מיון חד-תאי של תאי גזע מזנכימליים אימונופנוטיפיים משיניים נשירות שעברו קילוף אנושי
November 10th, 2023
פרוטוקול זה מתאר את השימוש במיון תאים המופעלים על ידי פלואורסצנטיות של תאי גזע מזנכימליים אנושיים בשיטת המיון של תא יחיד. באופן ספציפי, השימוש במיון תא בודד יכול להשיג טוהר של 99% של התאים האימונופנוטיפיים מאוכלוסייה הטרוגנית בשילוב עם גישה מבוססת ציטומטריית זרימה מולטי-פרמטרית.
פרוטוקול זה מפרט שיטה חיונית לאפיון וטיהור מדויק של תאי גזע מזנכימליים אנושיים על פלטפורמה אחת, המאפשרת יישומים יעילים במורד הזרם כמו השתלת תאי גזע. הוא משמעותי במיוחד עבור מעבדות קליניות המשפרות בדיקות מולקולריות וציטוגנטיות באמצעות מיון מדויק של תא בודד של תאי גזע מהונדסים או טבעיים. השיטות הנפוצות לבידוד אוכלוסיות תאי גזע מטוהרים מתייחסות לטכניקות כגון הפרדה אימונומגנטית, שיפוע צפיפות או מיון תאים מיקרופלואידים.
טכניקה כמו מיון אינדקסים מאפשרת לקשר אותו לפרופיל RNA של תא בודד שיכול לחלץ מידע שעתוק של כל תא ממוין. האתגרים העיקריים כוללים שמירה על איכות הדגימה, אופטימיזציה של תנאי תרבית תאים, כולל צפיפות התא וכדאיות במהלך המיון ולאחריו. בנוסף, תישקל גם בחירת גדלי חרירים מתאימים למכשיר והבטחת גישה בזמן לממיינים.
פרוטוקול זה מדגים לוח צביעה מדויק לאימונופנוטיפ ולמיון אוכלוסיית התאים הרצויה. הוא מבטיח איכות דגימה מתוקננת, כדאיות תאים אופטימלית, צפיפות למיון אוכלוסיית תאים ומגדיר מיון פרמטרים ניסיוניים בתוכנת FACSDiva . שיטה זו מאפשרת בחירה פשוטה ואימונופנוטיפ של אוכלוסיית תאי גזע המבטאים סמנים ביולוגיים ספציפיים.
פלטפורמה פשוטה זו מאפשרת מיון יעיל המבוסס על אוכלוסיית היעד המסייעת ומקבלת דגימות מטוהרות ליישומים הבאים במורד הזרם.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
סקירה
פרוטוקול זה מתאר שיטה לבידוד מדויק ואפיון של תאי גזע מזנכימליים אנושיים (MSCs) באמצעות מיון תאים מועשר פלואורסצנטי (FACS). הפרוטוקול משפר את טוהר אוכלוסיות תאי הגזע ל-99%, ומקל על השימוש בהם ביישומים נוספים כגון השתלת תאי גזע.
מרכיבי מחקר מרכזיים
תחום המחקר
- ביולוגיה של תאי גזע
- טכניקות מיון תאים
- שיטות אימונופנוטיפינג
רקע
- חשיבות של MSCs ביישומים קליניים
- אתגרים בהשגת אוכלוסיות תאי גזע טהורים
- שיטות קיימות לבידוד תאי גזע
שיטות ששימשו
- מיון תאים מועשר פלואורסצנטי (FACS)
- תאי גזע מזנכימליים אנושיים (MSCs)
- ציטומטריה זרימה רב-פרמטרית
תוצאות עיקריות
- הושג טוהר של 99% של תאים בעלי פנוטיפ אימונולוגי באמצעות FACS
- הוכחה להתמיינות מוצלחת לשושלות שונות (אדיפוציטים, אוסטאובלסטים, כונדרוציטים)
- סטרטגיות אופטימיזציה שסופקו לגידול תאים ולמיונם
מסקנות
- שיטה זו משפרת משמעותית את הדיוק של בידוד תאי הגזע.
- יש לה השלכות חשובות לקידום מחקר ותרפיות על תאי גזע.
שאלות נפוצות
Chapters in this video
0:00
Introduction
2:06
A Step‐by‐Step Guide for Seeding and Differentiation of Mesenchymal Stem Cell Cultures for Characterization
4:10
Lineage‐Specific Cytochemical Staining of Mesenchymal Stem Cells for Characterizing Differentiated Cells
6:07
Mesenchymal Stem Cell Surface Staining for Immunophenotyping
8:30
Mesenchymal Stem Cell Sample Preparation,Flow Cytometric Analysis, and Cell Sorting
