2 באוגוסט 2024
כאן אנו מציגים פרוטוקול לחקר תנועת שיניים אורתודונטית (OTM), המשמש מודל מתאים לחקר מנגנוני הסתגלות העצם, ספיגת שורשים ותגובת תאי עצם לגירויים מכניים. מדריך מקיף זה מספק מידע מפורט על מודל OTM, רכישת טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת וניתוח עוקב.
המטרה הראשונה של מחקר זה היא לנתח עיצוב מחדש של עצם מקסילרית ולאחר מכן עבור resorption בתגובה לגירויים פרמקולוגיים או שימוש טרנסגני. מחקר זה נועד לסלול את הדרך לאסטרטגיות טיפוליות עתידיות כדי לווסת אובדן עצם הקשורים לעיצוב מחדש של עצם. ההתקדמות האחרונה כוללת ניתוח של תכנון מולקולרי כדי למנוע או לטפל באובדן של תמותה מסת עצם. חידוש זה נועד לשפר את טיפולי השיניים, הכרוכים במבנים כגון יישור שיניים ושתלים דנטליים.
הטכנולוגיות המשמשות כיום לקידום המחקר בתחוננו כוללות שימוש בבעלי חיים מהונדסים גנטית, ניתוח ממוחשב של טומוגרפיית מאקרו, התקדמות בטכנולוגיית האביב ופיתוחים בחומרים לתיאורי שיניים האתגר הניסויי העיקרי טמון ברכישת המיומנויות הידניות הדרושות לייצור קפיצים בהדבקתם המדויקת לטוחנת הראשונה הימנית העליונה של עכברים. הליך זה מתבצע בהרדמה כאשר מיקום העכברים בשולחן ניתוחים ובעזרת מיקרוסקופ לדיוק. מחסור באסטרוגן כפי שנצפה באוסטאופורוזיס נקשר לעיצוב מחדש מוגבר של העצם המקסילרית.
מחקר עתידי יכול לחקור את הפוטנציאל של מולקולות כמו פוספט קינאז ודיאוקסיגנאז 1, כטיפולים המכוונים לאנזימים אוסטאוקלסטים. זוהי אסטרטגיה שמטרתה לשפר את ההגנה מפני אוסטאו בתנאים של לחץ מכני. כדי להתחיל, השתמש בצבת חיתוך דיסטלית כדי לחתוך את קפיץ סליל ניקל טיטניום פתוח בגודל 0.25 על 0.76 אינץ 'לשש לולאות, עם שני קצוות בצורת לולאה הממוקמים בניצב לקפיץ, באמצעות צבת ויינגרט אורתודונטית.
עצבו את חוט ניקל הכרום העגול בקוטר 0.20 מילימטר לתצורה הרצויה עם קצוות בצורת לולאה באמצעות פינצטה של Matthew ומכשיר בצורת עגול כהתייחסות לגודל. הרכיבו את הקצוות בצורת לולאה של הסליל ואת חוט ניקל הכרום העגול בקוטר 0.20 מילימטר. לאחר הרדמת העכבר, להעריך את עומק ההרדמה באמצעות רפלקס הדוושה.
מקם את העכבר בתנוחת דקוביטוס גבי על שולחן ניתוחים, משתק את גפיו כדי להגביל את התנועה ולאפשר גישה תוך אוראלית. השתמש בפותחן פה, המעוצב מחוט בקוטר 0.50 מ"מ ומאובטח בחוט 0.08 מ"מ כדי להקל על הדמיה מלאה תוך מניעת תנועת ראש. תחת מיקרוסקופ סטריאו, להתבונן במבנים בתוך הפה.
נקו וחרטו את הטוחנת הראשונה הימנית ואת המשטחים החותכים באמצעות אצטון ופריימר לחריטה עצמית, בהתאמה. בעזרת מברשת מיקרו, אספו כמות קטנה של פריימר לחריטה עצמית. ולהחיל אותו על פני השטח הסתומים של הטוחנת הראשונה העליונה.
לרפא באור את הפריימר על פני השטח הנסתרים של טוחנות וחותכות במשך 30 שניות. באמצעות שרף שנרפא באור, קשרו את הקצה הדיסטלי של קפיץ סליל פתוח של ניקל טיטניום בעל שש לולאה אל פני השטח הנסתרים של הטוחנת המקסילרית הראשונה הימנית. ומרפא אור למשך 30 שניות.
