Name: פציעת הקפאה בשריר המסה של עכבר להקמת מודל פיברוזיס שריר הלסת (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-12-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 33 s
Description: למדו פרוטוקול פציעת הקפאה ליצירת מודל עכברים לפיברוזיס שריר הלסת. השיטה מאפשרת השוואה בין התחדשות שרירי הגפיים לשרירי הפנים וחושפת מנגנוני התחדשות ייחודיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך על ידי מענקים מוועדת הבריאות והבריאות המחוזית של סצ'ואן (מספר מענק: 21PJ063) והקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מספר מענק: 82001031).

כל ההליכים בבעלי חיים במחקר זה נבדקו ואושרו על ידי הוועדה האתית של בית הספר לסטומטולוגיה במערב סין, אוניברסיטת סצ'ואן (WCHSIRB-D-2020-114). עכברי C57BL/6 זכרים (בני 5 שבועות) גודלו במתקן מבוקר לחות (53 ± 2%) ובטמפרטורה מבוקרת (23 ± 2 מעלות צלזיוס) והיו במחזור אור/חושך של 12 שעות. ראה טבלת חומרים לפרטים הקשורים לכל החומרים, הריאגנטים והמכשירים המשמשים בפרוטוקול זה.
1. הקפאת פציעה
<ol><li>הרדמה: להרדים את העכברים בכדורי צמר גפן ספוגי איזופלורן ולהזריק tiletamine-zolazepam intraperitoneally במינון של 50 מ"ג / ק"ג. לפני ואחרי ניתוח שיכוך כאבים סופק על ידי הזרקה intraperitoneal של meloxicam במינון של 1 מ"ג / ק"ג. הגנו על עיניהם באמצעות משחה וטרינרית. כרית חימום שנשמרה בטמפרטורה של 38 מעלות צלזיוס הוכנסה מתחת לווילון הכירורגי במהלך כל ההליך כדי לספק תמיכה תרמית לחיה. תקנו את העכברים בעזרת סרט הדבקה לאחר שהשכיבו אותם על צדם על שולחן ניתוחים (איור 1). להעריך את מידת ההרדמה על ידי אובדן רפלקס העפעפיים, רפלקס התיקון ורפלקס הנסיגה מדוושה. הערה: בעת מריחת חומר הרדמה איזופלואורן, החזק את העכבר ביד אחת ואת כדור הצמר גפן הספוג באיזופלואורן ביד אחרת. הקפידו לשמור את כדור הצמר גפן במרחק מהחיה כדי למנוע אי נוחות וגירוי בעור.</li>
	<li>הסרת שיער לפני הניתוח: השתמש בסכין גילוח חשמלי כדי לגלח את השיער על השוק והפנים של העכבר ולמרוח את משחת depilatory עם צמר גפן על העור, מכסה את שריר Masseter ואת שריר tibialis הקדמי. לאחר 1-2 דקות, שטפו את העיסה עם מגבון כירורגי על בסיס אתנול (איור 2A ואיור 2G). אתרי הניתוח עברו חיטוי בשלושה סבבים של פילינג על בסיס יוד ו-75% אתנול. הערה: סכין הגילוח החשמלי לבדו לא הספיק להסרת שיער, במיוחד באזור המסה. בעת החלת הדבק depilatory, חשוב לא להשתמש להדביק מוגזם. נגבו את העור בעדינות בעת שטיפת המשחה כדי למנוע כוויות בעור.</li>
	<li>חשיפה לשדה הניתוח: יש לכסות בווילונות כירורגיים לפני הניתוח. עבור שריר MAS, למשש תחילה לאורך הקצה התחתון של הלסת התחתונה. במרחק של 5 מ"מ מהקצה, בצעו חתך של 7 מ"מ לאורך הקו המחבר בין הקו האוראלי לטרגוס (הקו המקווקו מציין את מיקום החתך באיור 2B).</li>
