Name: השתלת עור Murine (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-01-16T10:34:00.000+00:00
Duration: 6 min 42 s
Description: למד השתלת עור מורינית לחקר תגובות T תאים אלוגניים בדגם BALB/c ל-C57BL/6. שיטה זו מאפשרת הערכת אסטרטגיות סבילות ודחיית שתלים בביולוגיית השתלות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

NIH אימונולוגיה הדרכה גרנט T32 AI 60,573 (KRG) ו-NIH מענק GM 41,514 (MDC)

לפני תחילת הניסוי: <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבל אישור IACUC </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר כלי ניתוח ו-Q-טיפים </li></ul> I. רקמות התורם קציר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים עכבר התורם (בהתאם SOP של המוסד) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שיער רטוב חזרה מהבסיס של האוזן עם אלכוהול </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התורם קציר העור על ידי חיתוך האוזן את בבסיס </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים בצלחת רקמה על הקרח </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> האוזן פיצול: הצדדים קמצוץ הגחון ועל הגב של רקמת בבסיס של האוזן עם עכברוש שיניים מלקחיים, משוך בעדינות בנפרד רקמות; רקמות לצוף הגב, משטח פנימי למטה, PBS על קרח; להשליך דש הגחון collagenous </li></ol> השנייה. הכן מקבל עבור להשתלות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכבר הרדימי באמצעות הליך אישור </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניהול כאבים להקלה על כאב לאחר הניתוח (כלומר 0.05-0.1 מ&quot;ג / g ip Bupernex) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום העכבר במצב לרוחב </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע קמצוץ הבוהן כדי להבטיח חיים הוא מסומם מספיק </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שיער רטוב עם אלכוהול לגלח החזה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נגב אזור נקי עם ספוגית אלכוהול </li></ol> ג. עור להשתלות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא ~ 1 ס&quot;מ חתך: עור אוהל עם עכברוש שיניים מלקחיים ולחתוך ~ 0.25-0.5 ס&quot;מ מתחת מלקחיים </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסרת העור תורם PBS, במקום על גבי המיטה שתל (עם המשטח הפנימי של העור אוזן מול המיטה שתל), ולהסיר PBS עם עודף סטרילי Q-קצה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות לחתוך עור עודף תורם כל כך השתלת שנמצאת ביובש בתוך המיטה שתל (מוודא קצוות השתל אינם מכורבלת מתחת שתל שאינו הנגאובר על העור גזע של הנמען) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גלישת הנמען תחבושת סטרילית (עם קטע שאינו דבק גזה הניח על שתל העור) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא תחבושת כי הוא לא חזק מדי (להעריך נשימה של החיה) והזרועות, כי הם ניידים בחופשיות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחבושת Secure עם תפר 2-0 יחיד משי </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חיה מקום בכלוב נקי (תחת מנורת חימום עד שהחיה התאוששה מספיק מן ההרדמה) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צג הנמען 1-2/day סימנים של מצוקה ולנהל משכך כאבים לפי הצורך להקלה על הכאב </li></ol> IV. הסרת תחבושת (6-7 ימים לאחר ההשתלה) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכבר הרדימי באמצעות הליך אישור </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גזור להסיר תפר משי </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מספריים סוף בוטה, לחתוך בזהירות באמצעות תחבושת (כדי לוודא שלא לשבש את השתל) בעדינות להסיר </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור העכבר לכלוב נקי </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק ~ שתל 8 שעות לאחר הסרת התחבושת סימנים של scabbing או התכווצות. אם כיום, שתל עשוי נכשלו vascularize ואת צריכה להיחשב כשל טכני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעקב יומי אחר סימנים של דחייה (בדרך כלל מגדירים נמק ~ 80% של רקמת התורם) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתלות עור allogeneic בדרך כלל דוחים בין D8-12 מנותחות </li></ol> ו &#39;עצות שימושיות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מסיק רקמות התורם קרוב לבסיס של האוזן יהיה: 1) למקסם את גודל השתל, ו 2) לספק הסככה הגחון אחיד שיאפשר פיצול </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש תמיד סכין גילוח חדש גילוח הנמען </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם כאבים תינתן ip, לנהל הליך לפני ההשתלה כדי לצמצם מנותחות טיפול (למזער סיכוי לשבש את השתל) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במידת האפשר, להסיר את הכפפות לפני החלת את התחבושת. כפפות נוטים לתקוע את התחבושת לסבך את הבקשה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנחת תפר בודד בסוף תחבושת יהיה למזער מוקדמת הסרת </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעטוף כמו תחבושת הדוקה כפי שמותר להעריך נשימה לפני הנחת תפר. אם תחבושת הדוקה מדי, בעלי חיים יפסיק לנשום. אם תחבושת רופפת מדי, בעלי חיים תסיר אותו. </li></ol>

