Name: פרוטוקול הצלת עוברים להכלאה בין-מינית בסקווש (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-09-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 15 s
Description: למדו פרוטוקול הצלת עוברים להכלאה בין-מינית בסקווש בין Cucurbita pepo ל-Cucurbita moschata באמצעות מדיום MS ואנטיביוטיקה. שיטה זו פשוטה לשכפול ומאפשרת לגדל עוברים בוגרים מהכלאות בין-מיניות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי למזון וחקלאות של USDA, פרויקט NRS מס '. FLA-TRC-006176 והמכון למדעי המזון והחקלאות של אוניברסיטת פלורידה.

1. שתילה והאבקה
הערה: חשוב לזהות גנוטיפים תואמים שההכלאה שלהם תביא לסט פירות ולייצור עוברים בני קיימא.
<ol><li>תנאי שתילה ותחזוקה<ol><li>השג זרעים של גנוטיפים של דלעת (cultivars/accessions) להכלאה (טבלה 1).</li>
		<li>מלאו 50 תאים התחלתיים (25 ס"מ רוחב x 50 ס"מ אורך) עם חומר עציץ מתוקן עם דשן NPK שלם המכיל 1.38 גרם/ק"ג N, 1.38 גרם/ק"ג P ו-1.38 גרם/ק"ג K.</li>
		<li>זורעים זרעים לעומק השווה לאורכם ומכסים במדיום עציצים. להשקות את הדירות מבלי ליצור מים עומדים. לאחר מכן, שמרו על המדיה לחה על ידי השקיה ידנית פעם ביום.</li>
		<li>בשלב השני של עלי אמת, השתלו את השתילים לתוך עציצים בקוטר 25 ס"מ עד 30 ס"מ מתוקנים עם דשן NPK שלם ב 3 כפות / סיר. דשן את הצמחים פעם בשבוע עם 500 מ"ל/סיר של דשן נוזלי המכיל NPK 20:20:20 הוסיף לריכוז של 1 גרם לכל גלון מים.</li>
		<li>לשמור על צמחים בחממה בטמפרטורות שבין 22-28 מעלות צלזיוס תחת משטר אור טבעי. עבור גנוטיפים מתפתלים, ספקו סורג תומך בחממה (איור 1).</li>
	</ol></li>
	<li>ביצוע האבקות<ol><li>בדרך כלל, פריחה בדלעת מתחילה בגיל 6 עד 8 שבועות מהזריעה, תלוי בזן (איור 2A,B). התחילו לבצע הכלאה מבוקרת (צלבים) ברגע שהצמחים מתחילים לפרוח. בתנאי חממה, האבקה יכולה להיעשות כל השנה.</li>
		<li>זהה פרחים זכריים ונקביים של זני C. pepo ו- C. moschata שיהיו מוכנים להאבקה למחרת. כדי לזהות פרחים כאלה, בדוק אם יש פרחים שעלי הכותרת שלהם הם בעלי גוון צהוב אך אינם פתוחים. הדביקו בעדינות את הפרחים הסגורים בחלקם העליון באמצעות סרט מיסוך כדי למנוע האבקה מקרית של חרקים (איור 2C,D).</li>
		<li>בבוקר יום המחרת, הפרחים מוכנים להאבקה. בצע האבקה לפני 10:00 בבוקר כדי לשפר את שיעור ההצלחה של הכלאה27.</li>
		<li>פתח את פרחי הנקבה והזכר על ידי הסרה עדינה של החלק העליון המודבק של עלי הכותרת. הסירו את עלי הכותרת מהפרח הזכרי והעבירו את האבקה על-ידי שפשוף עדין של הפורקן על הסטיגמה של הפרח הנקבי (איור 3A).</li>
		<li>לאחר ההאבקה, מיד לסגור את הפרח הנקבי המואבק עם סרט מיסוך. השתמשו בתג כדי לתעד את תאריך ההאבקה ולציין את ההורים האבהיים והאימהיים שבהם נעשה שימוש בצלב (איור 3B).</li>
		<li>צלב מוצלח מסומן על ידי שחלה מורחבת אשר יוצרת במהירות פרי קטן תוך שבוע אחד (איור 4A). לאחר מכן הצמח מוכן לקטיף 45-55 ימים לאחר האבקה28 (איור 4B).</li>
	</ol></li>
</ol>2. טכניקת הצלת עוברים
<ol><li>היערכות למדיה<ol><li>הכינו מלאי אנטיביוטיקה: עבור cefotaxime (מלח נתרן), להמיס את האנטיביוטיקה ב 4 מ"ל של מים deionized או מזוקקים, לסנן דרך מסנן מזרק סטרילי 0.22 μm, ולעשות 0.5 מ"ל aliquots. יש לאחסן בטמפרטורה של -20°C. תמיסת המלאי המתקבלת תהיה בריכוז של 250 מ"ג/מ"ל.</li>
		<li>עבור אמפיצילין (מלח נתרן), יש להמיס את האבקה ב-10 מ"ל מים, לסנן דרך מסנן מזרק סטרילי של 0.22 מיקרומטר, ולאליקוט במלאי של 1 מ"ל בריכוז סופי של 100 מ"ג/מ"ל. יש לאחסן בטמפרטורה של -20°C.</li>
		<li>הפוך את Murashige ו- Skoog (MS) לבינוניים על ידי המסת 2.45 גרם של בינוני (ריכוז 4.91 גרם לליטר) ב-500 מ"ל של מים מזוקקים בבקבוק של 1 ליטר. הוסיפו 1.5 גרם של מסטיק גלן ואוטוקלאב בטמפרטורה של 121 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות. מסטיק הגלן מתמוסס לחלוטין במהלך האוטוקלבינג.</li>
		<li>לאחר autoclaving, לקרר את המדיום על ידי הנחת הבקבוק באמבט מים ב 50 מעלות צלזיוס. מוציאים את מלאי האנטיביוטיקה מהמקפיא ומפשירים אותם בארון הזרימה הלמינרית.</li>
		<li>מעבירים את הבקבוק הבינוני למכסה המנוע של הזרימה הלמינרית. הוסיפו 0.6 מ"ל של תמיסת מלאי cefotaxime (250 מ"ג/מ"ל) ו-0.25 מ"ל של מלאי אמפיצילין (100 מ"ג/מ"ל) לבקבוק הבינוני וערבבו היטב. יוצקים כ-7 מ"ל מהמדיום לתוך צלחת פטרי סטרילית (60 מ"מ x 15 מ"מ).</li>
		<li>תנו למדיום להתמצק בצלחות הפטרי למשך כ-15-20 דקות. סוגרים את צלחות הפטרי בעטיפת איטום ומניחים אותן בקופסת אחסון. יש לאחסן בטמפרטורת החדר.</li>
	</ol></li>
	<li>הצלת עוברים<ol><li>לפני שתתחיל, נקו ועקרו את ארון זרימת האוויר הלמינרי עם 70% אלכוהול אתילי.</li>
		<li>קצרו את פרי הדלעת על-ידי שבירה/חיתוך שלו מהגפן הראשית וחטאו את משטח הפרי על-ידי שטיפה עם חומר ניקוי נוזלי (לדוגמה, 0.3% כלורוקסילנול) בכיור המעבדה עד להסרת כל הלכלוך הרופף (איור 5A).</li>
		<li>יש לשטוף במי ברז בשפע. יבשו את הפרי במגבות נייר נקיות. העבירו את הפרי לארון זרימת האוויר הלמינרי (איור 5B).</li>
		<li>פני השטח מעקרים את הפרי על ידי התזת 70% אתנול על הפרי בארון הסטרילי של זרימת האוויר הלמינרית. חצו את הפרי בסכין סטרילית (איור 5C) והוציאו את הזרעים.</li>