	<li>עבור שריר TA, יש למשש תחילה לאורך השוק כדי לאתר את הקצה הקדמי של עצם השוקה. חתכו 2 מ"מ אחורית לקצה העור דרך העור בעזרת אזמל, החל מהברך וכלה בקרסול (הקו המקווקו מציין את מיקום החתך באיור 2H). עבור כל עכבר, אם שריר MAS ושריר TA בצד שמאל נפגעים, השתמש בשריר השני בצד הנגדי כבקרה. הערה: חתך זה שטחי מאוד כדי להבטיח שהשרירים לא ייפגעו במהלך החתך. החתך בפנים לא צריך להיות קרוב מדי לטרגוס. אחרת, בלוטת הפרוטיד תיחשף, מה שיוביל לדימום מוגזם במהלך תהליך ההקפאה הבא.</li>
	<li>הקפאת קרח יבש: החזיקו פיסה אחת של קרח יבש עם מלקחיים מקוררים מראש לאורך הצירים הארוכים של שרירי MAS ו-TA (איור 2C ואיור 2I, בהתאמה). הניחו את הקרח היבש ישירות על פני השטח של השריר למשך 5 שניות. אשרו שהשריר נראה נוקשה ולבן בהיר מיד לאחר הסרת הקרח היבש (איור 2D ואיור 2J), אולם הוא חוזר לצבעו ולמרקמו הרגילים תוך 22-25 שניות, בדומה לשריר הסמוך שלא נפגע (איור 2E ואיור 2K). הערה: יש לקרר מראש את המלקחיים המחזיקים את הקרח היבש כדי למנוע סובלימציה מהירה של הקרח היבש. טיימר הוא חובה בביצוע פציעת הקפאה של 5 שניות וספירת זמן ההחלמה של 22-25 שניות של השריר. יש לנטוש כל שריר שזמן ההחלמה שלו קצר מ-22 שניות או ארוך מ-25 שניות. שלב זה דורש תרגול.</li>
	<li>סגירת פצע: לאחר התאוששות מלאה של השריר, סגרו את פצע העור עם לפחות שלושה תפרים 7-0 (איור 2F ואיור 2L).</li>
	<li>החייאה: כאשר התפר הושלם, הכניסו את העכברים לכלוב עם תמיכה תרמית ועקבו אחריהם ברציפות עד שכל הרפלקסים הנכונים הוחזרו.</li>
</ol>2. אוסף שרירים
<ol><li>להרדים את העכברים עם מנת יתר של isoflurane, ואחריו נקע צוואר הרחם. קצרו את שרירי MAS ו-TA משני הצדדים לצורך ניתוח היסטולוגי.</li>
	<li>דיסקציה של שריר MAS: יש לפתוח את העור על פני העכבר ולהסיר את בלוטת הפרוטיד כדי לחשוף את החלק האחורי של שריר ה-MAS. נתחו את MAS מהחיבור הקדמי שלו עד לחיבור האחורי שלו על הלסת התחתונה. האזור המנוקד הלבן מציין את החלק החשוף של MAS (איור 3A). הערה: שריר MAS מורכב מתאים עמוקים ושטחיים, שניהם מחוברים באופן הדוק לפני השטח של הלסת התחתונה. הקפד ללחוץ על המספריים ללסת התחתונה במהלך הדיסקציה כדי להבטיח בידוד מלא של MAS. היזהר להבחין בין הזיגומטיקו-מנדיבולריס לבין MAS על ידי גבולותיו בין הזיגומטי ללסת התחתונה.</li>
	<li>דיסקציה של שריר TA: חתכו את העור מהקרסול ועד הברך והסירו את הפאשיה כדי לחשוף את שריר TA. השתמש בקצה של מלקחיים micro-dissection כדי לבודד את הגיד של TA ולהחליק אותו כל הדרך עד הברך כדי לנתק את הסיבים המתחברים לשוקה. לאחר מכן, חתכו את הגיד בקרסול (איור 3B). הערה: עבור שריר TA, ישנם כמה גידי שריר סביב קרסול העכבר; יידרש תרגול כדי להבחין בגיד של ת"א, שהוא הגדול והקרוב ביותר לשוקה.</li>
	<li>טרום קירור איזופנטאן: מכינים שתי חביות בידוד; ממלאים את החבית הקטנה באיזופנטאן ואת החבית הגדולה בחנקן נוזלי. הניחו את החבית הקטנה בתוך החבית הגדולה 10 דקות לפני נתיחת השריר (איור 3D).</li>
