Name: טכניקה יעילה לאדם יחיד לדגימת חלב מעכברי מעבדה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T13:45:00.000+00:00
Duration: 4 min 56 s
Description: למד שיטה יעילה לדגימת חלב מעכברי מעבדה באמצעות מכשיר ואקום לשאיבה רציפה. הפרוטוקול מאפשר לאדם אחד לאסוף 0.1–0.5 מ"ל חלב בפחות מעשר דקות, ומפחית אובדן דגימות במחקרי הנקה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

כל הליכי הטיפול והניסוי בבעלי חיים פעלו בהתאם להנחיות הפדרליות וקיבלו אישור מהוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת ראטגרס. עכברים נקבות (רקע C57BL/6) הזדווגו בגיל 8 שבועות. הם הוזנו במגדל סטנדרטי של צ'או אד ליביטום והוחזקו במחזור רגיל של 12:12 שעות אור: חושך. יום המסירה נספר כיום 1 לאחר המסירה (PD1). ב-PD2 (הנקה מוקדמת) ו-PD10 (שיא הנקה), נדגם חלב כמתואר להלן.
1. הרכבת מכשיר חליבה 
<ol>
	<li>חבר קצה אחד של צינור הפוליוויניל כלוריד (PVC) בקוטר פנימי (ID) בגודל 5/32 אינץ' למשאבת הוואקום והשתמש בסרט כדי לאבטח את החיבור (מסומן באיור 1A). הערה: ניתן להחליף את משאבת הוואקום בכל משאבה מתאימה או בוואקום מרכזי (המכונה לפעמים "ואקום ביתי") הקיים במעבדה.</li>
	<li>חבר את הקצה השני של צינורות ה-PVC בגודל 5/32 אינץ' לצינורות ה-PVC בגודל 1/8 אינץ' באמצעות מחבר ישר דוקרני.</li>
	<li>חבר את הקצה השני של צינור ה-PVC בגודל 1/8 אינץ' למחט היפודרמית 18G באמצעות מחבר (מסומן b באיור 1A).</li>
	<li>חותכים את קצה קצה הפיפטה P200 ~ 0.2 ס"מ ליצירת פתח גדול יותר. הכנס את קצה הפיפטה P200 דרך פתח פקק המחיצה כך שהקצה יצביע כלפי מעלה (איור 1B). הערה: החלף את קצות הפיפטות בין בעלי חיים.</li>
	<li>חבר את פקק המחיצה לצינור איסוף סטרילי. בצע ניקוב דרך פקק המחיצה בעזרת המחט ההיפודרמית 18 G.</li>
	<li>בדוק את לחץ היניקה על ידי הפעלת משאבת הוואקום והנחת אצבע (מכוסה בכפפת מעבדה) כנגד פתח קצה הפיפטה. הערה: אתה אמור להרגיש יניקה עדינה אם היא מורכבת כהלכה. צינור האיסוף, מחט היפודרמית 18 גרם וקצות פיפטה P200 צריכים להיות סטריליים.</li>
</ol>
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67669/67669fig1.jpg"> 
איור 1: מכשיר החליבה. (א) מכשיר חליבה עם משאבת ואקום המחוברת למחט היפודרמית 18 גרם באמצעות צינורות PVC. המחט עוברת דרך פקק מחיצה המחובר לצינור איסוף מיקרוצנטריפוגה. קצה פיפטה P-200 הפוך, המשמש לשאיבת חלב מפטמה, מוחדר דרך פתח של פקק המחיצה. (B) תרשים חתך של מכשיר החליבה. (ג) סכר שנחלב בשיטה המתוארת. (D) כמות מייצגת (0.3 מ"ל) של חלב שנאסף מסכר בשיא ההנקה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67669/67669fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
2. הפרדת הסכר מגורים
<ol>
	<li>ביום החליבה יש להפריד את הסכר מהגורים שלה כדי לאפשר הצטברות חלב בבלוטות.</li>
	<li>שמור על חום הגורים בקן.</li>
	<li>יש להמתין שעתיים של הפרדה אם נאסף חלב במהלך ההנקה המוקדמת (למשל, PD2 במחקר זה).</li>
	<li>אפשר 30-45 דקות של הפרדה אם החלב נאסף במהלך שיא ההנקה (למשל, PD10 במחקר זה).</li>
</ol>
3. הרדמת הסכר
<ol>