הפעל את הסליל באמצעות מכשיר שתוכנן במיוחד עם מנגנון מסילה וארכובה המחובר לשולחן הניתוחים. חבר את הקצה בצורת לולאה חופשית של החוט העגול בקוטר 0.20 מ"מ לוו של מד המתח. עם הפעלת הארכובה, הזיזו את שולחן הניתוחים לאורך המסילה עד שהדינמומטר ירשום כוח של 0.35 ניוטון.
חברו את החוט העגול בקוטר 0.20 מ"מ לשתי החותכות העליונות, כדי לעגן את הסליל. חתוך את החוט כדי לנתק את העכבר מהדינמומטר. הוסף תוספת נוספת של שרף כך שקצה המתכת של המכשיר לא ייחשף ויפגע בעכבר.
ומרפא אור למשך 30 שניות. לפרק את העכבר מהשולחן. לאחר הניתוח לטפל בעכבר עם תמיסת מלח כדי למנוע התייבשות במהלך תקופת ההסתגלות עם המכשיר.
כדי להתחיל, לקצור את העצם המקסילרית מן העכבר המתת חסד עם מספריים חדים על ידי חיתוך כל רקמות רכות. העצם הזיגומטית במישור הקשת ותפר האף הקדמי וסינכונדרוזיס עורפי ספנו במישור העטרה. מקבעים את העצם המקסילרית בפורמלין חוצץ 10% נייטרלי למשך 48 שעות.
כדי לבצע סריקת מיקרו CT של העצם המקסילרית, השתמש בגודל ווקסל איזוטרופי של 9 עד 18 מיקרומטר, הגדרות רנטגן של 50 קילו וולט, מסנן אלומיניום 0.5 מילימטר וזווית סיבוב של 0.5 מעלות לסריקות ברזולוציה גבוהה. לשחזר את התמונות שנרכשו באמצעות תוכנית שחזור טומוגרפיה מיקרו שצוין על ידי היצרן של מיקרו CT בשימוש. כדי לכמת את תנועת השן האורתודונטית, מדדו את ההבדל במרחק הליניארי בין צומת האמייל הצמנטי של הטוחנות הראשונה והשנייה של ההמי מקסילה הימנית ביחס להמי מקסילה השמאלית.
כדי לבדוק את הדגימות עבור נוכחות של resorption שורש דלקתי המושרה אורתודונטי, באמצעות שיטת מתאר ידנית, לבחור את האזור של עניין של שורש distovestibular של טוחנת מקסילרי הראשון. מדוד את צפיפות מינרלי השורש ואת אחוז נפח השורש לכל נפח כולל. חקירה של מודל עכבר לתנועת שיניים אורתודונטית בכוח של 0.35 ניוטון, הראתה כי המרחק הממוצע של צומת אמייל צמנטי בצד הבקרה בין הטוחנות הראשונה והשנייה היה 243.69 מיקרומטר.
בצד תנועת השן האורתודונטית, המרחק הממוצע של צומת אמייל צמנטי היה 284.66 מיקרומטר.
מחקר זה מציג פרוטוקול לבחינת תנועת שיניים אורתודונטית (OTM) במודל של עכבר, תוך התמקדות בעדכון מבנה העצם של הלסת העליונה (maxillary bone remodeling) ובספיגת שורשים בתגובה לגירויים מכניים. ממצאים מרכזיים מדגימים את יעילותו של מודל זה לניתוח תנועת שיניים ולהערכת אסטרטגיות טיפוליות פוטנציאליות למניעת אובדן עצם.
תזוזת שיניים אורתודונטית (OTM) בעכברים מספקת מודל in vivo חסון לחקר דינמיקת עיצוב מחדש של העצם תחת כוח מכני מבוקר, ומספקת מידע ישיר לתיקוף מטרות בשלב מוקדם עבור מסלולי הסתגלות של העצם. ניתוח כמותי ב-micro-CT של תזוזת שיניים וספיגת שורשים מאפשר מדידה מדויקת של תגובות ביולוגיות, ובכך תומך בביטחון ניבוי במחקרים תרגומיים של ביולוגיה של העצם. מודל זה ממוקם באופן אסטרטגי להערכה פרה-קלינית של התערבויות טיפוליות המכוונות לפעילות של אוסטאוקלסטים ואוסטאובלסטים.
מודל עכבר OTM זה משתלב ברצף שבין הגילוי לשלב הפרה-קליני, ומגשר בין מחקרים מכניסטיים למחקר תרגומי בנושאי הסתגלות העצם והתערבויות אורתודונטיות.