		<li>השתמשו במלקחיים סטריליים כדי לפתוח באופן אספטי את שכבת הזרעים ולחשוף את העוברים הלא בשלים (איור 6). הניחו בזהירות את העוברים הלא בשלים בצלחת פטרי המכילה MS בינוני בתוספת cefotaxime ואמפיצילין (איור 7A). סוגרים את צלחת הפטרי ואוטמים בסרט עטיפה. הערה: בהתאם לגודל העובר, ניתן להכניס חמישה או שישה עוברים לצלחת פטרי.</li>
		<li>מניחים את צלחות הפטרי האטומות עם העוברים בתא גידול מתחת ל-16 שעות פוטופריוד בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס ו-70% לחות יחסית. אם מתרחש זיהום, מיד תת-תרבות העוברים הלא מזוהמים לצלחת חדשה עם אותו מדיום.</li>
		<li>הקוטילדונים יתחילו להתרחב לאחר 4 ימים ויהפכו לירוקים תוך 10 ימים (איור 7B). בשלב זה, במידת הצורך, לבצע subculturing לתוך לוחות חדשים המכילים את אותו מדיום כדי לאפשר הרחבת רקמות. השורשים יתחילו להופיע ב-14 יום (איור 7C), וב-21 יום יהיו לצמחים שורשים מורחבים ולקוטילדונים (איור 7D). הערה: מדיום התרבית המשמש בפרוטוקול מתאים להבחנה ליורה ושורשים ללא ויסות גדילה משלימים.</li>
		<li>בשלב זה, הסירו את השתילים מכלי הפטרי ושטפו בעדינות את המדיה מהשורשים במי ברז (איור 8). הניחו את הצמחים במיכל פלסטיק (14 ס"מ על 9 ס"מ על 4 ס"מ) וכסו את השורשים במגבות נייר רטובות (איור 9A). מכסים את המיכל ומרחים מחדש את מגבות הנייר לפי הצורך.</li>
		<li>שומרים את המכלים בטמפרטורת החדר (25-28 מעלות צלזיוס) ועם פוטופריוד של 16 שעות. שלב זה יאקלם את הצמחים. לאחר התאקלמות במשך 7-10 ימים במיכל, השתילים יהיו באורך של כ -3-4 אינץ '. במהלך תקופה זו, יש להרטיב מחדש את מגבות הנייר לפי הצורך.</li>
		<li>מעבירים את השתילים ל-50 תאי התחלה (25 ס"מ רוחב X 50 ס"מ אורך) מתוקנים עם דשן כפי שתואר קודם לכן ומעבירים אותם לחממה (איור 9B). אין שתילים מעל המים כדי למנוע ריקבון; יש להוסיף כ-10-20 מ"ל לתא לפי הצורך.</li>
		<li>בשלב השני עד השלישי של עלי אמת, השתיל את השתילים בעציצים בקוטר 30 ס"מ מלאים בחומר עציצים מתוקן בדשן כפי שתואר קודם לכן (איור 10A). ספקו תמיכה לצמחי גפנים ובצעו הכלאה מבוקרת כאשר הצמחים מתחילים לפרוח, כפי שתואר קודם לכן (איור 10B).</li>
		<li>תחזקו את הצמחים בחממה בטמפרטורות שבין 22-28 מעלות צלזיוס תחת משטר אור טבעי. להעריך את הצמחים עבור תכונות פירות וזרעים.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Paris, H. S. Genetic Resources of Pumpkins and Squash, Cucurbita spp. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aParis%2C+HS+%22Genetics+and+Genomics+of+Cucurbitaceae.+Plant+Genetics+and+Genomics%3A+Crops+and+Models%22">Genetics and Genomics of Cucurbitaceae. Plant Genetics and Genomics: Crops and Models</a>. Grumet, R., Katzir, N., Garcia-Mas, J. 20, (2016).</li>
<li>Gong, L., Stift, G., Kofler, R., Pachner, M., Lelley, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microsatellites+for+the+genus+Cucurbita+and+an+SSR-based+genetic+linkage+map+of+Cucurbita+pepo+L%5BTitle%5D)+AND+%22Theoretical+and+Applied+Genetics%22%5BJournal%5D)">Microsatellites for the genus Cucurbita and an SSR-based genetic linkage map of Cucurbita pepo L.</a> Theoretical and Applied Genetics. 117 (1), 37-48 (2008).</li>
<li>Paris, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+genetic+relationships+in+Cucurbita+pepo+%28Cucurbitaceae%29+using+DNA+markers%5BTitle%5D)+AND+%22Theoretical+and+Applied+Genetics%22%5BJournal%5D)">Assessment of genetic relationships in Cucurbita pepo (Cucurbitaceae) using DNA markers.</a> Theoretical and Applied Genetics. 106 (6), 971-978 (2003).</li>
<li>Robinson, R. W., Decker-Walters, D. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRobinson%2C+RW+%22Cucurbits%22">Cucurbits</a>. , CAB International. Wallingford, Oxon, UK. (1997).</li>
<li>Teppner, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cucurbita+pepo+%28Cucurbitaceae%29-history%2C+seed+coat+types%2C+thin+coated+seeds+and+their+genetics%5BTitle%5D)+AND+%22Phyton+%28Horn%29%22%5BJournal%5D)">Cucurbita pepo (Cucurbitaceae)-history, seed coat types, thin coated seeds and their genetics.</a> Phyton (Horn). 40 (1), 1-42 (2000).</li>
<li>Hazra, P., Mandal, A. K., Dutta, A. K., Ram, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breeding+pumpkin+%28Cucurbita+moschata+Duch.+Ex+Poir.%29+for+fruit+yield+and+other+characters%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Plant+Breeding%22%5BJournal%5D)">Breeding pumpkin (Cucurbita moschata Duch. Ex Poir.) for fruit yield and other characters.</a> International Journal of Plant Breeding. 1 (1), 51-64 (2007).</li>
<li>Paris, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((History+of+the+cultivar-groups+of+Cucurbita+pepo%5BTitle%5D)+AND+%22Horticultural+Reviews-Westport+Then+New+York%22%5BJournal%5D)">History of the cultivar-groups of Cucurbita pepo.</a> Horticultural Reviews-Westport Then New York. 25, 71(2001).</li>
<li>Baggett, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attempts+to+cross+Cucurbita+moschata+%28Duch.%29+Poir.+%27Butternut+and+C.+pepo+L.+%27Delicata%27%5BTitle%5D)+AND+%22The+Cucurbit+Genetics+Cooperative%22%5BJournal%5D)">Attempts to cross Cucurbita moschata (Duch.) Poir. 'Butternut and C. pepo L. 'Delicata'.</a> The Cucurbit Genetics Cooperative. 2, 32-34 (1979).</li>