	<li>כאשר הסכר מוכן לחליבה, יש להזריק תמיסת קטמין/קסילזין (תוך-צפקית, i.p.) לצד אחד של חלל הצפקבין זוג הפטמות הרביעיוהחמישי. הערה: כמות תמיסת ההרדמה שיש לתת מחושבת לפי משקל הסכר (80-100 מ"ג/ק"ג קטמין, 5-12 מ"ג/ק"ג קסילזין, על פי פרוטוקול IACUC של אוניברסיטת ראטגרס). מנה זו תרגיע עכבר למשך 45-60 דקות, ותספק מספיק זמן לאיסוף חלב.</li>
	<li>אשר את ההרדמה על ידי לחיצה חזקה על כף הרגל, אך מבלי לפצוע אותה, כדי לבחון את תפיסת התחושה והכאב של בעל החיים. הרדמה נאותה מסומנת על ידי היעדר תנועה מכל סוג שהוא.</li>
	<li>מרחו משחה עיניים וטרינרית על עיני הסכר כדי למנוע יובש בזמן ההרדמה.</li>
</ol>
4. איסוף חלב
<ol>
	<li>הניחו את הסכר המרדים על גבה על משטח עבודה מוצק. נגב בעדינות את אזור החלב שלה עם מגבון סטרילי להכנת אלכוהול כדי לנקות את האזור לפני החליבה.</li>
	<li>יש לתת 1-2 יחידות של אוקסיטוצין (i.p.)בין זוג הפטמות הרביעיוהחמישי בצד חלל הצפק שלא קיבל זריקה. הערה: אוקסיטוצין היא מולקולה קטנה שיכולה להיספג במהירות ויש לה זמן מחצית חיים קצר 14,15. החליבה צריכה להתחיל תוך דקה לאחר ההזרקה.</li>
	<li>החזיקו את הסכר על ידי קרצוף עדין של אזור הצוואר שלה ביד הלא דומיננטית.</li>
	<li>שאבו חלב באופן ידני מהפטמה על ידי סחיטת רקמת החלב מהבסיס לקצה הפטמה עד שנראה חרוז חלב.</li>
	<li>הפעל את מכשיר הוואקום על ידי הפעלת לחצן ההפעלה.</li>
	<li>התחל לחלוב על ידי מריחה עדינה של קצה הפיפטה P200 ההפוך על פטמה. השתמשו בתנועת משיכה עדינה כדי לסייע בשאיבת חלב (איור 1C).</li>
	<li>חזור על שלבים 4.4-4.6 על כל הפטמות עד לאיסוף נפח מספיק של חלב. הערה: במהלך החליבה, חלב יכול להישאב בטעות למחט ההיפודרמית 18 גרם או לצינורות PVC של קו הוואקום. ניתן לתקן זאת בקלות על ידי החלפת המחט או צינורות ה-PVC לפני חליבת החיה הבאה.</li>
</ol>
5. התאוששות הסכר לאחר איסוף חלב
<ol>
	<li>החזירו את הסכר המורדם לכלוב עם הגורים שלה והתחממו. עקוב אחר החיה עד שהיא חוזרת להכרה. הערה: הסכר רשאי לסרב לינוק שוב אם נותנים לה להתעורר בעצמה בכלוב נפרד לפני שהיא חוזרת לגורים שלה. זה נפוץ יותר כאשר איסוף החלב מתרחש במהלך ההנקה המוקדמת (PD2).</li>
	<li>תנו לסכרים להתרחק מהגורים שלה כדי להתאושש לחלוטין כשהיא תתחיל להתעורר; זו התנהגות נורמלית. הערה: אנו צופים בסכרים חוזרים לגורים שלהם מעת לעת וחוזרים לינוק באופן מלא לאחר מספר שעות.</li>
</ol>
6. ניתוח חלב
<ol>
	<li>השתמש בערכת בדיקת לקטוז מסחרית (ראה טבלת חומרים) כדי למדוד את לקטוז החלב. יש לדלל את החלב פי 75 במים סטריליים ולבצע את הבדיקה בהתאם לפרוטוקול הערכה.</li>
	<li>מדוד את שומן החלב בשיטת creamatocrit שהודגמה בפרסומים אחרים16,17.</li>
	<li>העריכו את חלבון החלב על ידי ביצוע בדיקת חלבון ברדפורד18 עם אלבומין בסרום בקר כסטנדרט19. לפני ביצוע הבדיקה, צנטריפוגה את החלב ב-4,000 × גרם למשך 15 דקות ב-4 מעלות צלזיוס. חלץ את האינפראנטנט על ידי פיפטינג ודלל אותו ל-1:10 במים סטריליים לפני הבדיקה.</li>
	<li>לבצע אלקטרופורזה של ג'ל פוליאקרילאמיד (PAGE); הפרד 10 מיקרוגרם חלבון על ג'ל ביס-טריס 4%-12% לפי הוראות היצרן. העבירו את החלבונים על ממברנות פלואוריד פוליווינילידן (PVDF) וצבעו אותם ב-Coomassie Blue R-250.</li>
</ol>

