Name: רספירומטריה ברזולוציה גבוהה בתא בנפח קטן (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-25T12:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 8 s
Description: חקור רספירומטריה ברזולוציה גבוהה בתא בנפח קטן של 0.5 מ"ל לניתוח תפקוד מיטוכונדרי. שיטה זו מאפשרת מדידות מדויקות עם פחות חומר דגימה למחקר ביולוגי מתקדם.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבור המחקר על טסיות דם אנושיות, שמונה מתנדבים סיפקו הסכמה מדעת בכתב להשתתף במחקר, שאושר על ידי הרשות השוודית לביקורת אתית (מס' 2013/181). שני קווי תאי פיברובלסטים של עור אנושי מיילודים זכרים נרכשו מ-ATCC ונעשה בהם שימוש על פי אישור אתי של משרד הבריאות של צ'כיה (פרויקט: AZV MZ CR NU22-07-00474). הליכים הקשורים לעכברים נערכו בהתאם לחוק הניסויים בבעלי חיים האוסטרי ובהתאם לאמנה האירופית להגנה על בעלי חוליות המשמשים למטרות ניסיוניות ומדעיות אחרות (Tierversuchsgesetz 2012; הוראה 2010/63/EU; BMWFM-66.011/0128-WF/V/3b/2016). עקרון 3Rs יושם כדי למזער את מספר חיות הניסוי.
1. כיול עוצמת הקול
<ol>
	<li>הרכיבו את תאי הנפח הקטן (sV) או את תאי הנפח הקלאסי (cV) על האורובורוס (איור 1A,B; טבלה 1).</li>
	<li>הפעל את ה-Oroboros והתחבר ל-DatLab.</li>
	<li>יבש את התאים.</li>
	<li>פיפטה 0.54 מ"ל של H2O לתוך sV (0.50 מ"ל נפח ניסיוני אפקטיבי בתוספת 0.04 מ"ל נפח מת נימי) או 2.07 מ"ל של H2O לתוך cV (2.00 מ"ל נפח אפקטיבי בתוספת 0.07 מ"ל נפח מת נימי). הערה: כדי למנוע אובדן נוזלים בין החלק העליון של גליל הזכוכית למחזיק תא הפוליאוקסימתילן (POM), הכנס את קצה הפיפטה עמוק מספיק כדי לגעת בדופן תא הזכוכית.</li>
	<li>הפעל את הבוחשים.</li>
	<li>לפני סגירת החדר, יש להרטיב את טבעות ה- O של הפקקים תוך שמירה על הנימים שלהם יבשים. שחרר את טבעות כיול הנפח והכנס את הפקקים כלפי מטה עד שהנוזל ממלא את נימי הפקק ומופיעה טיפה קטנה בשקע בקצה העליון של הנימים (טבלה 1).</li>
	<li>הדק את טבעות כיול הנפח כדי לתקן את מיקומן כך שהנפח המכויל יתקבל בהחדרות רצופות של הפקקים.</li>
</ol>
2. הגדרה כללית של אורובורוס
<ol>
	<li>הפעל את תוכנת DatLab .</li>
	<li>הגדר את טמפרטורת הניסוי (37 מעלות צלזיוס) ואת מהירות סיבוב הערבוב ב-550 סל"ד (9.2 הרץ או סיבובים לשנייה) בתא sV או 750 סל"ד (12.5 הרץ) בתא cV. הגדר את מרווח דגימת הנתונים ל-2 שניות עם החלקה מעל 80 שניות (40 נקודות נתונים) בבדיקות רקע אינסטרומנטליות O2 או 40 שניות (20 נקודות נתונים) עבור רספירומטריה. הערה: מוטות המערבל המגנטיים (AlNiCo מצופים בפוליווינילידן דיפלואוריד [PVDF]; טבלה 1) נסערים על ידי שדה מגנטי מסתובב פועם עם עוצמת שדה של 3.5 mT ברמת המערבל בתא.</li>
	<li>בצע כיול אוויר28 ב-MiR05 או באותו מדיום דגירה ששימש בניסויים הבאים.</li>
	<li>בצע אפס כיול חמצן מדי פעם אך לעולם לא מיד לפני תחילת הניסויים.<ol>
		<li>הכן תמיסת מלאי Na-dithionite טרייה על ידי המסת אבקת O2-Zero במאגר פוספט של 50 מ"מ (pH 8.0) לריכוז של 2.5 מ"מ או 10 מ"מ עבור תאי sV או cV , בהתאמה.</li>
		<li>טיטראט Na-dithionite בעודף כדי להשיג את האות הגולמי R0 או זרם אפס [μA] בריכוז O2 0 μM14,28.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. מבחן רקע אינסטרומנטלי O2
<ol>
	<li>לשכהS V
	<ol>
		<li>לאחר כיול האוויר, סגור את החדר. עקוב אחר אות החמצן במשך כ-60 דקות עד שריכוז ה-O2 יורד מריווי האוויר לכ-150 מיקרומטר. הגדר ארבעה סימנים J°1 עד J°4 בתרשים 'O2 שיפוע שלילי'. הערה: בצע בדיקת רקע אינסטרומנטלית זו של O2 מדי יום לפני תחילת הניסוי.</li>
		<li>אופציונלי: עם מזרק המילטון, טיטראט נ-דיתיוניט מוכן לפי שלב 2.4.1 כדי להגיע לריכוז O2 של 100 מיקרומטר (איור 1C). הערה: בפרוטוקול אחר, נאט-דיתיוניט מועבר לתוך התא באמצעות מיקרו-משאבת הזרקת טיטרציה (TIP2k; איור משלים 1 ואיור משלים 2) להשוואה עם שיטה סטנדרטית לקביעת הרקע האינסטרומנטלי O2 שטף28.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>לשכהג' ה'
	<ol>