<li>Erwin, A. T., Haber, E. S. Species and Varietal Crosses in Cucurbits. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aErwin%2C+AT+%22Agricultural+Experiment+Station%2C+Iowa+State+College+of+Agriculture+and+Mechanical+Arts%22">Agricultural Experiment Station, Iowa State College of Agriculture and Mechanical Arts</a>. , (1929).</li>
<li>Whitaker, T. W., Bohn, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+taxonomy%2C+genetics%2C+production+and+uses+of+the+cultivated+species+of+Cucurbita%5BTitle%5D)+AND+%22Economic+Botany%22%5BJournal%5D)">The taxonomy, genetics, production and uses of the cultivated species of Cucurbita.</a> Economic Botany. 4 (1), 52-81 (1950).</li>
<li>Bemis, W. P., Nelson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interspecific+hybridization+within+the+genus+Cucurbita+I%2C+fruit+set%2C+seed+and+embryo+development%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Arizona+Academy+of+Science%22%5BJournal%5D)">Interspecific hybridization within the genus Cucurbita I, fruit set, seed and embryo development.</a> Journal of the Arizona Academy of Science. 2 (3), 104-107 (1963).</li>
<li>Washek, R. L., Munger, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hybridization+of+Cucurbita+pepo+with+disease+resistant+Cucurbita+species%5BTitle%5D)+AND+%22The+Cucurbit+Genetics+Cooperative%22%5BJournal%5D)">Hybridization of Cucurbita pepo with disease resistant Cucurbita species.</a> The Cucurbit Genetics Cooperative. 6, 92(1983).</li>
<li>Davoodi, S., Olfati, J. A., Hamidoghli, Y., Sabouri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+heterosis+in+Cucurbita+moschata+and+Cucurbita+pepo+interspecific+hybrids%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Vegetable+Science%22%5BJournal%5D)">Standard heterosis in Cucurbita moschata and Cucurbita pepo interspecific hybrids.</a> International Journal of Vegetable Science. 22 (4), 383-388 (2016).</li>
<li>De Oliveira, A. C. B., Maluf, W. R., Pinto, J. E. B., Azevedo, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistance+to+papaya+ringspot+virus+in+summer+squash+Cucurbita+pepo+L.+introgressed+from+an+interspecific+C.+pepo%C3%97+C.+moschata+cross%5BTitle%5D)+AND+%22Euphytica%22%5BJournal%5D)">Resistance to papaya ringspot virus in summer squash Cucurbita pepo L. introgressed from an interspecific C. pepo× C. moschata cross.</a> Euphytica. 132 (2), 211-215 (2003).</li>
<li>Rakha, M. T., Metwally, E. I., Moustafa, S. A., Etman, A. A., Dewir, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+Cucurbita+interspecific+hybrids+through+cross+pollination+and+embryo+rescue+technique%5BTitle%5D)+AND+%22World+Applied+Sciences+Journal%22%5BJournal%5D)">Production of Cucurbita interspecific hybrids through cross pollination and embryo rescue technique.</a> World Applied Sciences Journal. 20 (10), 1366-1370 (2012).</li>
<li>Zhang, Q. I., Yu, E., Medina, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+advanced+interspecific-bridge+lines+among+Cucurbita+pepo%2C+C.+maxima%2C+and+C.+moschata%5BTitle%5D)+AND+%22HortScience%22%5BJournal%5D)">Development of advanced interspecific-bridge lines among Cucurbita pepo, C. maxima, and C. moschata.</a> HortScience. 47 (4), 452-458 (2012).</li>
<li>Brown, R. N., Bolanos-Herrera, A., Myers, J. R., Miller Jahn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inheritance+of+resistance+to+four+cucurbit+viruses+in+Cucurbita+moschata%5BTitle%5D)+AND+%22Euphytica%22%5BJournal%5D)">Inheritance of resistance to four cucurbit viruses in Cucurbita moschata.</a> Euphytica. 129 (3), 253-258 (2003).</li>
<li>Pachner, M., Paris, H. S., Winkler, J., Lelley, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+and+marker-assisted+pyramiding+of+genes+for+resistance+to+zucchini+yellow+mosaic+virus+in+oilseed+pumpkin+%28Cucurbita+pepo%29%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Breeding%22%5BJournal%5D)">Phenotypic and marker-assisted pyramiding of genes for resistance to zucchini yellow mosaic virus in oilseed pumpkin (Cucurbita pepo).</a> Plant Breeding. 134 (1), 121-128 (2015).</li>
<li>Hayase, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cucurbita-crosses.+XV.+Flower+pollination+at+4+am+in+the+production+of+C.+pepo+x+C.+moschata+F1+hybrids%5BTitle%5D)+AND+%22Japanese+Journal+of+Breeding%22%5BJournal%5D)">Cucurbita-crosses. XV. Flower pollination at 4 am in the production of C. pepo x C. moschata F1 hybrids.</a> Japanese Journal of Breeding. 13 (2), 76-82 (1963).</li>
<li>Reed, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryo+rescue%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+development+and+biotechnology%22%5BJournal%5D)">Embryo rescue.</a> Plant development and biotechnology. , 235-239 (2004).</li>