<meta charset="utf8"></head><body>שיטה אופטימלית לאדם יחיד לאיסוף חלב במחקרי הנקה של עכברים

<ol><li>Ericsson, A. C., Crim, M. J., Franklin, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+brief+history+of+animal+modeling%5BTitle%5D)+AND+%22Mo+Med%22%5BJournal%5D)">A brief history of animal modeling.</a> Mo Med. 110 (3), 201-205 (2013).</li>
<li>Bryda, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mighty+mouse%3A+The+impact+of+rodents+on+advances+in+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Mo+Med%22%5BJournal%5D)">The mighty mouse: The impact of rodents on advances in biomedical research.</a> Mo Med. 110 (3), 207-211 (2013).</li>
<li>Watford, M., Erbelding, E. J., Smith, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamine+metabolism+in+rat+small+intestine%3A+Response+to+lactation%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Soc+Trans%22%5BJournal%5D)">Glutamine metabolism in rat small intestine: Response to lactation.</a> Biochem Soc Trans. 14 (6), 1058-1059 (1986).</li>
<li>Robinson, A. M., Williamson, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+glucose+metabolism+in+the+lactating+mammary+gland+of+the+rat+in+vivo+and+in+vitro.+Effects+of+starvation%2C+prolactin+or+insulin+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Comparison of glucose metabolism in the lactating mammary gland of the rat in vivo and in vitro. Effects of starvation, prolactin or insulin deficiency.</a> Biochem J. 164 (1), 153-159 (1977).</li>
<li>Kowalski, T. J., Wu, G., Watford, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+adipose+tissue+amino+acid+metabolism+in+vivo+as+assessed+by+microdialysis+and+arteriovenous+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Rat adipose tissue amino acid metabolism in vivo as assessed by microdialysis and arteriovenous techniques.</a> Am J Physiol. 273 (3 Pt 1), E613-E622 (1997).</li>
<li>Ashcroft, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+to+assess+arteriovenous+differences+across+the+liver+and+hindlimb+muscles+in+mice+following+treadmill+exercise%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Protocol to assess arteriovenous differences across the liver and hindlimb muscles in mice following treadmill exercise.</a> STAR Protoc. 4 (1), 101985(2023).</li>
<li>Hallemeesch, M. M., Ten Have, G. A., Deutz, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+flux+measurements+across+portal+drained+viscera%2C+liver%2C+kidney+and+hindquarter+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">Metabolic flux measurements across portal drained viscera, liver, kidney and hindquarter in mice.</a> Lab Animal. 35 (1), 101-110 (2001).</li>
<li>Le, H., Nguyen, M., Manso, H. E. C., Wang, M. D., Watford, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipocytes+are+the+only+site+of+glutamine+synthetase+expression+within+the+lactating+mouse+mammary+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Dev+Nutr%22%5BJournal%5D)">Adipocytes are the only site of glutamine synthetase expression within the lactating mouse mammary gland.</a> Curr Dev Nutr. 8 (6), 102168(2024).</li>
<li>Giordano, A., Smorlesi, A., Frontini, A., Barbatelli, G., Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((White%2C+brown+and+pink+adipocytes%3A+The+extraordinary+plasticity+of+the+adipose+organ%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">White, brown and pink adipocytes: The extraordinary plasticity of the adipose organ.</a> Eur J Endocrinol. 170 (5), R159-R171 (2014).</li>
