Name: תוספי שומנים לאריכות ימים וניתוח שעתוק גנים ב - Caenorhabditis elegans (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-12-09T13:05:00.000+00:00
Duration: 7 min 25 s
Description: למד שתי שיטות תוספת שומנים ב-Caenorhabditis elegans לניתוח שעתוק גנים לאורך זמן. הפרוטוקול מאפשר חילוץ RNA ממספר קטן של תולעים או מרקמות מבודדות לחקר ביולוגיית שומנים ותהליכי הזדקנות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים ל- P. Svay על התמיכה בתחזוקה. עבודה זו נתמכה על ידי מענקי NIH R01AG045183 (MCW), R01AT009050 (MCW), R01AG062257 (MCW), DP1DK113644 (MCW), קרן מארס אוף דימס (MCW), קרן וולש (MCW), חוקר HHMI (M.C.W.) ועמית קדם-דוקטורט (M.S.) של NIH T32 ES027801. חלק מהזנים סופקו על ידי CGC, הממומן על ידי משרד תוכניות תשתית המחקר של NIH (P40 OD010440).

<ol><li>Fahy, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+of+the+LIPID+MAPS+comprehensive+classification+system+for+lipids+1%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Update of the LIPID MAPS comprehensive classification system for lipids 1.</a> Journal of Lipid Research. 50, 9-14 (2009).</li>
<li>Liebisch, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+on+LIPID+MAPS+classification%2C+nomenclature%2C+and+shorthand+notation+for+MS-derived+lipid+structures%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Update on LIPID MAPS classification, nomenclature, and shorthand notation for MS-derived lipid structures.</a> Journal of Lipid Research. 61 (12), 1539-1555 (2020).</li>
<li>Mutlu, A. S., Duffy, J., Wang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+metabolism+and+lipid+signals+in+aging+and+longevity%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Lipid metabolism and lipid signals in aging and longevity.</a> Developmental Cell. 56 (10), 1394-1407 (2021).</li>
<li>Kimura, T., Jennings, W., Epand, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+specific+lipid+species+in+the+cell+and+their+molecular+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Roles of specific lipid species in the cell and their molecular mechanism.</a> Progress in Lipid Research. 62, 75-92 (2016).</li>
<li>Duffy, J., Mutlu, A. S., Wang, M. C. Lipid Metabolism, Lipid Signalling and Longevity. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDuffy%2C+J+%22Ageing%3A+Lessons+from+C.+elegans.+Healthy+Ageing+and+Longevity%22">Ageing: Lessons from C. elegans. Healthy Ageing and Longevity</a>. Olsen, A., Gill, M. , Springer. Cham. 307-329 (2017).</li>
<li>Lesa, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+chain+poly-unsaturated+fatty+acids+are+required+for+efficient+neurotransmission+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Long chain poly-unsaturated fatty acids are required for efficient neurotransmission in C. elegans.</a> Journal of Cell Science. 116 (24), 4965-4975 (2003).</li>
<li>Folick, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysosomal+signaling+molecules+regulate+longevity+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Lysosomal signaling molecules regulate longevity in Caenorhabditis elegans.</a> Science. 347 (6217), 83-86 (2015).</li>
<li>Ramachandran, P. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysosomal+signaling+promotes+longevity+by+adjusting+mitochondrial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Lysosomal signaling promotes longevity by adjusting mitochondrial activity.</a> Developmental Cell. 48 (5), 685-696 (2019).</li>
<li>Byrne, E. F. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+basis+of+Smoothened+regulation+by+its+extracellular+domains%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structural basis of Smoothened regulation by its extracellular domains.</a> Nature. 535 (7613), 517-522 (2016).</li>
<li>Corsi, A. K., Wightman, B., Chalfie, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transparent+window+into+biology%3A+a+primer+on+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Transparent window into biology: a primer on Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 200 (2), 387-407 (2015).</li>
<li>Nigon, V. M., Félix, M. -A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((History+of+research+on+C.+elegans+and+other+free-living+nematodes+as+model+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22WormBook%22%5BJournal%5D)">History of research on C. elegans and other free-living nematodes as model organisms.</a> WormBook. , 1-84 (2017).</li>
<li>Kutscher, L. M., Shaham, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forward+and+reverse+mutagenesis+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22WormBook%22%5BJournal%5D)">Forward and reverse mutagenesis in C. elegans.</a> WormBook. , 1-26 (2014).</li>
<li>Brooks, K. K., Liang, B., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+bacterial+diet+on+fat+storage+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+ONE%22%5BJournal%5D)">The influence of bacterial diet on fat storage in C. elegans.</a> PloS ONE. 4 (10), 7545(2009).</li>
<li>Brock, T. J., Browse, J., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+desaturation+and+the+regulation+of+adiposity+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Fatty acid desaturation and the regulation of adiposity in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 176 (2), 865-875 (2007).</li>
<li>Brock, T. J., Browse, J., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+regulation+of+unsaturated+fatty+acid+composition+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic regulation of unsaturated fatty acid composition in C. elegans.</a> PloS Genetics. 2 (7), 108(2006).</li>
<li>Watts, J. L., Phillips, E., Griffing, K. R., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deficiencies+in+C20+poly-unsaturated+fatty+acids+cause+behavioral+and+developmental+defects+in+Caenorhabditis+elegans+fat-3+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Deficiencies in C20 poly-unsaturated fatty acids cause behavioral and developmental defects in Caenorhabditis elegans fat-3 mutants.</a> Genetics. 163 (2), 581-589 (2003).</li>
<li>Watts, J. L., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+dissection+of+poly-unsaturated+fatty+acid+synthesis+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Genetic dissection of poly-unsaturated fatty acid synthesis in Caenorhabditis elegans.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 99 (9), 5854-5859 (2002).</li>
<li>Watts, J. L., Browse, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Palmitoyl-CoA-specific+%CE%949+fatty+acid+desaturase+from+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Palmitoyl-CoA-specific Δ9 fatty acid desaturase from Caenorhabditis elegans.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 272 (1), 263-269 (2000).</li>
<li>Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fat+synthesis+and+adiposity+regulation+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Endocrinology+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Fat synthesis and adiposity regulation in Caenorhabditis elegans.</a> Trends in Endocrinology & Metabolism. 20 (2), 58-65 (2009).</li>