<li>Sharma, D. R., Kaur, R., Kumar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryo+rescue+in+plants-a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Euphytica%22%5BJournal%5D)">Embryo rescue in plants-a review.</a> Euphytica. 89 (3), 325-337 (1996).</li>
<li>Wall, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interspecific+hybrids+of+Cucurbita+obtained+by+embryo+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+American+Society+of+Horticultural+Science%22%5BJournal%5D)">Interspecific hybrids of Cucurbita obtained by embryo culture.</a> Proceedings of the American Society of Horticultural Science. 63, 427-430 (1954).</li>
<li>Metwally, E. I., Haroun, S. A., El-Fadly, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interspecific+cross+between+Cucurbita+pepo+L.+and+Cucurbita+martinezii+through+in+vitro+embryo+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Euphytica%22%5BJournal%5D)">Interspecific cross between Cucurbita pepo L. and Cucurbita martinezii through in vitro embryo culture.</a> Euphytica. 90 (1), 1-7 (1996).</li>
<li>Sisko, M., Ivancic, A., Bohanec, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+size+analysis+in+the+genus+Cucurbita+and+its+use+for+determination+of+interspecific+hybrids+obtained+using+the+embryo-rescue+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Science%22%5BJournal%5D)">Genome size analysis in the genus Cucurbita and its use for determination of interspecific hybrids obtained using the embryo-rescue technique.</a> Plant Science. 165 (3), 663-669 (2003).</li>
<li>Giancaspro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+an+in+vitro+embryo+rescue+protocol+for+breeding+seedless+table+grapes+%28Vitis+vinifera+L.%29+in+Italy%5BTitle%5D)+AND+%22Horticulturae%22%5BJournal%5D)">Optimization of an in vitro embryo rescue protocol for breeding seedless table grapes (Vitis vinifera L.) in Italy.</a> Horticulturae. 8 (2), 121(2022).</li>
<li>Warchol, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+genotype%2C+media+composition%2C+pH+and+sugar+concentrations+on+oat+%28Avena+sativa+L.%29+doubled+haploid+production+through+oat+x+maize+crosses%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiologiae+Plantarum%22%5BJournal%5D)">The effect of genotype, media composition, pH and sugar concentrations on oat (Avena sativa L.) doubled haploid production through oat x maize crosses.</a> Acta Physiologiae Plantarum. 40 (5), 1-10 (2018).</li>
<li>Nepi, M., Pacini, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pollination%2C+pollen+viability+and+pistil+receptivity+in+Cucurbita+pepo%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Botany%22%5BJournal%5D)">Pollination, pollen viability and pistil receptivity in Cucurbita pepo.</a> Annals of Botany. 72 (6), 527-536 (1993).</li>
<li>Harvey, W. J., Grant, D. G., Lammerink, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+and+sensory+changes+during+development+and+storage+of+buttercup+squash%5BTitle%5D)+AND+%22New+Zealand+Journal+of+Crop+and+Horticultural+Science%22%5BJournal%5D)">Physical and sensory changes during development and storage of buttercup squash.</a> New Zealand Journal of Crop and Horticultural Science. 25 (4), 341-351 (1997).</li>
<li>Moon, P., Meru, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryo+rescue+of+aged+Cucurbita+pepo+seeds+using+squash+rescue+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Horticultural+Science+and+Research%22%5BJournal%5D)">Embryo rescue of aged Cucurbita pepo seeds using squash rescue medium.</a> Journal of Horticultural Science and Research. 2 (1), 62-69 (2018).</li>
<li>Nuñez-Palenius, H. G., Ramírez-Malagón, R., Ochoa-Alejo, N. Muskmelon embryo rescue techniques using in vitro embryo culture. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNu%C3%B1ez-Palenius%2C+HG+%22Plant+Embryo+Culture%22">Plant Embryo Culture</a>. , Humana Press. 107-115 (2011).</li>
<li>Vining, K. J., Loy, J. B. Seed development and seed fill in hull-less seeded cultigens of pumpkin (Cucurbita pepo L). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVining%2C+KJ+%22Cucurbitaceae+98%3A+Evaluation+and+Enhancement+of+Cucurbit+Germplasm%22">Cucurbitaceae 98: Evaluation and Enhancement of Cucurbit Germplasm</a>. McCreight, J. M. , ASHS Press. Alexandria, VA. 64-69 (1998).</li>
<li>Vining, K. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Seed+development+in+hull-less-seeded+pumpkin+%28Cucurbita+pepo+L.%29%22">Seed development in hull-less-seeded pumpkin (Cucurbita pepo L.)</a>. , University of New Hampshire. L.), Durham, NH. M.S. Thesis (1999).</li>
</ol>

