Name: הזרקה תוך-פמורלית של תאי גזע ותאי אב המטופויטיים אנושיים לעכברים מדוכאי חיסון (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-12-08T15:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 40 s
Description: חקור הזרקה תוך-פמורלית של תאי גזע המטופויטיים אנושיים בעכברים מדוכאי חיסון. שיטה זו מגבירה השתרשות תאים ומסייעת להבנת התפתחות תאי דם בריאים לאורך החיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>הזרקת HSPCs אנושיים לתוך עצם הירך של עכברים המוקרנים באופן תת-קטלני

<ol><li>Dancey, J. T., Deubelbeiss, K. A., Harker, L. A., Finch, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+kinetics+in+man%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Neutrophil kinetics in man.</a> J Clin Invest. 58 (3), 705-715 (1976).</li>
<li>Purton, L. E., Scadden, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limiting+factors+in+murine+hematopoietic+stem+cell+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Limiting factors in murine hematopoietic stem cell assays.</a> Cell Stem Cell. 1 (3), 263-270 (2007).</li>
<li>Laurenti, E., Göttgens, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+haematopoietic+stem+cells+to+complex+differentiation+landscapes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">From haematopoietic stem cells to complex differentiation landscapes.</a> Nature. 553 (7689), 418-426 (2018).</li>
<li>Cosgrove, J., Hustin, L. S. P., de Boer, R. J., Perié, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematopoiesis+in+numbers%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Immunol%22%5BJournal%5D)">Hematopoiesis in numbers.</a> Trends Immunol. 42 (12), 1100-1112 (2021).</li>
<li>Mazurier, F., Doedens, M., Gan, O. I., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+myeloerythroid+repopulation+after+intrafemoral+transplantation+of+NOD-SCID+mice+reveals+a+new+class+of+human+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Rapid myeloerythroid repopulation after intrafemoral transplantation of NOD-SCID mice reveals a new class of human stem cells.</a> Nat Med. 9 (7), 959-963 (2003).</li>
<li>McKenzie, J. L., Gan, O. I., Doedens, M., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+short-term+repopulating+stem+cells+are+efficiently+detected+following+intrafemoral+transplantation+into+NOD%2FSCID+recipients+depleted+of+CD122%2B+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Human short-term repopulating stem cells are efficiently detected following intrafemoral transplantation into NOD/SCID recipients depleted of CD122+ cells.</a> Blood. 106 (4), 1259-1261 (2005).</li>
<li>Notta, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+single+human+hematopoietic+stem+cells+capable+of+long-term+multilineage+engraftment%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Isolation of single human hematopoietic stem cells capable of long-term multilineage engraftment.</a> Science. 333 (6039), 218-221 (2011).</li>
<li>Belluschi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelo-lymphoid+lineage+restriction+occurs+in+the+human+haematopoietic+stem+cell+compartment+before+lymphoid-primed+multipotent+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Myelo-lymphoid lineage restriction occurs in the human haematopoietic stem cell compartment before lymphoid-primed multipotent progenitors.</a> Nat Commun. 9 (1), 4100(2018).</li>
<li>McDermott, S. P., Eppert, K., Lechman, E. R., Doedens, M., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+human+cord+blood+engraftment+between+immunocompromised+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Comparison of human cord blood engraftment between immunocompromised mouse strains.</a> Blood. 116 (2), 193-200 (2010).</li>