	<li>הכנת תבנית הטבעה: הכינו תבנית רדיד אלומיניום גלילית לכל דגימה ומלאו אותה בתרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית (OCT).</li>
	<li>קפוא טרי: השקיעו את השריר ב-OCT, והחזיקו אותו בניצב לתרכובת OCT (איור 3C). השתמש מחזיק מחט כדי להעביר את התבנית לתוך isopentane precooled. המתינו 40 שניות עד שה-OCT יהפוך לבן ומוצק (איור 3D). הערה: ודא שמיקום התבנית אינו נמוך מדי. אחרת, האיזופנטאן יתערבב עם ה-OCT ויפגע בתהליך הקפאת השרירים. רמת OCT בתבנית צריכה להיות דומה לגובה דגימת השריר. הימנע מכמות מוגזמת של OCT כדי להבטיח הקפאה מהירה ויעילה.</li>
	<li>אחסון דוגמאות: אחסנו דגימות שריר קפואות טריות בצלחות 24 בארות המסומנות בבירור. חתכו את הדגימות מיד או אחסנו אותן בטמפרטורה של -80°C לשימוש ארוך טווח.</li>
</ol>3. ניתוח היסטולוגי
<ol><li>השתמש בהקפאה כדי לחתוך מקטעים בעובי 10 מיקרומטר מדגימת השריר לשקופיות שטופלו על פני השטח.</li>
	<li>הניחו את המגלשות באצטון קר כקרח למשך 20 דקות וייבשו אותן באוויר במכסה האדים למשך 20 דקות.</li>
	<li>שטפו את המגלשות במשך 3 x 5 דקות במי מלח חוצצים פוספט (PBS). הערה: משלב זה ואילך, המגלשות נשמרו בתא לחות כדי למנוע התייבשות.</li>
	<li>סיריוס מכתים אדום<ol><li>הכינו את תמיסת העבודה Sirius Red על ידי המסת 0.5 גרם של אבקת Sirius Red ב-500 מ"ל של חומצה פיקרית רוויה.</li>
		<li>צבעו את המגלשות עם פתרון העבודה Sirius Red למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר.</li>
		<li>שטפו את המגלשות במשך 2X5 דקות עם 0.5% חומצה אצטית.</li>
		<li>לאחר תהליך הצביעה, הדגימות צריכות להיות מיובשות תחילה באתנול 95% למשך 15 שניות, ולאחר מכן התייבשות באתנול נטול מים למשך דקה אחת. השלב האחרון כולל הרכבה של המגלשה עם בלסם ניטרלי.</li>
	</ol></li>
	<li>צביעה אימונוהיסטולוגית<ol><li>חדרו את המקטעים עם 0.3% טריטון ב-PBS למשך 20 דקות בטמפרטורת החדר, ולאחר מכן שטיפת PBS.</li>
		<li>עבור צביעת Pax7, חסום את המקטעים באמצעות המגיב שסופק עם הערכה המוזכרת; לצביעת למינין ו-Pdgfrα, יש לחסום עם אלבומין בסרום בקר 5% (BSA) וסרום חמור 5% ב-PBS למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר.</li>
		<li>יש לדגור על החלקים עם נוגדנים ראשוניים נגד Pax7, למינין ו-Pdgfrα למשך הלילה בטמפרטורה של 4°C, ולאחר מכן לשטוף עם PBS למשך 3X5 דקות.</li>
		<li>יש לדגור על המקטעים עם נוגדנים משניים מצומדים בצבע פלואורסצנטי למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר, ולאחר מכן לשטוף עם PBS במשך 3X5 דקות.</li>
		<li>יש לדגור עם 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) במשך 3 דקות בטמפרטורת החדר, ולאחר מכן לשטוף עם PBS במשך 3 x 5 דקות.</li>
		<li>הניחו את אמצעי ההרכבה על החלק, הניחו את הכיסוי מעליו והשתמשו בלק כדי לאטום את הכיסוי.</li>
	</ol></li>
</ol>