<li>Knight, C. H., Maltz, E., Docherty, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Milk+yield+and+composition+in+mice%3A+Effects+of+litter+size+and+lactation+number%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Biochem+Physiol+A+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Milk yield and composition in mice: Effects of litter size and lactation number.</a> Comp Biochem Physiol A Comp Physiol. 84 (1), 127-133 (1986).</li>
<li>Willingham, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Milk+collection+methods+for+mice+and+reeves%27+muntjac+deer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Milk collection methods for mice and reeves' muntjac deer.</a> J Vis Exp. (89), e51007(2014).</li>
<li>Muranishi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+collecting+mouse+milk+without+exogenous+oxytocin+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Method for collecting mouse milk without exogenous oxytocin stimulation.</a> Biotechniques. 60 (1), 47-49 (2016).</li>
<li>Gómez-Gallego, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+to+collect+high+volumes+of+milk+from+mice+%28mus+musculus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Anales+de+Veterinaria+de+Murcia%22%5BJournal%5D)">A method to collect high volumes of milk from mice (mus musculus).</a> Anales de Veterinaria de Murcia. 29, 55-61 (2014).</li>
<li>DePeters, E. J., Hovey, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+collecting+milk+from+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mammary+Gland+Biol+Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Methods for collecting milk from mice.</a> J Mammary Gland Biol Neoplasia. 14 (4), 397-400 (2009).</li>
<li>Oxytocin- oxytocin injection. , 
 <a target="_blank" href="https://dailymed.nlm.nih.gov/dailymed/fda/fdaDrugXsl.cfm?setid=a9b62187-4141-487c-a9da-f42ad7f9b408&type=display">https://dailymed.nlm.nih.gov/dailymed/fda/fdaDrugXsl.cfm?setid=a9b62187-4141-487c-a9da-f42ad7f9b408&type=display</a> (2019).</li>
<li>Lucas, A., Gibbs, J. A., Lyster, R. L., Baum, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creamatocrit%3A+Simple+clinical+technique+for+estimating+fat+concentration+and+energy+value+of+human+milk%5BTitle%5D)+AND+%22Br+Med+J%22%5BJournal%5D)">Creamatocrit: Simple clinical technique for estimating fat concentration and energy value of human milk.</a> Br Med J. 1 (6119), 1018-1020 (1978).</li>
<li>Paul, H. A., Hallam, M. C., Reimer, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Milk+collection+in+the+rat+using+capillary+tubes+and+estimation+of+milk+fat+content+by+creamatocrit%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Milk collection in the rat using capillary tubes and estimation of milk fat content by creamatocrit.</a> J Vis Exp. (106), e53476(2015).</li>
<li>Ernst, O., Zor, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linearization+of+the+Bradford+protein+assay%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Linearization of the Bradford protein assay.</a> J Vis Exp. (38), e1918(1918).</li>
<li>Hueso, D., Fontecha, J., Gomez-Cortes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+of+the+most+commonly+used+methods+for+total+protein+determination+in+milk+of+different+species+and+their+ultrafiltration+products%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Nutr%22%5BJournal%5D)">Comparative study of the most commonly used methods for total protein determination in milk of different species and their ultrafiltration products.</a> Front Nutr. 9, 925565(2022).</li>