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

כפי שמודגם במאמר-video זה, המודל השתלת עור היא שיטה מהירה וקלה לניטור allogeneic T התגובות התא. השתלה אלוגנאית העור יש מגוון רחב של יישומים נוצל עד assay את היעילות של מגוון רחב של סוכני מדכאות חיסון ואינדוקציה סובלנות פרוטוקולים, וכן כדי לחקור את ההשפעות הביולוגיות של נוגדנים חסימה שונים.

<table><tbody><tr><td>פינצטה למיקרו-דיסקציה (מעוקלת)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4142</td><td></td></tr><tr><td>פינצטת שיני חולדה (1x2 שיניים, ישרה)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11053-10</td><td>n=2</td></tr><tr><td>מספרי סטראביזמוס (קצה קהה)</td><td>Fine Science Tools</td><td>14074-11</td><td></td></tr><tr><td>פינצטת איריס (מעוקלת)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11065-07</td><td></td></tr><tr><td>מספרי קפיץ (זוויתיים)</td><td>Fine Science Tools</td><td>15006-09</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק מחטים מיקרוסקופי מסוג Halsey</td><td>Fine Science Tools</td><td>12500-12</td><td></td></tr><tr><td>צלחות 10 cm</td><td>Corning</td><td>430167</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Cellgro</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>Bupernex (Buprenorphine hydrochloride)</td><td>Reckitt Benckiser</td><td>517201</td><td></td></tr><tr><td>מזרקי אינסולין (29 Ga)</td><td>Monoject</td><td>8881 600145</td><td></td></tr><tr><td>מקלונים (Q-tips)</td><td>Solon Manufacturing Company</td><td>362</td><td></td></tr><tr><td>להבי תער בעלי קו חיתוך יחיד (#9)</td><td>Smith &amp;amp; Nephew Inc.</td><td>67-0238</td><td></td></tr><tr><td>חוט תפירה ממשי (2-0; PS-2)</td><td>Ethicon Inc.</td><td>583H</td><td></td></tr></tbody></table>

השתלת עור murine

Murine Skin Transplantation

בתור אחד המודלים המחמירים ביותר והפחות מאתגר מבחינה טכנית, השתלת עור היא שיטה רגילה לארח assay T התגובות התא MHC-אנטיגנים שונים התורם. מטרת מאמר-video זה היא לספק את הצופה עם הפגנה צעד אחר צעד ויזואלית של השתלת עור באמצעות מודל העכבר. הפרוטוקול מחולק 5 מרכיבים עיקריים: 1) התורם קצירת העור; 2) הכנת הנמען להשתלה; 3) להשתלת עור; 4) הסרת התחבושת דחיית שתל ניטור: 5) עצות מועילות. בקיאים פעם, את ההליך עצמו צריך לקחת &lt;10 דקות לבצע.

השתלה אלוגנאית העור הוא מודל סטנדרטי לארח assay T התגובות התא MHC-אנטיגנים שונים התורם. זה וידאו המאמר מספק הדרכה ויזואלית של כל צעד מעורב בביצוע BALB/c--&gt; השתלת C57BL / 6 העור.

השתלת עור Murine

כאחד המודלים המחמירים ביותר והפחות מאתגרים מבחינה טכנית, השתקת עור היא שיטה סטנדרטית לבחינת תגובות של תאי T של המאכלס ל...

