Name: הכנה וקטורית לנטיויראלית לאפנון יעיל של גנים ומיקרו-רנא של מקרופאגים שוכנים ברקמת חלל הצפק in vivo בעכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-02-16T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 33 s
Description: למד הכנת וקטורים לנטיויראליים לאפנון יעיל של גנים במקרופאגים שוכני רקמת חלל הצפק בעכברים. שיטה זו מאפשרת שילוב יציב של טרנסגנים וביטוי יעיל לחקר תפקודי מערכת החיסון.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>הכנה וקטורית לנטיויראלית לאפנון גן In Vivo

<ol><li>Wynn, T. A., Chawla, A., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+biology+in+development%2C+homeostasis+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Macrophage biology in development, homeostasis and disease.</a> Nature. 496 (7446), 445-455 (2013).</li>
<li>Jantsch, J., Binger, K. J., Muller, D. N., Titze, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+homeostatic+immune+function%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">Macrophages in homeostatic immune function.</a> Front Physiol. 5, 146(2014).</li>
<li>Wynn, T. A., Vannella, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+tissue+repair%2C+regeneration%2C+and+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Macrophages in tissue repair, regeneration, and fibrosis.</a> Immunity. 44 (3), 450-462 (2016).</li>
<li>Ginhoux, F., Guilliams, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-resident+macrophage+ontogeny+and+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Tissue-resident macrophage ontogeny and homeostasis.</a> Immunity. 44 (3), 439-449 (2016).</li>
<li>Epelman, S., Lavine, K. J., Randolph, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origin+and+functions+of+tissue+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Origin and functions of tissue macrophages.</a> Immunity. 41 (1), 21-35 (2014).</li>
<li>Amit, I., Winter, D. R., Jung, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+local+environment+and+epigenetics+in+shaping+macrophage+identity+and+their+effect+on+tissue+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of the local environment and epigenetics in shaping macrophage identity and their effect on tissue homeostasis.</a> Nat Immunol. 17 (1), 18-25 (2016).</li>
<li>Gosselin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environment+drives+selection+and+function+of+enhancers+controlling+tissue-specific+macrophage+identities%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Environment drives selection and function of enhancers controlling tissue-specific macrophage identities.</a> Cell. 159 (6), 1327-1340 (2014).</li>
<li>Lavin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-resident+macrophage+enhancer+landscapes+are+shaped+by+the+local+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Tissue-resident macrophage enhancer landscapes are shaped by the local microenvironment.</a> Cell. 159 (6), 1312-1326 (2014).</li>
<li>Davies, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+tissue-resident+macrophages+are+metabolically+poised+to+engage+microbes+using+tissue-niche+fuels%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Peritoneal tissue-resident macrophages are metabolically poised to engage microbes using tissue-niche fuels.</a> Nat Commun. 8 (1), 2047(2017).</li>
<li>Shi, J., Hua, L., Harmer, D., Li, P., Ren, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cre+driver+mice+targeting+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Cre driver mice targeting macrophages.</a> Methods Mol Biol. 1784, 263-275 (2018).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+lentiviral+vectors+for+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+China+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Recent advances in lentiviral vectors for gene therapy.</a> Sci China Life Sci. 64 (11), 1842-1857 (2021).</li>
<li>Kosaka, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lentivirus-based+gene+delivery+in+mouse+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Artif+Organs%22%5BJournal%5D)">Lentivirus-based gene delivery in mouse embryonic stem cells.</a> Artif Organs. 28 (3), 271-277 (2004).</li>