המחברים מצהירים על היעדר ניגוד עניינים.

ישנם שני צווארי בקבוק עיקריים להכלאה בין-מינית מוצלחת בין C. moschata ו- C. pepo: מחסום תאימות צולבת, הנקבע על ידי היענות גנוטיפית לייצור עוברים היברידיים, ומחסומים לאחר ההפריה, המעכבים את התפתחותם של עוברים היברידיים לזרעים רגילים. כפי שדווח בעבר על דלעת, בדיקת התאימות הצולבת במחקר הנוכחי גילתה כי רוב הפרי התפתח באופן חלקי, כאשר רוב הזרעים אינם ניתנים להשגה16. לגנוטיפ ההורי יש השפעה ניכרת על התאימות של הכלאה בין-מינית בין C. moschata ו- C. pepo. מבין 24 צירופי ...

קוקורביטה (שם מדעי: Cucurbita; 2n = 40) הוא סוג מגוון מאוד במשפחת ה-Cucurbitaceae, הכולל 27 מינים שונים, מתוכם חמישה מבויתים1. מבין אלה, Cucurbita moschata, C. pepo, ו- C. maxima הם החשובים ביותר מבחינה כלכלית בעולם. בארה"ב, C. moschata ו- C. pepo הם שני המינים החשובים ביותר בייצור החקלאי. C. pepo מורכב מארבעה תת-מינים (ovifera, pepo, fraternal ו-gumala) המכילים קבוצות דלעת בקיץ ובחורף של נוכלים, סטרייטנק, בלוט, צדפות, קוקוזל, מח ירקות, קישואים ודלעת 2,3,4,5. C. moschata מורכב בעיקר מסוגי שוק דלעת חורף כולל דלורית, דיקינסון וקבוצת גבינה1. שני המינים מגוונים מבחינה מורפולוגית ופנוטיפית, כאשר C. pepo נחשב לתנובה שלו, לאוזניים, להרגל גידול השיחים ולתכונות פרי מגוונות הכוללות צורת פרי, גודל פרי, צבע בשר ותבנית קליפה. מאידך גיסא, C. moschata מוערך על הסתגלותו לחום ולחות, כמו גם עמידות למחלות ומזיקים 6,7. הכלאה בין-מינית בין C. moschata ו- C. pepo היא לא רק אסטרטגיה חשובה לאינטרוגרסיה של תכונות רצויות בין שני המינים, אלא גם מאפשרת את הרחבת הבסיס הגנטי בתוכניות רבייה 7,8.
הצלבות מוקדמות בין C. moschata ו- C. pepo נעשו כדי לקבוע את ההתאמה שלהם ו / או מחסומים טקסונומיים 9,10,11, בעוד שמחקרים מאוחרים יותר התמקדו בעיקר בהעברת תכונות רצויות12,13,14. הכלאה בין-מינית בין שני המינים התמקדה בהעברת תכונות חדשות כגון הרגל גידול של שיח או שיח למחצה ושיפור התשואה מ- C. pepo יחד עם עמידות למחלות, הסתגלות ללחץ אביוטי ומרץ מוגבר מ- C. moschata14,15,16. לדוגמה, הצלבות ספציפיות בין C. pepo (P5) ו- C. moschata (MO3) הביאו לתפוקת פירות גבוהה יותר 13, בעוד ש- C. moschata accessions (מקומי ניגרי ומנין) היו בשימוש נרחב כמקור העיקרי לעמידות בפני נגיפי פוטיוירוס בתרבויות C. pepo מעובדות 17,18. 
מחקרים קודמים הראו כי הכלאה בין C. moschata ו- C. pepo אפשרית אך קשה 8,15. הצלבים הבין-ספציפיים עלולים לגרום לכך שלא יהיו פירות (הפלה), פירות פרתנוקרפיים נטולי זרעים בני קיימא (זרעים ריקים), פירות ללא זרעים שבהם העוברים הלא בוגרים לא מצליחים להתפתח (stenospermocarpy), או פירות עם מעט עוברים לא בשלים שניתן להציל לצמחים בוגרים באמצעות הצלת עוברים15,16. לדוגמה, לא הושגו זרעים בני קיימא על ידי חציית C. pepo (מלכת השולחן, האם) עם C. moschata (גבינה גדולה, אבהית), עם זאת, הצלב ההדדי הניב 57 זרעים בני קיימא מתוך 134 האבקה9. הייאז השיגה זרעים בני קיימא מצלבי C. moschata ו- C. pepo רק כאשר צלבים נעשו בשעה 04:00 בבוקר באמצעות אבקה שאוחסנה בטמפרטורה של 10 מעלות צלזיוס במשך הלילה19. באגט חצה שמונה זנים שונים של C. moschata עם C. pepo (דליקטה) ודיווח כי מתוך 103 האבקה כוללת, התקבלו 83 פירות שנראו תקינים, אך אף אחד מהם לא הכיל זרעים בני קיימא8. בהצלבה בין C. pepo (S179) ו- C. moschata (NK), Zhang et al. השיגו 15 פירות עם 2,994 זרעים, אך רק 12 מהם היו בני קיימא בעוד שהשאר הציגו התפתחות בסיסית בלבד. מחקרים אלה מצביעים על כך שלמרות שמעבר בין-ספציפי בין C. moschata ל- C. pepo מועיל מאוד, השגת פירות עם זרעים בני קיימא מהצלבים דורשת16.
הצלת עוברים הוצעה כשיטה מתאימה להתגבר על בעיות הנובעות מהפלה מוקדמת או מעוברים שפותחו בצורה גרועה והיא אחת הטכניקות המוקדמות והמוצלחות ביותר בתרבית במבחנה להתחדשות של עוברים לא בשלים16,20. הצלת עוברים כוללת תרבית מבחנה של עוברים לא מפותחים/לא בשלים ולאחר מכן העברה למדיום מזין סטרילי כדי להקל על התאוששות השתילים ובסופו של דבר צמחים בוגרים21. למרות שהצלת עוברים משמשת בדרך כלל בגידול סקווש, חסר תיאור מפורט של המתודולוגיה המתאימה שתאפשר את יישומה השגרתי. שימוש בטכניקת הצלת עוברים כדי להתגבר על מחסומי הכלאה בין-ספציפיים במיני Cucurbita דווח כבר בשנת 195422. עם זאת, ההצלחה של הצלת עוברים במחקרים המוקדמים לא דווחה או נמוכה מאוד. Metwally et al. דיווחו על שיעור הצלחה של 10% (התחדשות לצמחים בוגרים) בקרב 100 עוברים היברידיים בין-ספציפיים שניצלו מהכלאה בין C. pepo ו- C. martinezii23. Sisko et al. דיווחו על שיעור הצלחה משתנה של התחדשות עוברים בקרב עוברים שהתקבלו משילובים צולבים שונים: שיעור ההתחדשות של בני כלאיים שהושגו על ידי חציית C. maxima (Bos. Max) ו- C. pepo (הבהלה לזהב) היה 15.5%, עבור C. pepo (קישואים) ו- C. moschata (הוקאידו) היה 20%, ואילו עבור C. pepo (הבהלה לזהב) ו- C. moschata (דולגה) הוא היה 37.5%24. בנוסף לגנוטיפ, המדיה ותנאי התרבית במבחנה הם גורמים חשובים להצלחת הטכניקה25,26. במחקר הנוכחי נבדקו שילובי צלב שונים בין C. moschata ו- C. pepo, ופותחה מתודולוגיה פשוטה לשימוש בטכניקת הצלת העוברים בסקווש. פיתוח טכניקת הצלת עוברים פשוטה וקלה לשחזור תאפשר הכלאה בין-מינית ושיפור הנבטים בתוכניות גידול סקווש.

