Name: פרדיגמות להערכה התנהגותית במודל דרוזופילה של הפרעת הספקטרום האוטיסטי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 30 s
Description: חקור פרדיגמות התנהגותיות להערכת הפרעת הספקטרום האוטיסטי במודל Drosophila. השיטות כוללות מבחני תוקפנות, חיזור, טיפוח והסתגלות לכמתים גנטיים של התנהגות חברתית וחוזרת.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים מאוד למאני רמאסוואמי (NCBS, בנגלור) ולבאסקר בקטבצ'אלו (IIT מנדי) על מערך בדיקת ההרגלה ובחירת הריח, לפוואן אגרוואל (MAHE) על הצעותיו יקרות הערך על מבחן התוקפנות, לאמיטאבה מג'ומדר (NCCS, פונה) על שיתוף אב הטיפוס של תא בדיקת החיזור שלו וקווי הזבוב המוטנטים Fmr1 , ולגאורב דאס (NCCS, פונה) על שיתוף קו MB247-GAL4. אנו מודים למרכז המניות בלומינגטון דרוזופילה (BDSC, אינדיאנה, ארה"ב), המכון הלאומי לגנטיקה (NIG, קיוטו, יפן), אוניברסיטת בנרס הינדו (BHU, ורנסי, הודו) והמרכז הלאומי למדעי הביולוגיה (NCBS, בנגלור, הודו) על קווי דרוזופילה . העבודה במעבדה נתמכה על ידי מענקים מ- SERB-DST (ECR/2017/002963) ל- AD, מלגת DBT Ramalingaswami שהוענקה ל- AD (BT / RLF / RE-ENTRY / 11/2016), ותמיכה מוסדית מ- IIT Kharagpur, הודו. SD ו-SM מקבלים מלגות דוקטורט מ-CSIR-Senior Research Fellowship; ראש הממשלה מקבל מלגת דוקטורט מ-MHRD, הודו.

דרוזופילה מודלים לתכונות גנטיות והתנהגותיות של הפרעת הספקטרום האוטיסטי

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

דרוזופילה משמשת כאורגניזם מודל משובח למחקר בהפרעות נוירולוגיות בבני אדם בשל רמה גבוהה של שימור רצפי גנים בין גנים של זבובים ומחלות אנושיות9. פרדיגמות התנהגותיות חזקות רבות הופכות אותו למודל אטרקטיבי לחקר פנוטיפים המתבטאים במוטציות המשחזרות מחלות אנושיות. מכיוון שמאות גנים מעורבים בהפרעת הספקטרום האוטיסטי (ASD), לא קיים מודל ASD משותף בשום אורגניזם מודל. לכן, עבור כל מוטציה, החוקרים חייבים תחילה לקבוע פנוטיפים דמויי ASD בזבוב. במאמר זה, ניסינו לייעל את התהליך על ידי הצעת שימוש בחמש פרדיגמות התנהגותיות של זבובים בתיאום להערכה כזו. פרדיגמות אלה משמשות בזבובים כדי להעריך ליקויים התנהגותיים עיקריים ונפוצים של חולי ASD אנושיים: ליקויים חברתיים ותקשורתיים, שיפור התנהגויות חוזרות ונשנות ופגם התרגלות. אם מוטציה בגן זבוב מראה פגמים בכל או ברוב חמש הפרדיגמות הללו, זה יכול להיות אינדיקציה חזקה לתרחיש דמוי ASD.
רוב הפרדיגמות ההתנהגותיות המתוארות כאן שימשו פעמים רבות בספרות קודמת לפתרון שאלות מחקר מגוונות. אין זה נדיר למצוא וריאציות בטכניקות בין מחקרים שונים. השינויים בטכניקות נעשו כדי להתאים לצורך המחקרי ולהתאים לדרישה של השאלה הספציפית הנפתרת. לדוגמה, במבחן החיזור, ניתן לכמת התנהגות חיזור מולדת ומלומדת כלפי זבוב בוחן שיכול להיות זכר לא בוגר65, נקבה בתולה66,67, נקבה טרום זיווג 68,69,70, נקבה בתולה שנהרגה בהקפאה 65, או אפילו נקבה ערופת ראש19. בשיטה המתוארת במאמר זה, נקבות בר שהזדווגו מראש שימשו כבודק כדי לבדוק את דפוס החיזור של זבוב מודל ASD זכר. כושר הקבלה שלנקבה טרום זיווג נמוך יחסית לזה של זבוב בתולי71. כתוצאה מכך, מספר התקפי החיזור הגבריים