חלון קבוע לחקירת גרורות סרטן לריאה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להשתלת חלון אופטי השוכנות לצמיתות עבור בית החזה מורין, המאפשר הדמיה תוך-ויאלית ברזולוציה גבוהה של הריאה. קביעות החלון הופכת אותו מתאים היטב לחקר תהליכים תאיים דינמיים בריאה, במיוחד אלה המתפתחים לאט, כגון התקדמות גרורתית של תאים סרטניים מופצים.

פרוטוקול זה מותר לענות על שאלה חשובה בתחום גרורות הסרטן. כולל, איך תאים סרטניים ליישב את הריאה? איך תאים סרטניים נשארים רדומים?

ומה לגרום להם לצאת רדום ובסופו של דבר ליצור גרורות. היתרון העיקרי של פרוטוקול זה הוא כי התהליך גרורתי דינמי ניתן ללמוד ישירות ויוו, בזמן אמת, ב microenvironment אמיתי. שיטה זו יכולה לספק תובנה על מספר מחלות ריאות, אבל זה שימושי במיוחד להבנת ההתנהגות תאים סרטניים בודדים הפצה לריאה, אתר נפוץ של גרורות.

ראשית, יש להשתמש בתפר משי 2-0 כדי לקשור קשר בבסיס של קטטר 22 מד, משאיר זנבות באורך 2 אינץ '. לאחר שהעכבר הוא מרדים לחלוטין, להעביר את העכבר לשולחן הפעולה, צנרור את העכבר, ולאחר מכן לאבטח את צנתר הצנרור על ידי קשירת תבר משי 2-0 סביב חוטם של העכבר. חבר את מכונת ההנשמה לקטטר הצנרור.

באמצעות סרט נייר, אבטחו את הגפיים הקדמיות והגפיים האחוריות בשלב הניתוח המחומם. מקם סרט נייר לאורך גב העכבר כדי למקסם את החשיפה לתחום הניתוחי. הרם את העור עם המלקחיים ולעשות חתך מעגלי כ 10 מ"מ בערך 7 מ"מ שמאלה על בעצם החזה ועל 7 מ"מ מעולה על השוליים תת צילומי.

לחתוך את הרקמה הרכה מעל הצלעות. הרם את הצלע השישית והשביעית באמצעות מלקחיים. השתמש בלהב יחיד של מספריים זעירים בוטים עם הצד המעוגל לכיוון הריאה כדי לנקב בזהירות את השריר הבין-צלעית בין הצלעות השישית והשביעית לכניסה לחלל התוך-אתורי.

שחרר בעדינות את מיכל האוויר הדחוס על הפגם כדי למוטט את הריאה ולהפריד את הריאה מקיר החזה. תדליקו את האוויר הדחוס בהתפרצויות קצרות כדי למנוע פגיעה ריאות יטרוגנית. מניחים את אגרוף הביופסיה מעל כלי החיתוך ומתמרנים בזהירות את בסיס כלי החיתוך באמצעות החתך הבין-צלעתי.

כוון את בסיס כלי החיתוך במקביל לקיר החזה ונקב חור עגול 5 מ"מ דרך כלוב הצלעות. בעזרת תפר משי 5-O, מניחים תפר חוט ארנק, כ 1 מ"מ מהחור, בהיקף. לאחר מכן, מקם את מסגרת החלון בקיר החזה עם הקצוות של הפגם המעגלי שנלכד בתוך חריץ החלונות.

קשרו היטב את תיל המשי 5-O כדי לנעול את החלון המושתל בבטחה. החל זרם יציב ועדין של אוויר דחוס במשך כ 10 עד 20 שניות כדי לייבש את הריאה. השתמש במלקחיים כדי לאחוז במסגרת החלון בקצה החיצוני שלו ולהרים בעדינות כדי להבטיח הפרדה של הריאה מהפנים התחתיות של מסגרת החלון.

יש לפזר שכבה דקה של דבק ציאנואקרילט לאורך הפנים התחתיות של מסגרת החלון האופטית. לחץ בעדינות אך בחוזקה על מסגרת החלון האופטית על רקמת הריאה למשך 10 עד 20 שניות לחיבור. יש לפזר טיפת דבק בקוטר 5 מ"מ על פתק כיסוי מלבני.