<li>Peyou-Ndi, M. M., Watts, J. L., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+an+animal+%CE%9412+fatty+acid+desaturase+gene+by+heterologous+expression+in+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Biochemistry+and+Biophysics%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of an animal Δ12 fatty acid desaturase gene by heterologous expression in Saccharomyces cerevisiae.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 376 (2), 399-408 (2000).</li>
<li>Spychalla, J. P., Kinney, A. J., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+an+animal+%CF%89-3+fatty+acid+desaturase+by+heterologous+expression+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Identification of an animal ω-3 fatty acid desaturase by heterologous expression in Arabidopsis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 94 (4), 1142-1147 (1997).</li>
<li>Watts, J. L., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+a+%CE%945-fatty+acid+desaturase+from+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Biochemistry+and+Biophysics%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of a Δ5-fatty acid desaturase from Caenorhabditis elegans.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 362 (1), 175-182 (1999).</li>
<li>Deline, M. L., Vrablik, T. L., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+supplementation+of+polyunsaturated+fatty+acids+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Dietary supplementation of polyunsaturated fatty acids in Caenorhabditis elegans.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50879(2013).</li>
<li>Estes, R. E., Lin, B., Khera, A., Davis, M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+metabolism+influence+on+neurodegenerative+disease+progression%3A+is+the+vehicle+as+important+as+the+cargo%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Molecular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Lipid metabolism influence on neurodegenerative disease progression: is the vehicle as important as the cargo.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 14, 788695(2021).</li>
<li>Sunshine, H., Iruela-Arispe, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+lipids+and+cell+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Lipidology%22%5BJournal%5D)">Membrane lipids and cell signaling.</a> Current Opinion in Lipidology. 28 (5), 408-413 (2017).</li>
<li>Han, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mono-unsaturated+fatty+acids+link+H3K4me3+modifiers+to+C.+elegans+lifespan%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mono-unsaturated fatty acids link H3K4me3 modifiers to C. elegans lifespan.</a> Nature. 544 (7649), 185-190 (2017).</li>
<li>O'Rourke, E. J., Kuballa, P., Xavier, R., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CF%89-6+Poly-unsaturated+fatty+acids+extend+life+span+through+the+activation+of+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">ω-6 Poly-unsaturated fatty acids extend life span through the activation of autophagy.</a> Genes & Development. 27 (4), 429-440 (2013).</li>
<li>Steinbaugh, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid-mediated+regulation+of+SKN-1%2FNrf+in+response+to+germ+cell+absence%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Lipid-mediated regulation of SKN-1/Nrf in response to germ cell absence.</a> eLife. 4, 07836(2015).</li>
<li>Blackwell, T. K., Steinbaugh, M. J., Hourihan, J. M., Ewald, C. Y., Isik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SKN-1%2FNrf%2C+stress+responses%2C+and+aging+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radical+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">SKN-1/Nrf, stress responses, and aging in Caenorhabditis elegans.</a> Free Radical Biology and Medicine. 88, 290-301 (2015).</li>
<li>Ezzili, C., Otrubova, K., Boger, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+amide+signaling+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorganic+%26+Medicinal+Chemistry+Letters%22%5BJournal%5D)">Fatty acid amide signaling molecules.</a> Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 20 (20), 5959-5968 (2010).</li>
<li>Qi, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%CF%89-3+fatty+acid+%CE%B1-linolenic+acid+extends+Caenorhabditis+elegans+lifespan+via+NHR-49%2FPPAR%CE%B1+and+oxidation+to+oxylipins%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">The ω-3 fatty acid α-linolenic acid extends Caenorhabditis elegans lifespan via NHR-49/PPARα and oxidation to oxylipins.</a> Aging Cell. 16 (5), 1125-1135 (2017).</li>
<li>Shemesh, N., Meshnik, L., Shpigel, N., Ben-Zvi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary-induced+signals+that+activate+the+gonadal+longevity+pathway+during+development+regulate+a+proteostasis+switch+in+Caenorhabditis+elegans+adulthood%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Molecular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Dietary-induced signals that activate the gonadal longevity pathway during development regulate a proteostasis switch in Caenorhabditis elegans adulthood.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 10, 254(2017).</li>
<li>Savini, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysosome+lipid+signalling+from+the+periphery+to+neurons+regulates+longevity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Lysosome lipid signalling from the periphery to neurons regulates longevity.</a> Nature Cell Biology. 24 (6), 906-916 (2022).</li>
<li>Stiernagle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintenance+of+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22WormBook%22%5BJournal%5D)">Maintenance of C. elegans.</a> WormBook. , (2006).</li>
<li>Wang, M. C., O'Rourke, E. J., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fat+metabolism+links+germline+stem+cells+and+longevity+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Fat metabolism links germline stem cells and longevity in C. elegans.</a> Science. 322 (5903), 957-960 (2008).</li>
<li>Jacob, T. C., Kaplan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+EGL-21+carboxypeptidase+E+facilitates+acetylcholine+release+at+Caenorhabditis+elegans+neuromuscular+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The EGL-21 carboxypeptidase E facilitates acetylcholine release at Caenorhabditis elegans neuromuscular junctions.</a> The Journal of Neuroscience. 23 (6), 2122-2130 (2003).</li>
<li>Kass, J., Jacob, T. C., Kim, P., Kaplan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+EGL-3+proprotein+convertase+regulates+mechanosensory+responses+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The EGL-3 proprotein convertase regulates mechanosensory responses of Caenorhabditis elegans.</a> The Journal of Neuroscience. 21 (23), 9265-9272 (2001).</li>
<li>Bael, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+spectrometric+evidence+for+neuropeptide-amidating+enzymes+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Mass spectrometric evidence for neuropeptide-amidating enzymes in Caenorhabditis elegans.</a> Journal of Biological Chemistry. 293 (16), 6052-6063 (2018).</li>
<li>Fu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+metabolic+fingerprinting+of+neutral+lipids+with+hyperspectral+stimulated+Raman+scattering+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">In vivo metabolic fingerprinting of neutral lipids with hyperspectral stimulated Raman scattering microscopy.</a> Journal of the American Chemical Society. 136 (24), 8820-8828 (2014).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי עניינים.