		<li>לאחר כיול האוויר, סגור את החדר, המתן לייצוב שיפוע O2 וקבע את הסימון J°1 על החלקה 'שיפוע O2 neg.'28. בעזרת מזרק המילטון, טיטראט Na-dithionite שהוכן לפי שלב 2.4.1. בשלבים של 0.7 מיקרוליטר כדי להתאים למשטר החמצן של החדר sV ולהוריד את ריכוז ה-O2 ל-150 מיקרומטר.</li>
		<li>הוסיפו שלב טיטרציה נוסף של Na-dithionite (כ-7 מיקרוליטר) כדי להוריד את ריכוז ה-O2 ל-100 מיקרומטר (איור 1D).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>ניתוח נתוני רקע אינסטרומנטלי O2<ol>
		<li>חשב את שיפוע הרקע האינסטרומנטלי O2 ב-DatLab28. בחר שטף/שיפוע מהתפריט העליון.</li>
		<li>פתח את חלון תיקון הרקע O2. בחר Active File כמקור לרקע O2 ובחר את סימני J° שישמשו לחישוב הרגרסיה הליניארית. החל את תיקון הרקע O2.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67442/67442fig1v2.jpg"> 
איור 1: תאים בנפח קטן (s V) ובנפח קלאסי (cV) ובדיקת רקע אינסטרומנטלית O2. (A) Chambers v. (ב) לשכה ג' נ' (C) עקבות מייצגים של שיפוע שלילי וסימני J°1, sV (0.5 מ"ל; ירוק) ו-cV (2.0 מ"ל; כחול). (ד) ריכוז חמצן וסימני R1 תואמים. שלוש טיטרציות נא-דיתיוניט ידניות (כ-0.7 מיקרוליטר, מלאי 10 מ"מ; cV) וטיטרציה סופית של 7.0 מיקרוליטר של 2.5 מ"מ ו-10 מ"מ בתא sV ו-cV , בהתאמה. קוצים שנגרמו על ידי טיטרציות בוטלו. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67442/67442fig1v2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
4. הוספת דגימה לתאי אורובורוס
הערה: ניתן להוסיף את הדגימה לתא בשתי שיטות: החלפת נפח חלקית (טסיות דם ופיברובלסטים במחקר הנוכחי) או החלפת נפח מלאה (מיטוכונדריה מבודדת במחקר הנוכחי).
<ol>
	<li>החלפת נפח חלקית<ol>
		<li>הסר את הפקק שהוכנס במלואו. פיפטה והשליכו נפח Vמתוך MiR05. Vout הוא 60-70 מיקרוליטר עבור טסיות דם ו-80-150 מיקרוליטר עבור פיברובלסטים, המחושבים על פי ריכוזי התאים בתרחיף תאי המלאי.</li>
		<li>שווה ערך ל-V out, פיפטה באותו נפח VJ.i של תרחיף תאי מלאי (עם ריכוז תאים ידוע) לתוך התא (איור 2).</li>
		<li>חשב את ריכוז תאי הניסוי בנפח V' בפועל (0.54 מ"ל ו-2.07 מ"ל), גדול מנפח הניסוי האפקטיבי V (0.5 מ"ל ו-2.0 מ"ל). הערה: יש לתכנן ריכוזים של תרחיף תאי המלאי וריכוז תאי הניסוי כדי להשיג נפחים של VJ.i = Vהחוצה התואמים לשגיאת טיטרציה קטנה. בניסויים עם טסיות דם, נעשה שימוש בפקק אב טיפוס עבור תאS V עם נפח מת נימי של 0.05 מ"ל.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>החלפת נפח מלאה<ol>
		<li>שואבים את כל המדיום מהתא ומחליפים אותו בלפחות 0.54 מ"ל או 2.07 מ"ל של תמיסת מלאי מיטוכונדריה מבודדת בריכוז הדגימה הניסיוני בתאי sV או cV, בהתאמה.</li>
		<li>סגור את החדר ושאב את תמיסת המלאי המיטוכונדריאלית העודפת מכלי הפקק. הערה: החלפת נפח מלאה אינה כוללת כל שונות בריכוז המיטוכונדריה שעלולה להיגרם על ידי טיטרציה לתוך התא הסגור דרך נימי הפקק עם מזרק המילטון. השיטה האחרונה ישימה לדגימות בקוטר קטן שהוכנו בתרחיפים מרוכזים (למשל, מיטוכונדריה מבודדת); עם זאת, הוא חושף תאים שבירים לנזק פוטנציאלי של ממברנות הפלזמה על ידי כוחות גזירה המופעלים במחט באורך 51 מ"מ של מזרק המילטון (קוטר פנימי של 0.41 מ"מ). זה נמנע על ידי הסרת הפקק והכנסת הדגימה לתא על ידי החלפת נפח חלקית או מלאה. נחקרו שלושה סוגים של תכשירים מיטוכונדריאליים. ההכנות לדוגמה מתוארות בתיק משלים 1 1,26,29,30.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>תאים חיים: טסיות דם אנושיות<ol>
		<li>הכניסו את הקריביאלים המכילים טסיות דם לאמבט מים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס והפשירו את התוכן עד שיישאר מעט קרח.</li>
		<li>פתח את הקריוביאלים והוסף 1 מ"ל של מדיום מחומם מראש (DPBS + 10 מ"מ EGTA, 37 מעלות צלזיוס) לאט בטיפות.</li>
		<li>מערבבים בעדינות את הטסיות ומעבירים אותן לצינור צנטריפוגה של 50 מ"ל בנפח כולל של 10 מ"ל בינוני מחומם מראש (DPBS + 10 מ"מ EGTA, 37 מעלות צלזיוס). צנטריפוגה ב 1000 גרם למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר (RT) באמצעות רוטור מתנדנד החוצה (תאוצה 6, בלם 2).</li>