ביסוס מודל פיברוזיס שרירי הלסת בעכברים באמצעות פציעת הקפאה

<ol><li>Yoshioka, K., Kitajima, Y., Seko, D., Tsuchiya, Y., Ono, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+body+region+specificity+in+murine+models+of+muscle+regeneration+and+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiologica%22%5BJournal%5D)">The body region specificity in murine models of muscle regeneration and atrophy.</a> Acta Physiologica. 231 (1), e13553(2021).</li>
<li>Worley, M. L., Patel, K. G., Kilpatrick, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cleft+lip+and+palate%5BTitle%5D)+AND+%22Clinics+in+Perinatology%22%5BJournal%5D)">Cleft lip and palate.</a> Clinics in Perinatology. 45 (4), 661-678 (2018).</li>
<li>Pai, B. C. J., Hung, Y. -T., Wang, R. S. H., Lo, L. -J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outcome+of+patients+with+complete+unilateral+cleft+lip+and+palate%3A+20-year+follow-up+of+a+treatment+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Outcome of patients with complete unilateral cleft lip and palate: 20-year follow-up of a treatment protocol.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 143 (2), 359e-367e (2019).</li>
<li>Parsaei, Y., Chandler, L., Smetona, J. T., Lopez, J., Steinbacher, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aesthetic+repair+of+unilateral+cleft+lip+using+the+modified+inferior+triangle+and+adjunctive+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Aesthetic repair of unilateral cleft lip using the modified inferior triangle and adjunctive techniques.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 149 (1), 70e-73e (2022).</li>
<li>Schubert, F. R., Singh, A. J., Afoyalan, O., Kioussi, C., Dietrich, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((To+roll+the+eyes+and+snap+a+bite+-+function%2C+development+and+evolution+of+craniofacial+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+In+Cell+%26+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">To roll the eyes and snap a bite - function, development and evolution of craniofacial muscles.</a> Seminars In Cell & Developmental Biology. 91, 31-44 (2019).</li>
<li>Vyas, B., Nandkishore, N., Sambasivan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vertebrate+cranial+mesoderm%3A+developmental+trajectory+and+evolutionary+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Life+Sciences%3A+CMLS%22%5BJournal%5D)">Vertebrate cranial mesoderm: developmental trajectory and evolutionary origin.</a> Cellular and Molecular Life Sciences: CMLS. 77 (10), 1933-1945 (2020).</li>
<li>Sambasivan, R., Kuratani, S., Tajbakhsh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+eye+on+the+head%3A+the+development+and+evolution+of+craniofacial+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">An eye on the head: the development and evolution of craniofacial muscles.</a> Development. 138 (12), 2401-2415 (2011).</li>
<li>Cheng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Head+muscle+fibro-adipogenic+progenitors+account+for+the+tilted+regeneration+towards+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Head muscle fibro-adipogenic progenitors account for the tilted regeneration towards fibrosis.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 589, 131-138 (2022).</li>
<li>Pavlath, G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneity+among+muscle+precursor+cells+in+adult+skeletal+muscles+with+differing+regenerative+capacities%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Heterogeneity among muscle precursor cells in adult skeletal muscles with differing regenerative capacities.</a> Developmental Dynamics. 212 (4), 495-508 (1998).</li>
<li>Camacho-Alonso, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+of+lingual+musculature+in+rats+using+myoblasts+over+porcine+bladder+acellular+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Diseases%22%5BJournal%5D)">Regeneration of lingual musculature in rats using myoblasts over porcine bladder acellular matrix.</a> Oral Diseases. 27 (6), 1580-1589 (2021).</li>
<li>LeBoff, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinician%27s+guide+to+prevention+and+treatment+of+osteoporosis%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoporosis+International%22%5BJournal%5D)">The clinician's guide to prevention and treatment of osteoporosis.</a> Osteoporosis International. 33 (10), 2049-2102 (2022).</li>
<li>Julien, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+contribution+of+skeletal+muscle+mesenchymal+progenitors+to+bone+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Direct contribution of skeletal muscle mesenchymal progenitors to bone repair.</a> Nature Communications. 12 (1), 2860(2021).</li>
<li>Mahdy, M. A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycerol-induced+injury+as+a+new+model+of+muscle+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Glycerol-induced injury as a new model of muscle regeneration.</a> Cell and Tissue Research. 374 (2), 233-241 (2018).</li>
<li>Guardiola, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+acute+skeletal+muscle+regeneration+by+cardiotoxin+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Induction of acute skeletal muscle regeneration by cardiotoxin injection.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (119), 54515(2017).</li>
<li>Larouche, J. A., Wallace, E. C., Spence, B. D., Buras, E., Aguilar, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatiotemporal+mapping+of+immune+and+stem+cell+dysregulation+after+volumetric+muscle+loss%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Spatiotemporal mapping of immune and stem cell dysregulation after volumetric muscle loss.</a> JCI Insight. 8 (7), e162835(2023).</li>
<li>Anderson, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+a+critical+size+threshold+for+volumetric+muscle+loss+in+the+mouse+quadriceps%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+C%2C+Methods%22%5BJournal%5D)">Determination of a critical size threshold for volumetric muscle loss in the mouse quadriceps.</a> Tissue Engineering. Part C, Methods. 25 (2), 59-70 (2019).</li>
<li>Lukjanenko, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+disrupts+muscle+stem+cell+function+by+impairing+matricellular+WISP1+secretion+from+fibro-adipogenic+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Aging disrupts muscle stem cell function by impairing matricellular WISP1 secretion from fibro-adipogenic progenitors.</a> Cell Stem Cell. 24 (3), 433-446.e7 (2019).</li>
<li>Dong, J., Dong, Y., Chen, Z., Mitch, W. E., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathway+to+muscle+fibrosis+depends+on+myostatin+stimulating+the+differentiation+of+fibro%2Fadipogenic+progenitor+cells+in+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">The pathway to muscle fibrosis depends on myostatin stimulating the differentiation of fibro/adipogenic progenitor cells in chronic kidney disease.</a> Kidney International. 91 (1), 119-128 (2017).</li>
<li>Lemos, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nilotinib+reduces+muscle+fibrosis+in+chronic+muscle+injury+by+promoting+TNF-mediated+apoptosis+of+fibro%2Fadipogenic+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Nilotinib reduces muscle fibrosis in chronic muscle injury by promoting TNF-mediated apoptosis of fibro/adipogenic progenitors.</a> Nature Medicine. 21 (7), 786-794 (2015).</li>
<li>Joe, A. W. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+injury+activates+resident+fibro%2Fadipogenic+progenitors+that+facilitate+myogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Muscle injury activates resident fibro/adipogenic progenitors that facilitate myogenesis.</a> Nature Cell Biology. 12 (2), 153-163 (2010).</li>
<li>Biferali, B., Proietti, D., Mozzetta, C., Madaro, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibro-adipogenic+progenitors+cross-talk+in+skeletal+muscle%3A+the+social+network%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+In+Physiology%22%5BJournal%5D)">Fibro-adipogenic progenitors cross-talk in skeletal muscle: the social network.</a> Frontiers In Physiology. 10, 1074(2019).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