תוספי שומנים שימשו במחקרי הזדקנות כדי להבהיר את ההשפעה הישירה של מיני שומנים מסוימים על הזדקנות בריאה 6,7,23,26,27,31. עם זאת, הליך נטילת תוספי שומנים יכול להיות מאתגר, וכל חוסר עקביות בין הניסויים יכול לגרום לתוצאות שאינן ניתנות לשחזור. כאן, הפרוטוקול המפורט הראשון שלב אחר שלב מתועד כדי להנחות מדענים חדשים כדי למנוע את המלכו...

שומנים ליפידים הם מולקולות הידרופוביות או אמפיפתיות קטנות המסיסות בממיסים אורגניים אך אינן מסיסות במים 1,2. מולקולות ליפידים נפרדות נבדלות זו מזו בהתבסס על מספר הפחמן הכלול בשרשראות שלהן, מיקומן, מספר הקשרים הכפולים והמבנים הקשורים אליהן, כולל גליצרול או פוספטים. ליפידים ממלאים תפקידים מכריעים בתוך ובין תאים שונים כדי לווסת תפקודים אורגניזמיים, כולל דו-שכבתיות של ממברנות, אספקת אגירת אנרגיה ופעולה כמולקולות איתות 3,4.
ראשית, שומנים הם מרכיבים מבניים של ממברנות ביולוגיות, כולל קרום הפלזמה והממברנות התת-תאיות התוך-תאיות המפרידות בין התאים הפנימיים לבין הסביבה החוץ-תאית. שנית, שומנים הם הצורה העיקרית של אגירת אנרגיה בבעלי חוליות וחסרי חוליות. שומנים ניטרליים, כולל טריאצילגליצרולים, מאוחסנים לתקופה ממושכת ברקמות שונות, כולל ברקמת השומן. בנמטודה Caenorhabditis elegans, המעי הוא איבר אחסון השומן המטבולי העיקרי; תפקידו אינו מעורב רק בעיכול וספיגה של חומרים מזינים, אלא גם בתהליך של דטוקסיפיקציה, הדומה לפעילות של הפטוציטים של יונקים. רקמות אגירת שומן אחרות כוללות את הנבט, שבו שומנים חיוניים להתפתחות ביציות, ואת היפודרמיס, המורכב מתאי אפידרמיס דמויי עור 3,5. שלישית, בשנים האחרונות, עדויות נוספות מצביעות על כך שליפידים הם מולקולות איתות חזקות המעורבות באיתות תוך-תאי וחוץ-תאי על-ידי פעולה ישירה על מגוון קולטנים, כולל קולטנים מצומדים לחלבון G וקולטנים גרעיניים, או בעקיפין באמצעות אפנון נזילות הממברנה או שינויים לאחר תרגום 6,7,8,9 . מחקרים נוספים ימשיכו להבהיר את המנגנונים המולקולריים הבסיסיים של איתות שומנים בקידום אריכות ימים ותוחלת חיים.
אורגניזמי מודל חשובים כדי לענות על שאלות ביולוגיות ספציפיות שהן מורכבות מכדי לחקור בבני אדם. לדוגמה, התולעת העגולה C. elegans היא מודל מצוין לביצוע ניתוח גנטי לניתוח תהליכים ביולוגיים הרלוונטיים לתזונת האדם ולמחלות10. המסלולים המולקולריים המשומרים ביותר הרלוונטיים לפיזיולוגיה האנושית, לרקמות מורכבות, לדפוסי התנהגות ולשפע של כלים למניפולציה גנטית הופכים את C. elegans לאורגניזם מודל יוצא דופן11. לדוגמה, C. elegans מצוין בהעברת בדיקות גנטיות לזיהוי גנים ספציפיים לפנוטיפ, כמו גם בבדיקות גנטיות הפוכות ברחבי הגנום באמצעות הפרעת RNA12.
במעבדות, הנמטודות גדלות על צלחות אגר פטרי שנזרעו עם מדשאה של חיידקי Escherichia coli, המספקות מקרונוטריאנטים כגון חלבונים, פחמימות וחומצות שומן רוויות ובלתי רוויות כמקורות אנרגיה ואבני בניין, ומיקרונוטריאנטים כגון קו-פקטורים וויטמינים13. בדומה ליונקים, נמטודות מסנתזות מולקולות של חומצות שומן הן מחומצה פלמיטית והן מחומצה סטארית (מולקולות רוויות של 16 פחמן ו-18 פחמן, בהתאמה) שהן רוויות ברצף ומוארכות למגוון חומצות שומן חד-בלתי רוויות (MUFAs) וחומצות שומן רב-בלתי רוויות (PUFAs)14,15,16,17,18. באופן מעניין, C. elegans מסוגל לסינתזה דה נובו של כל חומצות השומן ואנזימי הליבה הנדרשים המעורבים בביוסינתזה של חומצות שומן, דה-סטורציה והתארכות, מה שמקל על הסינתזה של PUFAsארוכי שרשרת 19. בשונה ממינים אחרים של בעלי חיים, C. elegans יכולים להמיר חומצות שומן 18-פחמן ו-20-פחמן ω-6 לחומצות שומן ω-3 עם אנזימי ω-3 דסטוראז משלהם. בנוסף, לתולעים יש דסטוראז Δ12 המזרז היווצרות חומצה לינולאית (LA) מחומצה אולאית (OA, 18:1)20,21. רוב בעלי