לוח בדיקה מרובע: שינוי לוח השחמט התלת מימדי לחקר שילובי סמים

לוח השחמט המרובע הוא טכניקה החוקרת את כל השילובים האפשריים שניתן להשיג על ידי שילוב של ארבע תרופות, וחשוב למצוא טיפול למיקרואורגניזמים עמידים, בעיקר MDRs או הידועים גם כמיקרואורגניזמים עמידים לתרופות מרובות. טכניקה זו אינה עתירת עבודה וניתן להשיג את התוצאות למחרת או לאחר סיום תקופת הדגירה. בנוסף לכך, הוא יכול ללמוד את כל השילובים האפשריים ולא רק שילובים ספציפיים ומוגבלים מאוד שניתן להשיג על ידי שילוב של ארבע התרופות הללו והכל, הכל בניסוי אחד.

בנוסף לכך, ניתן להשתמש בטכניקה זו במספר דיסציפלינרים ולא רק במיקרוביולוגיה ואפילו במיקרוביולוגיה. הוא יכול לחקור את כל השילובים האפשריים בין חומרים אנטי-מיקרוביאליים שונים ולא רק חומרים אנטיבקטריאליים. בנוסף לחלק המיקרוביולוגיה, ניתן להשתמש בו על מנת לחקור שילובים בין תרופות אנטי-סרטניות, בין תמציות צמחים לתרופות, ואפילו בין פאנלים של טיפולים מולקולריים יעילים מולקולריים.

הכנה מניחים 4 96, צלחות היטב זו ליד זו על מנת ליצור ריבוע בעזרת סרט, מדביקים את החלק התחתון שלהן יחד. חזור על שלב זה על מנת לקבל ארבעה לוחות שכל אחד מהם מכיל ארבע לוחות וקרא להם אחת, שתיים, שלוש וארבע. הוסף 50 מיקרוליטר מולר.

רמז ומרק לבארות שבין עמודה שתיים לעמודה 11 בשנת 1696, צלחות באר של ארבעת הפאנלים מוסיפות 200 מיקרוליטר מרק מולר הינטון לבאר H 12 המשמשת כבקרה שלילית. ובכן, בבארות 1696 של ארבעת הפאנלים מוסיפים מרק מולר הינטון אחד של 50 מיקרוליטר לבארות A אחד ו-H אחד המשמשים כבארות בקרה חיובית בלוחות הבאר משנת 1696 של ארבעת הפאנלים תרופה אחת cefotaxime דילול סדרתי לצינור חרוטי ב -15 מ"ל. מים מזוקקים סטריליים.

חשב את הנפח שיש להסיר מתמיסת המלאי של התרופה לפי הנוסחה C אחד V אחד שווה C שניים V שתיים. הסר את הנפח המחושב מהמים המזוקקים הסטריליים של 15 מ"ל והוסף את אותו נפח של תמיסת מלאי התרופות לפיפטה הצינור החרוטי 50 מיקרוליטר מתמיסת התרופה המוכנה לכל באר בעמודה 11 ובעמודה 12, למעט הבאר H 12, התחל את הדילול הסדרתי על ידי הוצאת 50 מיקרוליטר מעמודה 11 והכנסתו לבארות המתאימות בעמודה 10, ואז מ -10 עד הגעה לעמודה השנייה שם יושלכו 50 המיקרוליטרים שנלקחו מעמודה שתיים. חזור על הדילול הסדרתי עבור כל אחד מלוחות הבאר 1696 של ארבעת הלוחות.

תרופה 2 אמיקה דילול סדרתי לצינור חרוטי ב-10 מ"ל. מים מזוקקים סטריליים. חשב את הנפח שיש להסיר מתמיסת המלאי של התרופה.

הסר את הנפח המחושב מהמים המזוקקים הסטריליים של 10 מ"ל והוסף את אותו נפח של תמיסת מלאי התרופות לצינור החרוטי. קח צלחת נפרדת של 96 בארות, הוסף מאה מיקרוליטר מרק מולר הינטון סטרילי לבארות שבין ורד G B.In צלחת זו, הוסף מאות מיקרוליטר מהתרופה שהוכנה בעבר. שתיים, פתרון לבארות של שורה G.לדלל באופן סדרתי משורה G לשורה B על ידי לקיחת מאה מיקרוליטר מכל באר ב-RO G.ולבסוף השלכת מאה המיקרוליטרים מהבארות של שורה B.חזור על שלבים אלה על מנת להכין שמונה צלחות נפרדות של 96 בארות העברת תרופה שתיים לארבעת הפאנלים פיפטה 50 מיקרוליטר של תרופה שתיים מהבארות בין שורות G ו-B לתוך בארות תואמות בכל צלחת בארבעת הלוחות, צלחת אחת מוכנה של 96 בארות מכילה מאה מיקרוליטר של תרופה שתיים.

זה מספיק לשתי צלחות בתרופת פאנל אחת. שלושה חיים של חלציים בנוסף לארבעה צינורות חרוטיים שונים ב-14 מ"ל מים מזוקקים סטריליים. חשב את הנפח שיש להסיר מתמיסת המלאי של התרופה.