<table><tbody><tr><td>אמפיצילין</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>BP1760-5</td><td></td></tr><tr><td>אוטוקלאב</td><td>סטריס</td><td>AMSCO LAB 250</td><td></td></tr><tr><td>איזון</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>צפוטקסים</td><td>סיגמא אלפריך</td><td>C 7039</td><td></td></tr><tr><td>צינורות צנטריפוגה (1.5 מ"ל)</td><td>סיגמא אלפריך</td><td>T9661</td><td></td></tr><tr><td>חומר ניקוי</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>אתנול, 95%</td><td>מלקחיים של Decon Labs</td><td>2805HC</td><td></td></tr><tr><td></td><td>VWR</td><td>82027-408</td><td></td></tr><tr><td>מסטיק גלאן</td><td>Caisson Laboratories</td><td>G024</td><td></td></tr><tr><td>תא גידול או מדף</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מואר מכסה מנוע למינרי / ארון בטיחות ביולוגית</td><td>The Baker Company, Inc</td><td>Edgegard</td><td></td></tr><tr><td>נייר דבק Uline</td><td></td><td>S-11735</td><td></td></tr><tr><td>מדיה בקבוק</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Murashige & Skoog Medium Research</td><td>Products International</td><td>M10200</td><td></td></tr><tr><td>NPK דשן (20-20-20)</td><td>BWI Companies, Inc</td><td>&nbsp; PR200</td><td></td></tr><tr><td>Osmocote Plus דשן</td><td>BWI Companie,s Inc</td><td>OS90590</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm M</td><td>Sigma Alfrich</td><td>P7793</td><td></td></tr><tr><td>צלחת פטרי (60 x 15 מ"מ)</td><td>USA Scientific, Inc</td><td>8609-0160</td><td></td></tr><tr><td>עציצים לצמחים</td><td>BWI Companies, Inc</td><td>NP4000BXL</td><td></td></tr><tr><td>מיכלי מזון מפלסטיק, בשימוש חוזר</td><td>אוסקר מאייר</td><td>4470003330</td><td></td></tr><tr><td>תגי תלייה מפלסטיק</td> תערובת עציצים <td>של אמזון</td><td>B07QTZRY6T</td><td></td></tr><tr><td>ג'ולי</td><td>גארדנר</td><td>Pro-Line C/B</td><td></td></tr><tr><td>מגשי התחלה שתילים BWI</td><td>Companies Inc</td><td>מסנן</td> מזרק GPPF128S4 <td></td></tr><tr><td>(0.22 אום)</td> תמיכה בסבכה <td>ExtraGene</td><td>B25CA022-S</td><td></td></tr><tr><td>הום</td><td>דיפו</td><td>&nbsp; 2A060006</td><td></td></tr><tr><td>אמבטיית</td><td></td><td></td><td></td> מים</tr></tbody></table>

פרוטוקול הצלת עוברים להכלאה בין-מינית בסקווש

Embryo Rescue Protocol for Interspecific Hybridization in Squash

הכלאה בין-מינית בגידולי קוקורביטה (סקווש) רצויה להרחבת השונות הגנטית ולאינטרוגרסיה של אללים שימושיים. עוברים לא בשלים הנוצרים מצלבים רחבים אלה חייבים להתחדש באמצעות טכניקות מתאימות להצלת עוברים. למרות שטכניקה זו מבוססת היטב עבור גידולים רבים, חסר תיאור מפורט של המתודולוגיה המתאימה לדלעת שתאפשר את יישומה השגרתי. כאן אנו מתארים פרוטוקול הצלת עוברים שימושי להכלאה בין-מינית של C. pepo ו- C. moschata. כדי לזהות שילובים בני קיימא להצלת עוברים, בוצעו 24 צלבים בין-ספציפיים. סט פירות התקבל מעשרים ושניים צלבים, מה שמעיד על שיעור הצלחה של 92%. עם זאת, רוב הפירות שהתקבלו היו parthenocarpic, עם זרעים נטולי עוברים (זרעים ריקים). רק שילוב צלב אחד הכיל עוברים לא בשלים שניתן היה לחדשם באמצעות אמצעי גידול צמחיים בסיסיים. בסך הכל חולצו 10 עוברים מפרי F1 הבין-ספציפי, ושיעור ההצלחה של הצלת עוברים היה 80%. פרוטוקול חילוץ העוברים שפותח כאן יהיה שימושי להכלאה בין-מינית בתוכניות גידול סקווש.

כדאיות סט פירות וזרעים נערכה בדיקה ראשונית לקביעת כדאיות סט הפירות והזרעים במגוון שילובים צולבים. בסך הכל נבחרו 15 גנוטיפים של דלעת, ארבעה C. pepo ו-11 C. moschata, (טבלה 1). מתוך 24 צירופי הצלב הבין-ספציפיים שנוסו, הושגה ערכת פירות עבור 22 (טבלה 2), המייצגת הצלחה כוללת של &gt;92% בערכת הפירות. לא הושגו פירות בוגרים על ידי חציית O ו-M ו-E ו-J, בעוד שהמספר הגבוה ביותר של פירות (n = 6) הושגו על ידי חציית F ו-J (טבלה 2). מספר הפרחים שהו...

המאמר מתאר פרוטוקול חילוץ עוברים להתחדשות של עוברים לא בשלים הנגזר מההכלאה הבין-מינית של Cucurbita pepo ו- Cucurbita moschata. ניתן לשכפל את הפרוטוקול בקלות והוא יהווה משאב חשוב לתוכניות גידול סקווש.

Interspecific hybridization in Cucurbita crops (squash) is desirable for widening genetic variation and for the introgression of useful alleles. Immature ...