החיים או הצמחים חסרים גם Δ12 וגם ω-3 desaturases ולכן מסתמכים על צריכה תזונתית של ω-6 ו- ω-3 כדי להשיג את ה- PUFA שלהם, בעוד ש- C. elegans אינו זקוק לחומצות שומן תזונתיות22. מוטנטים מבודדים ללא אנזימי דסטוראז פונקציונליים שימשו לחקר התפקודים של חומצות שומן ספציפיות בתהליכים ביולוגיים שונים, כולל רבייה, גדילה, אריכות ימים והעברה עצבית. ניתן לטפל בהשפעה של חומצות שומן בודדות על מסלולים ביולוגיים ספציפיים באמצעות גישה גנטית ותוספי תזונה16,17,23. עד כה, מחקר השומנים התמקד באפיון גנים המעורבים בסינתזה של שומנים, פירוק, אחסון ופירוק במצבים נוירולוגיים והתפתחותיים24. עם זאת, התפקידים של שומנים בוויסות אריכות ימים רק מתחילים להתגלות.
איתות שומנים בוויסות תוחלת החיים ליפידים ממלאים תפקידים מכריעים בוויסות תוחלת החיים על ידי הפעלת מפלי איתות תאיים ברקמות ובסוגי תאים שונים. מחקרים אחרונים הדגישו את התפקידים הפעילים של שומנים בוויסות שעתוק ותקשורת בין תאים באמצעות חלבונים קושרי שומנים או זיהוי קולטני ממברנה25. בנוסף, תוספי שומנים תזונתיים מציעים כלי מצוין לנתח כיצד חילוף החומרים של שומנים משפיע על תוחלת החיים של C. elegans. הוכח כי MUFAs ו-PUFA שונים מקדמים אריכות ימים על-ידי הפעלת גורמי שעתוק26,27.
מודלים של אריכות ימים, כולל איתות אינסולין/IGF-1 ואבלציה של תאים מבשרי נבט, קשורים למסלול הביוסינתזה של MUFA, ותוספי MUFA, כולל חומצה אולאית, חומצה פלמיטולאית וציס-vaccenic, מספיקים כדי להאריך את תוחלת החיים של C. elegans 26. למרות שאפקט אריכות הימים שהוענק על ידי ממשל MUFA דורש חקירה נוספת, המנגנון הבסיסי צפוי להיות מתווך על ידי גורם השעתוק SKN-1/Nrf2, שהוא מפעיל מרכזי של תגובת עקה חמצונית ותקנה לאריכות ימים28,29. בקרב MUFAs, קבוצה מסוימת של אתנולמידים אציליים שומניים הנקראים N-acylethanolamines (NAEs) ממלאת תפקידים מכריעים במנגנונים שונים כולל דלקת, אלרגיות, למידה, זיכרון ומטבוליזם של אנרגיה30. במיוחד, מולקולת השומנים המכונה אולאויל-אתנול-אמיד (OEA) זוהתה כרגולטור חיובי של אריכות ימים על ידי קידום הטרנסלוקציה של החלבון קושר השומנים 8 (LBP-8) לתוך הגרעין כדי להפעיל את קולטני ההורמון הגרעיני NHR-49 ו- NHR-807. תוספת של האנלוגי OEA KDS-5104 מספיקה להארכת תוחלת החיים, וגורמת לביטוי של גנים המעורבים בתגובות עקה חמצונית ובחמצון β מיטוכונדריאלי 7,8.
יחד עם זאת, תפקידם של PUFAs נקשר גם לרגולציה של אריכות ימים. מתן PUFA ω-3 חומצת שומן α-חומצה לינולנית (ALA) מקדם אריכות ימים על ידי הפעלת NHR-49/PPARα, גורמי שעתוק SKN-1/NRF וגרימת חמצון β מיטוכונדריאלי31. באופן מעניין, מוצרים מחומצנים של ALA, המכונים אוקסיליפינים, מפעילים את SKN-1/NRF, מה שמרמז על כך שגם PUFA וגם הנגזרות החמצוניות שלהם יכולים להעניק יתרונות לאריכות ימים23. תוספת של חומצת שומן ω-6 חומצה ארכידונית (AA) וחומצה דיהומו-γ-לינולנית (DGLA) מאריכה את תוחלת החיים באמצעות הפעלת אוטופגיה, מקדמת בקרת איכות חלבון וכתוצאה מכך פוגעת בצברי חלבון מבוזבזים ורעילים27,32. לאחרונה, ויסות איתות תאי לא אוטונומי המתווך על ידי החלבון קושר השומנים 3 (LBP-3) ו-DGLA הוכח כחיוני לקידום אריכות ימים על-ידי שליחת אותות היקפיים לנוירונים, מה שמרמז על תפקיד ארוך טווח של מולקולות שומנים בתקשורת בין רקמות ברמות מערכתיות33. המחקר הנוכחי מדווח על כל שלב לביצוע תוספי שומנים עם חיידקים שנזרעו על צלחות או תרחיף חיידקים בתרבית נוזלית. מתודולוגיות אלה משמשות להערכת תוחלת חיים וניתוח שעתוק, תוך שימוש בתכולת גוף שלמה או ברקמות מנותקות שמקורן בכמה תולעים. ניתן להתאים את הטכניקות הבאות למגוון מחקרים תזונתיים ולהציע כלי תקף לנתח כיצד חילוף החומרים של השומנים משפיע על אריכות ימים והזדקנות בריאה.