<li>Billerbeck, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+human+CD4%2BFoxP3%2B+regulatory+T+cells+in+human+stem+cell+factor-%2C+granulocyte-macrophage+colony-stimulating+factor-%2C+and+interleukin-3-expressing+NOD-SCID+IL2R%CE%B3%28null%29+humanized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Development of human CD4+FoxP3+ regulatory T cells in human stem cell factor-, granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-, and interleukin-3-expressing NOD-SCID IL2Rγ(null) humanized mice.</a> Blood. 117 (11), 3076-3086 (2011).</li>
<li>Rongvaux, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+function+of+human+innate+immune+cells+in+a+humanized+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Development and function of human innate immune cells in a humanized mouse model.</a> Nat Biotechnol. 32 (4), 364-372 (2014).</li>
<li>McIntosh, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonirradiated+NOD%2CB6.SCID+Il2r%CE%B3%E2%88%92%2F%E2%88%92+KitW41%2FW41+%28NBSGW%29+Mice+support+multilineage+engraftment+of+human+hematopoietic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Nonirradiated NOD,B6.SCID Il2rγ−/− KitW41/W41 (NBSGW) Mice support multilineage engraftment of human hematopoietic cells.</a> Stem Cell Reports. 4 (2), 171-180 (2015).</li>
<li>Notta, F., Doulatov, S., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engraftment+of+human+hematopoietic+stem+cells+is+more+efficient+in+female+NOD%2FSCID%2FIL-2Rgc-null+recipients%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Engraftment of human hematopoietic stem cells is more efficient in female NOD/SCID/IL-2Rgc-null recipients.</a> Blood. 115 (18), 3704-3707 (2010).</li>
<li>Futrega, K., Lott, W. B., Doran, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+bone+marrow+HSC+transplantation+enhances+local+engraftment+at+the+expense+of+systemic+engraftment+in+NSG+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Direct bone marrow HSC transplantation enhances local engraftment at the expense of systemic engraftment in NSG mice.</a> Sci Rep. 6, 23886(2016).</li>
<li>Mende, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+molecular+and+functional+features+of+extramedullary+hematopoietic+stem+and+progenitor+cell+reservoirs+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Unique molecular and functional features of extramedullary hematopoietic stem and progenitor cell reservoirs in humans.</a> Blood. 139 (23), 3387-3401 (2022).</li>
<li>Medyouf, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelodysplastic+cells+in+patients+reprogram+mesenchymal+stromal+cells+to+establish+a+transplantable+stem+cell+niche+disease+unit%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Myelodysplastic cells in patients reprogram mesenchymal stromal cells to establish a transplantable stem cell niche disease unit.</a> Cell Stem Cell. 14 (6), 824-837 (2014).</li>
<li>Eppert, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+gene+expression+programs+influence+clinical+outcome+in+human+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Stem cell gene expression programs influence clinical outcome in human leukemia.</a> Nat Med. 17 (9), 1086-1093 (2011).</li>
<li>Sanchez, P. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+robust+xenotransplantation+model+for+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">A robust xenotransplantation model for acute myeloid leukemia.</a> Leukemia. 23 (11), 2109-2117 (2009).</li>
<li>Li, J., Chen, H., Zhao, S., Wen, D., Bi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+intrafemoral+orthotopic+xenografts+of+peripheral+blood+or+bone+marrow+from+acute+myeloid+and+acute+lymphoblastic+leukemia+patients%3A+clinical+characterization%2C+methodology%2C+and+validation%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Patient-derived intrafemoral orthotopic xenografts of peripheral blood or bone marrow from acute myeloid and acute lymphoblastic leukemia patients: clinical characterization, methodology, and validation.</a> Clin Exp Med. 23 (4), 1293-1306 (2023).</li>