ומשכם הם יותר כלפי נקבה מזווגת מאשר כלפי בתולה; באופן דומה, ההשהיה להזדווגות ארוכה יותר גם מזו של נקבות בודקות בתולות, ובמקרה כזה ההזדווגות המוקדמת מובילה לירידה במדד החיזור, מה שמקטין את טווח ההשוואה היעילה בין גנוטיפים. לפיכך, השימוש בנקבה מזווגת מראש כבודק מספק ניתוח השוואתי טוב יותר של התנהגות החיזור של זבוב ASD לעומת זבוב מסוג פראי. מצד שני, השימוש בנקבות בתולות עשוי לספק מידע נוסף שעשוי להיות מוסווה כאשר משתמשים בנקבות מזווגות. השימוש בנקבות מזווגות עשוי גם להשפיע ולשנות את התנהגות החיזור הגברי. לסיכום, מוצע לחוקרים לבחור את אסטרטגיית הניסוי שלהם ואת הפירוט בהתאם לצורך של הניסוי הספציפי.
יש להיזהר כאן לפני יישום הטכניקה בכל או בכל הומולוגי הזבובים של גנים אוטיסטים. כל הפרדיגמות ההתנהגותיות הללו מוסדרות על ידי מספר מסוים וקטן של נוירונים. ביטוי של גן מסוים חייב להיקבע תחילה לפני שממשיכים לפרדיגמה התנהגותית מסוימת. לדוגמה, אם הומולוג הזבוב של גן הקשור ל- ASD אינו מתבטא בנוירונים בגוף פטריות או נוירונים גלוטמטרגיים, אז התנהגות החיזור והטיפוח עשויה שלא להיות מושפעת מהמוטציה שלו.
נקודה נוספת שהחוקרים צריכים להיזהר ממנה היא שהיעדר פגם לא תמיד אומר שלמוטציה אין תפקיד. לדוגמה, בניסויי התנהגות הטיפוח עם מוטציות Fmr1 , ספירת ההתקפים הכוללת של הטיפוח אינה נמוכה משמעותית במוטנטים מאשר בקבוצת הביקורת, בעוד שפרמטרים אחרים כמו מדד הטיפוח וכו' מראים פגם בהתנהגות הטיפוח. ניתן להסביר זאת על ידי התארכות כל התקף טיפוח במוטציות Fmr1 , וכתוצאה מכך ספירה נמוכה של מספר ההתקף הכולל למרות שמשך ההתקף הכולל גבוה בהרבה. זה מדגיש את הצורך בכימות של פרמטרים מרובים עבור כל דפוס התנהגות. יתר על כן, יש לזכור כי המונח ASD מכסה מגוון רחב של מחלות הנגרמות על ידי וריאציות בכל אחד ממאות הגנים, וכתוצאה מכך פנוטיפים הטרוגניים עם דרגות שונות של חדירה בקרב האנשים המושפעים. לדוגמה, גירעון התרגלות הוא ציין בחלק מהחולים אבל לא בכולם. אותו הדבר צפוי במודלים של זבובים של המחלה.
לצורך ניתוח התנהגות תוקפנית נלקחו בחשבון במחקר זה סוגים שונים של פרמטרים תוקפניים: ריאות, איום כנף, התנגשות וכו' (איור 1)30. יש לזהות ולספור כל התקף כסוג התקף בודד או כספירת התקף כוללת. חשוב להכיר תחילה את דפוסי התוקפנות של זבובים זכרים, המתואריםב-59,72 ומוצגים באיור 1. בעת ספירת מספרי התקף אגרסיבי, יש לזהות בבירור את נקודות ההתחלה והסיום של אירוע תוקפנות יחיד; סוגים רבים של דפוסי תוקפנות עשויים להופיע בתוך התקף אחד, ואחריו סוף ההתקפה. התקף תוקפנות נחשב להסתיים כאשר זבוב מפסיק להראות כל אחת מההתנהגויות או התנועה התוקפנית למשך 2 שניות או עוצר את ההתקף ומתחיל ללכת.
לרוב הפרדיגמות ההתנהגותיות הללו יש וריאציות והתקדמות מרובות המתוארות על ידי מעבדות מרובות. כל אחד מהשינויים הספציפיים נוצר כדי לענות על הצרכים של מטרה מסוימת. באופן דומה, טכניקות כימות או ניתוח אוטומטיות ומבוססות אלגוריתמים שחררו טכניקות אלה מהסיכוי לשגיאות ידניות. במאמר זה, הטכניקות הבסיסיות ביותר הודגמו עם הכמות הקטנה ביותר של דרישות חומריות, בתקווה כי טכניקות אלה ניתן לאמץ בקלות ולהשתמש על ידי מספר מקסימלי של חוקרים.

