הערכה של שלמות מחסום המעי בעכברים באמצעות דקסטרן עם תווית פלואורסצאין-איזותיוציאנט

שיטה זו עוזרת לענות על שאלות לגבי האם מצב מסוים משנה את שלמות מחסום המעי, או על שאלות האם טיפול פוטנציאלי יכול לשמור על שלמות מחסום המעי. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מציעה טכניקה לא פולשנית, נטל נמוך כדי להעריך ולכמת חדירות מעיים in vivo. כדי להתחיל, מהר את העכברים במשך ארבע שעות, ולאחר מכן לתת 200 מיקרוליטר של מתלה FITC-dextran באמצעות gavage אוראלי לכל עכבר באמצעות מחט gavage מעוקר 38 מ"מ 22 מד.

הפעל טיימר לאחר הרווח הראשון והמתן חמש עד 10 דקות בין כל gavage כדי לאפשר מדידות in vivo, תוך שמירה על שעה אחת לאחר gavage. שמור על מתלי FITC-dextran הנותרים עבור העקומה הסטנדרטית. הפעל את המכונה והתוכנה על-ידי לחיצה ממושכת על לחצן התחל ואפשר למערכת להתחמם.

לחץ על מצב המכשיר וודא שכל המכשירים המוגדרים מציגים אישור לפני שתמשיך. לאחר מכן לחץ על מחקר חדש ושמור את הקובץ בשם הרצוי. לאחר מכן, לחץ על אפשרויות לימוד.

הזן את מזהה הדגימה ובחר את הלייזר הנכון והתנסה. לאחר מכן יש להסיר את הפרווה מאזור הבטן באמצעות מכונת גילוח חשמלית, ולמרוח משחה וטרינרית בנדיבות על העיניים כדי למנוע התייבשות. פתח את תא ההדמיה והנח את בעל החיים באופן דורסלי על צלחת הסריקה.

לאחר מכן אבטחו את הגפיים והזנב בנייר דבק. לאחר מכן, בחר את האזור לסריקה באמצעות הכלי ציור. הקפידו לכלול את כל רוחב הבטן ממש מעל הכבד ועד פי הטבעת.

לאחר מכן לחץ על הכלי שינוי כדי להתאים את האזור לאחר הציור. הגדר את רזולוציית הסריקה ל -2.0 מ"מ ולחץ על התחל כדי להתחיל בסריקה. לאחר מכן, פתח את קבצי התמונה על ידי מציאתם תחת שם הקובץ שנבחר ובו זמנית פתח את כל הקבצים עם הגדרות מסונכרנות.

באמצעות סרגל הכלים של הגדרות התמונה, השתמש בלחצנים סנכרן תמונה וסנכרן קנה מידה כדי לסנכרן את הגדרות התמונה לצורך השוואה מדויקת. לאחר מכן שמרו את התמונות עם קנה המידה המותאם. השווה את פלואורסצנטיות הבטן של כל בעל חיים ועכבר הבקרה בתמונות בקנה מידה אחיד באמצעות תוכנה המשויכת למערכת ההדמיה.

אספו גלולת צואה מכל עכבר בצינור סטרילי ארבע שעות לאחר הפרסום. לאחר מכן שמור את הצינורות על קרח והנח אותם בחושך. לאחר מכן, צנטריפוגה דגימות הדם ב 9, 390 x גרם במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר.

לאחר מכן העבירו את הפלזמה לצינור סטרילי חדש ושמרו אותה על קרח בחושך. לדלל 50 מיליגרם של דגימות צואה ב 200 מיקרוליטר של PBS, ולדלל את הפלזמה עם PBS ביחס של אחד לשניים. צלחת 100 דגימות מיקרוליטר ותקנים בצלחת שחורה אטומה 96 בארות.

קרא את הפלואורסצנטיות על קורא לוחות פלואורסצנטיים עם עירור ב 485 ננומטר ובליעה ב 530 ננומטר. לבסוף, לקבוע את הריכוז של FITC-dextran לכל דגימה על ידי השוואת פלואורסצנטיות לריכוזים הידועים של העקומה הסטנדרטית. ניתוח הפלואורסצנטיות in vivo הראה כי עכברים שקיבלו רק את דיאטת הביקורת היו בעלי צריכת כבד גבוהה יותר של FITC-דקסטרן ורמות גבוהות יותר של פלואורסצנטיות שיורית בחלל הבטן בהשוואה לעכברים שקיבלו את דיאטת תוספת האינולין.

לעכברים שקיבלו את התזונה בתוספת אינולין היו רמות נמוכות משמעותית של FITC-דקסטרן בפלזמה שלהם בהשוואה לעכברים שקיבלו רק את דיאטת הביקורת. בהתאמה, לעכברים שקיבלו את דיאטת האינולין היו רמות גבוהות משמעותית של FITC-דקסטרן בצואה שלהם מאשר לעכברים שקיבלו רק את דיאטת הביקורת. הרמות הנמוכות יותר של FITC-דקסטרן בצואה של העכברים המבוקרים מצביעות על כך שהוא חלחל דרך מחסום המעי למחזור הדם ולא הופרש כראוי.

הרמות הגבוהות של FITC-דקסטרן בפלזמה חיזקו ממצא זה. תזמון הוא חיוני בעת ניסיון הליך זה. קריאת פלואורסצנטיות ואיסוף הדגימות צריכים להתרחש קרוב ככל האפשר לשעה וארבע שעות לאחר המפגש עבור כל עכבר בודד.