		<li>השעו מחדש את הטסיות ב-0.25 מ"ל DPBS + 10 מ"מ EGTA (RT) והוסיפו אותן לתאים על ידי החלפת נפח חלקי לריכוז תאים ניסיוני ראשוני הנע בין 157 · 106 עד 210 · 106 x·mL-1 בתא של 0.5 מ"ל ומ-164 · 106 עד 220 · 106 x·mL-1 בתא של 2.0 מ"ל (ראה31 לפרטים על היחידה האלמנטרית x). הערה: אורובורוס אחד צויד בתא sV ו-cV במיקומים A ו-B, בהתאמה, בשימוש במקביל לאורובורוס אחר המצויד בתא sV ו-cV במיקומים B ו-A, בהתאמה.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>תאים חדירים: פיברובלסטים אנושיים<ol>
		<li>הוסף את התאים לתאי האורובורוס על ידי החלפת נפח חלקית לריכוז תאים נומינלי של 0.75 · 106 x·mL-1 בשני סוגי התאים וחשב את הריכוז בפועל (שלב 4.1.3). הערה: במקביל נעשה שימוש בכלי אורובורוס שונים, כל אחד מהם מצויד בתאי sV או cV .</li>
	</ol>
	</li>
	<li>מיטוכונדריה מבודדת: לב עכבר<ol>
		<li>הוסף 15 מיקרוליטר של תרחיף מיטוכונדריאלי ל-5985 מיקרוליטר של מדיום נשימה מיטוכונדריאלי (MiR05), וכתוצאה מכך ריכוז חלבון מיטוכונדריאלי מלאי נע בין 0.013-0.026 מ"ג∙mL-1.</li>
		<li>הוסף את התרחיף המיטוכונדריאלי לתאי Oroboros על ידי החלפת נפח מלאה. הערה: אורובורוס אחד צויד בתא sV ו-cV במיקומים A ו-B, בהתאמה, בשימוש במקביל לאורובורוס אחר המצויד בתאיs V ו-cV במיקומים B ו-A, בהתאמה.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67442/67442fig02.jpg"> 
איור 2: הוספת תרחיף התא על ידי החלפת נפח חלקית. (A) תוספת בתא 0.5 מ"ל sV ו-(B) בתא 2.0 מ"ל cV. (1) תא סגור עם נפחים של מדיום נשימה V ונימי פקק מלא Vstc, למדידת רקע אינסטרומנטלי O2 שטף JO2°. (2) הפקק הוסר, Vstc התנקז לתוך התא וכתוצאה מכך הנפח הכולל V'= V+Vstc. (3) הסרה חלקית של מדיום Vהחוצה = -V J.i. נפח V'= V'+Vהחוצה נשאר בתא. (4) צנרת תת-דגימה עם נפח V J.i של תרחיף תאי מלאי רספירומטרי לתוך התא וכתוצאה מכך נפח כולל V# = V+Vstc של תרחיף תאים מדולל. (5) תא סגור עם נימי פקק מלאים (נפח מת Vstc) למדידת שטף O2 ספציפי לנפח J V,O2 בנפח ניסיוני V. נתון זה שונה מאיור 2A בספירת תאים ונורמליזציה ב-HRR41. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67442/67442fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
5. פרוטוקולי תביעה
<ol>
	<li>טיטרציה של תמיסות המלאי של הכימיקלים המפורטים בטבלה משלימה 1 לתוך התאים עם מיקרו-מזרקים של המילטון, והתאמת נפחי הטיטרציה כדי להשיג את אותם ריכוזים ניסיוניים בתאיs V ו-cV (ראה מקרא איורים באיורים 6, 8, 10).</li>
	<li>בחר פרוטוקול SUIT-003_D018 32,33 (עבור טסיות דם במחקר הנוכחי).</li>
	<li>פרוטוקולים נבחרים SUIT-001_D004 4,15,34,35 ו-SUIT-002_D007 4,15,35,36 (עבור פיברובלסטים במחקר הנוכחי).</li>
	<li>בחר פרוטוקול SUIT-002_D005 4,15,35,37 (עבור מיטוכונדריה מבודדת במחקר הנוכחי).</li>
</ol>
6. ניתוח נתוני SUIT
<ol>
	<li>ב- DatLab, הגדר סימנים להגדרת מקטעים של חלקות נבחרות.</li>
	<li>בחר שטף/שיפוע בתפריט העליון. פתח את חלון השטף/שיפוע . החל את תיקון נפח הטיטרציה לדילול דגימות תלויות על ידי כל טיטרציה בפרוטוקול SUIT.</li>
	<li>בחר סימנים מהתפריט העליון. סטטיסטיקת Open Mark כדי להציג את החציון של נקודות הנתונים המסומנות בבסיס מתוקן על ידי הפחתת צריכת החמצן השיורית (rox).</li>
	<li>חשב את היירוט והשיפוע בין תוצאות זוגיות המתקבלות בתאי sV ו- cV על ידי ניתוח רגרסיה הפוכה25,28 באמצעות גיליון אלקטרוני.</li>
	<li>השווה את קצב הנשימה במצב רוקס (מינימום O2 שטפים) בתאי sV ו- cV על ידי מבחן t זוגי של סטודנט באמצעות התוכנה jamovi 2.3.1338. הערה: מכיוון ששני התאים במכשיר Oroboros הם עצמאיים מבחינה תפקודית (למעט מרווחי הטמפרטורה וההקלטה של DatLab), ניתן לשקול מדידות בכל תא בנפרד, בדומה לשימוש במכשירים שונים. התוצאות הסופיות עשויות להיות מדווחות כחציונים או ממוצעים של תאים מרובים עם מידע על השונות שלהם.</li>
</ol>