<li>Naldini, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+gene+delivery+and+stable+transduction+of+nondividing+cells+by+a+lentiviral+vector%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">In vivo gene delivery and stable transduction of nondividing cells by a lentiviral vector.</a> Science. 272 (5259), 263-267 (1996).</li>
<li>Yamashita, M., Emerman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capsid+is+a+dominant+determinant+of+retrovirus+infectivity+in+nondividing+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Capsid is a dominant determinant of retrovirus infectivity in nondividing cells.</a> J Virol. 78 (11), 5670-5678 (2004).</li>
<li>Wilson, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lentiviral+delivery+of+RNAi+for+in+vivo+lineage-specific+modulation+of+gene+expression+in+mouse+lung+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Lentiviral delivery of RNAi for in vivo lineage-specific modulation of gene expression in mouse lung macrophages.</a> Mol Ther. 21 (4), 825-833 (2013).</li>
<li>Burns, J. C., Friedmann, T., Driever, W., Burrascano, M., Yee, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vesicular+stomatitis+virus+G+glycoprotein+pseudotyped+retroviral+vectors%3A+concentration+to+very+high+titer+and+efficient+gene+transfer+into+mammalian+and+nonmammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Vesicular stomatitis virus G glycoprotein pseudotyped retroviral vectors: concentration to very high titer and efficient gene transfer into mammalian and nonmammalian cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 90 (17), 8033-8037 (1993).</li>
<li>Finkelshtein, D., Werman, A., Novick, D., Barak, S., Rubinstein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LDL+receptor+and+its+family+members+serve+as+the+cellular+receptors+for+vesicular+stomatitis+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">LDL receptor and its family members serve as the cellular receptors for vesicular stomatitis virus.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (18), 7306-7311 (2013).</li>
<li>Ipseiz, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+in+vivo+gene+modification+in+mouse+tissue-resident+peritoneal+macrophages+by+intraperitoneal+delivery+of+lentiviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther+Methods+Clin+Dev%22%5BJournal%5D)">Effective in vivo gene modification in mouse tissue-resident peritoneal macrophages by intraperitoneal delivery of lentiviral vectors.</a> Mol Ther Methods Clin Dev. 16, 21-31 (2020).</li>
<li>Rosas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transcription+factor+Gata6+links+tissue+macrophage+phenotype+and+proliferative+renewal%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The transcription factor Gata6 links tissue macrophage phenotype and proliferative renewal.</a> Science. 344 (6184), 645-648 (2014).</li>
<li>BeckmanCoulter. , https://www.mybeckman.uk/resources/technologies/centrifugation/principles/rotor-balancing (2023).</li>
<li>JoVE Science Education Database. Lab Animal Research. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Rodent+Handling+and+Restraint+Techniques%22">Rodent Handling and Restraint Techniques</a>. , JoVE, Cambridge, MA. (2023).</li>
<li>Zufferey, R., Nagy, D., Mandel, R. J., Naldini, L., Trono, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiply+attenuated+lentiviral+vector+achieves+efficient+gene+delivery+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Multiply attenuated lentiviral vector achieves efficient gene delivery in vivo.</a> Nat Biotechnol. 15 (9), 871-875 (1997).</li>
<li>Nasri, M., Karimi, A., Allahbakhshian Farsani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production%2C+purification+and+titration+of+a+lentivirus-based+vector+for+gene+delivery+purposes%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotechnology%22%5BJournal%5D)">Production, purification and titration of a lentivirus-based vector for gene delivery purposes.</a> Cytotechnology. 66 (6), 1031-1038 (2014).</li>
<li>Optimized production and concentration of lentiviral vectors containing large inserts. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22J+Gene+Med%22">J Gene Med</a>. al Yacoub, N., Romanowska, M., Haritonova, N., Foerster, J. 9 (7), 579-584 (2007).</li>
<li>Malim, M. H., Bieniasz, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV+restriction+factors+and+mechanisms+of+evasion%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Med%22%5BJournal%5D)">HIV restriction factors and mechanisms of evasion.</a> Cold Spring Harb Perspect Med. 2 (5), a006940(2012).</li>