<li>Dobson, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relapse-fated+latent+diagnosis+subclones+in+acute+B+lineage+leukemia+are+drug+tolerant+and+possess+distinct+metabolic+programs%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discov%22%5BJournal%5D)">Relapse-fated latent diagnosis subclones in acute B lineage leukemia are drug tolerant and possess distinct metabolic programs.</a> Cancer Discov. 10 (4), 568-587 (2020).</li>
<li>Marktel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrabone+hematopoietic+stem+cell+gene+therapy+for+adult+and+pediatric+patients+affected+by+transfusion-dependent+%C3%9F-thalassemia%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Intrabone hematopoietic stem cell gene therapy for adult and pediatric patients affected by transfusion-dependent ß-thalassemia.</a> Nat Med. 25 (2), 234-241 (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>מזרק אינסולין 0.5 מ"ל עם 29 גרם x 12.7 מ"מ מחט</td><td>BD</td><td>324892</td><td></td></tr><tr><td>מזרק אינסולין 1 מ"ל עם 29 גרם x 0.5 אינץ' מחט</td><td>BD</td><td>324827</td><td></td></tr><tr><td>צינור 1.5 מ"ל</td><td>פישרברנד</td><td>509-GRD-PFB</td><td></td></tr><tr><td>3 מ"ל&nbsp;</td><td>HENKE SASS WOLF GMBH</td><td>4020.000V0</td><td></td></tr><tr><td>5 מ"ל מבחנה פוליסטירן תחתון עגול עם מכסה מסננת תאים 12 x 75 מ"מ</td><td>פלקון</td><td></td><td>352235 צינור FACS</td></tr><tr><td>5 מ"ל מבחנה פוליסטירן תחתון עגול עם מכסה הצמד 12 x 75 מ"מ</td><td>פלקון</td><td>352058</td><td>צינור FACS</td></tr><tr><td>27 גרם מחט 1/2 אינץ'&nbsp;</td><td>BD&nbsp;</td><td></td><td></td>300635</tr><tr><td>40 ומיקרו; מסננת תא m לצינור 50 מ"ל</td><td>גריינר ביו-אחד</td><td>542040</td><td></td></tr><tr><td>50 מ"ל צינור</td><td>Sarstedt בע"מ</td><td>62.547.254</td><td></td></tr><tr><td>96 היטב צלחת תחתונה עגולה&nbsp;</td><td>ספוגית אלכוהול Falcon</td><td>351177</td><td></td></tr><tr><td></td><td>VITREX MEDICAL A/S</td><td></td><td></td></tr> 520213 <tr><td>BD LSR Fortessa X-20 מנתח תאים&nbsp;</td><td></td><td></td><td>ציטומטר זרימת</td>BD</tr><tr><td>Buphrenorphine</td><td>Animalcare</td><td>XVD190</td><td></td></tr><tr><td>CD14 / PECy7 (Clone M5E2)</td> <td>biolegend</td><td>301814</td><td>בשימוש ב 1 ל 1000</td></tr><tr><td>CD19 / Alexa 700 (Clone HIB19)</td> <td>biolegend</td><td>302226</td><td>בשימוש ב 1 ל 300</td></tr><tr><td>CD19 / FITC (Clone HIB19)</td> <td>biolegend</td><td>302206</td><td>בשימוש ב 1 ל 200</td></tr><tr><td>CD3 / APCCy7 &nbsp;( Clone HIT3a)</td><td>biolegend</td><td>300318</td><td>בשימוש ב-1 ל-100</td></tr><tr><td>CD33/APC (Clone P67.6)BD</td><td></td> <td>345800</td><td>בשימוש ב-1 ל-200</td></tr><tr><td>CD45/BV510 (Clone HI30)</td><td>biolegend</td><td>304036</td><td>בשימוש ב-1 ל-500</td></tr><tr><td>CD45/PECy5 (Clone 2D1)</td><td>biolegend</td><td>368526</td><td>בשימוש ב-1 ל-300</td></tr><tr><td>CompBeads Anti-Mouse Ig, &kappa;/Negative Control Compensation Particles Set</td><td>BD</td><td></td><td></td>552843</tr><tr><td>Dnase 1</td><td>Worthington Biochemical</td><td>LS002139</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי (FBS)</td><td>PAN-Biotech</td><td>P40-37500</td><td></td></tr><tr><td>גליקופורין A (GlyA)/PE (Clone GA-R2)</td><td>BD</td><td>340947</td><td>בשימוש ב-1 ל-1000</td></tr><tr><td>Iscove Modified Dulbecco Media (IMDM)</td><td>PAN-Biotech</td><td>P04-20250</td><td></td></tr><tr><td>איזופלורן (IsoFlo 100% w/w אדי שאיפה, נוזל)</td><td>זוטיס</td><td>115095</td><td></td></tr><tr><td>מיקרובט&nbsp; 300 ליתיום הפרין LH, 300 ומיקרו; L</td><td>Sarstedt Ltd</td><td>20.1309</td><td>צינור איסוף דם עכבר</td></tr><tr><td>NOD. Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) עכברים&nbsp;</td><td>צ'ארלס ריבר&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פנקול אנושי, צפיפות: 1.077 גרם/מ"ל</td><td>PAN-Biotech</td><td>P04-60500</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>פוספט מלח בופר (PBS)</td><td>Gibco</td><td>14190169</td><td></td></tr></tbody></table>