<li>Anderson, S. M., Rudolph, M. C., Mcmanaman, J. L., Neville, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Key+stages+in+mammary+gland+development.+Secretory+activation+in+the+mammary+gland%3A+It%27s+not+just+about+milk+protein+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Key stages in mammary gland development. Secretory activation in the mammary gland: It's not just about milk protein synthesis.</a> Breast Cancer Res. 9 (1), 204(2007).</li>
<li>Meier, H., Hoag, W. G., Mcburney, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+characterization+of+inbred-strain+mouse+milk.+I.+Gross+composition+and+amino+acid+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nutr%22%5BJournal%5D)">Chemical characterization of inbred-strain mouse milk. I. Gross composition and amino acid analysis.</a> J Nutr. 85 (3), 305-308 (1965).</li>
<li>Hohlbaum, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Severity+classification+of+repeated+isoflurane+anesthesia+in+c57bl%2F6jrj+mice-assessing+the+degree+of+distress%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Severity classification of repeated isoflurane anesthesia in c57bl/6jrj mice-assessing the degree of distress.</a> PLoS One. 12 (6), e0179588(2017).</li>
<li>Weaver, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+deficiency+rescues+lactation+on+day+1+in+mice+fed+a+high+fat+diet%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Serotonin deficiency rescues lactation on day 1 in mice fed a high fat diet.</a> PLoS One. 11 (9), e0162432(2016).</li>
<li>Statement on resuming breastfeeding after anesthesia. , Committee on Obstetric Anesthesia. 
 <a target="_blank" href="https://www.asahq.org/standards-and-practice-parameters/statement-on-resuming-breastfeeding-after-anesthesia">https://www.asahq.org/standards-and-practice-parameters/statement-on-resuming-breastfeeding-after-anesthesia</a> (2009).</li>
<li>Lee, J. J., Rubin, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+feeding+and+anaesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Anaesthesia%22%5BJournal%5D)">Breast feeding and anaesthesia.</a> Anaesthesia. 48 (7), 616-625 (1993).</li>
<li>Reece-Stremtan, S., Campos, M., Kokajko, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Academy+of+Breastfeeding%2C+M.+Abm+clinical+protocol+%2315%3A+Analgesia+and+anesthesia+for+the+breastfeeding+mother%2C+revised+2017%5BTitle%5D)+AND+%22Breastfeed+Med%22%5BJournal%5D)">Academy of Breastfeeding, M. Abm clinical protocol #15: Analgesia and anesthesia for the breastfeeding mother, revised 2017.</a> Breastfeed Med. 12 (9), 500-506 (2017).</li>
<li>Oosting, A., Verkade, H. J., Kegler, D., Van De Heijning, B. J., Van Der Beek, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+selective+manipulation+of+milk+fatty+acid+composition+in+mice+through+the+maternal+diet+during+lactation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nutr+Sci%22%5BJournal%5D)">Rapid and selective manipulation of milk fatty acid composition in mice through the maternal diet during lactation.</a> J Nutr Sci. 4, e19(2015).</li>
<li>Silverman, J., Stone, D. W., Powers, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lipid+composition+of+milk+from+mice+fed+high+or+low+fat+diets%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">The lipid composition of milk from mice fed high or low fat diets.</a> Lab Animal. 26 (2), 127-131 (1992).</li>
<li>Rodgers, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Practical+aspects+of+milk+collection+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">Practical aspects of milk collection in the rat.</a> Lab Animal. 29 (4), 450-455 (1995).</li>
