מודל שריפת חולדות לחקר כוויה תרמית עורית בעובי מלא וזיהום

מודל פציעות כוויות זה מסוגל לשחזר את המצבים הקליניים שנצפו בחולי כוויות מאושפזים בעקבות פציעות כוויות כגון חוסר ויסות חיסוני וזיהומים חיידקיים. שיטה זו של גרימת כוויה בחולדות קלה ללמידה וניתן להשתמש בה לפיתוח והערכה של תרופות טרופיות חדשות לפצעי כוויות וזיהומים. מודל זה יכול לשמש להערכת ריפוי פצעים, כמו גם את התקדמות זיהום חיידקי באתר הכוויה.

שיטת השראת כוויות זו יכולה לשמש גם במודלים של עכברים ובעלי חיים אחרים להשראת כוויות ולחקר זיהום חיידקי של פצעי כוויה. התחילו להכין את החולדה המורדמת לפגיעת הכוויה על ידי העברתה מעל כרית חימום במצב נוטה. בעזרת מוליך צמר גפן, יש למרוח חומר סיכה לעיניים על שתי העיניים כדי למנוע התייבשות הקרנית.

גלחו את האזור הגבי של החולדה בעזרת קוצץ חשמלי במלבן גדול מהשכמות ועד לבסיס הזנב. נגבו את השערות הרופפות מהאזור המגולח בעזרת הרקמה הספוגה במי מלח. יש למרוח את תחליב הסרת השיער על האזור המגולח באמצעות אפליקטור עם קצוות כותנה.

לאחר שלוש דקות, נגבו את האזור עם ספוג גזה רטוב פעמיים כדי להסיר את הקרם ולמנוע גירוי בעור. כבו את האיזופלורן והסירו את חרוט האף לפני הכנסת החולדה לכלוב ההתאוששות. ביום ניסוי פציעת הכוויות, כוונו את טמפרטורת אמבט המים ל -97 מעלות צלזיוס ושעה לפני הניסוי, הניחו 420 גרם של ארבעה מוטות נחושת באמבט המים.

ברגע שהחולדה אינה מגיבה לצביטה בבוהן בכל הגפיים, הניחו אותה על כרית החימום במצב נוטה והזריקו 20 מיליגרם לקילוגרם משקל גוף של מורפיום דרך שורש התוך-צפקי, או IP, לטיפול בכאב. לאחר מכן, בדוק את טמפרטורת אמבט המים. כוונו את הטיימר ולבשו את הכפפות העמידות בחום.

קחו מוט נחושת מחומם אחד מאמבט המים וגעו בו באזור הדורסום למשך שבע שניות. יש למרוח מיד את שלוש הכוויות הבאות בזו אחר זו באמצעות מוט אחד לכל אתר כוויה ולייצר כ-20% משטח פני הגוף הכולל כוויה במגע מלא. לאחר הכוויה, יש להחיות את בעל החיים על ידי הזרקת 0.1 מיליליטר לגרם משקל גוף של תמיסת רינגר הנקה דרך מסלול ה-IP.

לאחר שתסיים, כבה את האיזופלורן. הסירו את חרוט האף והניחו את החולדה על מחצלת החום. ביום הכוויה והזיהום, צנטריפוגה את Pseudomonas aeruginosa או Staphylococcus aureus תרבות בנפרד ב 4, 000 פעמים g במשך 5 דקות.

שטפו את הגלולה במי מלח רגילים לפני דילול הגלולה באמצעות מי מלח לצפיפות אופטית של 0.1 ננומטר ו-600 ננומטר. לדלל 200 מיקרוליטר של תרחיף חיידקי עם 800 מיקרוליטר של מלוחים ולקבל את החיסון החיידקי הרצוי של 2 על 10 ליחידות יוצרות מושבה 7 או CFU למיליליטר. 15 דקות לאחר הכוויה, מזריקים תת עורית 50 מיקרוליטר של חיסון מדולל של החיידקים ליד אזור הכוויה באמצעות מחט 29 מד.