<li>Sonza, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Susceptibility+of+human+monocytes+to+HIV+type+1+infection+in+vitro+is+not+dependent+on+their+level+of+CD4+expression%5BTitle%5D)+AND+%22AIDS+Res+Hum+Retroviruses%22%5BJournal%5D)">Susceptibility of human monocytes to HIV type 1 infection in vitro is not dependent on their level of CD4 expression.</a> AIDS Res Hum Retroviruses. 11 (7), 769-776 (1995).</li>
<li>Kingston, R. E., Chen, C. A., Rose, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+phosphate+transfection%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Calcium phosphate transfection.</a> Curr Protoc Mol Biol. Chapter 9, Unit 9.1(2003).</li>
<li>Brown, L. Y., Dong, W., Kantor, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Improved+protocol+for+the+production+of+lentiviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">An Improved protocol for the production of lentiviral vectors.</a> STAR Protoc. 1 (3), 100152(2020).</li>
<li>Moce-Llivina, L., Jofre, J., Muniesa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+polyvinylidene+fluoride+and+polyether+sulfone+membranes+in+filtering+viral+suspensions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">Comparison of polyvinylidene fluoride and polyether sulfone membranes in filtering viral suspensions.</a> J Virol Methods. 109 (1), 99-101 (2003).</li>
<li>Jiang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimized+method+for+high-titer+lentivirus+preparations+without+ultracentrifugation%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">An optimized method for high-titer lentivirus preparations without ultracentrifugation.</a> Sci Rep. 5, 13875(2015).</li>
<li>Czubala, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGFbeta+induces+a+SAMHD1-independent+post-entry+restriction+to+HIV-1+infection+of+human+epithelial+langerhans+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">TGFbeta induces a SAMHD1-independent post-entry restriction to HIV-1 infection of human epithelial langerhans cells.</a> J Invest Dermatol. 136 (10), 1981-1989 (2016).</li>
<li>Bouabe, H., Okkenhaug, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+targeting+in+mice%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Gene targeting in mice: a review.</a> Methods Mol Biol. 1064, 315-336 (2013).</li>
<li>Kim, J. M., Rasmussen, J. P., Rudensky, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+T+cells+prevent+catastrophic+autoimmunity+throughout+the+lifespan+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Regulatory T cells prevent catastrophic autoimmunity throughout the lifespan of mice.</a> Nat Immunol. 8 (2), 191-197 (2007).</li>
<li>Decalf, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensing+of+HIV-1+entry+triggers+a+Type+I+Interferon+response+in+human+primary+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Sensing of HIV-1 entry triggers a Type I Interferon response in human primary macrophages.</a> J Virol. 91 (15), e00147-e00217 (2017).</li>
<li>Wilson, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amelioration+of+emphysema+in+mice+through+lentiviral+transduction+of+long-lived+pulmonary+alveolar+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Amelioration of emphysema in mice through lentiviral transduction of long-lived pulmonary alveolar macrophages.</a> J Clin Invest. 120 (1), 379-389 (2010).</li>
<li>Markusic, D. M., van Til, N. P., Hiralall, J. K., Elferink, R. P., Seppen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+of+liver+macrophage+transduction+by+pseudotyping+lentiviral+vectors+with+a+fusion+envelope+from+Autographa+californica+GP64+and+Sendai+virus+F2+domain%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Reduction of liver macrophage transduction by pseudotyping lentiviral vectors with a fusion envelope from Autographa californica GP64 and Sendai virus F2 domain.</a> BMC Biotechnol. 9, 85(2009).</li>
<li>Burke, B., Sumner, S., Maitland, N., Lewis, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+gene+therapy%3A+cellular+delivery+vehicles+and+in+vivo+targets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">Macrophages in gene therapy: cellular delivery vehicles and in vivo targets.</a> J Leukoc Biol. 72 (3), 417-428 (2002).</li>
