יישום אקטואלי Bioassay כדי לכמת רעילות קוטל חרקים עבור יתושים וזבובי פירות

על ידי יישום ישיר של קוטל חרקים על החרק ולא דרך מגע על פני השטח, יש שונות מינימלית בחשיפה לקוטלי חרקים, וזה מאפשר לנו למדוד את פרופיל הרגישות של אוכלוסיות יתושים בצורה מדויקת יותר. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת לנו לחשב מינונים קטלניים של קוטל חרקים ולא ריכוזים קטלניים, מה שמשפר מאוד את ההשוואות של יחסי ההתנגדות. הקפידו לאחסן את קוטלי החרקים כראוי, הימנעו מזיהום הכלים שלכם וודאו שחלקי המזרק במצב טוב.

זה יעזור לך להשיג תוצאות עקביות. כדי להתחיל, להסיר את פתרונות קוטל החרקים הדרושים מן המקפיא. מיד מערבולת את התמיסה או הופכת חמש פעמים, ומניחים אותה במיכל עמיד בפני אור בטמפרטורת החדר כדי לאפשר לקוטלי החרקים להתחמם לטמפרטורת החדר לפני השימוש.

הגדר חמישה צינורות microcentrifuge עם 0.5 מיליליטר של אצטון כל אחד. מלאו את חבית המזרק לחלוטין באצטון מהצינור הראשון. לאחר מכן הוציאו את האצטון למיכל פסולת על ידי דחיפה מהירה כלפי מטה על הבוכנה, וחזרו על הפעולה ארבע פעמים נוספות כדי להשלים בסך הכל חמש שטיפות אצטון מאותו אצטון אליקוט.

לאחר מכן, מלאו את חבית המזרק לחלוטין באוויר, והוציאו את שאריות האוויר והאצטון הפוטנציאלי לתוך מיכל הפסולת. חזרו על הפעולה פעמיים נוספות כדי להשלים שלוש שטיפות באוויר. צור כיס אוויר בתוך הקנה בין בוכנת המזרק לחלק העליון של המחט על ידי משיכת הבוכנה כחמישה מילימטרים לתוך הקנה.

סמן את כוסות ההחזקה מפלסטיק עם תעודת הזהות האקראית להערכת תמותה עיוורת. באמצעות שאיפה המופעלת על ידי יניקה משאיפה, שאפו למספר הרצוי של יתושים בוגרים בני שלושה עד חמישה ימים. מניחים את קצה השואף לתוך הצינור עם כותנה עטופה סביב הקצה.

נשפו בעדינות, והקש על השואף כדי להעביר את היתושים לצינור חרוטי. השתמש בכותנה כדי לחבר את הצינור כאשר קצה השואף מוסר, ולאחר מכן מכסה עם המכסה. להפיל לזמן קצר את היתושים בצינורות על ידי הנחתם למשך 10 דקות לפחות בארבע מעלות צלזיוס או לקבור אותם מתחת לקרח במגש קרח.

העבירו את היתושים שהופלו לאוהל הטיפול בחרקים. הפנו בזהירות את היתושים אל מגש פלסטיק המונח על הקרח, ושפכו כ-50 יתושים בכל פעם כדי לוודא שכל אחד מהם נוגע במגש הקריר שמתחתיו ונשאר מופל. מיין את היתושים לפי מין על ידי הרמתם בעדינות על ידי הרגליים או הכנפיים עם מלקחיים, ולאחר מכן הנחת כל מין לתוך החזקה נפרדת, ולעצור כאשר המספר הרצוי מגיע.

בעת המיון, יש להסיר יתושים שנפצעו או שהם גדולים או קטנים במיוחד. כדי לרשום את משקלה של היתושים, הניחו ריקה עם צלחת פטרי כמכסה על המאזניים, ותארו את המאזניים. יוצקים את היתושים לתוך המיכל, ומניחים את המכסה על גבי.

מניחים את המיכל על הסולם, ורושמים את המשקל הסופי, יחד עם מספר היתושים. מיד הניחו את הדגימות בחזרה על הקרח כדי להשאיר אותן משותקות עד שכל כוסות הדגימה נשקלו. מחלקים את היתושים המוכנים לחמש עד עשר כוסות נפרדות המונחות על קרח, המסומנות בתעודות זהות אקראיות.

השתמשו בפינצטה ובמטען כף יד כדי להשיג 20 עד 25 יתושים לכוס. כדי למיין את זבובי הפירות, מרדימים את הזבובים באמצעות פחמן דו חמצני למשך שבע שניות. יוצקים את הזבובים על חבילת קרח עטופה בנייר ספסל.