<li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+high-fat+diet+on+secreted+milk+transcriptome+in+midlactation+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Genomics%22%5BJournal%5D)">Effect of high-fat diet on secreted milk transcriptome in midlactation mice.</a> Physiol Genomics. 49 (12), 747-762 (2017).</li>
<li>Kucia, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-protein+diet+during+gestation+and+lactation+affects+mammary+gland+mrna+abundance%2C+milk+composition+and+pre-weaning+litter+growth+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Animal%22%5BJournal%5D)">High-protein diet during gestation and lactation affects mammary gland mrna abundance, milk composition and pre-weaning litter growth in mice.</a> Animal. 5 (2), 268-277 (2011).</li>
<li>Ragueneau, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+development+in+mice.+Iv%3A+Quantity+and+gross+composition+of+milk+in+five+inbred+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Early development in mice. Iv: Quantity and gross composition of milk in five inbred strains.</a> Physiol Behav. 40 (4), 431-435 (1987).</li>
<li>Falconer, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Milk+production+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Agric+Sci%22%5BJournal%5D)">Milk production in mice.</a> J Agric Sci. 37 (3), 224-235 (1947).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>בקבוקונים קריוגניים 1 מ"ל</td><td>קורנינג</td><td>430658</td><td>מועדף לאיסוף חלב מוקדם</td></tr><tr><td>מזרק 1 מ"ל</td><td>Exel</td><td>26048</td><td></td></tr><tr><td>2 מ"ל צינור איסוף מיקרוצנטריפוגות</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>02-681-344</td><td>מועדף לאיסוף חלב שיא ומאוחר</td></tr><tr><td>18 גרם מחט היפודרמית</td><td>BD PrecisionGlide</td><td>305195</td><td></td></tr><tr><td>27 גרם מחט היפודרמית</td><td>BD </td><td></td> מגבון הכנה לאלכוהול PrecisionGlide 305109 <td></td></tr><tr><td></td><td>Honeywell</td><td>154818</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Rad תרכיז מגיב צבע Bio-Ra</td><td>5000006</td><td></td><td>d</td></tr><tr><td>סרום בקר אלבומין</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2153</td><td></td></tr><tr><td>Immobilon -P PVDF ממברנה</td><td>אימובילון</td><td>IPVH00010</td><td></td></tr><tr><td>קטמין</td><td>Dechra</td><td>1000001250</td><td>נרכש דרך Veternarian Office&nbsp;</td></tr><tr><td>קלטת תיוג מעבדה</td><td>VWR International</td><td>89097</td><td></td></tr><tr><td>ערכת בדיקת לקטוז</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>MAK487</td><td></td></tr><tr><td>אביזרי פוליפרופילן מיני דוקרניים</td><td>Cole-Parmer Instrument Company</td><td>6365-90</td><td></td></tr><tr><td>דיאטת עכבר</td><td>מעבדת דיאטה</td><td>5015</td><td></td></tr><tr><td>NuPAGE Bis-Tris מיני ג'ל חלבון, 4&ndash; 12%</td><td>Invitrogen</td><td>NP0335BOX</td><td></td></tr><tr><td>Optixcare סיכה לעיניים</td><td>Aventix</td><td>N/A</td><td>נרכש דרך Veternarian Office&nbsp;</td></tr><tr><td>אוקסיטוצין</td><td>בימדה</td><td>1OXY015</td><td>נרכש דרך Veternarian Office&nbsp;</td></tr><tr><td>קצות פיפטה P200</td><td>צינורות PVC של גילסון</td><td>F1733001</td><td></td></tr><tr><td>: 1/8 אינץ' ID</td><td>VWR International</td><td>MFLX07407-75&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>צינורות PVC: 5/32 אינץ' ID</td><td>VWR International</td><td>MFLX07407-77</td><td></td></tr><tr><td>פקק מחיצה</td><td>Chemglass Life Sciences</td><td>CG-3022-91</td><td></td></tr><tr><td>משאבת ואקום</td><td>Drummond Scientific Co.</td><td>P-103635</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Akorn Animal Health</td><td>NDC 59399-110-20</td><td>נרכש דרך Veternarian Office&nbsp;</td></tr></tbody></table>