<li>Bain, C. C., Jenkins, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology+of+serous+cavity+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Immunol%22%5BJournal%5D)">The biology of serous cavity macrophages.</a> Cell Immunol. 330, 126-135 (2018).</li>
<li>Milone, M. C., O'Doherty, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+use+of+lentiviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Clinical use of lentiviral vectors.</a> Leukemia. 32 (7), 1529-1541 (2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.05% טריפסין-EDTA (1x) (טריפסין 500 מ"ג/ליטר או 0.02 מ"מ)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25300054</td><td></td></tr><tr><td>0.22 &mu; m מסנן Millex GP סטרילי</td><td>Merck</td><td>SLGS033SS</td><td></td></tr><tr><td>0.45 &mu; m מסנן סטרילי millex GP</td><td>Merck</td><td>SLHP033RS</td><td></td></tr><tr><td>0.5 מ"ל מזרק אינסולין U-100 עם מחט, 0.33 מ"מ x 12.7 מ"מ (29 גרם)</td><td>BD</td><td>324892</td><td></td></tr><tr><td>1 ליטר Sharps מיכל</td><td>N</td><td>/A N/A</td><td></td></tr><tr><td>2.4G2 נוגדן (TruStain FcX נגד עכבר CD16/32)</td><td>Biolegend</td><td>101320</td><td></td></tr><tr><td>40 &mu; m מסננת</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>22363547</td><td></td></tr><tr><td>מדיום AimV (דרגת מחקר), תוסף AlbuMax</td><td>תרמו פישר מדעי</td><td>31035025</td><td></td></tr><tr><td>חסימת מאגר מוכן</td><td>בבית</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מבשלה תיוגליקולט בינוני</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>B2551</td><td>4% תמיסת מלאי שהוכנה במים, אוטוקלאב ונשמר קפוא.</td></tr><tr><td>CD11b</td><td>Biolegend</td><td>101222</td><td>עיין בטבלה 1 לדילול וריכוז</td></tr><tr><td>CD11b</td><td>BD</td><td>550993</td><td>עיין בטבלה 1 לדילול וריכוז</td></tr><tr><td>CD11c</td><td>Biolegend</td><td>117317</td><td>עיין בטבלה 1 לדילול וריכוז</td></tr><tr><td>CD11c</td><td>Biolegend</td><td>117333</td><td>עיין בטבלה 1 לדילול וריכוז</td></tr><tr><td>CD19</td><td>BD</td><td>560375</td><td>עיין בטבלה 1 לדילול וריכוז</td></tr><tr><td>CD19</td><td>Biolegend</td><td>152410</td><td>עיין בטבלה 1 לדילול וריכוז</td></tr><tr><td>CD226</td><td>Biolegend</td><td>128808</td><td>עיין בטבלה 1 לדילול וריכוז</td></tr><tr><td>CD3e</td><td>BD</td><td>560527</td><td>עיין בטבלה 1 לדילול וריכוז</td></tr><tr><td>CD3e</td><td>Biolegend</td><td>152313</td><td>עיין בטבלה 1 לדילול וריכוז</td></tr><tr><td>CD4</td><td>Biolegend</td><td>100412</td><td>עיין בטבלה 1 לדילול וריכוז</td></tr><tr><td>CD73</td><td>eBioscience</td><td>16-0731-82</td><td>עיין בטבלה 1 לדילול וריכוז</td></tr><tr><td>CD8a</td><td>eBioscience</td><td>48-0081-82</td><td>עיין בטבלה 1 לדילול וריכוז</td></tr><tr><td>בקבוק תרבית תאים (T175 fask, 175 cm2, 550 מ"ל)</td> <td>גריינר ביו וואן</td><td>658175</td><td></td></tr><tr><td>צינורות צנטריפוגה, צינורות תחתונים חרוטיים 25 מ"מ x 89 מ"מ</td><td>בקמן קולטר</td><td>358126</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגות</td><td>בקמן</td><td></td> קולטר <td>צנטריפוגה וצנטריפוגה TC</td></tr><tr><td>קולגנאז מסוג IV</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>C5138</td><td></td></tr><tr><td>צינורות צנטריפוגה חרוטיים (15 מ"ל ו-50 מ"ל)</td><td>גריינר ביו וואן</td><td>11512303 & 11849650</td><td></td></tr><tr><td>Cryotubes</td><td>Greiner Bio One</td><td>123277</td><td>או Cryotubes</td></tr><tr><td>DMEM בינוני (1x) + 4.5 גרם/ליטר D-גלוקוז, 400 ומיקרו; M L-glutamine</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>41965-062</td><td></td></tr><tr><td>Dnase I</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11284932001</td><td></td></tr><tr><td>מגיב טרנספקציה אפקטן</td><td>Qiagen</td><td>301425</td><td></td></tr><tr><td>F4/80</td><td>Biolegend</td><td>123123</td><td>עיין בטבלה 1 לדילול וריכוז</td></tr><tr><td>F4/80</td><td>Biolegend</td><td>123133</td><td>עיין בטבלה 1 לדילול וריכוז</td></tr><tr><td>F4/80</td><td>Biolegend</td><td>123147</td><td>עיין בטבלה 1 לדילול וריכוז</td></tr><tr><td>FceR1</td><td>eBioscience</td><td>48-5898-80</td><td>עיין בטבלה 1 לדילול וריכוז</td></tr><tr><td>סרום עגל עוברי (FCS)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10270-106</td><td>מושבת בחום למשך 30 דקות בטמפרטורה של 56 מעלות; C וסטרילי מסוננים דרך 0.22 &mu; m