<meta charset="utf8"></head><body>חקר נפחי תא עבור רספירומטריה מיטוכונדריאלית ברזולוציה גבוהה

<ol><li>Zdrazilova, L., Hansikova, H., Gnaiger, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparable+respiratory+activity+in+attached+and+suspended+human+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Comparable respiratory activity in attached and suspended human fibroblasts.</a> PLoS ONE. 17 (3), e0264496(2022).</li>
<li>Schöpf, B., et al. <a target="_blank" href="https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32198407/">OXPHOS remodeling in high-grade prostate cancer involves mtDNA mutations and increased succinate oxidation.</a> Nat Commun. 11 (1), 1487(2020).</li>
<li>Meszaros, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+predictive+value+of+graft+viability+and+bioenergetics+testing+towards+the+outcome+in+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+International%22%5BJournal%5D)">The predictive value of graft viability and bioenergetics testing towards the outcome in liver transplantation.</a> Transplant International. 37, 12380(2024).</li>
<li>Doerrier, C., Garcia-Souza, L. F., Krumschnabel, G., Wohlfarter, Y., Mészáros, A. T., Gnaiger, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+fluorespirometry+and+OXPHOS+protocols+for+human+cells%2C+permeabilized+fibers+from+small+biopsies+of+muscle%2C+and+isolated+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">High-resolution fluorespirometry and OXPHOS protocols for human cells, permeabilized fibers from small biopsies of muscle, and isolated mitochondria.</a> Methods Mol Biol. 1782, 31-70 (2018).</li>
<li>Gnaiger, E., Steinlechner-Maran, R., Méndez, G., Eberl, T., Margreiter, R. <a target="_blank" href="https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/8746845/">Control of mitochondrial and cellular respiration by oxygen.</a> J Bioenerg Biomembr. 27 (6), 583-596 (1995).</li>
<li>Gnaiger, E., Méndez, G., Hand, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+phosphorylation+efficiency+and+depression+of+uncoupled+respiration+in+mitochondria+under+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">High phosphorylation efficiency and depression of uncoupled respiration in mitochondria under hypoxia.</a> Proc Natl Acad Sci. 97 (20), 11080-11085 (2000).</li>
<li>Gnaiger, E. <a target="_blank" href="https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14713113/">Oxygen Conformance of Cellular Respiration.</a> Hypoxia. Advances in Experimental Medicine and Biology. Roach, R. C., Wagner, P. D., Hackett, P. H. , Springer. Springer, Boston, MA. (2003).</li>
<li>Harrison, D. K., Fasching, M., Fontana-Ayoub, M., Gnaiger, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytochrome+redox+states+and+respiratory+control+in+mouse+and+beef+heart+mitochondria+at+steady-state+levels+of+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cytochrome redox states and respiratory control in mouse and beef heart mitochondria at steady-state levels of hypoxia.</a> J Appl Physiol. 119 (10), 1210-1218 (2015).</li>
<li>Pesta, D., Gnaiger, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+respirometry%3A+OXPHOS+protocols+for+human+cells+and+permeabilized+fibers+from+small+biopsies+of+human+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">High-resolution respirometry: OXPHOS protocols for human cells and permeabilized fibers from small biopsies of human muscle.</a> Methods Mol Biol. 810, 25-58 (2012).</li>
<li>Komlódi, T., Cardoso, L. H. D., Doerrier, C., Moore, A. L., Rich, P. R., Gnaiger, E. <a target="_blank" href="https://www.bioenergetics-communications.org/index.php/bec/article/view/komlodi_2021_q">Coupling and pathway control of coenzyme Q redox state and respiration in isolated mitochondria.</a> Bioenerg Commun. 2021.3, (2021).</li>
<li>Suomalainen, A., Nunnari, J. <a target="_blank" href="https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/38788685/">Mitochondria at the crossroads of health and disease.</a> Cell. 187 (11), 2601-2627 (2024).</li>
<li>Cardoso, L. H. D., et al. <a target="_blank" href="https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/39424161/">Fatty acid β-oxidation in brain mitochondria: Insights from high-resolution respirometry in mouse, rat and Drosophila brain, ischemia and aging models.</a> Biochim Biophys Acta Mol Basis Dis. 1871, 167544(2025).</li>
<li>Gnaiger, E. <a target="_blank" href="https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11718759/">Bioenergetics at low oxygen: dependence of respiration and phosphorylation on oxygen and adenosine diphosphate supply.</a> Respir Physiol. 128 (3), 277-297 (2001).</li>
<li>Gnaiger, E. <a target="_blank" href="https://books.google.at/books?id=JMlo1CuofE4C&dq=Gnaiger+E+(2008)+Polarographic+oxygen+sensors,+the+oxygraph+and+high-resolution+respirometry+to+assess+mitochondrial+function.+In:+Mitochondrial+dysfunction+in+drug-induced+toxicity+(Dykens+JA,+Will+Y,+eds)+John+Wiley+%26+Sons,+Inc,+Hoboken,+NJ:327-52.&lr=&source=gbs_navlinks_s">Polarographic Oxygen Sensors, the Oxygraph and High-Resolution Respirometry to Assess Mitochondrial Function.</a> Mitochondrial dysfunction in drug-induced toxicity. Dykens, J. A., Will, Y. , John Wiley & Sons, Inc. Hoboken, NJ. 327-352 (2008).</li>