<table><tbody><tr><td>1.5 מ"ל עלי</td><td>Genesee Scientific</td><td>93-165P15</td><td>לטחינת תולעים עם טריזול</td></tr><tr><td>אגרוז</td><td>סיגמא</td><td>A9639-500G</td><td></td></tr><tr><td>AmfiRivert cDNA סינתזה פלטינה מאסטר מיקס</td><td>GenDEPOT</td><td>R5600</td><td>לשעתוק הפוך מדגימות תולעת בתפזורת</td></tr><tr><td>יישומי Biosystems QuanStudio 3 בזמן אמת PCR</td><td>ThermoFisher</td><td>A28567</td><td>עבור qRT-PCR</td></tr><tr><td>Benchmark Scientific StripSpin 12 Microcentrifuge</td><td>Benchmark Scientific</td><td>C1248</td><td>עבור צינורות PCR מסתובבים</td></tr><tr><td>ברנסון 450 סוניפייר דיגיטלי, עם קצה 1/8 אינץ'</td><td>ברנסון אולטרסאונד תאגיד</td><td>100-132-888R</td><td></td></tr><tr><td>כלורופורם</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>C298-500</td><td></td></tr><tr><td>כולסטרול</td><td>סיגמא</td><td>C8503-25G</td><td></td></tr><tr><td>דימתיל סולפוקסיד (DMSO)</td> <td>סיגמא</td><td>D8418-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf 5424 R צנטריפוגה</td><td>Eppendorf</td><td>22620444R</td><td>למיצוי RNA</td></tr><tr><td>Eppendorf vapo protect mastercycler pro</td><td>Eppendorf</td><td>950030010</td><td>לשעתוק הפוך</td></tr><tr><td>אתנול, מוחלט (200 הוכחה)</td> <td>Fisher Scientific</td><td>BP2818-500</td><td></td></tr><tr><td>Greiner Bio-One CELLSTAR, 12 W צלחת</td><td>נטע סיינטיפיק</td><td>665180</td><td>12 בארות צלחות להאכלת ליקויד</td></tr><tr><td>צלחת פטרי גריינר ביו-וואן, Ps, 100 x 20 מ"מ</td><td>נטע סיינטיפיק</td><td>664161</td><td>לצלחות LB חיידקים ותולעים 10 ס"מ צלחות NGM</td></tr><tr><td>גריינר ביו-וואן צלחת פטרי, Ps, 60 x 15 מ"מ</td><td>נטע סיינטיפיק</td><td>628161</td><td>לתולעת 6 ס"מ צלחות NGM</td></tr><tr><td>Invitrogen מים ללא נוקלאז</td><td>ThermoFisher</td><td>AM9937</td><td></td></tr><tr><td>Isoproanol</td><td>Sigma</td><td>PX1835-2</td><td></td></tr><tr><td>Levamisole hydrochloride</td><td>VWR</td><td>SPCML1054</td><td></td></tr><tr><td>lipl-4Tg</td><td>MCW Lab</td><td>N/A</td><td>Transgenic C. elegans</td></tr><tr><td>lipl-4Tg; fat-3(wa22)</td><td>MCW Lab</td><td>N/A</td><td>טרנסגני C. elegans</td></tr><tr><td>Luria Broth</td><td>Base ThermoFisher</td><td>12795-084</td><td></td></tr><tr><td>מגנזיום גופרתי (MgSO4)</td><td>Sigma</td><td>M2643-500G</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp EnduraPlate אופטי 96-בארות צלחת תגובה מהירה וברורה עם ברקוד</td><td>ThermoFisher</td><td>4483354</td><td>96-well qPCR צלחת</td></tr><tr><td>MicroAmp סרט דבק אופטי</td><td>יישומי BioSystem</td><td>4311971</td><td>לאיטום צלחת qPCR עם 96 בארות</td></tr><tr><td>Milli-Q Advantage A10 מערכת טיהור מים</td><td>סיגמא</td><td>Z00Q0V0WW</td><td>מים נטולי יונים המשמשים לייצור כל הריאגנטים, כולל חיץ ומדיה תרבותית, אלא אם צוין כמים נטולי נוקלאז בפרוטוקול</td></tr><tr><td>N2</td><td>Caenorhabditis Genetics Center</td><td>N/A</td><td>C. ELEGANS WILD ISOLATE</td></tr><tr><td>NanoDrop ND-1000 ספקטרופוטומטר</td><td>ThermoFisher</td><td>N/A</td><td>למדידת ריכוז RNA</td></tr><tr><td>OP50</td><td>Caenorhabditis Genetics Center</td><td>N/A</td><td>חיידקים המשמשים כC. elegans מזון</td></tr><tr><td>פוטזיום פוספט דו-בסיסי טריהידראט (K2HPO4&middot; 3H2O)</td><td>Sigma</td><td>P5504-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Potasium phosphate monobasic (KH2PO4)</td><td>Sigma</td><td>P0662-2.5KG</td><td></td></tr><tr><td>Power SYBR ערכת תאים ירוקים ל-Ct</td><td>ThermoFisher</td><td>4402953</td><td>לשעתוק הפוך ו-qPCR מכמה תולעים או רקמת תולעת</td></tr><tr><td>Power SYBR Green Master Mix</td><td>ThermoFisher</td><td>4367659</td><td>עבור qPCR מדגימות תולעים בתפזורת</td></tr><tr><td>קוטל חיידקים טהור בהיר אולטרה אקונומיקה&nbsp;</td><td>KIK אינטרנשיונל LLC.</td><td>59647210143</td><td>אקונומיקה ביתית 6% להכנת ביצי תולעים</td></tr><tr><td>צלחת ספוט פיירקס עם תשעה שקעים</td><td>Sigma</td><td>CLS722085-18EA</td><td>זכוכית שעון לניתוח התולעים</td></tr><tr><td>RNaseZap RNase תמיסת טיהור</td><td>ThermoFisher</td><td>AM9780</td><td></td></tr><tr><td>נתרן קלוריד (NaCl)</td> <td>Sigma</td><td>S7653-1KG</td><td></td></tr><tr><td>נתרן הידרוקסיד (NaOH)</td> <td>Sigma</td><td>SX0590-3</td><td></td></tr><tr><td>נתרן פוספט דו-בסיסי הפטהידראט (Na2HPO4&middot; 7H2O)</td><td>Sigma</td><td>S9390-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Sorvall Legend Mach 1.6R צנטריפוגה</td><td>Thermo</td><td>7500-4337</td><td>לאיסוף חיידקים</td></tr><tr><td>Thermo Sorvall ST 8 צנטריפוגה</td><td>Thermo</td><td>7500-7200</td><td>להכנת ביצי תולעת</td></tr><tr><td>TRIzol Reagent</td><td>TheroFisher</td><td>15596018</td><td>מגיב מיצוי RNA</td></tr><tr><td>ערכת טורבו ללא DNA ThermoFisher</td><td></td><td>AM1907</td><td>להסרת זיהום DNA במיצוי RNA</td></tr><tr><td>Vortexer 59</td><td>Denville Scientific INV</td><td>S7030</td><td></td></tr><tr><td>VWR מערבלי גלולות חד פעמיים ומנוע אלחוטי</td><td>VWR</td><td>47747-370</td><td>לטחינת תולעים עם Trizol</td></tr><tr><td>VWR אנרגיה קינטית 26 ג'אול מיני צנטריפוגה C1413 V-115</td><td>VWR</td><td>N/A</td><td>לאיסוף תולעים. דגם שהופסק, דגם דומה זמין ב-VWR עם Cat# 76269-064</td></tr><tr><td>קוטף תולעים</td><td>WormStuff</td><td>59-AWP</td><td></td></tr></tbody></table>