הזרקה תוך-פמורלית של תאי גזע ותאי אב המטופויטיים אנושיים לעכברים מדוכאי חיסון 

Intrafemoral Injection of Human Hematopoietic Stem and Progenitor Cells into Immunocompromised Mice

ניתן להעריך את קליטת התאים המוזרקים תוך פמורלית בכל נקודת זמן מ -24 שעות ואילך בהתאם לתכנון הניסוי. בנקודת הזמן הסופית, ניתן לאסוף IF, BM, PB וטחול. אלה ניתנים לעיבוד, והערכת רמת הקליטה באמצעות ציטומטריית זרימה. כדי לקרוא לאחיזה אנושית אפילו ברמות נמוכות, הכתמנו בשני נוגדנים שונים כנגד CD45 אנושי (שיבוט HI30 ושיבוט 2D1). רק תאים חיוביים לשני הנוגדנים (CD45++) נחשבו ממוצא אנושי. סף הקליטה נקבע באופן הבא: (% CD45++ + % GlyA+) ≥ 0.01% ומינימום של 30 תאים שנרשמו בשני השערים (<strong class="xf...

Hematopoietic stem cells (HSCs) are defined by their lifelong ability to produce all blood cell types. This is operationally tested by transplanting cell ...

intrafemoral-injection-human-hematopoietic-stem-progenitor-cells-into

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

זה פרוטוקול הפרטים גזירת להשתלה בתאי גזע hematopoietic מתאי גזע עובריים של עכבר (ESC) הזרקת הבאים שלהם לעכברים הנמען מוקרן קטלנית. בקצרה, הם ESC להבדיל גופים embryoid, אשר נגועים אז עם HoxB4 retroviral ושיתוף תרבותי עם OP9 תאים סטרומה וציטוקינים hematopoietic.

גזירת בתאי גזע hematopoietic מ Murine בתאי גזע עובריים

סרטון זה מדגים טכניקה ליצירת עכברי מערכת החיסון האנושית (HIS). CD34+ תאי גזע hematopoietic (HSC) מבודדים מתאי מעיל דם טבורי אנושי באמצעות חרוזים מגנטיים מצופים נוגדנים. CD34+ HSCs מורחבים במדיום גידול מועשר בציטוקינים ונשמר בהקפאה. לבסוף, HSCs מופשרים מוזרקים לתוך גור עכבר מדוכא חיסון כדי לבסס את מודל העכבר שלו.

בידוד תאי גזע המטופויטיים מדם טבורי ליצירת עכברי מערכת החיסון האנושית

פרוטוקול זה מתאר הליך לדגימה סדרתית של מח עצם הירך (BM) מבלי לדרוש הקרבה של עכברים. הליך זה מקל על מחקרי אורך של הרכב ה-BM של עכברים לאורך זמן ומספק גישה סדרתית לתאים בתוך ה-BM למחקרי ex vivo והשתלות.

הירך מח עצם שאיפה בעכברים חיים

5 חלבוני ניאון קומבינטורית סימון של תאי גזע ואבות היווצרות הדם מאפשר במעקב משובט vivo באמצעות confocal ושני פוטונים במיקרוסקופ, מתן תובנות ארכיטקטורת hematopoietic מח העצם במהלך רגנרציה. שיטה זו מאפשרת מיפוי גורל לא פולשנית של תאים נגזרים HSPCs ספקטרלי מקודדים ברקמות שלמות לתקופות נרחבות של זמן לאחר השתלה.