הפרעת הספקטרום האוטיסטי (ASD) כוללת קבוצה הטרוגנית של הפרעות נוירולוגיות. הוא כולל מגוון של הפרעות נוירו-התפתחותיות מורכבות המאופיינות בגירעונות רב-הקשריים ומתמשכים בתקשורת חברתית ובאינטראקציה חברתית ובנוכחות דפוסי התנהגות ופעילות ותחומי עניין מוגבלים, חוזרים ונשנים1. על פי ארגון הבריאות העולמי (WHO), 1 מכל 100 ילדים מאובחן עם ASD ברחבי העולם עם יחס זכר-נקבה של 4.22. המחלה מתגלה בשנה השנייה או השלישית לחיים. ילדים אוטיסטים מראים חוסר עניין בהדדיות חברתית-רגשית, תקשורת לא מילולית ומיומנויות יחסים. הם מפגינים התנהגויות חוזרות ונשנות כמו תנועה מוטורית סטריאוטיפית, מעקב שגרתי לא גמיש וטקסי, והתמקדות אינטנסיבית בתחומי עניין מוגבלים. ילדים אוטיסטים מראים רמה גבוהה של תגובה כלפי מגע, ריח, צליל וטעם, בעוד שתגובת כאב וטמפרטורה נמוכה יחסית1. החדירה של הפרעה זו שונה גם בקרב חולים שונים הסובלים מאוטיזם ולכן השונות עולה.
האבחנה הקלינית הנוכחית של ASD מבוססת על הערכה התנהגותית של האנשים מכיוון שאין בדיקה גנטית מבוססת סמנים ביולוגיים או נפוצה המכסה את כל הצורות של ASD3. פענוח הבסיס הגנטי והנוירופיזיולוגי יסייע במיקוד אסטרטגיות הטיפול. בעשור האחרון, גוף גדול של מחקר הביא לזיהוי של מאות גנים שנמחקו או עברו מוטציה או שרמות הביטוי שלהם משתנות בחולי ASD. מחקר מתמשך מדגיש את אימות תרומתם של גנים מועמדים אלה באמצעות אורגניזמים מודל כמו עכבר או זבוב פירות, שבמסגרתם, גנים אלה מושמטים או מופלים ולאחר מכן בדיקות ליקויים התנהגותיים דמויי ASD והבהרת מסלולים גנטיים ומולקולריים בסיסיים הגורמים לאנומליות. מודל עכבר המשחזר וריאציות של מספר העתק (CNVs) באתרים הכרומוזומליים האנושיים 16p11.2 מראה חלק מהפגמים ההתנהגותיים של ASD 4,5,6. חשיפה טרום לידתית לתרופה טרטוגנית חומצה ולפרואית (VPA) היא מודל עכבר נוסף המתאר תכונות הדומותלאוטיזם 7,8 אנושי. בנוסף, קיים מגוון מודלים של עכברים המציגים אוטיזם הקשור לתסמונת גנטית, לדוגמה, מודלים סינדרומיים של גן יחיד הנגרמים על ידי מוטציות ב- Fmr1, Pten, Mecp2, Cacna1c, ומודלים לא סינדרומיים של גן יחיד הנגרמים על ידי מוטציות בגנים כמו Cntnap2, Shank, Neurexin, או Neuroligin גנים 5.
זבוב פירות (Drosophila melanogaster) הוא אורגניזם מודל בולט נוסף לחקר הבסיס התאי, המולקולרי והגנטי של שפע של הפרעות אנושיות9, כולל ASD. דרוזופילה ובני אדם חולקים תהליכים ביולוגיים שמורים מאוד ברמה המולקולרית, התאית והסינפטית. זבובי פירות שימשו בהצלחה במחקרי ASD 10,11,12 כדי לאפיין גנים הקשורים לאוטיזם ולפענח את תפקידם המדויק בסינפטוגנזה, תפקוד סינפטי ופלסטיות, הרכבת מעגלים עצביים והתבגרות; הומולוגים של זבובים של גנים הקשורים לאוטיזם נמצאו כבעלי תפקידים בוויסות התנהגות חברתית ו / או חזרתית 11,13,14,15,16,17,18,19,20,21. זבוב הפירות עבד גם כמודל לבדיקת גנים ASD וגרסאותיהם 15,22,23. האתגר הגדול ביותר במחקר ASD בזבובים הוא שבניגוד למודלים אחרים של מחלות, אין מודל אחד של זבוב ASD. כדי להבין את ההשפעה של מוטציות או הפלת גן ASD ספציפי, חוקר צריך לאמת אם הפנוטיפים ההתנהגותיים מחקים מספיק את הסימפטומים של חולי ASD ולאחר מכן, להתקדם לקראת הבנת הבסיס המולקולרי או הפיזיולוגי של הפנוטיפים.
לפיכך, זיהוי פנוטיפים דמויי ASD חיוני למחקר ASD במודל הזבוב. קומץ טכניקות התנהגותיות התפתחו במהלך השנים המאפשרות לנו לזהות חריגות כמו ליקויים בהתנהגות / אינטראקציה חברתית, תקשורת, התנהגויות חזרתיות והיענות לגירויים. בנוסף, מספר שינויים ושדרוגים של טכניקות התנהגותיות אלה נעשו במעבדות שונות כדי להתאים לדרישות ספציפיות כגון upscaling, אוטומציה של מבחנים, קריאות, כימות ושיטות השוואה. במאמר וידאו זה, הגרסאות הבסיסיות ביותר של חמש פרדיגמות התנהגותיות מודגמות, אשר, בשילוב, ניתן להשתמש בהן כדי לזהות תוצאות התנהגותיות דמויות ASD בצורה הקלה ביותר.
תוקפנות היא התנהגות מולדת שמורה אבולוציונית המשפיעה על הישרדות ורבייה24. התנהגות תוקפנית כלפי פרטים מושפעת מ"מוטיבציה לחיברות"25,26 כמו גם מ"תקשורת"27, שתיהן נפגעות אצל אנשים הסובלים מאוטיזם. התנהגות תוקפנית מתוארת היטב בדרוזופילה ויכולת הכימות שלה באמצעות בדיקת תוקפנות חזקה 28,29,30 ובסיס גנטי ונוירוביולוגי מובן היטב 31 הופכת אותה לפרדיגמה התנהגותית מתאימה32 להערכת פנוטיפ ASD במודל זבוב. תוקפנות מושפעת מבידוד חברתי הרחק מסביבה חברתית, מה שמוביל לתוקפנות מוגברת; אותו הדבר נצפה כאשר זבובים זכרים שוכנים בבידוד במשך כמה ימים33,34. בדיקה התנהגותית נוספת המכמתת חברותיות בזבובים היא Social Space Assay35, המודדת מרחקים בין שכנים קרובים ומרחקים בין זבובים בקבוצה קטנה של זבובים, מה שהופך אותה למתאימה באופן מושלם לבדיקת תפקידם של אורתולוגים גנטיים ASD בזבוב 12,21,36,37 וכן במודלים סביבתיים של זבוב ASD 38, 39.
בדיקת החיזור של דרוזופילה היא פרדיגמה התנהגותית נוספת המשמשת לעתים קרובות להערכת שינויים במיומנויות חברתיות ותקשורתיות על מעגלים או מניפולציות גנטיות, כולל גנים הקשורים לאוטיזם 18,19,21,40. דפוסי התנהגות חוזרים שכיחים בחולי ASD, אשר מגולמים בזבובים על ידי התנהגות טיפוח - סדרה של פעולות מובחנות וסטריאוטיפיות המבוצעות לצורך ניקוי ומטרות אחרות. הוא שימש בהצלחה לבדיקת ההשפעה של מוטציות בגן ASD בזבובים21,41, כמו גם חשיפה לכימיקלים38,39. התקדמות ואוטומציה מרובות בבדיקה תוארו לפני 16,41,42,43; כאן, אנו מדגימים את דפוס הבדיקה הבסיסי ביותר, שקל לאמץ ולכמת.
ASD ידוע כמשפיע על היכולת להרגלה, למידה וזיכרון אצל חלק מהחולים 44,45,46,47,48,49,50, אורגניזמים מודל ASD 51,52 וגם גורם לליקויים בהתנהגויות ריח שונות50. התרגלות קפיצה קלה של דרוזופילה שימשה בעבר לסינון גנים ASD23. ניתן לבדוק את ההרגלה על ידי שיטה פשוטה של בדיקת הרגלת חוש הריח 53,54,55. אנו מתארים את השיטה לגרימת הרגלת חוש הריח ובודקים את התוצאה באמצעות בדיקת בחירת ריח בינאריתקלאסית 56 המבוססת על מבוך Y, שניתן להשתמש בה כדי לזהות פגמים בהתרגלות בגן ASD, מוטציה או מצב של הפלה גנטית. כדי להעריך אם ההשפעה של מוטציה (או הפלת גנים) או טיפול תרופתי על התנהגותו של זבוב מסתכמת בפנוטיפ דמוי ASD, ניתן להשתמש בשילוב של 5 הבדיקות הללו המתוארות כאן.