מסנן</td></tr><tr><td>זרימה ציטומטר</td><td>תרמו פישר מדעי</td><td>&nbsp; Attune NxT</td><td></td></tr><tr><td>Flow Cytometry (FACS)</td><td>מאגר מוכן בבית</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ תרבית רקמות פלואורסצנטיות</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>EVOS FL</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>העדפת משתמש</td></tr><tr><td>תמיסת המלח המאוזנת של האנק (HBSS)</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>14175-053</td><td></td></tr><tr><td>קו</td><td></td> <td>תאים HEK293T</td><td>גדל לפחות שבוע לפני הטרנספקציה. </td></tr><tr><td>אנטיגן ליבה נטול HIV-1</td> ללא מיקופלזמה <td>בקמן קולטר</td><td>6604667</td><td></td></tr><tr><td>Hyaluronidase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3506</td><td></td></tr><tr><td>פילינג כירורגי Hydrex, כלורהקסידינג גלוקונאט 4% w/v ניקוי עור</td><td>Ecolab</td><td>3037170</td><td></td></tr><tr><td>I-A/I-E</td><td>Biolegend</td><td>107625</td><td>עיין בטבלה 1 לדילול וריכוז</td></tr><tr><td>ICAM1</td><td>Becton Dickinson</td><td>554970</td><td>עיין בטבלה 1 עבור</td></tr><tr>קו <td></td><td></td><td>תאי Jurkat T</td> לדילול וריכוז <td>שגדל לפחות שבוע לפני השימוש. </td></tr><tr><td>ערכת כתמי תאים מתים ללא מיקופלזמה חי/מת כמעט IR ניתנת לתיקון</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>L34975</td><td></td></tr><tr><td>Ly6G</td><td>Biolegend</td><td>127615</td><td>עיין בטבלה 1 לדילול וריכוז</td></tr><tr><td>עכברים</td><td></td><td></td><td>כאן השתמשו בנקבות C57BL/6, בגילאי 8-12 שבועות (נהרות צ'ארלס), אלא אם צוין אחרת</td></tr><tr><td>פיפטות מיקרו-נימיות (טווח נפח 0.5-1,000 &mu; L)</td> <td>פישר סיינטיפיק & Starlab</td><td>11963466 & 11943466 & 11973466 & S1111-3700</td><td></td></tr><tr><td>NK1.1</td><td>Biolegend</td><td>108724</td><td>עיין בטבלה 1 לדילול וריכוז</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148-500G</td><td>מוכן ל-2% w/v ב-PBS</td></tr><tr><td>pCMV-&Delta; אריזת R8.91 פלסמיד</td><td></td><td>Zuffrey, R., et al. 1997</td><td>מקודד חלבון Gag-Pol HIV המונע על ידי מקדם ציטומגלווירוס. עמידות לאמפיצילין.</td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין (100x, 10,000 U/mL)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>צלחת פטרי</td><td>Greiner Bio One</td><td>664160</td><td></td></tr><tr><td>pHR'SIN-cPPT-SEW פלסמיד</td><td></td><td>Rosas, M. et al. 2014</td><td>שונה למחקרי ביטוי shRNA ו-miR. מקודד סמן EGFP במורד הזרם מקדם SFFV ובמעלה הזרם של משפר נגיף ההפטיב של וודצ'אק. עמידות לאמפיצילין.</td></tr><tr><td>pMD2.G פלסמיד</td><td></td><td>Naldini, L. et al. 1996</td><td>מקודד מעטפת g-glycoprotein של נגיף סטומטיס שלפוחית (VSV-G). עמידות לאמפיצילין.</td></tr><tr><td>חולדה IgG1, &kappa; בקרת איזוטיפ</td><td>Becton Dickinson</td><td>550617</td><td>עיין בטבלה 1 לדילול וריכוז</td></tr><tr><td>סרום חולדה</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R9759-10ML</td><td></td></tr><tr><td>מאגר ליזה ACK בדם אדום</td><td>שהוכן בבית</td><td></td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 בינוני (1x) + 400 uM L-גלוטמין</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>21875-091</td><td></td></tr><tr><td>Saponin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S4521</td><td></td></tr><tr><td>SiglecF</td><td>BD</td><td>562681</td><td>עיין בטבלה 1 לדילול וריכוז</td></tr><tr><td>טבליות נתרן היפוכלוריט (אקונומיקה, 2,000 ppm)</td><td>Guest Medical</td><td>H8818</td><td></td></tr><tr><td>צלחת תרבית תאים סטרילית 24 בארות</td><td>Greiner Bio One</td><td>662160</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Dulbecco's PBS (DPBS) (1x) Mg++ ו-Ca2+ - ללא</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>סטרילי EDTA</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15575020</td><td></td></tr><tr><td>צינורות העברה חד פעמיים סטריליים VWR (23.0 מ"ל, 30 ס"מ)</td> <td>VWR</td><td>612-4515</td><td></td></tr><tr><td>סוכרוז</td><td>תרמו פישר</td><td>15503022</td><td></td></tr><tr><td>מספריים כירורגיים</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>העדפת משתמש</td></tr><tr><td>מזרקים (50 מ"ל ו-1 0 מ"ל)</td><td>Fisher Scientific</td><td>10084450 & 768160</td><td></td></tr><tr><td>Tim4</td><td>Biolegend</td><td>130007</td><td>עיין בטבלה 1 לדילול וריכוז</td></tr><tr><td>צלחת תרבית תאים 96 בארות U-bottom</td><td>Greiner Bio One</td><td>650180</td><td></td></tr></tbody></table>