<li>Gnaiger, E. <a target="_blank" href="http://bioenergetics-communications.org/index.php/bec/article/view/gnaiger_2020_mitopathways">Mitochondrial pathways and respiratory control. An Introduction to OXPHOS analysis.</a> Bioenerg Commun. 2020.2, (2020).</li>
<li>Diaz, E. C., Adams, S. H., Weber, J. L., Cotter, M., Børsheim, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+LDL-C%2C+high+blood+pressure%2C+and+low+peak+VO%E2%82%82+associate+with+platelet+mitochondria+function+in+children-The+Arkansas+Active+Kids+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Biosci%22%5BJournal%5D)">Elevated LDL-C, high blood pressure, and low peak VO₂ associate with platelet mitochondria function in children-The Arkansas Active Kids Study.</a> Front Mol Biosci. 10, 1136975(2023).</li>
<li>Ehinger, J. K., Morota, S., Hansson, M. J., Paul, G., Elmér, E. <a target="_blank" href="https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25893255/">Mitochondrial dysfunction in blood cells from amyotrophic lateral sclerosis patients.</a> J Neurol. 262 (6), 1493-1503 (2015).</li>
<li>Heimler, S., et al. <a target="_blank" href="http://bioenergetics-communications.org/index.php/bec/article/view/heimler_2022">Platelet bioenergetics are associated with resting metabolic rate and exercise capacity in older adult women.</a> Bioenerg Commun. 2022.2, (2022).</li>
<li>Palacka, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+mitochondrial+bioenergetics+reprogramming+in+patients+with+urothelial+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Platelet mitochondrial bioenergetics reprogramming in patients with urothelial carcinoma.</a> Int J Mol Sci. 23 (1), 388(2021).</li>
<li>Fischer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+respiration+in+response+to+iron+deficiency+anemia%3A+Comparison+of+peripheral+blood+mononuclear+cells+and+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolites%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial respiration in response to iron deficiency anemia: Comparison of peripheral blood mononuclear cells and liver.</a> Metabolites. 12 (3), 270(2022).</li>
<li>JedIicka, J., et al. <a target="_blank" href="https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/36647911/">Impact of aging on mitochondrial respiration in various organs.</a> Physiol Res. 71 (Suppl. 2), S227-S236 (2022).</li>
<li>Westerlund, E., et al. <a target="_blank" href="https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/38439844/">Correlation of mitochondrial respiration in platelets, peripheral blood mononuclear cells and muscle fibers.</a> Heliyon. 10 (5), e26745(2024).</li>
<li>Hütter, E., Renner, K., Pfister, G., Stöckl, P., Jansen-Dürr, P., Gnaiger, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescence-associated+changes+in+respiration+and+oxidative+phosphorylation+in+primary+human+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Senescence-associated changes in respiration and oxidative phosphorylation in primary human fibroblasts.</a> Biochem J. 380 (3), 919-928 (2004).</li>
<li>Yépez, V. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OCR-Stats%3A+Robust+estimation+and+statistical+testing+of+mitochondrial+respiration+activities+using+Seahorse+XF+Analyzer%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">OCR-Stats: Robust estimation and statistical testing of mitochondrial respiration activities using Seahorse XF Analyzer.</a> PLoS One. 13 (7), e0199938(2018).</li>
<li>Gnaiger, E. <a target="_blank" href="https://wiki.oroboros.at/index.php/Gnaiger_2021_MitoFit_BCA">Bioenergetic cluster analysis - mitochondrial respiratory control in human fibroblasts.</a> MitoFit Preprints. 2021.8, (2021).</li>
<li>Palmer, J., Tandler, B., Hoppel, C. <a target="_blank" href="https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/925018/">Biochemical properties of subsarcolemmal and interfibrillar mitochondria isolated from rat cardiac muscle.</a> J Biol Chem. 252, 8731-8739 (1977).</li>
<li>Lai, N. M., Kummitha, C., Rosca, M. G., Fujioka, H., Tandler, B., Hoppel, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+mitochondrial+subpopulations+from+skeletal+muscle%3A+Optimizing+recovery+and+preserving+integrity%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol%22%5BJournal%5D)">Isolation of mitochondrial subpopulations from skeletal muscle: Optimizing recovery and preserving integrity.</a> Acta Physiol. 225 (2), e13182(2019).</li>
<li>Baglivo, E., Cardoso, L. H., Cecatto, C., Gnaiger, E. <a target="_blank" href="https://www.bioenergetics-communications.org/index.php/bec/article/view/baglivo_2024">Statistical analysis of instrumental reproducibility as internal quality control in high-resolution respirometry.</a> Bioenerg Commun. 2022.8, (2022).</li>
<li>Mela, L., Seitz, S. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/007668797955006X?via%3Dihub">Isolation of mitochondria with emphasis on heart mitochondria from small amounts of tissue.</a> Methods Enzymol. 55, 39-46 (1979).</li>
<li>Cardoso, L. H. D., Doerrier, C., Gnaiger, E. <a target="_blank" href="http://bioenergetics-communications.org/index.php/bec/article/view/cardoso_2021_mgg">Magnesium Green for fluorometric measurement of ATP production does not interfere with mitochondrial respiration.</a> Bioenerg Commun. 2021.1, (2021).</li>