פרוטוקול הצלת העוברים הוא חובה להתחדשות של עוברים לא בשלים שמקורם בהצלבות בין-מיניות בין מינים שונים של Cucurbita. הוא משמש בדרך כלל להצלבות בין Cucurbita moschata ו Cucurbita pepo. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא הפשטות שלה.הפרוטוקול משתמש רק במדיית טרשת נפוצה עם אנטיביוטיקה. לפיכך, ניתן לשכפל אותו בקלות על ידי כל מעבדה. ניתן יהיה לשנות טכניקה זו כדי לחקור מחסומים שונים להכלאה בין-מינית או בין-גנרית.תשומת לב לפרטים במהלך כל שלב תועיל לתוצאה מוצלחת. התחילו בשתילת צמחי Cucurbita על ידי מילוי 50 תאים מתחילים שטוחים של 25 על 50 ס"מ באמצעות מדיום עציצים בתוספת חנקן מלא, זרחן ודשן אשלגן, המכיל 1.38 גרם לקילוגרם של חנקן, זרחן ואשלגן כל אחד. לאחר מכן, זורעים את הזרעים לעומק השווה לאורכם ומכסים אותם במדיום העציצים.להשקות את הדירות מבלי ליצור מים עומדים ולשמור על המדיה לחה על ידי השקייתן פעם ביום. בסוף שלב העלה האמיתי השני, השתלו את השתילים בעציצים בקוטר 30 ס"מ בתוספת שלוש כפות דשן שלם לכל סיר. לאחר כל שבעה ימים, להפרות כל סיר עם 500 מיליליטר של דשן נוזלי המכיל 20, 20, 20 חנקן, זרחן ואשלגן בגרם אחד הוסיף לגלון של מים.לשמור על צמחים בחממה בטמפרטורות שבין 22 ל 28 מעלות צלזיוס תחת משטר האור הטבעי. עבור גנוטיפים vining, לספק trellis תומך בחממה. בצעו הכלאה מבוקרת או האבקה ברגע שהצמחים מתחילים לפרוח בגיל שישה עד שמונה שבועות מהזריעה.בדקו את הפרחים שלא נפתחו בעלי גוון צהוב על עלי הכותרת, וזהו פרחים זכריים ופרחים נקביים של תרבויות Cucurbita pepo ו- Cucurbita moschata. כדי למנוע האבקה מקרית של חרקים, הדבק בעדינות את הפרח הסגור בחלקו העליון באמצעות סרט מיסוך. למחרת בבוקר, בצע את ההאבקה לפני 10:00 בבוקר על ידי הסרה עדינה של החלק העליון המודבק של הפרח הזכר והנקבה.הפרדת עלי הכותרת מהפרח הזכרי, והעברת האבקנים על ידי שפשוף עדין של הפתח על הסטיגמה של הפרח הנקבי. לאחר ההאבקה, סגרו מיד את הפרח הנקבי המואבק עם סרט מיסוך, והשתמשו בתג כדי לתעד את תאריך ההאבקה ולציין את ההורים האבהיים והאימהיים המשמשים בצלב. צלב מוצלח המסומן על ידי שחלה מורחבת יהווה פרי קטן תוך שבוע.קוטפים את הפרי לאחר 45 עד 55 ימי האבקה. הכינו ציר צ'פוטקסימה. סננו אותו דרך מסנן מזרק סטרילי בגודל 0.22 מיקרון.ולעשות 0.5 מיליליטר aliquots של 250 מיליגרם לכל מיליליטר cefotaxime לפני אחסון אותם במינוס 20 מעלות צלזיוס. באופן דומה, להכין מלאי אמפיצילין. מסננים אותו דרך מסנן מזרק סטרילי של 0.22 מיקרון ומכינים אליקוטים של מיליליטר אחד של 100 מיליגרם למיליליטר אמפיצילין לפני שמאחסנים אותם במינוס 20 מעלות צלזיוס.הכינו את Murashige ו-Skoog, או MS medium על ידי המסת 2.45 גרם של המדיום ב-500 מיליליטר מים מזוקקים בבקבוק של ליטר אחד. הוסיפו 1.5 גרם של מסטיק גלן למדיום MS וסובבו אותו בטמפרטורה של 121 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות. מצננים את המדיום על ידי הנחת הבקבוק באמבט מים בטמפרטורה של 50 מעלות צלזיוס.הפשירו את מלאי האנטיביוטיקה בתוך ארון הזרימה הלמינרית. מעבירים את הבקבוק הבינוני למכסה המנוע של הזרימה הלמינרית ומוסיפים 0.6 מיליליטר של מלאי cefotaxime ו-0.25 מיליליטר של מלאי אמפיצילין למדיום עם ערבוב נכון. יוצקים כשבעה מיליליטר של המדיום לתוך צלחת פטרי סטרילית סטרילית בגודל 60 על 15 מילימטרים.תנו למדיום להתמצק בצלחות הפטרי למשך כ-15 עד 20 דקות. סגרו את צלחות הפטרי בעטיפת איטום והכניסו אותן לקופסת אחסון בטמפרטורת החדר עד לשימוש נוסף. קוטפים את פרי הדלעת על ידי כריתתו מהגפן הראשית ומחטאים את הפרי על ידי שטיפת פני השטח שלו בכיור המעבדה באמצעות חומר ניקוי נוזלי כמו 0.3% כלורוקסילנול.שטפו את הפרי במי ברז רבים ויבשו אותו במגבות נייר נקיות לפני העברת הפרי לארון זרימת האוויר למינציה. יש לעקר את משטח הפרי בתוך הארון על ידי ריסוס 70% אתנול. חותכים את הפרי בסכין סטרילית ומוציאים את הזרעים.השתמש במלקחיים סטריליים או בידיים עם כפפות סטריליות כדי לפתוח באופן אספטי את שכבת הזרעים ולחשוף את העוברים הלא בשלים לפני הנחתם בצלחת פטרי המכילה MS Medium בתוספת אנטיביוטיקה. אטמו את לוחות הפטרי באמצעות סרט עטיפה והניחו אותם בתא גידול בעל טמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס, תקופת צילום של 16 שעות ולחות יחסית של 70%. במקרה של זיהום, מיד תת-תרבות העוברים הלא מזוהמים לתוך צלחת חדשה בעלת אותו מדיום.לאחר פיתוח שורשים לאחר 10 עד 14 יום, והקוטילדונים מפותחים לאחר 15 עד 21 יום, הוציאו את הצמחים מהכלים הפטריים, ושטפו בעדינות את המדיה הקיימת סביב השורשים באמצעות מי ברז. מניחים צמחים מנוקים במיכל פלסטיק בגודל 14 על 9 על 4 ס"מ ומכסים את השורשים במגבות נייר רטובות. מכסים את המיכל ומרטיבים מחדש את מגבות הנייר בעת הצורך.הקפידו על מיכלי הפלסטיק בטמפרטורה של 25 עד 28 מעלות צלזיוס, ובפרק זמן של 16 שעות כדי להתאקלם בצמחים תוך שמירה על מצב הלחות של מגבות נייר. לאחר 7 עד 10 ימים של התאקלמות, מעבירים את השתילים באורך שלושה עד ארבעה סנטימטרים ל-50 תאים המכילים תערובת עציצים מסחרית מתוקנת עם דשן ומעבירים אותם לחממה. יש להימנע מהשקיית יתר כדי למנוע ריקבון ולהוסיף כ-10 עד 20 מיליליטר מים לתא לפי הצורך.בשלב השני עד השלישי של העלים, משתילים את השתילים לעציצים בקוטר 25 ס"מ מלאים במדיום עציצים מתוקן בדשן ומבצעים הכלאה מבוקרת כאשר הצמחים מתחילים לפרוח. שמרו על הצמחים בחממה בטמפרטורה של 22 עד 28 מעלות צלזיוס תחת משטר האור הטבעי. ולהעריך את הצמחים עבור תכונות פירות וזרעים.ארבעה פפו קוקורביטה ו-11 קוקורביטה מושצ'טה נבחרו להכלאה בין-מינית. מתוך 24 צירופי צלב בין-ספציפיים שנוסו, הושגה ערכת פירות עבור 22 צלבים המייצגים יותר מ-92% הצלחה בערכת הפירות. ההצלבות בין Cucurbita moschata ו- Cucurbita pepo המערבות גנוטיפים O ו- M, וגנוטיפים E ו- J, לא הניבו פרי בוגר.ואילו ההכלאה בין Cucurbita moschata לבין Cucurbita pepo שכללה גנוטיפים F ו-J, הניבה שישה פירות. מספר הפרחים המואבקים עבור שילובי צלב שונים נע בין 1 ל -11. ושיעור ההצלחה של ההאבקה נע בין 0% ל-100% מתוך 44 פירות שהופקו מכל צירופי הצלב, רק פרי אחד מהכלאה בין Cucurbita moschata ו-Cucurbita pepo, גנוטיפים C ו-J יצרו עוברים לא בשלים שניתן להציל.לצורך פיתוחם של עוברים לא מפותחים אלה, הם גודלו בתרבית באמצעות המדיה להצלת עוברים, מה שהביא לאחוזי הצלחה של 80% בהצלת עוברים. שני ההליכים החשובים ביותר הם זיהוי הצלבות תואמות בין שני מינים כלומר, Cucurbita moschata ו- Cucurbita pepo, והתחדשות עוברים מוצלחת. מכיוון שטכניקת הצלת העוברים היא פשוטה וניתנת לשכפול בקלות, מגדלי סקווש ברחבי העולם יכולים להשתמש בטכניקה זו להצלת עוברים לא בשלים שמקורם בהצלבות בין-ספציפיות בין מיני Cucurbita שונים.