הכנה וקטורית לנטיויראלית לאפנון יעיל של גנים ומיקרו-רנ"א של מקרופאגים שוכנים ברקמת חלל הצפק in vivo בעכברים

Lentiviral Vector Preparation for Efficient Gene and MicroRNA Modulation of Peritoneal Cavity Tissue&#45;Resident Macrophages In Vivo in Mice

Peritoneal tissue-resident macrophages have broad functions in the maintenance of homeostasis and are involved in pathologies within local and neighboring ...

lentiviral-vector-preparation-for-efficient-gene-microrna-modulation

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

יש מיקרו RNA תפקידים משמעותיים במבנה המוח ותפקודו. כאן אנו מתארים שיטה לאכיפת מירנה היפוקמפוס יתר ביטוי באמצעות הזרקת stereotactic של lentivirus מירנה מביע מהונדס. גישה זו יכולה לשמש כדרך מהירה יחסית על מנת להעריך...

Lentiviruses הזרקת Stereotactic של microRNA-לבטא באזור CA1 היפוקמפוס העכבר והערכה של תוצאות ההתנהגות

בפרוטוקול זה, אנו מתארים שיטות להעברה יעילה של קווי תאי מקרופאגים של עכברים עם siRNAs באמצעות מערכת המעבורת Amaxa Nucleofector 96-well, לעורר את המקרופאגים עם ליפופוליסכריד ולנטר את ההשפעות על ייצור ציטוקינים דלקתיים.

באמצעות RNA-התערבות לחקר התגובה החיסונית המולדת בהמקרופאגים עכבר

אנו מתארים כאן פרוטוקול פשוט לבידוד מקרופאגים צפקיים של עכברים. לאחר הליך זה מיצוי RNA לביצוע ניתוח ביטוי גנים על גירוי קולטנים דמויי טול.