ישנם מגוון מודלים של פציעות לחקר התחדשות שרירי השלד, כולל שימוש בגירויים פיזיים, כימיים וכירורגיים 10,11,12,13,14,15,16. קרדיוטוקסין ובריום כלוריד הם שני הכימיקלים הנפוצים ביותר ליזום התחדשות שרירים10,11, אך הם גורמים לפיברוזיס חולף ...

שרירי הלסת הם קריטיים בפעילויות פיזיולוגיות יומיומיות כגון מסטיקציה, דיבור, נשימה והבעות פנים1. עם זאת, בעיוותים אורופציאליים מולדים, שרירים אלה מפגינים שינויים אטרופיים ופיברוטיים, מה שמוביל לפגיעה בבריאות הגוף ובקוגניציה חברתית2. ניתוח שחזור פנים נותר טיפול הקו הראשון, אך עד 30-70% מהמטופלים לאחר הניתוח עדיין סובלים מאובדן שרירים ותפקוד לקוי של שרירים 3,4 כישלון התחדשות שריר הלסת מיוחס לגורמים פנימיים, שאינם ניתנים לתיקון על ידי ניתוח בלבד.
הופעתם של שרירי הלסת היא חידוש אבולוציוני, המלווה את ראש החוליות המורכב והלב הקאמרי 5,6. שלא כמו עמיתיהם הגפיים שמקורם בסומיט, שרירי הלסת מקורם בקשת הענפית7. תווים פילוגנטיים ואונטוגנטיים אלה עשויים לגרום להם להתנהגויות רגנרטיביות מובחנות8. דווח כי שריר המעסה (MAS) פיתח פיברוזיס חמור בזמן ששריר הטיביאליס הקדמי (TA) התחדש במלואו לאחר חשיפה באותה מידה של פציעה 1,9. עם זאת, המנגנון הבסיסי של התחדשות נותר מובן היטב.
במחקר זה נקבע מודל פציעה מקפיא של שריר המסה של עכברים כדי להקל על חקירת התחדשות שרירי הפנים. בחרנו 14 יום לאחר הפציעה כנקודת הזמן להערכת פנוטיפ פיברוזיס מכיוון שזו הייתה נקודת הזמן המוקדמת ביותר שבה ניתן היה להבחין בסטייה בין שני שרירים. התחדשות מלאה של MAS לאחר פציעה דורשת לפחות 40 שבועות1. באופן עקבי, מחקר זה גילה שקיעת קולגן יוצאת דופן לאחר פציעה קפואה של MAS בהשוואה להתחדשות רגילה של TA לאחר 14 יום לאחר הפציעה. בעזרת מודל זה ניתן לבצע מחקרים מכניסטיים נוספים על ניוון שרירים ופיברוזיס, אשר בתורו יסייעו בפיתוח דרכים טיפוליות פוטנציאליות לקידום התחדשות שרירי הלסת לאחר הניתוח.