ברוכים הבאים למעבדה של ד"ר Michael Kalen. אני Kim Gard. היום נדגים מודל השתלת עור באמצעות השילוב של זני BC לא black six, כאחד המודלים המחמירים ביותר והפשוטים ביותר לביצוע מבחינה טכנית לדחיית השתקת רקמה.השתתלת עור היא טכניקה סטנדרטית המשמשת לבדיקת תגובות אלוגניות, והיא נפוצה להערכת היעילות של אסטרטגיות שונות להשראת סבילות. אם כן, נתחיל. הליך זה מתחיל בקצירת העור מעכבר התורמד ה-BAB שלנו.ראשית, בצעו המתנסה לתורם בהתאם ל-SOP של ה-Iacuc. כעת, הרטיבו את פרוות הגב בבסיס האוזן באמצעות אלכוהול, קצרו את העור על ידי הסרת האוזן קרוב ככל האפשר לבסיס והניחו על קרח. לאחר מכן, חלקו כל אוזן תוך השלכת השליחה הגבית הקולגנית והצופו את הרקמה על קרח.כעת עור התורם מוכן להשתלה. הליך ההשתלה מתחיל בהרדמה של בעל החיים המקבל בהתאם לנהלים המאושרים. ברגע שהמקבל מורדם כראוי, הוצא את בעל החיים מהתא ומתן bup andnext IP להקלה על הכאב.מקם את מקבל השבייה במנח צדי וודא שהחיה מורדמת לחלוטין על ידי ביצוע בדיקת צביטה באצבעות. הרטב את הפרווה באלכוהול וגלח אותה. לאחר שהמקבל גולח באופן נקי, בצע חתך של כ-1 עד 2 סנטימטרים.הניחו את סריקת התורם מעל החתך והסירו נוזלים עודפים בעזרת מקלוני צמר גפן סטריליים (Q-tip). כעת, גזרו בזהירות את שאריות עטיפת עור התורם, בעזרת מכשיר ומחזיק. ודאו שהתחבושת אינה הדוקה מדי על ידי הערכת הנשימה, ולאחר מכן בדקו שהזרועות נעות בחופשיות.כעת הדק את התחבושת באמצעות תפר בודד. מקם את העכבר בכלוב נקי עם מנורת חימום עד שהחיה תתאושש במהלך הימים הראשונים. לאחר הניתוח, יש לנטר את החיה מספר פעמים ביום כדי לזהות סימני מצוקה ולהעניק buprenorphine במידת הצורך לשיכוך כאבים.חמישה עד שבעה ימים לאחר הניתוח, מסירים את התחבושות. אדגים את הסרת התחבושת מקבל השתלה ביום השישי שלאחר ההשתלה. לאחר שהעכבר הרדים באופן מלא, הסירו את התפר ובאמצעות מספריים בעלי קצה קהה גזרו את התחבושת והסירו אותה בעדינות, תוך הקפדה שלא להפריע להשתלה.החזירו את בעל החיים לכלוב נקי ועקבו מדי יום אחר סימני דחייה. בהתאם לשילוב הזנים שבחרתם, מרבית השתלות העור נדחות, דבר המוגדר בדרך כלל כ-80% נמק עד היום השמיני עד ה-12. עכבר זה נמצא ביום השמיני לאחר הניתוח וקיבל השתלות דו-צדדיות.משמאל מופיע השתלה סינגנית של תאי שחור שש המשמשת כביקורת, אשר לא תדחה. מימין מופיעה השתלה אלוגנית של BAB sea אשר תדחה. כאן מופיעה השתלה נוספת שנמצאת בתהליך של דחייה.לבסוף, השתלה מתאריך שונה שכמעט נדחיתה לחלוטין. שלושה דוגמאות אלו מדגימות את השונות הנורמלית בקינטיקה של דחיית השתלות עור. בניסוי הקודם, הראינו לכם כיצד לבצע השתלת עור במבנה מראה (mirroring skin transplant).מודל זה הוא שיטה מהירה ופשוטה לניטור תגובות אלוגנאיות ויש לו מגוון רחב של יישומים. לדוגמה, ניתן להשתמש בהשתלת עור כדי לבחון את היעילות של חומרים אימונו-סופרסיביים שונים, נוגדנים חוסמים ופרוטוקולים להשראת סבילות. זהו כל השלב.תודה לצפייה ובהצלחה בניסויים שלכם.

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

בדו"ח זה, אנו מתארים את העור תלת ממדי לשחזר מודל אשר מחקה העור האנושי באדריכלות הרכב. הפיזיולוגיה מלנוציט, התקדמות מלנומה גורל בתאי גזע עורי נחקרו באמצעות העור לשחזר מודל. המודל שימושית גם ככלי קליני להערכת תרופות.

עור תלת ממדי האדם לשחזר דגם: ככלי מחקר עור רגיל התקדמות מלנומה

ניתוח רקמות ספציפית של מודל התחדשות זקיקי שיער באמצעות lentivirus לתווך רווח או פסד--of-פונקציה.

ניתוח גנטי מהיר של איתות אפיתל-mesenchymal במהלך התחדשות שיער

סרטון זה מדגים שיטה להשתלת עור אנושי על עכבר מדוכא חיסון עם תגובת נויטרופילים מדוכאת. השיטה כוללת מריחת עור אנושי בעובי מפוצל על מיטת השתל של העכבר, אטימתו וכיסויו להתאוששות. בסופו של דבר, העור האנושי נצמד לעור העכבר, מבסס את כלי הדם ואת זרימת הדם, וכתוצאה מכך קסנוגרפט עור מוצלח.