<li>Gnaiger, E. <a target="_blank" href="https://doi.org/10.26124/becprep.2025-0004">The elementary unit — count and numbers in the International System of Units.</a> BEC preprints. , (2025).</li>
<li>Vernerova, A., et al. <a target="_blank" href="https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34944675/">Mitochondrial respiration of platelets: Comparison of isolation methods.</a> Biomedicines. 9 (12), 1859(2021).</li>
<li>Oroboros Instruments SUIT-003 O2 ce-pce D018. , 
 <a target="_blank" href="https://wiki.oroboros.at/index.php/SUIT-003_O2_ce-pce_D018">https://wiki.oroboros.at/index.php/SUIT-003_O2_ce-pce_D018</a> (2024).</li>
<li>Oroboros Instruments SUIT-001 O2 ce-pce D004. , 
 <a target="_blank" href="https://wiki.oroboros.at/index.php/SUIT-001_O2_ce-pce_D004">https://wiki.oroboros.at/index.php/SUIT-001_O2_ce-pce_D004</a> (2024).</li>
<li>Timón-Gómez, A., et al. <a target="_blank" href="https://doi.org/10.1113/EP092792">Bioenergetic profiles and respiratory control in mitochondrial physiology: Precision analysis of oxidative phosphorylation.</a> Exp Physiol. , 1-33 (2025).</li>
<li>Oroboros Instruments SUIT-002 O2 ce-pce D007. , 
 <a target="_blank" href="https://wiki.oroboros.at/index.php/SUIT-002_O2_ce-pce_D007">https://wiki.oroboros.at/index.php/SUIT-002_O2_ce-pce_D007</a> (2024).</li>
<li>Oroboros Instruments SUIT-002 O2 mt D005. , 
 <a target="_blank" href="https://wiki.oroboros.at/index.php/SUIT-002_O2_mt_D005">https://wiki.oroboros.at/index.php/SUIT-002_O2_mt_D005</a> (2024).</li>
<li>The Jamovi Project jamovi (Version 2.3.13). , 
 <a target="_blank" href="https://www.jamovi.org/">https://www.jamovi.org/</a> (2024).</li>
<li>Gnaiger, E. <a target="_blank" href="https://wiki.oroboros.at/images/3/3f/Gnaiger_1983_POS_preface.pdf">Preface: A biologist´s view.</a> Polarographic Oxygen Sensors. Aquatic and Physiological Applications. Gnaiger, E., Forstner, H. , Berlin, Heidelberg, New York. Springer. V-VII (1983).</li>
<li>Hütter, E., Renner, K., Jansen-Dürr, P., Gnaiger, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biphasic+oxygen+kinetics+of+cellular+respiration+and+linear+oxygen+dependence+of+antimycin+A+inhibited+oxygen+consumption%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Rep%22%5BJournal%5D)">Biphasic oxygen kinetics of cellular respiration and linear oxygen dependence of antimycin A inhibited oxygen consumption.</a> Mol Biol Rep. 29 (1/2), 83-87 (2002).</li>
<li>Oroboros Instruments Cell count and normalization in HRR. , 
 <a target="_blank" href="https://wiki.oroboros.at/index.php/Cell_count_and_normalization_in_HRR">https://wiki.oroboros.at/index.php/Cell_count_and_normalization_in_HRR</a> (2020).</li>
<li>Williams, O., Sergent, S. R. <a target="_blank" href="https://europepmc.org/article/nbk/nbk557800">Histology Platelets</a>. , StatPearls Pubs. Treasure Island, FL. (2022).</li>
<li>Donnelly, C., et al. <a target="_blank" href="https://www.bioenergetics-communications.org/index.php/bec/article/view/donnelly_2022">The ABC of hypoxia - what is the norm.</a> Bioenerg Commun. 2022.12.V2, (2022).</li>
<li>Aguirre, E., Rodríguez-Juárez, F., Bellelli, A., Gnaiger, E., Cadenas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+model+of+the+inhibition+of+respiration+by+endogenous+nitric+oxide+in+intact+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Kinetic model of the inhibition of respiration by endogenous nitric oxide in intact cells.</a> Biochim Biophys Acta. 1797 (5), 557-565 (2010).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Anaconda3</td><td>Anaconda Software Distribution</td><td>https://www.anaconda.com/</td> <td>תוכנה</td></tr><tr><td>ADP</td><td>Merck, גרמניה</td><td>117105</td><td></td></tr><tr><td>אנטיביוטיקה-אנטי-פטריות 100x</td><td>Biosera, צרפת</td><td>XC-A4110</td><td>זהירות H317 עלול לגרום לתגובה אלרגית בעור</td></tr><tr><td>Antimycin A</td><td>Sigma-Aldrich, ארה"ב</td><td>A8674</td><td>זהירות H300&nbsp; קטלני במקרה של בליעה, H400 לטווח קצר (אקוטי) סכנת מים&nbsp;</td></tr><tr><td>אסקורבט</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"ב</td><td>A7631</td><td></td></tr><tr><td>ATP</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"ב</td><td>&nbsp; A 2383</td><td></td></tr><tr><td>BSA ללא חומצות שומן</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"</td><td>ב A 6003</td><td>אלבומין סרום בקר</td></tr><tr><td>CaCO3</td><td>Sigma-Aldrich, ארה"ב</td><td>C 4830</td><td></td></tr><tr><td>CCCP</td><td>Sigma-Aldrich, ארה"ב</td><td>C2759</td><td>קרבוניל ציאניד m-כלורופניל הידרזון זהירות H301 + H311 + H331 רעיל במקרה של בליעה, במגע עם העור או במקרה של שאיפה</td></tr><tr><td>Countess Automated Cell counter&nbsp;</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק, ארה"ב</td><td>AMQAX100</td><td></td></tr><tr><td>ציטוכרום c</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"ב</td><td>C7752</td><td></td></tr><tr><td>DatLab&nbsp;</td><td>Oroboros Instruments, אוסטריה</td><td>גרסה 7.4</td><td>תוכנה לאיסוף וניתוח נתונים</td></tr><tr><td>DatLab&nbsp;</td><td>Oroboros Instruments, אוסטריה</td><td>גרסה 8.1</td><td>תוכנה לאיסוף וניתוח נתונים</td></tr><tr><td>בדיקת חלבון DC</td><td>Bio-Rad, ארה"ב</td><td>5000112</td><td>ערכת בדיקת חלבון; זהירות H314 גורם לכוויות חמורות בעור ולנזק לעיניים</td></tr><tr><td>Digitonin</td><td>Sigma-Aldrich, ארה"</td>ב <td>D5628</td><td>זהירות H301 רעיל אם נבלע</td></tr><tr><td>Dithiothreitol</td><td>Sigma-Aldrich, ארה"ב</td><td>D 0632</td><td>זהירות H318 גורם לנזק חמור לעיניים</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Pan Biotech, גרמניה</td><td>P04-05551</td><td>Dulbecco' s שונה Eagle' s בינוני</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma-Aldrich, ארה"ב</td><td>D2650</td><td>דימתיל-סולפוקסיד</td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Lonza Bioscience, שוויץ</td><td>LONBE17-512F</td><td>Dulbecco ללא סידן s מי מלח חוצץ פוספט</td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma-Aldrich, ארה"ב</td><td>E 4378</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Thermo Fisher Scientific, ארה"ב</td><td>A5256701</td><td>סרום בקר עוברי</td></tr><tr><td>גלוקוז</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"ב&</td><td>nbsp; G7528</td><td></td></tr><tr><td>גלוטמט&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"ב</td><td>G1626</td><td></td></tr><tr><td>גליצרופוספט</td><td>סנטה קרוז ביוטכנולוגיה</td><td>sc-215789</td><td></td></tr><tr><td>Heraeus Multifuge 3s גדול</td><td>תרמו פישר מדעי, ארה"ב</td><td>צנטריפוגה</td><td>HM3S</td></tr><tr><td>Hettich Rotina 380R&nbsp;</td><td>Andreas Hettich GmbH & Co. KG, גרמניה</td><td>1701</td><td>צנטריפוגה</td></tr><tr><td>Imidazole</td><td>Honeywell Fluka, אוסטריה</td><td>56750</td><td>זהירות H302 מזיק בבליעה, H314 גורם לכוויות עור חמורות ולנזק לעיניים, H360D עלול לפגוע בתינוק שטרם נולד</td></tr><tr><td>jamovi&nbsp;</td><td>פרויקט jamovi</td><td>גרסה 2.3.13</td><td>תוכנה</td></tr><tr><td>K+-MES</td><td>Sigma-Aldrich, ארה"ב</td><td>M 8250</td><td></td></tr><tr><td>Leucosep tube&nbsp;</td><td>Greiner Bio-One GmbH, אוסטריה</td><td>Z642843-300EA</td><td>צינור צנטריפוגה עם מחסום פוליאתילן</td></tr><tr><td>Malate&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich, ארה"ב</td><td>M1000</td><td>אזהרה H319 גורם לגירוי חמור בעיניים.</td></tr><tr><td>מניטול</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"ב</td><td>M 4125</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2&nbsp;</td><td>שרלאו, ספרד</td><td>MA 0036</td><td></td></tr><tr><td>MiR05-Kit</td><td>Oroboros Instruments, אוסטריה</td><td>60101-01</td><td>מיקסר בינוני נשימה מיטוכונדריאלית</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Swelab Instruments, שוודיה</td><td>שולחן נדנדה</td><td>440S</td></tr><tr><td>Mr Frosty Frozen Container</td><td>Thermo Fisher Scientific, ארה"ב</td><td>5100-0001</td><td>מיכל הקפאה</td></tr><tr><td>Oroboros</td><td>Oroboros Instruments, אוסטריה</td><td></td><td>NextGen-O2k ו-O2k מטופלים באופן קולקטיבי עם המונח ' אורובורוס</td></tr><tr><td>Oroboros Chamber cV</td><td>Oroboros Instruments, אוסטריה</td><td>23100-01</td><td>תא נפח קלאסי</td></tr><tr><td>Oroboros Chamber sV</td><td>Oroboros Instruments, אוסטריה</td><td>33100-01</td><td>תא נפח קטן</td></tr><tr><td>Oroboros TIP2k-Module</td><td>Oroboros Instruments, אוסטריה</td><td>11100-03</td><td>מיקרו-Pump טיטרציה-הזרקה</td></tr><tr><td>O2-Zero Powder</td><td>Oroboros Instruments, אוסטריה</td><td>ברקוד 26600-02</td><td>&nbsp; Na-dithionite זהירות H251 חימום עצמי: עלול להתלקח, H302 מזיק בבליעה, H319 גורם לגירוי חמור בעיניים</td></tr><tr><td>אוקטנויל קרניטין</td><td>ביוטרנד - APExBIO Technology, גרמניה</td><td>B6371</td><td></td></tr><tr><td>אוליגומיצין</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"ב</td><td>O4876</td><td></td></tr><tr><td>פוספוקריאטין</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"ב</td><td>P 7936</td><td></td></tr><tr><td>פירובט</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"ב</td><td>P2256</td><td>זהירות H317 עלול לגרום לתגובה אלרגית בעור</td></tr><tr><td>רוטנון</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"ב</td><td>R8875</td><td>זהירות H300 קטלני אם נבלע</td></tr><tr><td>שורות תאי פיברובלסטים בעור&nbsp;</td><td>&nbsp; ATCC, ארה"ב</td><td></td><td></td></tr><tr><td>נתרן אזיד</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"ב</td><td>S2002</td><td>אזהרה H300 + H310 + H330 קטלני במקרה של בליעה, במגע עם העור או במקרה של שאיפת</td></tr><tr><td>סובטיליסין A</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"</td>ב <td>P. 5380</td><td>אזהרה H318 - גורם לנזק חמור לעיניים, H334 - עלול לגרום לתסמיני אלרגיה או אסתמה או קשיי נשימה בשאיפה</td></tr><tr><td>Succinate</td><td>Sigma-Aldrich, ארה"ב</td><td>S2378</td><td></td></tr><tr><td>סוכרוז</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"ב</td><td>S 7903</td><td></td></tr><tr><td>Swelab Alfa מונה תאי דם&nbsp;</td><td>Boule Diagnostics AB, שבדיה</td><td>1420041</td><td></td></tr><tr><td>טאורין&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"ב</td><td>T 0625</td><td></td></tr><tr><td>Tecan Infinite TM F200</td><td>Tecan, שוויץ</td><td></td><td>ספקטרופוטומטר</td></tr><tr><td>TMPD</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"ב</td><td>T3134</td><td>N,N,N',N'-טטרמתיל-p-פנילאנדיאמין דיהידרוכלוריד זהירות H315 גורם לגירוי בעור, H319 גורם לגירוי חמור בעיניים</td></tr><tr><td>טריפסין</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"ב</td><td>T4799</td><td>זהירות H334 עלול לגרום לתסמיני אלרגיה או אסתמה או קשיי נשימה בשאיפה</td></tr><tr><td>Vacuette</td><td>Greiner Bio-One GmbH, אוסטריה</td><td>15452520</td><td></td></tr></tbody></table>