<table><tbody><tr><td>מזרק 1 מ"ל</td><td>Shifeng מכשירים ומכשירים רפואיים (צ'נגדו, סצ'ואן, סין)</td> <td>מזרק 1 מ"ל</td> <td>/</td></tr> <tr><td></td><td>Acetone Chron Chemicals</td><td>שקופיות מיקרוסקופ אצטון</td> <td>/</td></tr> <tr><td>הידבקות</td><td>Citotest Scientific</td><td>188105</td> <td>/</td></tr> <tr><td>Animal Depilatory</td><td>Phygene Scientific</td><td>PH1877</td> <td>/</td></tr> <tr><td>BSA (אלבומין סרום בקר)</td> <td>Solarbio Life Sciences</td><td>A8010</td><td>/</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Solarbio Life Sciences</td><td>C0065</td><td>/</td></tr><tr><td>חמור נגד עזים Alexa Fluor 488</td><td>Abcam</td><td>ab150129</td><td>1:200</td></tr><tr><td>סרום חמור</td><td>Solarbio Life Sciences</td><td>SL050</td><td>/</td></tr><tr><td>Dry Ice</td><td>Sinrro Technology (צ'נגדו, סצ'ואן, סין)</td><td>קרח יבש בצורת אורז</td><td>/</td></tr><tr><td>IFKine חמור אדום נגד ארנב</td><td>Abbkine Scientific Company</td><td>A24421</td><td>1:200</td></tr><tr><td>חביות בידוד (גדולות)</td> <td>Thermos</td><td>D600</td> <td>/</td></tr> <tr><td>חביות בידוד (קטנות)</td> <td>Polar Ware</td><td>250B</td> <td>/</td></tr> <tr><td>Isoflurane</td><td>RWD Life Technology Company (שנזן, גואנגדונג, סין)</td> <td>R510-22</td> <td>/</td></tr> <tr><td>Isopentane</td><td>MACKLIN</td><td>M813375</td> <td>/</td></tr> <tr><td>Laminin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L9393</td><td>1:1000</td></tr><tr>טכנולוגיית<td>Sinrro חנקן נוזלי</td><td>(צ'נגדו, סצ'ואן, סין)</td><td>/</td><td>/</td></tr><tr><td>ערכת M.O.M</td><td>מעבדות וקטור</td><td>BMK-2202</td><td></td></tr><tr><td>עכברים&nbsp;</td><td>&nbsp; חברת הטכנולוגיה הביולוגית Dashuo (צ'נגדו, סצ'ואן, סין)</td><td>בן 5 שבועות</td><td>/</td></tr><tr><td>מדיום הרכבה</td><td>Solarbio Life Sciences</td><td>S2100</td><td>/</td></tr><tr><td>Nertral</td><td>balsam Solarbio Life Sciences</td><td>G8590</td><td>/</td></tr><tr><td>Pax7</td><td>Developmental Studies Hybridoma Bank&nbsp;</td><td>Pax7</td><td>1:5</td></tr><tr><td>Pdgfra</td><td>R& D systems</td><td>AF1062</td><td>1:40</td></tr><tr><td>Sirus Red Staining Kit</td><td>Solarbio Life Sciences</td><td>G1472</td><td>/</td></tr><tr><td>מכשירים כירורגיים (מלקחיים, מספריים, מחזיק מחט, אזמל ותפרים)</td> <td>Zhuoyue Medical Instrument (סוקיאן, ג'יאנגסו, סין)</td><td>/</td><td>/</td></tr> <tr><td>Tissue-tek OCT</td><td>Sakura</td><td>4583</td><td>/</td></tr><tr><td>Triton</td><td>Shanghai Scigrace Biotech</td><td>ABIO-Biofroxx-0006A</td><td>/ </td></tr><tr><td>Zoletil</td><td>Virbac</td><td>Zoletil 50</td><td>/</td></tr></tbody></table>

פציעת הקפאה בשריר המסה של עכבר להקמת מודל פיברוזיס שריר הלסת

Freezing Injury in Mouse Masseter Muscle to Establish an Orofacial Muscle Fibrosis Model