<table><tbody><tr><td><זירת תוקפנות חזקה>חזקה:</חזקה></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>צלחת סטנדרטית של 24 בארות עשויה פוליסטירן</td><td></td><td></td> שקוף <td>12 ס"מ x 8 ס"מ x 2 ס"מ. קוטר באר בודדת = 18 ס"מ. #Z707791 סיגמא-אולדריך; עומק = 1 ס"מ</td></tr><tr><td>יריעת</td><td></td><td></td> פלסטיק/אקריליק שקופה <td>חלופה: מכסה מחורר של צלחת תרבית תאים</td></tr> <tr><td><חזק>מבחן מרחב חברתי: </חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>קליפס</td><td></td><td></td> קלסר <td>19 מ"מ</td></tr><tr><td>יריעות זכוכית ויריעות אקריליק בגדלים</td><td></td><td></td> מותאמים אישית <td>עובי = 5 מ"מ</td></tr><tr><td><חזק>בדיקת חיזור: </חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>אגוז ובורג עם הברגה</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>יריעות פרספקס בצורות מותאמות</td><td></td><td></td> <td>אישיתט) מכסה: דיסק פרספקס עגול ושקוף בהתאמה אישית (עובי 2-3 מ"מ, קוטר 70 מ"מ) עם חור טעינה אחד באזור ההיקפי וחור בורג נוסף במרכז (קוטר ~ 3 מ"מ לכל אחד); ii) דיסק פרספקס שני שקוף ועבה יותר (עובי 3-4 מ"מ, קוטר 70 מ"מ), עם 6-8 נקבים בקוטר 15 מ"מ, במרחק שווה מהמרכז; iii) בסיס: זהה למכסה למעט ללא חור הטעינה</td></tr> <tr><td><חזק>בדיקת טיפוח: < / חזק ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>פאנל</td><td></td><td></td> LED מכוסה זכוכית מפוזרת <td>10&ndash; פאנל LED הניתן להרכבה על התקרה 15 וואט</td></tr> <tr><td><חזק>הרגל ובדיקת מבוך Y</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>תאי טיפוס</td><td>x2, מתאם זכוכית בורוסיליקט</td></tr><tr><td>לחיבור מבוך Y עם בקבוקון</td><td></td><td></td> כניסה <td>פרספקס, בהתאמה אישית, מדידות בבקבוקי ריאגנט <חזקים>איור 5A</חזק></td></tr><tr><td>שקופים</td><td></td><td></td><td>Borosil #1500017</td></tr><tr><td>פקק שטיפת</td><td></td><td></td> גז <td>Borosil #1761021</td></tr><tr><td>בקבוקון</td><td></td><td></td> זכוכית <td>OD= 25 מ"מ x גובה = 85 מ"מ; ריח זכוכית בורוסיליקט</td></tr><tr><td>(אתיל בוטיראט)</td><td></td><td></td><td>Merck #E15701</td></tr><tr><td>שעוות פרפין (נוזלית) אור</td><td></td><td></td><td>SRL #18211</td></tr><tr><td>מהדקי</td><td></td><td></td> רולר <td>פולימד #14098</td></tr><tr><td>צינורות</td><td></td><td></td> סיליקון <td>OD = 0.6 ס"מ, מזהה = 0.3 ס"מ; מהדקי רולר לבקרת זרימה</td></tr><tr><td>משאבת</td><td></td><td></td> ואקום <td>Hana #HN-648 (כל משאבת אקווריום עם כיוון זרימה הפוך ידנית)</td></tr> <tr><td>מבוך</td><td></td><td></td> Y <td>זכוכית בורוסיליקט</td></tr><tr><td>צינור זכוכית בצורת Y (זכוכית בורוסיליקט)</td><td></td><td></td> <td>בהתאמה אישית, מדידות ב<חזק>איור 5A</חזק</td></tr><tr><td>><חזק>פריטים נפוצים: </חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>כל תוכנה להפעלת וידאו (למשל - נגן מדיה VLC)https://www.videolan.org/vlc/</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מחשב לניתוח</td><td></td><td></td><td></td>נתוני וידאו</tr><tr><td>בקבוקי</td><td></td><td></td> זבוב <td>OD = 60 מ"מ x גובה = 140 מ"מ; בקבוקוני</td></tr><tr><td></td><td></td><td>זבוב</td> זכוכית / פוליפרופילן <td>OD = 25 מ"מ x גובה = 85 מ"מ; תוכנת פריזמה מזכוכית בורוסיליקט</td></tr><tr><td>https://www.graphpad.com/scientific-software/prism/www.graphpad.com/scientific-software/prism/</td><td></td> תוכנת ImageJ טיימר https://imagej.net/downloads מצלמת וידאו עם הגדרת הקלטת וידאו מצלמת וידאו או מצלמת טלפון נייד תעבוד <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><חזק>לשואב זבובים: </חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>סופג כותנה</td><td></td><td></td><td>, חיטוי</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td></td><td></td><td>סיגמא-אולדריץ'</td></tr><tr><td>#P7793 טיפים</td><td></td><td></td><td>לפיפטה 200 ומיקרו; L או 1000 ומיקרו; L, בחר depeding על הקוטר החיצוני של צינור הסיליקון אורך צינור סיליקון</td></tr><tr><td>/גומי</td><td></td><td></td><td>= 30-50 ס"מ. הצינור צריך להיות חסר ריח</td></tr><tr><td><חזק>הרכב מזון זבובים: < / חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מרכיבים (כמות ל -1 ליטר מזון)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>אגר (8 גרם)</td><td></td><td></td> <td>SRL # 19661 (CAS: 9002-18-0)</td></tr> <tr><td>קורנפלור (80 גרם)</td><td></td><td></td> <td>אורגני, נרכש</td></tr><tr><td>מקומי D-גלוקוז (20 גרם)</td><td></td><td></td> <td>SRL # 51758 (CAS: 50-99-7)</td></tr><tr><td>חומצה פרופיונית (4 גרם)</td><td></td><td></td><td>SRL # 43883 (CAS: 79-09-4)</td></tr><tr><td>סוכרוז (40 גרם)</td><td></td><td></td><td>SRL # 90701 (CAS: 57-50-1)</td></tr><tr><td>טגו (מתיל פרה הידרוקסי בנזואט) (1.25 גרם)</td><td></td><td></td><td>SRL # 60905 (CAS: 5026-62-0)</td></tr><tr><td>אבקת שמרים (10 גרם)</td><td></td><td></td><td>HIMEDIA # RM027</td></tr><tr><td><קווי זבוב חזקים>זבובים ששימשו בניסויים במחקר זה:</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>סוג בר (קנטון S או CS)</td><td></td><td></td><td>BDSC # 64349</td></tr><tr><td>w1118</td><td></td><td></td><td>BDSC # 3605</td></tr><tr><td>w[1118]; Fmr1[&Delta; 50M]/TM6B, Tb[+]</td><td></td><td></td><td>BDSC # 6930</td></tr><tr><td>w[*]; Fmr1[&Delta; 113M]/TM6B, Tb[1]</td><td></td><td></td><td>BDSC # 67403</td></tr><tr><td>MB247-GAL4 (Gaurav Das, NCCS Pune, India)</td><td></td><td></td><td>BDSC # 50742</td></tr><tr><td>LN1-GAL4</td><td></td><td></td><td>NP1227, קונסורציום NP, יפן</td></tr><tr><td>row-shRNA</td><td></td><td></td><td>BDSC # 25971</td></tr></tbody></table>