במשובט מעקב vivo של גזע hematopoietic ובתאים המסומנים על ידי חמישה חלבונים ניאון באמצעות Confocal וmultiphoton מיקרוסקופית

הטבע של האינטראקציות בין תאי גזע hematopoietic ואב (HSPCs) ונישות מח עצם הוא הבין היטב. שינויי חומרה מותאם אישית ופרוטוקול רכישה רב שלבים לאפשר את השימוש בשני הפוטונים ומיקרוסקופיה confocal לתמונת vivo לשעבר HSPCs שכותרתו התביית בתוך אזורי מוח עצם, אינטראקציות מעקב ותנועה.

במעקב 4 ממדי Vivo של תאי גזע ואבות היווצרות דם במבוגרי עכבר calvarial מח עצם

מיקרוסקופ זריחה intravital (IVFM) של החילונית מוחל בשילוב עם דגמים גנטיים בעלי חיים כדי ללמוד את יונת ואת engraftment של תאים hematopoietic גומחות מח עצם (מוניטור).

שילוב של מיקרוסקופ פלואורסצנטי Intravital (IVFM) עם דגמים גנטיים בחקר דינמיקה Engraftment Hematopoietic תאים במח העצם נישות

אנו מתארים היקפית אנושית תא היקפי (pbmc)-מבוסס הומניזציה מודל העכבר מבע שתלת עבור מחקר translational-אונקולוגיה. פרוטוקול זה יכול לשמש כמנחה כללי להקמת ולאפיון מודלים דומים להערכת הטיפול של I-O.

תא היקפי של דם מונאפרור (PBMC) חרט הומניזציה מודל Xenograft עבור מחקר הטרנסג-אונקולוגיה (I-O)

המתואר כאן הם שלוש גישות ניסיוני ללמוד את הדינמיקה של זיהום HIV בעכברים הומניזציה. הראשון מתיר את המחקר של אירועי זיהום כרונית, בעוד שני האחרונים מאפשר לימוד של אירועים חריפים לאחר זיהום ראשוני או נגיפי ההפעלה מראש.

כרונית, חריפה, ו-HIV ההפעלה מופעל מודלים העכבר חיסוני הומניזציה

פרוטוקול זה מתאר הזרקה תוך-פמורלית של כמה תאי גזע המטופויטיים או לוקמיים, כולל תאים ערוכים גנטית, במודלים של קסנוגרפט מורין, אשר לא רק יאפשרו השתלה מהירה ובטוחה של תאים אלא גם ניתוחים סדרתיים של מח העצם.

הזרקות תוך עצם הירך הפשוטות באמצעות עכברים חיים מאפשרות ניתוח רציף של מח עצם

כאן, הקמנו in vivo אוסטאו-אורגנואידים המופעלים על ידי פיגומי ג'לטין טעונים בחלבון מורפוגנטי-2 עצם כדי לקצור תאי גזע / אב המטופויטיים טיפוליים לשחזור של מערכת המטופויטית וחיסונית פגומה. בסך הכל, גישה זו יכולה לספק מקור תאי מבטיח לטיפולים תאיים.

In Vivo גישת אוסטאו-אורגנואיד לקצירת תאי גזע/אב המטופויטיים טיפוליים

חקור הזרקה תוך-פמורלית של תאי גזע המטופויטיים אנושיים בעכברים מדוכאי חיסון. שיטה זו מגבירה השתרשות תאים ומסייעת להבנת התפתחות תאי דם בריאים לאורך החיים.

הזרקה תוך-פמורלית של תאי גזע ותאי אב המטופויטיים אנושיים לעכברים מדוכאי חיסון

גלה סרטונים נוספים