תוספי שומנים לאריכות ימים וניתוח שעתוק גנים ב - caenorhabditis elegans

Lipid Supplementation for Longevity and Gene Transcriptional Analysis in Caenorhabditis elegans

הזדקנות היא תהליך מורכב המאופיין בשינויים פיזיולוגיים מתקדמים הנובעים הן מתרומה סביבתית והן מתרומה גנטית. ליפידים חיוניים למרכיבים מבניים של קרומי התאים, לאגירת אנרגיה וכמולקולות איתות. ויסות חילוף החומרים והאיתותים של השומנים חיוני להפעלת מסלולים ברורים לאריכות ימים. התולעת העגולה Caenorhabditis elegans היא אורגניזם מצוין וחזק לנתח את התרומה של מטבוליזם שומנים ואיתות בוויסות אריכות ימים. מחקרים רבים תיארו כיצד תוספי תזונה של מולקולות שומנים ספציפיות יכולים להאריך את תוחלת החיים של C. elegans ; עם זאת, הבדלים קלים בתנאי התוספים עלולים לגרום לבעיות שכפול בקרב מדענים במעבדות שונות. כאן, דווח על שתי שיטות מפורטות של תוספי תזונה עבור C. elegans המשתמשות בתוספי שומנים עם חיידקים שנזרעו על צלחות או תרחיף חיידקים בתרבית נוזלית. כמו כן מסופקים כאן הפרטים לביצוע בדיקות תוחלת חיים עם תוספת שומנים לכל החיים וניתוח qRT-PCR באמצעות ליזאט תולעת שלמה או רקמות מנותקות שמקורן בכמה תולעים. באמצעות שילוב של מחקרי אורך ומחקרי שעתוק על תוספי שומנים, מבחני ההזנה מספקים גישות מהימנות לנתח כיצד שומנים משפיעים על אריכות ימים והזדקנות בריאה. מתודולוגיה זו יכולה להיות מותאמת גם לגישות סינון תזונתיות שונות כדי להעריך שינויים בתת-קבוצה של תעתיקים באמצעות מספר קטן של רקמות מנותחות או כמה בעלי חיים.

אימות של שינויי שעתוק באמצעות כמה תולעים שלמות עם תוספת שומנים כדי לחקור אם הפרוטוקול לחילוץ ולתמלול מחדש של RNA לתוך cDNA מכמה תולעים שלמות ניתן לשחזור ולהשוואה עם הנתונים של תולעים בתפזורת,נעשה שימוש בזן תולעים בעל תוחלת חיים ארוכה המבטא יתר על המידה את החומצה הליזוזומלית ליפאז lipl-4 במעי 7,8,33,35. אינדוקציה שעתוק של הגנים לעיבוד נוירופפטידים egl-3 ו- egl-21...

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטות לתוספי שומנים בתרביות נוזליות ובתרביות על צלחת עבור Caenorhabditis elegans, יחד עם מחקרי אורך וניתוח שעתוק גנים מכמות גדולה או כמה תולעים ורקמות תולעים.

תוספי שומנים לאריכות ימים וניתוח שעתוק גנים ב - Caenorhabditis elegans

Aging is a complex process characterized by progressive physiological changes resulting from both environmental and genetic contributions. Lipids are ...