פרדיגמות להערכה התנהגותית במודל דרוזופילה של הפרעת הספקטרום האוטיסטי

Paradigms for Behavioral Assessment in Drosophila Model of Autism Spectrum Disorder

הפרעת הספקטרום האוטיסטי (ASD) כוללת קבוצה הטרוגנית של הפרעות נוירו-התפתחותיות עם סימפטומים התנהגותיים נפוצים, כולל ליקויים באינטראקציה חברתית וביכולת תקשורת, התנהגויות מוגבלות או חוזרות משופרות, וגם, במקרים מסוימים, לקות למידה וליקוי מוטורי. דרוזופילה שימשה כאורגניזם מודל שאין שני לו למידול מספר רב של מחלות אנושיות. מכיוון שגנים רבים היו מעורבים באוטיזם, זבובי פירות התגלו כדרך רבת עוצמה ויעילה לבחון את הגנים המעורבים לכאורה בהפרעה. מכיוון שמאות גנים, בעלי תפקידים תפקודיים מגוונים, מעורבים באוטיזם, מודל זבוב גנטי יחיד של ASD אינו ישים; במקום זאת, מוטציות גנטיות בודדות, הפלות גנים, או מחקרים מבוססי ביטוי יתר של הומולוגים של זבובים של גנים הקשורים ל- ASD הם האמצעי הנפוץ להשגת תובנה לגבי מסלולים מולקולריים העומדים בבסיס תוצרי גנים אלה. שורה של טכניקות התנהגותיות זמינות בדרוזופילה המספקות קריאה קלה של ליקויים במרכיבים התנהגותיים ספציפיים. מבחני מרחב חברתי ומבחני תוקפנות וחיזור בזבובים הוכחו כיעילים בהערכת פגמים באינטראקציה חברתית או בתקשורת. התנהגות טיפוח בזבובים היא קריאה מצוינת של התנהגות חזרתית. בדיקת הרגלה משמשת בזבובים כדי להעריך את היכולת ללמידה של הרגלה, אשר נמצא מושפע אצל חלק מחולי ASD. שילוב של פרדיגמות התנהגותיות אלה יכול לשמש כדי לבצע הערכה יסודית של מצב המחלה דמוי ASD האנושי בזבובים. באמצעות שימוש בזבובים מוטנטיים מסוג Fmr1 , שחזור תסמונת ה-X השביר בבני אדם, והפלה בשורה הומולוגית של POGZ בנוירונים של זבובים, הראינו ליקויים הניתנים לכימות בריווח חברתי, תוקפנות, התנהגות חיזור, התנהגות טיפוח והרגלה. פרדיגמות התנהגותיות אלה מודגמות כאן בצורותיהן הפשוטות והפשוטות ביותר, מתוך הנחה שזה יקל על השימוש הנרחב בהן למחקר על ASD והפרעות נוירו-התפתחותיות אחרות במודלים של זבובים.