רספירומטריה ברזולוציה גבוהה בתא בנפח קטן

High-Resolution Respirometry in a Small-Volume Chamber

Investigating respiratory fluxes is decisive for understanding the complex interplay between metabolic processes. Studies of cells and tissues with ...

high-resolution-respirometry-in-a-small-volume-chamber

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

respirometry ברזולוציה גבוהה משמש לקביעת צריכת חמצן המיטוכונדריה. זוהי טכניקה פשוטה כדי לקבוע מתחמי שרשרת הנשימה במיטוכונדריה '(I-IV) מחירי נשימה, קיבולת מערכת תחבורת אלקטרון מקסימלי המיטוכונדריה, ויושרת הממברנה החיצונית של המיטוכונדריה.

ברזולוציה גבוהה Respirometry להעריך תפקוד מיטוכונדריאלי permeabilized ו תאים שלמים

כאן, דגימת שריר ארבע ראשי נלקחת מחזיר מורדם והמיטוכונדריה מבודדת על ידי צנטריפוגה דיפרנציאלית. לאחר מכן, קצב הנשימה של מתחמי שרשרת הנשימה המיטוכונדריאלית I, II ו-IV נקבעים באמצעות רספירומטריה ברזולוציה גבוהה.

בידוד של המיטוכונדריה ללא פגע מן שרירי השלד על ידי דיפרנציאל צנטריפוגה מדידות Respirometry ברזולוציה גבוהה

המטרה של פרוטוקול זה היא כדי למדוד את ההשפעה של שינויים בתיווך גלוקוז נשימה מיטוכונדריאלי בנוכחות תרכובות טבעיות על תאי הבטא תקינה 832/13 באמצעות respirometry ברזולוציה גבוהה.

Respirometry ברזולוציה גבוהה כדי למדוד את הפונקציה מיטוכונדריאלי של תאי הבטא תקין בנוכחות תרכובות טבעיות

פרוטוקול זה מתאר calorespirometry, מדידת סימולטני הישירים של פיזור חום וגם נשימה, אשר מספקת גישה לא פולשנית כדי להעריך את חילוף החומרים האנרגיה. טכניקה זו משמשת כדי להעריך את התרומה של מסלולים אירובית וגם אנאירובית כדי ניצול האנרגיה על-ידי ניטור את זרימת האנרגיה התאית הכוללת.

Calorespirometry: גישה חזקה, לא פולשנית כדי לחקור את חילוף החומרים האנרגיה התאית

פרוטוקול זה מציג את הבנייה והשימוש של מנגנון פלתיסמוגרפיה פשוטה לכל הגוף כדי לעקוב אחר התקדמות מחלות נשימה חיידקיות באופן לא פולשני.

פלתיסמוגרפיה פשוטה של כל הגוף כדי לאפיין את תפקוד הריאות במהלך מליואידוזיס נשימתי

הערכת זרחון חמצוני באמצעות מד נשימה ברזולוציה גבוהה הפכה לחלק בלתי נפרד מהניתוח הפונקציונלי של מיטוכונדריה ומטבוליזם של אנרגיה תאית. כאן אנו מציגים פרוטוקולים לניתוח חילוף החומרים של אנרגיה תאית באמצעות מדים מבוססי תאים ומיקרו-פלטות ברזולוציה גבוהה ודנים ביתרונות העיקריים של כל מכשיר.

Respirometry ברזולוציה גבוהה להערכת ביו-אנרגיה בתאים וברקמות באמצעות מדים מבוססי תאים ולוחות

פרוטוקול זה מתאר את ההתקנה וההרצה של מערכת מיקרו-רספירומטריה שניתן להשתמש בה כדי לחקור את התכונות הפיזיולוגיות של הולוביונט האלמוגים.

אפיון פיזיולוגי של הולוביונט האלמוגים באמצעות כלי מיקרו-רספירומטריה חדש

ניתוח תפקוד המיטוכונדריה של הזרע על ידי ספירומטריה ברזולוציה גבוהה מאפשר למדוד את צריכת החמצן של זרעונים הנעים בחופשיות במערכת תא סגור. ניתן ליישם את הטכניקה למדידת נשימה בזרעונים אנושיים, המספקת מידע על מאפייני המיטוכונדריה של הזרע ושלמותו.

רספירומטריה ברזולוציה גבוהה להערכת תפקוד המיטוכונדריה בזרעונים אנושיים

במאמר זה אנו מתארים שיטה מקיפה למדידת זרחן חמצוני מיטוכונדריאלי בסיבי שריר שלד טריים משריר אדם או עכבר. שיטה זו מאפשרת כימות בזמן אמת של נשימה מיטוכונדריאלית והערכת העדפת דלק וגמישות מטבולית תוך שמירה על רשתות מיטוכונדריאליות קיימות ושלמות הממברנה.

מדידת נשימה מיטוכונדריאלית בסיבי שרירי שלד של בני אדם ועכבר על ידי ספירומטריה ברזולוציה גבוהה

במאמר זה וידאו, אנו מתארים שיטה חדשה המאפשרת בנייה של הדרגתיים odorant בגיאומטריות ויציב לשליטה. אנו בקצרה להמחיש כיצד הדרגתיים אלה יכולים לשמש מסך פגמים חוש הריח (תתרנות מלאה או חלקית) ו ללמוד תכונות מהותיות יותר של התנהגות chemotaxis.

ברזולוציה גבוהה מדידה של התנהגות ריח מונחה על הזחלים תסיסנית

חקור רספירומטריה ברזולוציה גבוהה בתא בנפח קטן של 0.5 מ"ל לניתוח תפקוד מיטוכונדרי. שיטה זו מאפשרת מדידות מדויקות עם פחות חומר דגימה למחקר ביולוגי מתקדם.

רספירומטריה ברזולוציה גבוהה בתא בנפח קטן

גלה סרטונים נוספים