השתלת צינורית תוך גולגולתית עבור קולטן אנטיגן כימרי טורי (CAR) עירוי תאי T בעכברים

פרוטוקול זה משכפל מערכת צנתרים תוך-חדרית המשמשת בניסויים קליניים מתמשכים לבדיקת אספקה אזורית מקומית של טיפול CAR T-cell המכוון נגד גידולים במערכת העצבים המרכזית. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא היכולת לספק מינונים חוזרים מרובים של טיפול מקומי אזורי CAR T-cell מבלי לבצע הליכים כירורגיים פולשניים מרובים. מערכת זו יכולה לשמש לחקר טיפולים שונים באתרי לידה שונים, ובכך עשויה לספק תובנה למספר עצום של תחומי מחקר במדעי המוח.

כדי להתחיל, הניחו את העכבר המרדים עם הראש המגולח על שולחן הניתוחים ופתחו בעדינות את תחתית הזרוע הסטריאוטקטית באמצעות מרית. מכניסים את הצינורית במלקחיים ומהדקים אותה על ידי הידוק הבורג על הזרוע עד שחצי עד שני שלישים מחלק הפלסטיק הלבן וחמישה מילימטרים של הצינורית בולטים מתחתית הפתח. הכנס ואבטח את שיניו העליונות של העכבר בסרגל הנשיכה של המנגנון הסטריאוטקסי.

משוך את חרוט האף קדימה והדק אותו, וודא שהעכבר שואף איזופלורן. לאחר מכן, הרכיבו את העכבר על המנגנון הסטריאוטקסי המחומם באמצעות אזיקי אוזניים או מוטות אוזניים, תוך הימנעות מלחץ מוגזם. לחטא את אתר הניתוח ולבצע חתך מקביל לגולגולת כמתואר בכתב היד.

השתמשו במקלוני צמר גפן כדי להרחיק את הפאשיה. זהה את ציוני הדרך, bregma ו lambda על הגולגולת המתאימה סימנים קדמיים ואחוריים שבו לוחות הגולגולת נפגשים. כדי ליצור משטח לחיבור האקריל, צרו בעדינות מספר חריצים לרוחב הגולגולת באמצעות אזמל.

באמצעות הזרוע הסטריאוטקסית, למקם את הצינורית לנקודת ציון של עניין. הרם את קצה הצינורית מילימטר עד שני מילימטרים מעל פני הגולגולת ועבור לקואורדינטות הרצויות. באמצעות מחט 18 מד או מקדחה כירורגית, לעשות שני חורי בורג על הגולגולת החשופה הרחק מהמקום שבו הצינורית נכנסת, להבטיח מספיק מקום עבור הצינורית.

סובבו את המקדחה דרך חור הבורג עד שהיא מתחברת לגולגולת. בעזרת מברג בעל קצה שטוח, הכנס והדק שני ברגים לתוך החורים. לאחר מכן, משכו בעדינות את הבורג כלפי מעלה כדי לוודא שהוא מאובטח.

להחדרת צינורית יש ליצור חור בגולגולת בקואורדינטות שזוהו באמצעות מחט 18 מד או מקדחה כירורגית. באמצעות הזרוע הסטריאוטקטית, מורידים את הצינורית לקואורדינטת DV הרצויה. בכ-0.3 גרם אבקת שרף אקרילי ו-10 עד 15 טיפות נוזל בצלחת חרסינה בעלת 12 בארות, מעמיסים את החומר הצמיגי המוכן בצבע לבן לתוך מזרק של מיליליטר.

מצפים את הגולגולת וממלאים את החללים סביב הצינורית והבורג. שחררו את הבורג על הזרוע הסטריאוטקטית בזמן שהמלט גמיש. השתמש בעדינות במרית כדי לשחרר את הצינורית מהמחזיק בפתח התחתון ולמשוך את הזרוע הסטריאוטקטית הרחק מהעכבר.

לאחר ייבוש הצמנט, הכניסו את צינורית הדמה לצינורית המנחה וסובבו עם כיוון השעון כדי לאבטח אותה היטב. לאחר השלמת ההליך, להחזיר את העכבר לכלוב הביתי המחומם שלו להתאוששות. כדי להכין את צינורית הטיפול, הכנס את החלק העליון שלה לתוך צינורות PKG.

לאחר מכן, מלא את מזרק הטיפול בתרחיף תאי CAR T והכנס אותו דרך הקצה השני של צינור PKG, המכסה את החלק העליון של צינורית הטיפול. לאחר הרדמת העכבר, תקן את צינורית המדריך בבסיס באמצעות מלקחיים. שחררו את הברגים והוציאו את צינורית הדמה, ואפשרו גישה לצינורית המנחה.

החדירו את תאי ה-CAR T למשך דקה אחת והחזיקו את צינורית הטיפול במקומה למשך דקה נוספת. לאחר הסרת צינורית הטיפול, יש להבריג חזרה צינורית דמה בחוזקה. לאחר מכן, לנהל meloxicam תת עורית עבור שליטה בכאב.

הטיפול בתאי CAR T המכוון GPC2 גרם לרגרסיה משמעותית של הגידול במדולובלסטומה והאריך משמעותית את ההישרדות במודל גליומה של קו האמצע התלמי. בעת החדרת הצינורית המנחה למיקום תוך גידולי, חשוב להבין כי הקואורדינטות הגב-גחון עשויות להיות שטחיות יותר מהזרקת הגידול על מנת להסביר את אורכי הקרנת הצינורית הדמה והטיפול.