טכניקה יעילה לאדם יחיד לדגימת חלב מעכברי מעבדה

An Efficient Single-Person Technique for Milk Sampling from Laboratory Mice

באמצעות טכניקה זו, דגמנו בהצלחה מספיק חלב בזמנים שונים במהלך 21 יום הנקה. אנו מחשיבים את יום הלידה ליום 1 לאחר הלידה (PD1), ובעבודה זו דגמנו חלב על PD2 (הנקה מוקדמת) ו-PD10 (שיא הנקה), n = 4 כל אחד. השגנו בנוחות 0.1-0.5 מ"ל חלב מכל סכר (איור 1D). כדי לאמת שיטה זו, מדדנו את ההרכב הגולמי של דגימות החלב הללו והשווינו את ההבדלים בין חלב שנאסף בתחילת ההנקה לשיא ההנקה באמצעות מבחן t של סטודנט.
מצאנו שריכוז הלקטוז בחלב היה בממוצע 12.3 ± 0.6 גרם לליטר ב-PD2 ו-12.0 ±-0.9 גרם לליטר ב-PD10 (טבלה 1). אחוז השומן בחלב היה 26.0 ±-1.0% ו-33.4 ±-2.5% ב-PD2 ו-PD10, בהתאמה. ריכוז השומן היה 174.4 ±-7.1 גרם/ליטר ב-PD2 וגבוה משמעותית, 224.4 ±-17.1 גרם/ליטר ב-PD10 (טבלה 1). תכולת החלבון הממוצעת הייתה 70.1 ±-5.2 גרם/ליטר ב-PD2 ו-75.1 ±-2.6 גרם/ליטר ב-PD10 (טבלה 1). למרות שתכולת חלבון החלב הכוללת לא הייתה שונה בין PD2 ל-PD10, השפע היחסי של חלבון חלב בודד היה שונה. באופן ספציפי, αS1-קזאין וחלבון חומצי מי גבינה היו גבוהים יותר בחלב PD10 מאשר בחלב PD2 (p &lt; 0.05), בעוד ש-β-קזאין (p &lt; 0.05) הראו שכיחות גבוהה יותר ב-PD2 מאשר PD10 (איור 2).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67669/67669fig2.jpg"> 
איור 2: ניתוח חלבון חלב. (A) ניתוח PAGE מוכתם כחול של Coomassie של חלב שנאסף ב-PD2 ו-PD10. זיהוי החלבון נעשה כמתואר קודם לכן14. (B) אותות חלבון בודדים נותחו ב-ImageJ ונורמלו לחלבון הכולל המוכתם. התוצאות בוטאו כממוצע עם קווי שגיאה סטנדרטיים ונקודות נתונים בודדות כנקודות. השכיחות הממוצעת של כל חלבון ב-PD2 ו-PD10 הושוותה באמצעות מבחן Student's t דו-זנבי. *p &lt; 0.05, n = 4. קיצורים: PAGE = אלקטרופורזה של ג'ל פוליאקרילאמיד; PDn = יום לאחר המסירה n. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67669/67669fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td colspan="2"></td>
			<td>ממוצע</td>
			<td>SEM</td>
			<td>ערך p</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">לקטוז (גרם/ליטר)</td>
			<td>PD2</td>
			<td>12.3</td>
			<td>0.6</td>
			<td rowspan="2">0.75</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PD10</td>
			<td>12.0</td>
			<td>0.9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">שומן (גרם/ליטר)</td>
			<td>PD2</td>
			<td>174.4</td>
			<td>7.1</td>
			<td rowspan="2">0.04</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PD10</td>
			<td>224.4</td>
			<td>17.1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">חלבון (גרם/ליטר)</td>
			<td>PD2</td>
			<td>70.1</td>
			<td>5.2</td>
			<td rowspan="2">0.42</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PD10</td>
			<td>75.1</td>
			<td>2.6</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
טבלה 1: הרכב מקרו-נוטריינטים של חלב שנאסף ב-PD2 ו-PD10. התוצאות, שהתבטאו כממוצע וטעות התקן של הממוצע (SEM), נותחו כדי לבחון את ההשפעות של יום ההנקה על הרכב החלב באמצעות מבחן t של סטודנט דו-זנבי, n = 4.

Rodent models have been widely used in biology since the early 20th century to study basic physiology and biochemical mechanisms. In lactation and ...

an-efficient-single-person-technique-for-milk-sampling-from

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

שיטה זו מתארת ​​כיצד לנתח ולהעריך התפתחות תפקוד בלוטת החלב ומן העכברים. בלוטות החלב נכרת מוערכים לתואר הפיתוח באמצעות הר שלם תוך פליטה החלב מוערך באמצעות אוקסיטוצין מבוססי assay myoepithelial התכווצות התא.

הערכת התפתחות בלוטת החלב פונקציה ועל מודלים עכבר

איסוף חלב ממודלים של בעלי חיים מקל על כיווני מחקר שונים: הבנת חסינות פסיבית, זיהוי פתוגנים האחראים להעברה אנכית, ובאמצעות שימוש בעכברים טרנסגניים, אפילו ייצור מסחרי של חלבונים המצויים בחלב אם. כאן אנו מדגימים שיטה פשוטה לאיסוף חלב בעכברים ובאייל המונטג'אק של ריבס.