שריר הלסת מהווה תת-קבוצה של רקמת שריר השלד, עם מסלול אבולוציוני מובהק ומקור התפתחותי. בניגוד לשרירי הגפיים שמקורם בסומיט, שרירי הלסת מקורם בקשתות הענפיות, עם תרומות בלעדיות מהפסגה העצבית הגולגולתית. מחקר שנערך לאחרונה גילה כי התחדשות שונה גם בקבוצת שרירי הפנים. עם זאת, מנגנון הרגולציה הבסיסי עדיין לא נחשף. המודלים הנוכחיים להתחדשות שרירי השלד מתמקדים בעיקר בשרירי הגפיים והגו. בפרוטוקול זה, קרח יבש שימש לגרימת פציעת הקפאה בשריר המסה של העכבר ובשריר הטיביאליס הקדמי ליצירת מודל פיברוזיס של שריר הפנים. הדינמיקה הטמפורלית של תאי לוויין שריר ואבות פיברו-אדיפוגניים הייתה שונה בין שני השרירים, מה שהוביל לפגיעה בהתחדשות מיופייבר ולשקיעת מטריצה חוץ-תאית מוגזמת. בעזרת מודל זה, מחקר מעמיק יותר של התחדשות שרירים באזור orofacial יכול להתבצע כדי לפתח גישות טיפוליות עבור חולים עם מחלות orofacial .

צביעה אדומה של HE וסיריוס (איור 4 ואיור משלים S1) חשפה התחדשות שרירים מלאה של TA במודל זה של פציעת הקפאה. לעומת זאת, MAS הציג רגנרציה לקויה של מיופייבר ושקיעת מטריצה חוץ-תאית מוגזמת. ההיסטולוגיה של שרירי MAS ו-TA שלמים מוצגת באיור 4A,B, כאשר שרירי המיופייבר נמצאים ביישור והאזור הפיברוטי הופיע רק בחלל הבין-תאי ובין צרורות שונים. בעוד ששריר TA נשאר במידה רבה באותו מבנה שריר כמו השליטה השלמה שלו לאחר 14 יום לאחר הפ...

מטרת פרוטוקול זה היא לבסס מודל פיברוזיס שרירי הפנים. השוואת ההיסטולוגיה בין מעסה עכברים לשריר הקדמי טיביאליס לאחר פציעה קפואה אישרה פיברוזיס שריר המעסה. מודל זה יאפשר חקירה נוספת של המנגנון העומד בבסיס פיברוזיס שריר הפנים.

Orofacial muscle constitutes a subset of skeletal muscle tissue, with a distinct evolutionary trajectory and development origin. Unlike the somite-derived ...

מחקרי התחדשות שרירי השלד הנוכחיים מתמקדים רק בגפה ובשריר הגו, ומשאירים את המאפיינים והמנגנון של התחדשות שרירי הלסת לא נחקרו ברובם. מטרת מחקר זה היא ליצור מודל עכבר קל ואמין יותר כדי להקל על חקירה נוספת של התחדשות שרירים באזור הפנים. התפתחויות אחרונות סוקרות כי שרירי הלסת מהווים תת-קבוצה ייחודית של שרירי השלד עם מסלול אבולוציוני מובהק ומקור התפתחותי.הם גם מציגים ביצועי התחדשות שונים בהשוואה לעמיתיהם בגפיים. יש צורך בחקירה מעמיקה יותר של התחדשות שרירי הלסת כדי להבין את המנגנון העומד בבסיס הבדלים ניכרים אלה. המחקר מציג שיטה מהירה וניתנת לשחזור לחקר התחדשות שרירי הפנים.תהליך הפציעה בחצי הקפאה ארך 20 דקות, ותהליך הקציר ארך 10 דקות בלבד לכל עכבר, והעכברים יכולים לסבול את הפציעה היטב ללא כל פגיעה בתנועה. מכיוון שהמודל שלנו מאפשר השוואה עוקבת בין שריר המסה הפיברוטי לבין שריר הטיביאליס הקדמי המתחדש במלואו מהיבטים של מורפולוגיה, היסטולוגיה וויסות מולקולרי, הוא משמש לנו כוח לשניים להתעמק במנגנון הבסיסי. המחקר העתידי שלנו יתמקד בהשפעות הסיבתיות בין השינויים של תאי גזע שריר מקומיים ותאי נישה מרובים, והתערבויות שפותחו בהתאמה לתהליך של פיברוזיס שריר הפנים.

freezing-injury-mouse-masseter-muscle-to-establish-an-orofacial

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

מודלים עכבריים שונים של חסימת עורק המוח אמצעית (MCAO) נמצאים בשימוש נרחב בחקר המוח ניסיוני. הנה, אנחנו מדגימים את המודל של MCAO דיסטלי הקבוע transcranial אשר מייצר אוטם קליפת המוח עקבי של גודל המתאים לנזק שהוטל על ידי הרוב המכריע של מקרי שבץ איסכמי אנושיים.