embryo-rescue-protocol-for-interspecific-hybridization-in-squash

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

סרט הווידאו הזה מדגים 2 צבעים הר שלם הכלאה באתרו, שיטה שבאמצעותה דפוס ביטוי במרחב ובזמן של 2 גנים שונים יכולים להיות דמיינו בעוברים אפרוח צעיר. שיטה זו הוצגה לראשונה על ידי דייוויד וילקינסון, דומינגוס אנריקה, פיל אינגהם ודוד איש-Horowicz.

הר שלם כפול באתרו הכלאה של עוברים צ&#39;יק מוקדם

הר שלמים הכלאה באתרו היא אחת הטכניקות הנפוצה ביותר בביולוגיה התפתחותית. כאן, אנו מציגים ברזולוציה גבוהה פלורסנט כפול פרוטוקול הכלאה באתרו לניתוח דפוס הביטוי המדויק של גן יחיד לקביעת חפיפה של תחומים הביטוי של שני גנים. אנו כוללים propidium גרעיני יודיד נגד כתם להדגיש ארגון רקמות.

דג הזברה שלמים הר ברזולוציה גבוהה פעמיים פלורסנט באתרו הכלאה

מדריך צעד אחר צעד כדי ליצור ממוקד עוברי דג הזברה chimeric על ידי השתלת בשלב blastula או gastrula.

יצירת עוברים דג הזברה chimeric על ידי השתלה

הגישה לניתוח הגירה גורלו הסופי של העופות לפסגה תאים עצביים שליו, חומוס עוברים chimeric מתואר. שיטה זו היא טכניקה פשוטה וישירה לאיתור תאים עצביים לפסגה במהלך הגירה והבחנה שקשה אחרת להבחין בתוך העובר גוזל unmanipulated.

ניתוח של הגירה קרסט בידול עצבית ועל ידי חוצה מינים להשתלות

אנו מדווחים שיטה יעילה ופשוטה לבודד את העוברים בשלבים מוקדמים של פיתוח...

בידוד יעיל ומהיר של עוברים משלבים מוקדמים<em&gt; Thaliana ארבידופסיס</em&gt; זרעים

דג הזברה, דגים טרופיים קטנים, הפכה לדגם פופולרי ללימוד תפקוד גן במהלך התפתחות מחלה וחוליות. הביטוי של הזמן ומרחב של גני המטרה יכול להיקבע על...

הר שלם ברזולוציה גבוהה<em&gt; באתרו</em&gt; הכלאה בתוך עוברי דג הזברה לחקר ביטוי גנים ותפקוד

המטרה היא להמחיש שניתן להשתמש בקלות במודל הקטניות Medicago truncatula כדי לחקור את הוויסות של עובריות צמחים מוקדמות כדי להשלים את מודל ה-Arabidopsis שאינו קטניות. מורפולוגיה של תרמילים קשורה לשלבי אמבריוגנזה זיגוטית ומסופק גם פרוטוקול לאיסוף עוברים באמצעות תרבית רקמה.

פרוטוקולים לקבלת Zygotic וסומטי עוברים ללימוד תקנה של פיתוח העובר מוקדם בקטניות הדגם<em&gt; Medicago truncatula</em

אנו מתארים הליך רב-יעד chromogenic כל הר הכלאה באתר (MC-תרצה) בעוברים שלמים תסיסנית מאפשרים זיהוי סימולטני וספציפי של שלושה דפוסי הפצת mRNA שונים על ידי מנוגד משקעים צבע.

רב-יעד Chromogenic כל הר<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה להשוואת תחומים ביטוי גנים ב<em&gt; דרוזופילה</em&gt; עוברים

פרוטוקול זה מאפשר הדמיה של ביטוי גנים בעובריים Astyanax cavefish. גישה זו פותחה במטרה למקסם את אות של ביטוי גנים, תוך מזעור צביעת הרקע לא ספציפית.

Wholemount ב באתרו הכלאה עבור עוברי Astyanax

מטרה זו של פרוטוקול זה היא לייצר כימאריק axo, עם פלואידי forelimbs נגזר מרקמת תורם Cas9-מוטוניים באמצעות שיטות השתלת רקמות עובריים.

הדור של כימאריק אקאוללס עם הגפיים הספאוזהות באמצעות השתלה עובריים

פרוטוקול זה מתאר כיצד להשיג תמונות על ידי שילוב הכלאה באתרו ואימונוהיסטוכימיה של חלקים עובריים של דגי זברה. הכלאה באתרו בוצעה לפני הקפאה, ואחריה הכתמת נוגדנים. כדאי לזהות את דפוסי הביטוי של שני גנים בדגי זברה אם יש מיעוט נוגדנים.

ב Situ הכלאה בשילוב עם אימונוהיסטוכימיה בעוברי דגי זברה Cryosectioned

למדו פרוטוקול הצלת עוברים להכלאה בין-מינית בסקווש בין Cucurbita pepo ל-Cucurbita moschata באמצעות מדיום MS ואנטיביוטיקה. שיטה זו פשוטה לשכפול ומאפשרת לגדל עוברים בוגרים מהכלאות בין-מיניות.

פרוטוקול הצלת עוברים להכלאה בין-מינית בסקווש

גלה סרטונים נוספים