פרוטוקול זה מתאר שתי אסטרטגיות של תוספי שומנים עם שילוב של ניתוח אורך ושעתוק באורגניזם המודל, C.elegans. הטכניקה מתארת כיצד לבחון שינויים בשעתוק באמצעות מעט תולעים או רקמות תולעים מנותחות, וכיצד ניתן לשלב את ההזנה הנוזלית של אוכלוסיית חרקים עם טכניקות הידרו. אנשים המבצעים טכניקה זו חייבים לתרגל דיסקציה של רקמות בגלל חלון הזמן הקצר לביצוע הניסוי כדי להשיג ניתוח שעתוק הולם.כדי להתחיל, לאסוף חיידקי OP50 על ידי צנטריפוגה של התרבות שגדלה בן לילה ב 4, 000 גרם במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. השליכו את הסופר-נטנט. להשעות את כדור החיידקים ב 20 מיליליטר של דילול חיידקים, הגבלה תזונתית או בסיס BDR על ידי מערבולת ושוב, לחזור על צנטריפוגה במשך 10 דקות.לאחר השלכת הסופר-נטנט, השהה מחדש את גלולת החיידקים במדיום BDR כדי להכין מלאי חיידקי BDR של 20 X. יש לדלל את מלאי החיידקים ל-5X באמצעות מדיום BDR לפני השימוש. באמצעות אתנול או דימתיל סולפוקסיד כממס, הכינו תמיסת מלאי שומנים בבקבוקון זכוכית חדש ומלאו את בקבוקון הזכוכית בארגון או בחנקן כדי למנוע חמצון.העבירו את תמיסת מלאי השומנים לתמיסת חיידקי ה-BDR כדי להשיג את הריכוז הסופי הרצוי בתנאי האכלה. ערבבו אותו היטב על ידי מערבולת במשך 20 שניות. הכן את הרכב הנשלט על ידי ערבוב אותם נפחים של אתנול מסונן או דימתיל סולפוקסיד עם חיידקי BDR.בצע תוספי שומנים ותרבית נוזלית על ידי העברת הכמות הרצויה של בקרת שומנים או רכב לכל באר של 12 צלחת באר עם שלושה עד ארבעה שכפולים עבור כל מצב האכלה. ערבבו את תרחיף התולעים Caenorrhabditis elegans המסונכרן עם חיידקי 5X BDR ביחס של אחד לאחד כדי להשיג ריכוז סופי של 1, 500 תולעים למיליליטר ופי 2.5 לחיידקים. לאחר מכן מעבירים שני מיליליטר של תערובת חיידקי התולעת לכל באר של צלחת 12 הבאר.בסיום לעטוף את צלחת 12 הבאר בנייר כסף ולנער את הצלחת באינקובטור של 20 מעלות צלזיוס ב 100 סל"ד לאורך הדגירה הרצוי. עבור תוספי שומנים על צלחות, זרעו מיליליטר אחד של חיידקים מותנים בשומנים למרכז של מדיום צמיחת נמטודה בגודל 10 ס"מ או צלחת אגר NGM. ודא כי פתרון העבודה הסופי הוא מערבולת מספר פעמים בין זריעת שתי הצלחות כאשר עובדים עם מספר גבוה של צלחות.יבשו את הצלחת בחושך בתוך מכסה מנוע בטיחותי. העבר 3000 תולעים מתרבית התולעים המסונכרנת לצלחת 10 סנטימטרים. יבשו את הצלחת במכסה מנוע של בטיחות ביולוגית עד שתולעים ששחו על הצלחות עם תוספי השומנים, יתחילו לזחול.לאחר הייבוש, יש לדגום את הלוח המותנה בשומנים באינקובטור של 20 מעלות צלזיוס למשך הזמן הרצוי ואם משתמשים בשומנים רב בלתי רוויים להגן על הצלחת מפני אור. הכינו 20 מיקרוליטרים של תמיסת ליזיס סופית לכל דגימה על ידי ערבוב 0.2 מיקרוליטרים של DNase I עם 19.8 מיקרוליטרים של תמיסת ליזיס בצינור PCR וערבבו אותו היטב על ידי צנרת למעלה ולמטה חמש פעמים. כדי לחלץ את הרנ"א מהמספר הקטן של תולעים שלמות, הסירו את החיידקים על ידי העברת 15 עד 20 תולעים ממדשאת החיידקים לצלחת NGM טרייה שלא נזרעה.מעבירים 15 עד 20 תולעים מצלחת ה-NGM הלא ממומשת לצינור ה-PCR המכיל 20 מיקרוליטרים של תמיסת הליזיס הסופית שזה עתה הוכנה עם המספר המינימלי של חיידקים ודוגרים את תגובת התזה למשך חמש דקות בטמפרטורת החדר. לאחר סיום הדגירה, שמרו את הדגימה באמבט מים קרים נחמד ובדקו את התולעים ארבע פעמים, חמש שניות בכל פעם עם משרעת של 30% ודופק למשך 15 שניות בין כל זמן של סוניקציה. יש לדגור על השפופרת בטמפרטורת החדר למשך חמש דקות לפני הוספת שני מיקרוליטרים של תמיסת עצירה לתגובת התזה ולערבב אותה על ידי הקשה עדינה.לדגור את התגובה במשך שתי דקות בטמפרטורת החדר ולאחר מכן להגדיר את הצינור על קרח. כדי לחלץ רנ"א מרקמת התולעת, בחרו כ-20 תולעים ממדשאת החיידקים והכניסו אותן לצלחת NGM חדשה ולא מעובדת כדי לסלק את החיידקים מהתולעים. העבירו 20 תולעים עם כמה שפחות חיידקים לזכוכית שעון המכילה 500 מיקרוליטר של תמיסת M9 המכילה ארבעה מיקרומולרים לבמיזול.כאשר התולעים משותקות, נתחו את הנבט או המעי באמצעות מחט 25 מדים שניתן לחבר למזרק מיליליטר אחד. באמצעות פיפטה זכוכית autoclaved, להעביר את הרקמות המנותקות לתוך צינור PCR ולהתיישב את הצינור על קרח במשך שתי דקות המאפשר את התצהיר של החומר בתחתית. הסר את הסופרנטנט מצינור ה- PCR לפני הוספת 20 מיקרוליטר של תמיסת ליזיס סופית וערבב אותו היטב על ידי הקשה.לאחר דגירה של תגובת התזה במשך חמש דקות, הוסף שני מיקרוליטרים של תמיסת עצירה והקש על הצינור מספר פעמים. דגירה של הצינור במשך שתי דקות לפני שתמשיך לתעתיק ההפוך. במחקר האימות, RNA שחולץ מאוכלוסייה גדולה ומכמה תולעים הראה אינדוקציה דומה של הגנים לעיבוד נוירופפטידים, egl-3 ו-egl-21.הוא מציע כי מיצוי RNA מכמה תולעים יכול להיות חלופה תקפה לטכניקות סינתזת CDNA סטנדרטיות מאוכלוסיות גדולות. במעי המנותח של תולעי הטרנסגן lipl-4, בתוספת חומצה דיהומו-גמא-לינולנית, או DGLA, הגנים לעיבוד נוירופפטידים עצביים לא הושרו. נטילת תוסף DGLA בריכוזים שונים הצילה את הארכת תוחלת החיים בתולעים לאחר נפילת שומן-3.תולעים עם תוספי שומנים עשויות גם להיות מעובדות לריצוף RNA, פרוטאומיקה, מטבוליזם ומחקרים התנהגותיים כדי לזהות פנוטיפים נוספים בתנאים ספציפיים אלה. מתודולוגיה זו יכולה להיות מיושמת על מחקר הזדקנות, ביולוגיה של שומנים וכל תחום מחקר אחר שמטרתו ליצור קשר בין פנוטיפ מסוים לבין גורם תזונתי או מטבוליט.

lipid-supplementation-for-longevity-gene-transcriptional-analysis

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

כאן אנו מציגים פרוטוקול לביצוע הגבלה מוצק צלחת מבוססי...