דוגמנות שבץ בעכברים: קרישה קבועה של עורקי דיסטלי התיכון מוחין

אנו מציגים פרוטוקול כירורגי המפרט כיצד לבצע אקסוטומיה של חתך או ריסוק על עצב הפנים בעכבר. ניתן להשתמש באקסוטומיה של עצב הפנים כדי לחקור את התגובה הפיזיולוגית לפגיעה עצבית ולבדוק טכניקות טיפוליות.

Axotomy פנים עצב של עכברים: דגם לחקר תגובת Motoneuron לפגיעה

פרוטוקול זה מדגים שלב אחר שלב פרטים כיצד לחלץ את הטוחנת הראשונה המנדיבולרית בעכבר. הוא מספק שיטה חלופית לחוקרים המתמקדים בריפוי והתחדשות עצם הלסת.

הקמת מודל ריפוי שקע מיצוי מולארי מנדיבולרי מורין

במאמר זה אנו מתארים פרוטוקול ליצירה כירורגית של פגיעה באיבוד שריר נפחי (VML) במעסה החולדות, ומספקים מודל נגיש ושניתן לשחזור לחקר פציעות שריר גולגולתי והטיפול בהן באמצעות ביו-חומרים כגון ההידרוג'ל החדש.

מודל מכרסם של אובדן שרירים נפחי Masseter לחקר חומרים ביו-הנדסיים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול המשלב אלקטרופורציה in vivo וניתוק עצבים של שריר levator auris longus (LAL). הליך זה מאפשר לחקור את התפקיד הפוטנציאלי של חלבונים שמקורם בשריר בהתחדשות הסינפסה העצבית-שרירית.

משולב באלקטרופורציה של Vivo ועצבוב מחדש לטווח קצר של שריר השלד של שריר השלד Auris longus

פרוטוקול זה מציג שיטה מקיפה ויעילה לניתוח תיקון עצם המנדיבולרית. אנו מתארים טכניקה הניתנת לשחזור עבור שבר מנדיבולרי לא מיוצב במודל עכבר, המאפשר ניתוח של תהליך תיקון עצם אנדוכונדרלית עם נזק מינימלי לרקמות ואובדן עצם.

טכניקה פחות פולשנית לשבר מנדיבולרי לא מיוצב במודלים של עכברים

פציעות אובדן שריר נפחי (VML) חורגות מיכולת ההתחדשות האנדוגנית, וכתוצאה מכך ליקויים תפקודיים קבועים. מחקר ה-VML הנוכחי מתמקד בעיקר בשרירי הגפיים והגזע. כדי להרחיב מחקרים מכניסטיים של VML לשרירי הגולגולת, מאמר זה מתאר שיטת in vivo להערכה אורכית של תפקוד שרירי המאסטר לפני ואחרי פציעת VML.

הערכה תפקודית in vivo של שריר מעסה חולדות לאחר יצירה כירורגית של פציעה באובדן שריר נפח (VML)

במודלים של בעלי חיים orthotopic של סרטן השחלות לשכפל טוב יותר מחלות אנושיות, ולכן לשפר את ההבנה שלנו של התקדמות סרטן תגובת הגידול לטיפול. מודל העכבר מקבל זריקה intrabursal של בלוציפראז-להביע תאים סרטניים בשחלות. טיפול מנוהל באמצעות gavage הפה. הגידול מנוטרת על...

בשנת vivo ההדמיה לטיפולים במודל עכבר orthotopic של סרטן השחלות

הקרינה מבוסס מדידה הכניסה חנות המופעל הסידן בתאים חיים: מתא הסרטן תרבותי כדי סיב שריר שלד

אנו מתארים שיטה ישירה למדידת כוח שרירים, כוח שרירים, התכווצות וקינטיקה עיפנות של שרירי שלד מבודדים...

הערכת Vivo לשעבר של התכווצות, ועיפנות Alternans בשרירי שלד מבודדים

למדו פרוטוקול פציעת הקפאה ליצירת מודל עכברים לפיברוזיס שריר הלסת. השיטה מאפשרת השוואה בין התחדשות שרירי הגפיים לשרירי הפנים וחושפת מנגנוני התחדשות ייחודיים.

פציעת הקפאה בשריר המסה של עכבר להקמת מודל פיברוזיס שריר הלסת

גלה סרטונים נוספים