שיטות איסוף חלב לעכברים וריבס &#39;Muntjac צביים

חלב הוא מקור תזונה עיקרי ליילוד. ניתוח מרכיבי החלב עשוי לספק תובנה לגבי גורמים אימהיים המשפיעים על בריאות הצאצאים. פרוטוקול זה מתאר שיטה ידנית לאיסוף דגימות חלב מהחולדה המניקה, אשר לאחר מכן יכולה לשמש לניתוח נוסף במורד הזרם.

אוסף חלב בעכברוש שימוש נימי צינורות והערכה של שומן חלב תוכן על ידי Creamatocrit

ניזול זרע נדרש הזרע להשתחרר הג'ל הזרע. מחקר זה מספק את נהלי איסוף זרע מן באיברי הרבייה הנקביים שלאחר ההזדווגות, ומדידת זמן ניזול זרע.

אוסף של שלאחר ההזדווגות זרע באיברי הרבייה הנקביים, מדידה של זרע ניזול בעכברים

בלוטת הרוק hypofunction הוא תוצאה תכופים של מחלות אוטואימוניות והקרנות. לשחזור הערכה של תפקוד בלוטת הרוק במודלים של העכבר המחלות האלה היא אתגר טכני. . הנה, מתוארת שיטה פשוטה למדידה מדויקת, לשחזור של ייצור רוק בעכברים.

שיטת המדידה של תפקוד בלוטת הרוק בעכברים

כאן אנו מציגים פרוטוקול דגימה דם הזנב-טיפ לאיסוף הדגימה תכופים בעכברים ערככם. שיטה זו שימושית עבור להערכת דפוסי הפרשת הורמון מחלמן פועמת, יכול להיות מותאם ניתוח גורמים אחרים במחזור.

תכופות לקיחת דמים קצה הזנב בעכברים להערכה של הפרשת הורמון מחלמן פועמת

מחקר זה דוחות דיגום הדם של וריד הזנב בעכברים באמצעות מערכת צינור שאיבת ואקום עם זכוכית מגדלת מוכספת. השיטה שלנו קל לתרגל, ניתן להשתמש עבור לקיחת דמים חוזרים בעכברים.

איסוף ששונה דם מן הוורידים הזנב של עכברים שאינם מרדימים עם מערכת איסוף הדם ואקום, זכוכית מגדלת מוכספת

כאן, אנו מתארים מתן תרופות מונחות מיקרופיפטה (MDA) כשיטה חלופית לאכילה אוראלית המתמרצת את חיית המחקר לבלוע טיפולים בקלות עם מינימום מתח ואי נוחות.

שימוש במתן תרופות מונחות מיקרופיפטה כשיטה חלופית לגבאג' אוראלי במודלים של מכרסמים

כאן, אנו מתארים את המבנה ונהלי ההפעלה, כולל אמצעי בלימה מיקרוביאליים של מתקן ל"עכברי פרא" באמצעות דגימת דם לאימונופנוטיפ כדוגמה.

נהלי הפעלה והכלה ביולוגית של מתקן לעכברי מעבדה עם מיקרוביום טבעי: נוהל אימונופנוטיפ

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לטכניקת איסוף דם אופטימלית בנבדקים עכברים באמצעות ניקור ורידים בפנים באמצעות lancet. אנו משתמשים בטכניקה זו לצד הערכה ציטומטרית של זרימה ציטומטרית כדי לאפיין פנוטיפים תאיים של זנים טרנסגניים, קונגניים ומדווחים. הוא מתאים גם לניתוח ציטוקינים בסרום ולמחקרי סוכרת.

ניקור ורידים בפנים לאיסוף דם עכברים

למד שיטה יעילה לדגימת חלב מעכברי מעבדה באמצעות מכשיר ואקום לשאיבה רציפה. הפרוטוקול מאפשר לאדם אחד לאסוף 0.1–0.5 מ"ל חלב בפחות מעשר דקות, ומפחית אובדן דגימות במחקרי הנקה.

טכניקה יעילה לאדם יחיד לדגימת חלב מעכברי מעבדה

גלה סרטונים נוספים