Solid פלייט מבוססי הגבלת תזונתיים ב Caenorhabditis elegans</em

Elegan &lt;em&gt; Caenorhabditis &lt;/ em&gt; הוא מודל שימושי כדי לחקור את הפונקציות של חומצות שומן רב בלתי רוויות בפיתוח ופיזיולוגיה. פרוטוקול זה מתאר שיטה יעילה להשלמת ג &lt;em&gt; elegans &lt;/ em&gt; דיאטה עם חומצות שומן רב בלתי רוויות.

תוספת תזונתית של חומצות שומן רב בלתי רוויות ב<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em

גלקסי והדוד צמחו ככלים פופולריים המאפשרים לחוקרים ללא הכשרה ביואינפורמטיקה לנתח ולפרש נתוני RNA-seq. אנו מתארים פרוטוקול לחוקרי אלגנס לבצע ניסויים-Seq RNA, גישה ולעבד את הנתונים באמצעות גלקסי ולקבל מידע ביולוגי משמעותי מרשימות הגן באמצעות DAVID.

Transcriptomic ניתוח<em&gt; C</em&gt;.<em&gt; elegans</em&gt; RNA רצף נתונים באמצעות Suite טוקסידו על פרויקט גלקסי

כאן, אנו מציגים מסגרת להתייחס הגבלות תזונתיות מגוון רחב ביטוי גנים ואת תוחלת החיים. אנו מתארים פרוטוקולים עבור הגבלות תזונתיות מגוון רחב, הדמיה כמותית של ביטוי גנים תחת הפרדיגמה הזו. אנחנו עוד חלוקה לרמות ניתוחים חישובית לחשוף שבבסיס תכונות עיבוד המידע של מעגלים גנטי מעורב חישה מזון.

כימות של מידע מקודד על ידי גנים ביטוי רמות במהלך תוחלת החיים אפנון תחת הגבלת תזונה מגוון רחב C . elegans

כאן נתאר פרוטוקול פשוט להפקת במהירות מאות צמיחה נמטודות מדיה אגר, 96-ובכן תרבות צלחות עם מספרים עקביים של Caenorhhabditis elegans לכל טוב. תרבויות אלה שימושיים להקרנה פנוטיפי של אורגניזם שלם. אנו מתמקדים כאן באמצעות תרבויות אלה לכימיקלים מסך עבור אפקטים פרו-אריכות ימים.

שיטה פשוטה להקרנה כימי תפוקה גבוהה ב Caenorhabditis Elegans

כאן נתאר שיטת עותקים משוכפלים, גישה באופן כמותי מודדים C. elegans תוחלת החיים/הישרדות, healthspan באופן תפוקה גבוהה וחזק, ובכך לאפשר הקרנה של מצבים רבים מבלי להתפשר על איכות הנתונים. פרוטוקול זה מפרט את האסטרטגיה, ומספק כלי תוכנה לניתוח של נתונים המשוכפלים.

השיטה קבע עותק משוכפל: בגישה תפוקה גבוהה באופן כמותי מידה Caenorhabditis elegans תוחלת החיים

כאן, אנו מציגים עבור בידודו של RNA DNA, חלבונים מדגם זהה, פרוטוקול, במאמץ להפחית את הווריאציה לשפר הפארמצבטית, להקל על פרשנויות.

משולב נוקלאוטיד שיחולץ חלבון ב Caenorhabditis elegans

ירידה פרוטאוסטלית היא סימן היכר של הזדקנות, להקל על תחילת מחלות ניווניות. אנו מתארים פרוטוקול כדי למדוד באופן כנותב פרוטאוסטזיס בשתי רקמות אלגנים שונים Caenorhabditis באמצעות ביטוי הטרולוגי של פוליגלוטמין חוזר התמזג לכתב פלואורסצנטי. מודל זה מאפשר ניתוח גנטי מהיר של פרוטאוסטזיס.

כימות ירידה פרוטאוסטטית ספציפית לרקמות ב elegans Caenorhabditis

מיקרוסקופיית פיזור ראמאן מגורה (SRS) מאפשרת הדמיה סלקטיבית ונטולת תווית של moieties כימיים ספציפיים והיא שימשה ביעילות כדי לדמות מולקולות השומנים ב vivo. כאן, אנו מספקים היכרות קצרה עם העיקרון של מיקרוסקופיה SRS ומתארים שיטות לשימוש בו באחסון השומנים הדמיה ב Caenorhabditis elegans.

הדמיה ללא תווית של דינמיקת אחסון השומנים באלגנים של Caenorhabditis באמצעות מיקרוסקופיית פיזור ראמאן מגורה

Caenorhabditis elegans משמשים כמערכת מודל מצוינת עם שיטות חזקות ובעלות נמוכה לסקר את תוחלת החיים, תוחלת החיים והחוסן ללחץ.

סקר שיטות בעלות נמוכה למדידת תוחלת החיים ותוחלת הבריאות ב - Caenorhabditis elegans

מקור המזון של Caenorhabditis elegans במעבדה הוא Escherichia coli חי. מכיוון שחיידקים פעילים מטבולית, הם מציגים משתנה מבלבל במחקרים מטבוליים ותרופתיים ב- C. elegans. כאן מתואר פרוטוקול מפורט לנטרול מטבולי של חיידקים באמצעות פרפורמלדהיד.

מתודולוגיה להשבתה מטבולית של חיידקים למחקר Caenorhabditis elegans

למד שתי שיטות תוספת שומנים ב-Caenorhabditis elegans לניתוח שעתוק גנים לאורך זמן. הפרוטוקול מאפשר חילוץ RNA ממספר קטן של תולעים או מרקמות מבודדות לחקר ביולוגיית שומנים ותהליכי הזדקנות.

תוספי שומנים לאריכות ימים וניתוח שעתוק גנים ב - Caenorhabditis elegans

גלה סרטונים נוספים