טכניקה להשתלת עור אנושי במודל עכבר

meningitidis Neisseria הוא הפתוגן ספציפי אדם שמדביק את כלי דם. בפרוטוקול זה microvessels אדם מוכנס בעכבר על ידי השתלת עור אנושי על עכברי חיסון. חיידקים לדבוק בהרחבה לכלי האנושי, שהובילו לניזק והתפתחות כלי דם של הפריחה purpuric נצפתה בדרך כלל במקרים של בני אדם.

אנושי עכבר מודל ללמוד זיהומים חיידקיים מיקוד microvasculature

השתלת עור זנב היא מודל רב עוצמה לחקר דחייה תלויה בתאי T והשראת סבילות במהלך תגובות חיסוניות אלוגניות בעכברים. היתרונות של פרוטוקול זה הם ניתוח פולשני קל, וקלות ניטור ללא צורך להקריב את העכבר המקבל.

השתלה של עור זנב לחקר תגובות תא Allogeneic T מסוג CD4 בעכברים

השתלת עור בעובי מלאת Murine היא מודל ומבוסס ללמוד דחייה בסביבת alloimmune. כאן, אנו מספקים הדרכה של כל שלב המעורב בביצוע BALB / ג - השתלת עור&gt; C57BL / 6 בעובי מלא.

השתלת עור בעובי מלא Murine

אנו מציעים פרוטוקול זה מראה כיצד להבדיל keratinocytes נגזר תאי גזע pluripotent המושרה ו fibroblasts וליצור תא צורב של העור תלת-ממד באמצעות אלה keratinocytes ו fibroblasts. פרוטוקול זה מכיל צעד נוסף של יצירת מודל humanized עכברים. הטכניקה המובאת כאן תשפר את המחקר דרמטולוגית.

דור של תא צורב עור תלת-ממד של כבל דם-derived המושרה בתאי גזע Pluripotent

מטרת המחקר הזה היתה לפתח מודל מורטין של ריפוי פצע כוויות. כוויה תרמית המושרה על העור החלק של עכברים באמצעות תבנית פליז מחומם מראש. הרקמה הנשרפה הייתה מצופה בשתל עור שנקטפו מזנבו של עכבר תורם דומה גנטית.

מודל מורנה של פצע צריבה שוחזר עם שתל העור Allogeneic

הפרוטוקול הנוכחי מתאר כיצד להשתיל עור אנושי בעכברים סוכרתיים שאינם שמנים (NOD)-scid interleukin-2 קולטן שרשרת גמא (NSG). בדו"ח נכללים תיאור מפורט של הכנת עור אדם להשתלה, הכנת עכברים להשתלה, השתלת עור אדם בעובי מפוצל והליך התאוששות לאחר ההשתלה.

מודל Xenograft לעור למניפולציה של תגובות חיסוניות אנושיות in vivo

המאמר הנוכחי מתאר טכניקה שונה להשתלת לב הטרוטופית וסקולרית עם טכניקה אספטית מעודכנת, שיכוך כאבים והרדמה.

פרוטוקול השתלת לב הטרוטופי מורין מותאם לסטנדרטים עכשוויים של טכניקה אספטית, הרדמה ושיכוך כאבים

אנו מציגים מודל עכבר שניתן לשחזור של אלוטרנסלנטציה מורכבת של גפיים אחוריות לצוואר הטרוטופית. פרוטוקול סופר-מיקרוכירורגי זה, הכולל אנסטומוזות כלי דם בקוטר 0.3-0.5 מ"מ, משלב הנחיית חוטי ניילון ושרוול ורידי. הוא מספק פלטפורמה אמינה למחקרים תרגומיים על סבילות, פגיעות איסכמיה-רפווזיה, ומנגנונים אימונולוגיים באלוטרנסרפלנטציה של כלי דם מרוכב.

השתלת גפה אחורית לצוואר הטרוטופית בעכבר: מודל סופר-מיקרוכירורגי של אלוטרנספלינצ'נציה מורכבת וסקולרית

למד השתלת עור מורינית לחקר תגובות T תאים אלוגניים בדגם BALB/c ל-C57BL/6. שיטה זו מאפשרת הערכת אסטרטגיות סבילות ודחיית שתלים בביולוגיית השתלות.

השתלת עור Murine

גלה סרטונים נוספים