הניחו את החולדה על כרית החימום להתאוששות. לאחר 15 עד 20 דקות, העבירו את בעל החיים שהתאושש לכלוב נקי. מיד לאחר פציעת הכוויה, יש להעריך את הפגיעה בעור מבחינה מורפולוגית מבחינת צבע ושוליים.

לאחר המתת חסד, לנתח ספירות דם מלאות כדי לקבוע את ההשפעה של השראת כוויה על המערכת החיסונית המארחת. אספו את הרקמה של החולדה המורדמת בצינור איסוף של 10 מיליליטר. הומוגניזציה של הדגימות באמצעות הומוגנייזר רקמות ודילול סדרתי של הרקמה הומוגנאטים במי מלח רגילים.

צלחת 100 מיקרוליטר של הומוגנט לא מדולל וכל הדילולים של כל דגימת רקמה שנאספו מחולדות נגועות ב- P.Aeruginosa על צלחות אגר cetrimide. לאחר הדגירה על הצלחות במשך 16 עד 18 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באינקובטור, ספרו את מושבות החיידקים שעל הצלחות. הכפל אותם ביחס דילול כדי לקבל את CFU למיליליטר ספירה לנרמל אותו עם משקל הרקמה כדי לחשב את רקמת תוכנית CPU.

פרוטוקול זה, הניתן לשחזור, הביא לפציעת כוויות בעובי מלא מדרגה שלישית בחולדות. צבע פציעת הכוויה השתנה מלבן לחום תוך 24 שעות ל-72 שעות לאחר הכוויה. בניתוח היסטולוגי, דגימות העור מבעלי חיים שנשרפו הראו פציעה בכל השכבות לאחר 24, 48 ו-72 שעות לאחר הפציעה, בעוד שהעור שלא נכווה הראה הבחנה ברורה בין אפידרמיס, דרמיס ושכבות רקמה תת-עורית.

הרס שכבת האפידרמיס ופגיעה בעובי המלא של הדרמיס עם שומן תת עורי ושרירי שלד נצפו בדגימות עור שרופות. ב-24 שעות לאחר הכוויה, כוויה בעובי מלא הייתה בעומק של יותר מ-2.61 מילימטרים. בהערכת פינוי חיידקים, התאוששות חיידקים נצפתה בכל החולדות שנפגעו מכוויות.

במהלך זיהום P.aeruginosa PAO1, מספר החיידקים שהתאוששו 24 שעות לאחר ההדבקה מעורן של חולדה שרופה היה פחות מהחיסון הראשוני של 1 על 10 ל-CFU. עם זאת, הוא עלה 48 ו 72 שעות לאחר ההדבקה. בזיהום S.aureus, ATC25923, נצפתה עלייה של 2 לוגים 10 בכל נקודות הזמן בעור בהשוואה לחיסון הראשוני, דבר המצביע על כך שהתבססות זיהום S.aureus נבעה מהשכפול הפעיל ברקמות.

הרקמה התת עורית והשרירים הראו עומס חיידקי גבוה יותר מאשר הריאה והטחול. הנתונים הראו כי חולדות שנשרפו פיתחו זיהום מערכתי 24 שעות לאחר חיסון P.aeruginosa ו-48 שעות לאחר חיסון S.aureus. יש להסיר לחלוטין את השיער על גבי החולדה ולשמור על הטמפרטורה ועל זמן השראת הכוויה כפי שהוזכר בפרוטוקול.

שאריות השיער והטמפרטורה השונה של מוטות הנחושת יכולים להשפיע על איכות הכוויה. ניתן לחקור את מודל כוויות החולדות כדי להעריך טיפולים אקטואליים חדשניים לטיפול בזיהומים בפצעי כוויות ולהערכת תחבושות פצעים שונות.