Name: הלבנה איטרטיבית מרחיבה את הריבוי עם שימוש באוטומציה של צביעה עבור מתקני ליבה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 52 s
Description: למדו את שיטת IBEX להלבנה איטרטיבית המרחיבה ריבוי בתאי עצב. השיטה משתמשת בצביעה אוטומטית ומגברי טיראמיד לשיפור איכות הדמיה והסתברות גבוהה יותר.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IBEX%3A+an+iterative+immunolabeling+and+chemical+bleaching+method+for+high-content+imaging+of+diverse+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protoc%22%5BJournal%5D)">IBEX: an iterative immunolabeling and chemical bleaching method for high-content imaging of diverse tissues.</a> Nature Protoc. 17 (2), 378-401 (2022).</li>
<li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IBEX%3A+A+versatile+multiplex+optical+imaging+approach+for+deep+phenotyping+and+spatial+analysis+of+cells+in+complex+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">IBEX: A versatile multiplex optical imaging approach for deep phenotyping and spatial analysis of cells in complex tissues.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 117 (52), 33455-33465 (2020).</li>
<li>Prichard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+automated+immunohistochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Pathol+Lab+Med%22%5BJournal%5D)">Overview of automated immunohistochemistry.</a> Arch Pathol Lab Med. 138, 1578-1582 (2014).</li>
<li>Stack, E. C., Wang, C., Roman, K. A., Hoyt, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+immunohistochemistry%2C+imaging%2C+and+quantitation%3A+a+review%2C+with+an+assessment+of+Tyramide+signal+amplification%2C+multispectral+imaging+and+multiplex+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Multiplexed immunohistochemistry, imaging, and quantitation: a review, with an assessment of Tyramide signal amplification, multispectral imaging and multiplex analysis.</a> Methods. 70, 46-58 (2014).</li>
<li>Speranza, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+differences+in+immune+dynamics+during+SARS-CoV-2+infection+in+rhesus+macaques%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci+Alliance%22%5BJournal%5D)">Age-related differences in immune dynamics during SARS-CoV-2 infection in rhesus macaques.</a> Life Sci Alliance. 5, 4(2022).</li>
<li>Parra, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procedural+requirements+and+recommendations+for+multiplex+immunofluorescence+tyramide+signal+amplification+assays+to+support+translational+oncology+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Procedural requirements and recommendations for multiplex immunofluorescence tyramide signal amplification assays to support translational oncology studies.</a> Cancers (Basel). 12 (2), 255(2020).</li>
<li>Hoyt, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+immunofluorescence+and+multispectral+imaging%3A+forming+the+Basis+of+a+clinical+test+platform+for+immuno-oncology%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Biosci%22%5BJournal%5D)">Multiplex immunofluorescence and multispectral imaging: forming the Basis of a clinical test platform for immuno-oncology.</a> Front Mol Biosci. 8, 674747(2021).</li>
<li>Bankhead, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((QuPath%3A+Open+source+software+for+digital+pathology+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">QuPath: Open source software for digital pathology image analysis.</a> Sci Rep. 7, 16878(2017).</li>
<li>Feng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+analysis+with+SPIAT+and+spaSim+to+characterize+and+simulate+tissue+microenvironments%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Spatial analysis with SPIAT and spaSim to characterize and simulate tissue microenvironments.</a> Nat Commun. 14, 2697(2023).</li>
