור עורי ליד קצה של המדגם, בזהירות להציג את העצם לתוך רקמת השומן. לאחר cannula הוא בתוך הרקמה, לחלץ את הבוכנה ולהזיז את cannula באופן רדינות בתוך מדגם רקמת השומן. חשוב לטפל ברקמת השומן בחוזקה במהלך שאיפת הליפו.

אם לא נאסף מספיק שומן, שקול לבצע הזרקת מלוחים נוספת. כאשר המזרק מלא שאיבת שומן, להסיר בזהירות את cannula מן הרקמה ולהחליף את המזרק המלא עם מזרק ריק חדש עד סך של 60 מיליליטר של שאפתן נקצר. למיקרו-פיצול של שאיבת השפתיים, מוציאים את המכשיר מהחבילה ומוודאים שהיחידה הראשית מחוברת לשקית הפסולת.

מניחים את שקית איסוף הפסולת על הקרקע, ולוודא כי השסתומים מאובטחים מכסות יחידת תהליך. פירס את יציאת חיבור התיק כדי לחבר את ספייק המסוף של קו הקלט לתוך שקית מלוחים ולמקם את שקית מלוחים גבוה יותר מאשר יחידת העיבוד. ודא שכל חמשת המהדקים המחוברים לצינורות המעגלים פתוחים, מקם את יחידת העיבוד במצב אנכי, אפשר לתמיסת מלח למלא את יחידת העיבוד, ואשר שהזרימה מגיעה לשקית הפסולת.

לנער את יחידת העיבוד כדי להסיר את כל בועות האוויר ולמקם את היחידה במצב אנכי עם הכובע הכחול פונה כלפי מעלה. סגור את המהדק ליד קו הקלט וחבר מזרק של שאיבת שומן לשסתום occluding עצמית של מכסה הקלט הכחול כדי להתחיל להזריק את שאיבת שומן. שמירה על יחידת העיבוד אנכית, לאט לדחוף למטה על בוכנה מזרק עד כל שאיבת שומן הועבר ליחידה.

כאשר כל שאיבת השפתיים הוזרקה, פתח את מהדק הקלט כדי לשחזר את זרימת התמיסת מלח ולנער במרץ את יחידת העיבוד במשך שתי דקות לפחות, בודק בקביעות את זרימת תמיסת מלח לתוך שקית הפסולת. כאשר תמיסת מלח ביחידת העיבוד הופכת לשקופה, מקם את היחידה עם הכובע האפור כלפי מעלה וסגור את המהדקים הממוקמים על הניקוז ליד הכובעים הכחולים והאפורים. הרקמה המעובדת תצוף למעלה.

לאחר מכן, מלא מזרק מנעול לולר 10 מיליליטר עם תמיסת מלח, ולחבר את המזרק לשסתום הטעינה של הכובע הכחול. חבר מזרק ריק 10 מיליליטר לולר לוקס עם הבוכנה מוכנס לחלוטין לשסתום של הכובע האפור. בתקיפות להזריק את מלוחים לתוך יחידת העיבוד מן הכובע הכחול, בודק כי המזרק מחובר שסתום אפור הוא כתוצאה מכך מתמלא עם הרקמה המעובדת.

כאשר כל מלוחים הוזרק, להסיר בזהירות את שני המזרקים ולחזור על עירוי מלוחים עד כל הרקמה המעובדת נאסף. בסוף העיבוד, להסיר את כל המזרקים, לסגור את כל המהדקים, לנתק את שקית מלוחים, ולהיפטר המכשיר על פי פרוטוקולים מקומיים. כאשר כל הרקמה המעובדת נאספה, מעבירים את רקמת השומן המיקרו-מקוטעת למיכל סטרילי ומוסיפים נפח שווה של אמצעי עיכול למיכל.

מניחים את המיכל האטום באמבט מים רועד ב-37 מעלות, מוגדרים ל-120 סיבובים בדקה למשך 45 דקות, ועוצרים את העיכול עם נפח שווה של פתרון חסימה בסוף הדגירה. לסנן ברצף את המדגם, תחילה באמצעות מסננת תא 100 מיקרומטר ואחריו סינון דרך מסננת תא 70 מיקרומטר צנטריפוגה ההשעיה מסוננת במשך חמש דקות ב 200 פעמים g. אנחנו להשעות את גלולה בערך 5 מיליליטר של חיץ תזה אריתרוקיטים במשך 15 דקות בטמפרטורת החדר.

עצור את התזה עם נפח שווה של פתרון חסימה וסנן את הפתרון באמצעות מסננת תאים של 40 מיקרומטר. לאחר מכן לאסוף את תאי רקמת שומן מיקרו מקוטע על ידי צנטריפוגה ואנחנו להשעות את גלולה בתותח חסימה טרי עם ערבוב קמח לספירה. לאחר דיסוציאציה וכתם נוגדנים, ניתן לקחת תאי שומן מיקרו-מפוצלים לציטומטר הזרימה לצורך ניתוח ו/או מיון תאים.

ניתוק מכני של שאיבת שומן ידנית גורם לייצור רקמת שומן מיקרו-מקוטעת המורכבת ממצטבר של אדיפוציטים העוטפים רשת מיקרו-וסקולרית. ניתוח immunofluorescence של ג'לטין מוטבע ברקמת שומן מיקרו מקוטע cryofixed מדגיש את המבנה, מראה את רשת כלי הדם מסומן על ידי סמן התא אנדותל Ulex Europaeus Agglutinin 1 קולטן מורכב בעיקר של כלי קטן דמוי נימי. יש לציין, pericytes המביעים נוירון גליה אנטיגן 2 או טסיות דם נגזר קולטן קולטן בטא מופצים בדרך כלל, ensheathing תאים אנדותל.

על ידי אי הכללת CD31 תאים אנדותל חיובי CD45 חיובי hematopoietic, הנוכחות של CD146 חיובי CD34 pericytes שלילי CD146 שלילי CD34 תאים חיוביים adventitial ניתן לזהות בתוך MAT. ידני lipo-שאיפה הוא חלק קריטי של ההליך חייב להתבצע בתנאים סטריליים לא יותר מ 16 שעות לאחר abdominoplasty. רקמת שומן מיקרו-מקוטעת יכולה להיות מעובדת עוד יותר על ידי כתמים אימונוהיסטוכימיים, תרבות במבחנה או ניתוח סודי כדי לקבל תובנה עמוקה יותר על ביולוגיה של רקמת שומן.

טכניקה זו מאפשרת לימוד של רקמות מגוונות בסידור הטבעי, הטבעי והתלת מימדי שלהם כמעין אורגנואידים קטנים, שהם קטנים מספיק כדי להיות מושתלים בעכברים או להישמר בתרבות ארוכת טווח. ואנחנו משתמשים במערכת זו בעיקר כדי לגשת באופן ניסיוני למיקרו-וירוסים שונים הספציפיים לאיברים. תורמי רקמת השומן שלנו אינם ידועים כנשאים של זיהומים transmissible.

עם זאת, בהיעדר כל הקרנה נוספת, כל הרקמות האנושיות צריכות להיחשב מזוהמות פוטנציאלית ומטופלות בהתאם.