השתמש בכלי איסוף ואקום כדי להרים תלוש כיסוי 5 מ"מ. טובלים את החלק התחתון של הכיסוי לתוך הדבק, ולאחר מכן לגרד את הדבק עודף שלוש פעמים נגד הצד של החלקה כיסוי מלבני כדי להפוך שכבה דקה מאוד של דבק על החלקה הכיסוי. מקם בזהירות את החלקת הכיסוי בזווית בתוך ההפסקה במרכז מסגרת החלון האופטית, ממש מעל רקמת הריאה.

לחץ קצר על מכונת ההנשמה כדי ליצור לחץ חיובי, ניפוח יתר של הריאה. כוון את החלקת הכיסוי במקביל לרקמת הריאה, תוך שימוש בתנועה המסתובבת ליצירת תצהיר ישיר בין משטח הריאה לבין הפנים התחתיות של החלקת הכיסוי. יש לשמור על לחץ עדין למשך כ-25 שניות כדי להגדיר את דבק הציאנואקרילט.

הפרד את החלקה של הכיסוי מכלי איסוף הוואקום במלקחיים. צור תפר מחרוזת ארנק, בהיקף, פחות מ 1 מ"מ מן הקצה לחתוך של חתך העור באמצעות תפר משי 5-O. יש לתחוב עור עודף מתחת לשפה החיצונית של מסגרת החלון לפני קשירת החלון בחוזקה עם קשרים נעילה.

יש לפזר כמות קטנה של דבק בממשק הזכוכית המתכתית כדי להבטיח אטם אטום בין פתק הכיסוי למסגרת החלון. חבר את המחט הסטרילית למזרק אינסולין 1 מ"ל. הכנס את המחט מתחת לתהליך xiphoid, מתקדם לכיוון הכתף השמאלית, נכנס לחלל בית החזה דרך הסרעפת.

משכו בעדינות את המזרק כדי להסיר כל שאריות אוויר מחלל בית החזה. ההדמיה התוך-וינטלית המולטי-פוטונית של אזור ריאה יחיד הראתה שניתן להעביר את המיקרו-כלי דם במשך שלושה ימים רצופים. נקודת הענף המובהקת מכלי שיט בודד זוהתה בכל יום ברצף.

אריתרוציטים ללא תווית יצרו צללים כאשר הם זורמים בכלי שיט גדולים יותר. זווית נקודות הענף ביחס לכלי הדם יכולה לשמש לחישוב קצבי זרימת אריתרוציטים. מהירות אריתרוציטים כותמה גם על ידי הזרקת העכבר עם מיקרוספרות פלואורסצנטיות ואורכי המסלול שלהם נמדדו חלקי זמן רכישת המסגרת.

ניתן להבחין בין המיקרוספרות הניוחת והזורמת. גורלם של תאי הגידול המופצים היה במעקב עם הדמיה סדרתית במשך מספר ימים, באמצעות החלון להדמיה ברזולוציה גבוהה של הריאה. תא הגידול הגיע ונתקע באזור הריאות ביום הראשון.

עם זאת, התא לא זוהה vasculature הריאות ביום השני והשלישי, המציין recirculation או extravasation. השלבים שהגיעו לשיאם של התקדמות גרורתית בריאה הוצגו החל מהגעת תאי הגידול, ההפצה של תא הגידול לתוך parenchyma הריאות והתפשטות כדי ליצור גרורות מאקרו. יש להקפיד להימנע מטראומה לריאה במהלך מיקום מסגרת החלון האופטי.

הריאה נוטה לדימום, אשר מאוחר יותר לעכב דבקות להחליק כיסוי במהלך המיקום. שיטות אחרות שניתן לבצע בעקבות הליך זה כוללות מיקרוסקופיה תוך-וינטלית, אשר כאשר משתמשים בגישה שונה למיקרוקרטוגרפיה, מאפשרת מיקום מחדש מדויק של תחומי עניין להדמיה חוזרת. פרוטוקול זה אפשר הדמיה של הריאה בחקירה של שאלה מרכזית על מנגנון גרורות.

מחקר זה נושא פוטנציאל לבנות מחדש טיפול חדש לחולי סרטן.