בידוד של הצפק Murine המקרופאגים לבצע ניתוח ביטוי גנים בעת ביצוע כמו אגרה רצפטורים הגירוי

הזרקת וריד הזנב hydrodynamic של וקטורים אינטגרציה מבוססת-transposon מאפשרת יציבה תרביות תאים של hepatocytes מאתר ויוו. כאן, אנו מציגים פרוטוקול מעשית למערכות תרביות תאים המאפשרת ביטוי מכוננת ארוכת טווח של transgene יחיד או ביטוי מכוננת ו דוקסיציקלין-inducible משולב של transgene או של מיר-shRNA בכבד.

מערכות מכוננת Inducible עבור שינוי גנטי In Vivo של העכבר Hepatocytes באמצעות הזרקת וריד הזנב Hydrodynamic

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לקדם אינטגרציה transgene וייצור של מייסד העכברים הטרנסגניים עם יעילות גבוהה על ידי זריקה פשוטה של וקטור במרחב perivitelline של oocyte מופרית lentiviral.

Lentiviral מתווכת הייצור של העכברים הטרנסגניים: שיטה פשוטה ויעילה מאוד עבור לימוד ישיר של המייסדים

במאמר זה, אנו מספקים שפרוטוקול מפורט עבור הביטוי של פיוז'ן פלורסנט חלבונים במח העצם מאתר נגזר התאים הדנדריטים ומקרופגים. השיטה מבוססת על התמרה חושית של מח העצם אבות עם בונה retroviral ואחריו בידול לתוך מקרופאגים, הדנדריטים תאים במבחנה.

ביטוי של חלבונים פיוז'ן פלואורסצנט תאים דנדריטים הנגזרות מח עצם מאתר ו מקרופאגים

אנו מתארים שיטה של שימוש polyethyleneimine (פיי)-מצופה חלקיקי תחמוצת ברזל פאראמגנטי עבור מקרופאגים transfecting עם siRNA. חלקיקים אלה יכולים להעביר ביעילות siRNA מקרופאגים במבחנה , ויוו , שתיקה ביטוי גנים היעד.

חלקיקי תחמוצת ברזל מצופה Polyethyleneimine כרכב למסירה של RNA מפריעות קטן כדי מקרופאגים במבחנה , In Vivo

לפלח epigenome DNA עריכה מייצג גישה טיפולית רב-עוצמה. פרוטוקול זה מתאר את הייצור, טיהור, הריכוז של ה-all-in-one וקטורים lentiviral מסתירים את transgene CRISPR-dCas9-DNMT3A עבור יישומים לעריכת epigenome בתא גזע pluripotent המושרה אנושי (hiPSC)-נגזר נוירונים.

וקטור lentiviral פלטפורמה למסירה יעיל של כלי עריכת Epigenome לתוך האדם המושרה מודלים המחלה נגזר תאי גזע Pluripotent

מקרופאגים, במיוחד מקרופאגים ראשוניים, מאתגרים transfect כפי שהם מתמחים בזיהוי מולקולות של מוצא לא עצמי. אנו מתארים פרוטוקול המאפשר העברה יעילה מאוד של מקרופאגים הראשי עם mRNA שנוצר מתבניות DNA כגון פלמידים.

העברה יעילה במיוחד של מקרופאגים ראשוניים עם מחוץ לגופית

פרוטוקול זה נועד להציג שיטה לייצור וטיהור ביומימטיקה של וזיקולה חוץ-תאית שמקורם בתאי גזע מזנכימיים (MSC) לטיפול גנטי. הננווסיקולה מוגבלת לשכבות ליפידים שמקורן ב-MSC ומכילה AAVs רקומביננטיים הנושאים את הגן המעניין בלומן. ננו-ווסיקולה זו מספקת וקטור משופר להעברת גנים ב-in vivo .

פיתוח ננוביסיקולות עטופות בממברנה של תאי גזע מזנכימיים לשיפור העברת הגנים

למד הכנת וקטורים לנטיויראליים לאפנון יעיל של גנים במקרופאגים שוכני רקמת חלל הצפק בעכברים. שיטה זו מאפשרת שילוב יציב של טרנסגנים וביטוי יעיל לחקר תפקודי מערכת החיסון.

הכנה וקטורית לנטיויראלית לאפנון יעיל של גנים ומיקרו-רנ"א של מקרופאגים שוכנים ברקמת חלל הצפק in vivo בעכברים

גלה סרטונים נוספים