בדיקת תוקפנות כמודל ASD זבוב, זבובים מוטנטיים Fmr1 שימשו63,64. w1118 זכרים שימשו כביקורת ו-Fmr1 trans-heterozygote Fmr1Δ113M/Fmr1Δ50M57 זבובים זכרים כזבובי ניסוי; זכרים בוגרים שוכנו בצינורות בידוד במשך 5 ימים. זכרים הומוטיפיים (אותו גנוטיפ, אותם תנאי דיור) הוכנסו לזירת התוקפנות והתנהגותם תועדה במשך 20 דקות. המספר הכולל של התקפים אגרסיביים ב-20 דקות נספר עבור כל גנוטיפ. נמצא כי מספר ההתקפים התוקפניים במהלך 20 דקות היה מופחת באופן משמעותי במקרה של זכרים מוטנטיים מאשר אצל זכרי הביקורת (איור 1E). התוקפנות המופחתת הזו בזבובי Fmr1 יכולה לנבוע מהעניין המופחת באינטראקציה חברתית עם זבוב אחר. לעומת זאת, זבובים זכרים מוטנטיים מסוג Fmr1 ששוכנו בקבוצה/חברה מראים ספירת התקפי תוקפנות דומה לזו של 1118 זבובים ששוכנו חברתית (הנתונים אינם מוצגים), מה שמצביע ככל הנראה על תפקיד חיובי של הסביבה החברתית בהשראת התנהגות חברתית.
בדיקת מרחב חברתי בדיקת המרחב החברתי בוצעה בזבובי w1118 ומודל ASD (Fmr1Δ113M/Fmr1Δ50M). המרחק לשכן הקרוב ביותר חושב עבור כל זבוב ובוצעו 10 שכפולים ביולוגיים עבור כל גנוטיפ. הזבובים המוטנטים מראים מרחקי שכנים קרובים יותר באופן משמעותי מאשר עמיתיהם בקבוצת הביקורת (איור 2D), מה שמצביע על העדפה להתרחקות גדולה יותר מזבובים אחרים.
בדיקת חיזור בדיקת החיזור של זבובים זכרים חד-ביתיים בוצעה כדי לכמת את התנהגות החיזור המולדת של שני זבובי מודל ASD נפרדים. ראשית, התנהגות החיזור של זבובי Fmr1 transheterozygous הושוותה לזו של w1118; זבובי Fmr1 הראו מדד חיזור נמוך משמעותית, כמו גם מספר מופחת של ניסיונות הזדווגות (איור 3E1). בניסוי שני, Row, אורתולוג דרוזופילה של הגן האנושי POGZ (גן סיכון ASDנפוץ מאוד 20), הופל על ידי ביטוי מיקרו-רנ"א קצר שיער כנגד שורה בנוירונים בגוף פטריות באמצעות קו דרייבר MB247-GAL4. זבובי מודל ASD אלה נבדקו עבור כל פגם בדפוס החיזור המולד; מדד החיזור ומספר ניסיון ההזדווגות חושבו מסרטוני 15 דקות. זבובי השורה הראו ירידה משמעותית במדד החיזור, כמו גם ספירות של ניסיונות הזדווגות (איור 3E2), מה שמצביע על תקשורת לקויה שלהם כלפי נקבות.
התנהגות טיפוח התנהגות טיפוח משמשת כקריאה להתנהגות חוזרת בדרוזופילה 16,42,43. התנהגות הטיפוח כומתה בזבובי Fmr1 transheterozygote והושוותה לזו של w1118. זמן ההשהיה לטיפוח הראשון יורד באופן משמעותי בזבובי Fmr1, בעוד שמשך ההתקף והטיפוח הממוצע ומדד הטיפוח עולים באופן משמעותי בזבובי Fmr1 (איור 4C), מה שמצביע על התנהגות טיפוח משופרת (או חזרתית) בזבובי מודל ASD. לעומת זאת, המספר הכולל של התקפי הטיפוח בזבובים המוטנטים לא נמצא שונה באופן משמעותי בהשוואה לזה של זבובי הביקורת.
בדיקת הרגלת חוש הריח הרגלה נמצאה פגומה במספר רב של אנשים אוטיסטים והיא יכולה לשמש כבדיקה לאותו הדבר בדרוזופילה23. כאן, הרגלת חוש הריח נבדקה במודל ASD על ידי הפלת שורה בנוירונים בין-עצביים מקומיים של חוש הריח המונעים על ידי LN1-GAL4. בניסויים אלה נעשה שימוש בריח מרתיע, 20% אתיל בוטיראט, כדי לגרום להרגלה בזבובים אלה. התוצאות מראות כי זבובים שנפלו בשורה לא התרגלו לאחר חשיפה לריח במשך 3 ימים (שני הפסים האחרונים בגרף באיור 5E אינם מראים הבדל משמעותי בין זבובים נאיביים לעומת זבובים מורגלים) בהשוואה לזבובים מסוג בר, זבובים המראים התרגלות אופיינית לאחר חשיפה לאתיל בוטיראט במשך 3 ימים (זבובים חשופים מראים ירידה משמעותית במדד הביצועים בהשוואה לזבובים נאיביים). זה מצביע על כך שזבובי ה-row-knockdown אינם מתרגלים לאחר חשיפה לאתיל בוטיראט במשך 3 ימים והם נדחים על ידי הריח הדוחה, מה שמוכיח שזבובי ASD אלה סובלים ממחסור בהרגלה.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66649/66649fig01.jpg"> איור 1: זירת תוקפנות ודפוסי התנהגות מייצגים. (A) מערך זירת התוקפנות בצלחת בת 24 בארות עם מכסה מחורר לכניסת זבובים. כניסה: ממדים של זירה אחת עם מזון זבובים בתוכה. (B) תצלום של צינור חד-ביתי המכיל זבוב זכר יחיד ומבודד ובקבוקון של בית קבוצה המכיל זבובים זכרים ונקבות, המתארים סביבה חברתית. (ג) שואף להעברה מבוססת שאיפת פה של זבובים. פריטים הדרושים להרכבת שואב זבוב המציין את צידי הצינור לכניסת זבוב (קצה זבוב) ואת הצד שיוכנס לפה (קצה הפה) (C1) ושואב זבוב מורכב (C2). (D) דפוסי התנהגות תוקפניים מייצגים של גברים-גברים: התקרבות, איום כנפיים, סיף, אחיזה, ריאות, אגרוף והתכתשות. (E) זבובים זכרים מוטנטיים מסוג Fmr1 מראים התנהגות תוקפנית מופחתת כלפי זכרים אחרים בהשוואה לקבוצת הביקורת. תרשים תיבה המציג את מספר ההתקפים התוקפניים של זכרים מבודדים חברתית של w1118 (בקרה) לעומת Fmr1 זבובים טרנס-הטרוזיגוטיים (Fmr1Δ113M/Fmr1Δ50M). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66649/66649fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66649/66649fig02.jpg"> איור 2: הגדרת זירת בדיקת מרחב חברתי. (A) דיאגרמה המציגה מידות וסידור של שמשות זכוכית וספייסרים אקריליים. (B) הסידור הסופי של רכיבי הזירה שבהם הספייסרים האקריליים דחוקים בין חלקי הזכוכית, ומשאירים רווח קטן לכניסת זבובים בתחתית. החלל המשולש שנוצר בין חתיכות זכוכית לספייסרים הוא זירת SSA עבור הזבובים, כאן הזבובים מסוגלים לנוע רק בשני ממדים. (C) תצלום של מערך הזירה הסופי של SSA עם זבובים בתוך התא. קיצור: SSA = מערך מרחב חברתי. (D) זבובי מודל ASD (Fmr1 transheterozygous) מראים התרחקות מוגברת זה מזה בבדיקת המרחב החברתי בהשוואה ל-w 1118. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66649/66649fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66649/66649fig03v2.jpg"> תרשים 3: זירת החיזור ודפוסי התנהגות מייצגים. דיאגרמות המציגות (A) עיצוב ו-(B) סידור הדיסקים בזירת בדיקת חיזור. (ג) צילום זירת החיזור לאחר ההסדר הסופי. (D) תמונות מייצגות המציגות דפוסי התנהגות של חיזור של זכר תמים כלפי נקבה מזווגת: מרדף, התמצאות, הבהוב כנפיים, ליקוק, ניסיון הזדווגות והזדווגות. (E) חלקות המציגות מדד חיזור ומספר ניסיונות הזדווגות בשני מודלים של ASD: (E1) זבובים מוטנטיים Fmr1 המראים ירידה משמעותית במדד החיזור ובניסיון ההזדווגות בהשוואה לקבוצת ביקורת w1118 . (ה2) זבובי שורה שימשו כמודל ASD נוסף שבו שורה-shRNA בא לידי ביטויבתאי עצב מסוג bod y פטריות (MB247-GAL4); ירידה משמעותית בהתנהגות החיזור נצפתה עם הפלת שורה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66649/66649fig03largev2.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66649/66649fig04.jpg"> איור 4: הגדרת זירה ודפוסי התנהגות מייצגים של התנהגות טיפוח. (A) הדיסק או הזירה בצורת גלגל (אותה זירת חיזור שמוצגת באיור 3) מותקנת על לוח LED עם מפזר להארה אחידה מלמטה, והווידאו צולם מלמעלה. זה מבטיח ניגודיות גבוהה יותר הנדרשת לזיהוי תנועה עדינה של תוספות במהלך הטיפוח. (B) תצלומים של דפוסי התנהגות טיפוח שנצפו אצל זבובים זכרים בוגרים. T1 = זוג רגלייםאחד , T2 = זוג רגלייםשני , T3 = זוג רגליים שלישי. מינוח אינטואיטיבי מקוצר משמש לתבניות טיפוח ב-B: T1-head= ראש משופשף ברגליים ראשונות; T1-T1 = זוג הרגליים הראשון שפשף יחד, וכן הלאה. קיצור: LED = דיודה פולטת אור. (C) גרפים המראים תוצאות בדיקת טיפוח שבוצעו בזבובים טרנס-הטרוזיגוטיים Fmr1 והושוו ל-w1118. זבובים מוטנטיים Fmr1 הראו השהיה מופחתת משמעותית עבור התקף הטיפוח הראשון, מה שמצביע על תחילת הטיפוח המוקדמת בהשוואה לקבוצת הביקורת. יתר על כן, משך התקף הטיפוח הממוצע ומדד הטיפוח גדלו באופן משמעותי במוטציות Fmr1 , דבר המצביע על התנהגות חוזרת משופרת בזבובי מודל ASD. לעומת זאת, המספר הכולל של התקפי הטיפוח לא השתנה באופן משמעותי בזבובים המוטנטים בהשוואה לקבוצת הביקורת. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66649/66649fig04large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66649/66649fig05.jpg"> איור 5: אינדוקציה והגדרת בדיקה להרגלת חוש הריח ותוצאה מייצגת לאחר הבדיקה. (A) רכיבים של מערך בדיקת בחירת הריח הבינארי: (A1) מבוך Y, (A2) המתאם, (A3) הסידור של שני אלה, (A4) זוג צינורות איסוף לחיבור בחלק העליון של זרועות מבוך Y, (A5) בקבוק הזכוכית ושפופרות הזכוכית לשמירה על תמיסת הריח או המים שדרכם יבעבע האוויר לפני שיעבור למבוך Y. (ב) התקנת בקבוק מזון זבוב להשראת הרגלה של חוש הריח; דיאגרמה מצוירת (B1) מראה כיצד צינור מיקרופוגה המכיל ריח תלוי מחוט נחושת באמצע הדרך בתוך הבקבוק; (B2) לבסוף, פתח הבקבוק מכוסה בכותנה ואטום במעטפות נייר חומות. (C) תמונה של הסידור הכולל של מערך מבוך Y. (D) תצלומים המראים את התפלגות הזבובים בתאי איסוף לאחר סיום ניסוי. (ד1) זבובים נאיביים (החשופים לפרפין חסר ריח בלבד, בקרה) מראים דחייה כלפי הריח המרתיע (20% אתיל בוטיראט המשמש להשראת הרגלה במחקר זה) ובוחרים בזרוע מבוך Y המלא באוויר רגיל ואילו (D2) זבובים חשופים (מורגלים) מתפלגים באופן שווה בשתי הזרועות. קיצור: ID = קוטר פנימי. (E) תוצאות בדיקת הרגלת חוש הריח של זבובי שורה הראו פגם בהרגלה. זבובי בר (קנטון S), לאחר חשיפה של 3 ימים לאתיל בוטיראט, הראו ירידה משמעותית במדד הביצועים בהשוואה לזבובים תמימים, דבר המעיד על הרגלה. כאשר צאצאים של זבובי LN1-GAL4 x row-shRNA נחשפו במשך 3 ימים, מדד הביצועים לא נמצא שונה באופן משמעותי מזה של זבובים תמימים; זה מוכיח שזבובי השורה האלה לא התרגלו בחשיפה של 3 ימים לריח, מה ששיחזר סימפטום אנושי דמוי ASD. קיצורים: ASD = הפרעת הספקטרום האוטיסטי; shRNA = RNA קצר סיכת ראש. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66649/66649fig05large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