הסר את הנפח המחושב מהמים המזוקקים הסטריליים של 14 מ"ל מכל צינור והוסף את הנפח המתאים של התרופה. לאחר הכנת הריכוזים הנדרשים של התרופה השלישית, קח 50 מיקרוליטר והוסף אותו לבארות המתאימות בין שורות B ו- G ועמודות שתיים ו -12 בצלחת המתאימה. בכל פאנל שבו C אחד מתאים לארבע הלוחות P אחד וארבעת הלוחות C שניים מתאימים לארבע P, שתי לוחות וארבעת הלוחות C3 מתאים לארבע P, שלוש לוחות וארבעת הלוחות ו-C ארבעה מתאים לארבע ה-P, ארבע הלוחות וארבעת הפאנלים תרופות ארבע טרימתופרים סולפאמתוקסזול תוספת לצינור חרוטי מוסיפים 14 מ"ל.

שאפו למים מזוקקים. חשב את הנפח שיש להסיר מתמיסת המלאי של התרופה. הסר את הנפח המחושב מהמים המזוקקים הסטריליים של 14 מ"ל של כל צינור והוסף את הנפח הנדרש של התרופה.

לאחר הכנת הריכוזים הנדרשים של התרופה הרביעית, קח 50 מיקרוליטר והוסף אותו לבארות המתאימות בין שורות B ו- G ועמודות שתיים ו -12. בארבעת הלוחות בפאנל המקביל, כאשר C אחד מתאים לפאנל 1, C 2 מתאים לפאנל 2, C3, מתאים לפאנל 3 ו-C 4 מתאים לפאנל 4. הכנה ותוספת של חיסון חיידקי שווה I-E-S-B-L באמצעות העברת לולאה סטרילית.

מושבה אחת של החיידק המבודד שווה לתרבית בעבר בצלחת לשני מ"ל מרק מולר הינטון סטרילי ומערבולת בדוק את העכירות היכן שהיא צריכה להיות 0.5 מקפרלנד באמצעות צפיפות הוסף מרק מולר הינטון סטרילי TML לכוס שתן סטרילית הוסף חיסון חיידקי מחיסון מקפרלנד 0.5 לכוס השתן לפי הנוסחה C אחד V אחד שווה C שני V שניים כאשר V אחד שווה 800 מיקרוליטר צינור פיפטה 50 מיקרוליטר מתמיסת החיסון ולכל באר מלבד H 12, שהיא בקרת הסטריליות, ובכן דגרו את הפאנלים ב -37 מעלות צלזיוס למשך הלילה. איור זה מייצג את לוח A. שוכני הצבע הם הבארות המכילות גידול חיידקים, והחצים השחורים מייצגים את הבארות שעל הגידול.

אין ממשק גידול בצלחת אחת, צלחת שתיים וצלחת שלוש. אנו יכולים לראות שיש עיכוב בשורה D המכילה אחד מעל שמונה MIC של אמיקאצין בנוסף למספר תת-מיקרופונים של cefotaxime ו-Levofloxacin בנוסף ל-MIC אחד מעל שמונה של Trimethoprim sulfamethoxazole בצלחת ארבע. אנו שמים לב שלא נראית גידול חיידקים ברביע המכיל את השילוב.

הסיבה לכך היא שבצלחת זו יש לנו את המיקרופון של לבופלוקסצין שיעכב לחלוטין את הצמיחה. איור 1 B מייצג את הפאנל השני. בפאנל זה, אנו יכולים לראות כי עיכוב צמיחת חיידקים נראה גם ב-RD, המכיל תת-ICS של cefotaxime ו-Levofloxacin בנוסף ל-MIC אחד מעל שמונה של Amikacin ו-MIC אחד מעל ארבעה MIC של trimethoprim sulfamethoxazole איור C אחד מייצג פאנל A שלוש.

באיור זה, אנו יכולים לראות כי עיכוב צמיחת החיידקים נראה בשורה C ובשורה D המכילה מספר תת-מיקרופונים של cefotaxime ו-Levofloxacin, ותוספת לחצי MIC של trimethoprim sulfamethoxazole, ואחד מעל ארבעה MIC של Amikacin בשורה C ואחד מעל שני MIC של Amikacin בשורה D איור 1D מייצג את לוח A ארבע. בפאנל זה יש לנו MIC אחד של Trimethoprim sulfamethoxazole בשילוב עם מספר ריכוזים של Cefotaxime, amikacin ו-Levofloxacin. באיור זה אנו יכולים לראות כי גידול החיידקים מעוכב לחלוטין ברביע המכיל את השילוב שבו עיכוב זה הוא ההשפעה של המיקרופון האחד של Trimethoprim sulfamethoxazole בגיליון FIC, הכל בקובץ האקסל.

הטבלה תציג את הצליל הסופי FIC, עם פירוש הערך המתקבל. לסיכום, טכניקת לוח השחמט Q חוקרת את כל השילובים האפשריים בין ארבע תרופות בניסוי אחד. התוצאות מתקבלות למחרת ומתפרשות בצורה קלה ומהירה באמצעות תבנית אקסל.