באמצעות מכחול בעל קצה דק, מפרידים וסופרים את הזכרים והנקבות. השתמשו במכחול כדי לאסוף בעדינות את הזבובים שנבחרו, והכניסו אותם לבקבוק מלאי נקי וריק. לאחר בחירת מספר שווה של זבובי פירות זכרים ונקבות, סמן את בקבוקי המניות בשם הזן ובסך הכל בזבוב הפירות.

מרדימים את בקבוק זבובי הפירות באמצעות פחמן דו חמצני למשך שבע שניות. יוצקים את זבובי הפירות על נייר שקילה, ומשתמשים בנייר כמשפך כדי להכניס את הזבובים לבקבוקון מזויף המסומן בתעודת זהות אקראית.לאחר הנחת מכסה צלחת הפטרי על גבי בקבוקון זבובי הפירות, הניחו אותו על המאזניים. רשום את המשקל המשולב ומספר הדגימות בגיליון הציונים.

מיד מניחים את בקבוקון זבובי הפירות במגש קרח כשהמכסה עדיין למעלה כדי למנוע מהזבובים לברוח. טען את המזרק בריכוז קוטל החרקים הנכון, החל מהמינון הכי פחות מרוכז ועבוד לקראת המינון המרוכז ביותר עם כל קבוצת אורגניזמים. הטה את הדגימות על נייר שקילה המונח על גבי מגש על הקרח.

הפרד את הדגימות הקרובות זו לזו באמצעות מכחול נקי ללא קוטל חרקים או צמר גפן כדי לאפשר גישה נוחה לכל דגימה לצורך מינון. באמצעות המזרק, יש למרוח טיפה אחת של תמיסת קוטל חרקים על בית החזה הגחוני ואזור הבטן עבור יתושים ואת הדורסום עבור זבובי פירות. מיד לשפוך את הדגימות בחזרה לתוך פלסטיק מסומן.

מכסים את הכוס ברשת וגומייה. שימו לב לספירת דגימות מעודכנת על הגביע אם דגימות כלשהן נהרגו, ניזוקו או נמלטו בתהליך זה. מניחים את הכוס שהושלמה לתוך מגש החזקה.

עבור הגביע הראשון, רשמו את הזמן שבו הושלמה המינון. חזרו על המינון של כל עד שכל הדגימות מינונו עם ריכוזי קוטל החרקים המתאימים, ותעדו את זמן הסיום שבו כל הדגימות נוספו. ספקו תמיסת 10% סוכרוז לכל באמצעות כדור צמר גפן רטוב, ואחסנו את היתושים וזבובי הפירות בטמפרטורה ובלחות הרצויות.

שיא תמותת הדגימות ב-24 שעות לאחר תחילת החשיפה לקוטלי חרקים. לסווג יתושים כחיים אם הם יכולים לעוף ולהחזיק את עצמם זקופים ומתים אם הם חסרי תנועה או אטקסיים, כפי שתואר על ידי ארגון הבריאות העולמי. בצע את אותה הערכת תמותה עבור זבובי פירות.

לאחר ביצוע הבדיקה הביולוגית, התקבלו נתוני תגובת מינון הכוללים שני זנים שהם רוקפלר וגנוטיפ IICC עבור הזכר והנקבה Aedes aegypti. המינון הקטלני החציוני של רוקפלר ו-IICC היה 0.008 ו-0.336 ננוגרם למיליגרם, בהתאמה. התוצאות לא חשפו הבדלים בין עקומות תגובת המינון של יתושים נקביים וזכריים בתוך כל זן.

לכן, נתונים משני המינים שולבו כדי לחשב את ערכי המינון הקטלני החציוני. מכיוון שהמרווחים בר-סמך של 95% עבור המינון הקטלני החציוני של שני זנים אלה לא חפפו, ערכים אלה נחשבו שונים באופן משמעותי. בנוסף, כאשר מחשבים את היחסים העמידים, זן ה-IICC היה עמיד יותר מפי 40 מזן הרוקפלר הרגיש.

התקבלו גם נתוני תגובת מינון עבור זבוב הפירות, Drosophila melanogaster, זן Canton-S, והמינון החציוני הקטלני של יחסות המסה נמצא כ-0.213 ננוגרם למיליגרם. עקביות היא קריטית, במיוחד בעת אחסון ויישום קוטל החרקים והערכת התמותה. כמו כן, יש לדאוג בעת הטיפול בדגימה כדי למנוע נזק או מוות שאינם נגרמים על ידי קוטל החרקים.

בשיטה זו, אנו יכולים כעת לקבוע במדויק את העמידות הטכנית של אוכלוסיית יתושים וכיצד תנאים סביבתיים משפיעים על העמידות או כיצד עמידות טכנית מנבאת עמידות מעשית.