הפרעת הספקטרום האוטיסטי (ASD) קשורה להתנהגות חברתית ותקשורתית לקויה ולהופעתה של התנהגות חזרתית. לצורך חקר הקשר בין גנים אוטסיים וליקויים התנהגותיים במודל דרוזופילה , מתוארות במאמר זה חמש פרדיגמות התנהגותיות להערכת ריווח חברתי, תוקפנות, חיזור, טיפוח והתנהגות הרגלה.

Autism Spectrum Disorder (ASD) encompasses a heterogeneous group of neurodevelopmental disorders with common behavioral symptoms including deficits in ...

הפרעת הספקטרום האוטיסטי משפיעה על ילדים, ומובילה לתקשורת לקויה, התנהגות חברתית והתנהגות חזרתית משופרת. דרוזופילה היא מודל פופולרי יותר ויותר לחקר אוטיזם כדי לפענח מסלולים מולקולריים בסיסיים. אנו מתארים סדרה של טכניקות סטנדרטיות לאפיון התנהגותי של מודלים של אוטיזם זבובים.לצורך פענוח היסודות המולקולריים של הפרעת הספקטרום האוטיסטי בזבובים, יש לקבוע במדויק את ביטוייה ההתנהגותיים. כימות תכונות התנהגותיות אנושיות של אוטיזם ב- Drosophila melanogaster היא משימה מאתגרת למדי. אין פרדיגמה התנהגותית אחת בזבובים המתייחסת לכל האנומליות ההתנהגותיות של הפרעה זו.תיארנו סדרה של חמש פרדיגמות התנהגותיות מבוססות היטב בדרוזופילה, כלומר, מבחן תוקפנות, מבחן מרחב חברתי, צורת פרווה, טיפוח ובדיקת הרגלה. כל אלה יכולים לשמש במודלים של זבוב ASD כדי לאפיין ולכמת את רמת הליקויים בהתנהגות תקשורתית, התנהגות חזרתית והתנהגות חברתית. תיארנו את חמש הטכניקות הללו בצורתן הפשוטה ביותר, כך שכל מעבדה עם מתקן מחקר זבובים מינימלי תוכל לאמץ אותן בקלות ולבצע ניסויים על מודל זבוב של הפרעת הספקטרום האוטיסטי, ולתרום לקידום הבנתנו את המחלה.

paradigms-for-behavioral-assessment-drosophila-model-autism-spectrum

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לכימות ההימנעות של אנשים לחוצים. פרדיגמה זו היא עוצמתית אך ידידותית למשתמש וניתן להשתמש בה כדי להעריך את ההשפעה של גנים וסביבה על סוג אחד של אינטראקציה חברתית ב-Drosophila melanogaster.

Assay הפשוט לכימות חברתיות הימנעות ב Melanogaster דרוזופילה

התנהגויות מוגבלות וחוזרות על עצמן מסדר גבוה יותר משבשות את חייהם של אנשים מושפעים.  התנהגויות אלה מאתגרות למידול במכרסמים, מה שמקשה על מחקר ביו-רפואי בסיסי על טיפולים או התערבויות פוטנציאליים ל-RRBs.  כאן אנו מתארים חקר אובייקטים חדשים כמבחן פוטנציאלי ל-RRBs מסדר גבוה יותר בעכברים.

חיפושי אובייקט רומן בתור Assay פוטנציאל התנהגויות חוזרות מסדר גבוה של עכברים

מודלים של מכרסמים הם כלים רבי ערך לחקר התנהגויות ליבה הקשורות להפרעת הספקטרום האוטיסטי (ASD). במאמר זה, אנו מסבירים על שני מבחנים התנהגותיים למידול מאפייני הליבה של ASD בעכברים: טיפוח עצמי, המעריך התנהגות חוזרת, ומבחן אינטראקציה חברתית בן שלושה חדרים, המתעד ליקויים חברתיים.

אסטרטגיות להערכת התנהגויות דמויות אוטיסטיות בעכברים

ההליך המתואר בפרוטוקול זה מראה כי הממשל טסטוסטרון ואמונות עממיות על הטסטוסטרון עשויה להיות קשורה התנהגויות חברתיות בניגוד ישירות.

שילוב של התנהגות אנדוקרינולוגיה וכלכלה ניסויית: החלטת טסטוסטרון חברתית ביצוע

Assaying β עמילואיד רעילות באמצעות טראנסגנטי ג elegans דגם

כפי מיומנות ידנית היא בעיקר זכותו של פרימטים, משימות התנהגותיות פותחו קופי מקוק. ארבעה להגיע ולתפוס משימות prehension, מדידה מניפולציה מצד היכולת והכוח, לאפשר להקים התאוששות לאחר פגיעה תפקודית של מערכת העצבים המרכזית ועל מנת לבחון את ההשפעה של הטיפול.

הערכה התנהגותית של מיומנות ידני יונקים לא אנושיים

בתגובה לאותות מזון או תרופות לזווג עליות במהלך תקופה של התנזרות זה עשוי להתייחס רגישות מוגברת להתנהגויות הישנות. כאן אנו פרט בהליך להערכת זה "דגירה של השתוקקות" אצל חולדות אשר למילוי עצמי סוכרוז.

שיטה כללית להערכת דגירה של השתוקקות סוכרוז בחולדות

מקצבי יממה בהתנדבות גלגל ריצת פעילות ביונקים הם מצמידים בחוזקה לתנודות המולקולריות של שעון ראשי במוח. ככזה, מקצבים יומיים אלה בהתנהגות יכולים לשמש כדי לחקור את ההשפעה של גורמים גנטיים, תרופתיים וסביבתיים על התפקוד של השעון הביולוגי הזה.

הקלטה וניתוח של מקצבי יממה בריצת גלגל פעילות במכרסמים

פרוטוקול זה מתאר דרך פשוטה וחסכונית לזהות באופן אינדיבידואלי דרוזופילה או חרקים אחרים. נתוני הדגמה החוקרים את הצלחת ההזדווגות על פני שלושה מינים של דרוזופילה מראים כי שיטה זו דומה או טובה יותר מהשימוש בהרדמת CO2.

צביעת חרקים למבחני התנהגות: התנהגות חיזור של הרדים<em&gt; דרוזופילה</em

על מנת לזהות מוטציות חדשות המשפיעות על תחושה מכנית, תכננו בדיקה המודדת את התגובה ההתנהגותית לגירוי מישוש של זיפי זבובים בשיבוטים מוטנטיים שנוצרו בשיטת MARCM. שילוב הטכניקות מאפשר לזהות מוטציות רגישות למכניקה שאחרת היו קטלניות.

התנהגות Assay עבור Mechanosensation של MARCM מבוסס משובט ב<em&gt; תסיסנית melanogaster</em

חקור פרדיגמות התנהגותיות להערכת הפרעת הספקטרום האוטיסטי במודל Drosophila. השיטות כוללות מבחני תוקפנות, חיזור, טיפוח והסתגלות לכמתים גנטיים של התנהגות חברתית וחוזרת.

פרדיגמות להערכה התנהגותית במודל דרוזופילה של הפרעת הספקטרום האוטיסטי

גלה סרטונים נוספים