<li>Meyer, L., Eling, N., Bodenmiller, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cytoviewer%3A+an+R%2FBioconductor+package+for+interactive+visualization+and+exploration+of+highly+multiplexed+imaging+data%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">cytoviewer: an R/Bioconductor package for interactive visualization and exploration of highly multiplexed imaging data.</a> BMC Bioinformatics. 25, 9(2024).</li>
<li>Windhager, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+end-to-end+workflow+for+multiplexed+image+processing+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">An end-to-end workflow for multiplexed image processing and analysis.</a> Nat Protoc. 18 (11), 3565-3613 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>ערכות TSA של Alexa Reagent לכתמים</td><td>תרמופישר</td><td></td><td>צבעי TSA חלופיים אם מסנני מיקרוסקופ אופל אינם זמינים. אלה כוללים את Alexa Fluor 488 (ערוץ כחול/ירוק), Alexa Fluor 555 או 568 (ערוץ אדום), Alexa Fluor 647 (ערוץ אדום רחוק), Alexa Fluor 750 (קרוב לאינפרא-אדום, אם מצויד במסננים מתאימים).&nbsp;</td></tr><tr><td>נוגדן Arg1</td><td>איתות סלולרי</td><td>93668</td><td>שימש באיור 4 ב-1:100</td></tr><tr><td>להבי חומר </td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td>או דומה, פרופיל גבוה או נמוך תלוי בסוג הרקמה</td></tr><tr><td>נוגדנים CD11b</td><td>אבקאם</td><td>AB133357</td><td>שימש באיור 4 ב-1:2000</td></tr><tr><td>נוגדן CD163</td><td>אבקאם</td><td>ab182422</td><td>שימש באיור 4 ב-1:500</td></tr><tr><td>נוגדנים CD31</td><td>איתות סלולרי</td><td>77699S</td><td>שימש באיור 2 ב-1:100</td></tr><tr><td>נוגדנים CD3e</td><td>דאקו</td><td>A045201-2</td><td>משמש באיור 1 ב-1:100</td></tr><tr><td>צנצנת Tool Coplin</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>01-816-21</td><td>או משהו דומה</td></tr><tr><td>Material Coverslips</td><td>VWR</td><td>v48393-026</td><td>או משהו דומה</td></tr><tr><td>נוגדן CX3CR1</td><td>אבקאם</td><td>AB308613</td><td>בשימוש באיור 4 ב-1:450</td></tr><tr><td>Stain DAPI</td><td>אקויה</td><td>FP1490</td><td></td></tr><tr><td>תוכנה<בר/> פיג'י</td><td></td><td></td><td>משמש למדידת עוצמת האות</td></tr><tr><td>Slide Fisher Superfront Slides</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>22-037-246</td><td>או משהו דומה</td></tr><tr><td>Software HALO</td><td>אינדיקה לאבס</td><td></td><td>דוגמה לתוכנות ניתוח תמונות מסחריות. משמש ליישור וניתוח תמונות.</td></tr><tr><td>נוגדנים Iba1</td><td>איתות סלולרי</td><td>17191</td><td>משמש באיור 4 ב-1:800</td></tr><tr><td>Software inForm</td><td>אקויה</td><td></td><td>משמש למדידת עוצמת האות</td></tr><tr><td>נוגדנים iNOS</td><td>אבקאם</td><td>AB283655</td><td>בשימוש באיור 4 ב-1:400</td></tr><tr><td>Instrument לייקה בונד Rx (או RXm)</td><td>Leica Biosystems</td><td>21.2201</td><td>בטקסט נקרא "אוטוסטיינר 1". ודאו שכל התגובות הנלווות זמינות גם כן, כולל קופסאות צביעה ותמיסות בתפזורת.&nbsp;</td></tr><tr><td>Reagent LiBH4</td><td>סיגמא-אלדריץ'</td><td>62460-5G-F</td><td>להישאר בסביבה ללא מים</td></tr><tr><td>Instrument מנטרה סנאפ</td><td>אקויה</td><td></td><td>נדרש מיקרוסקופ ריח רב-ספקטרלי כדי לזהות את הצבעים. דוגמה למיקרוסקופ שניתן להשתמש בו לזיהוי צבעי אופל.</td></tr><tr><td>Tool Microtome</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td>או משהו דומה עם אביזרים מועדפים כמו מברשות</td></tr><tr><td>תגובת צביעה ערכת Opal IHC 480</td><td>אקויה</td><td>FP1500001KT</td><td>בשימוש באיור 4</td></tr><tr><td>תגובת צביעה ערכת פלקס Opal IHC 6-plex</td><td>אקויה</td><td>NEL821001KT</td><td>520 ו-620 אינם מבהירים, כפי שנעשה שימוש באיורים 1, 2 ו-4</td></tr><tr><td>תגובת כתמים ערכת Opal IHC 780</td><td>אקויה</td><td>FP1501001KT</td><td>בשימוש באיור 4</td></tr><tr><td>תנור Tool </td><td>מיליפור סיגמא</td><td>Z683329</td><td>או משהו דומה, אפשר גם לעשות על אוטוסטיינר</td></tr><tr><td>נוגדן פנסיטוקרטין</td><td>אבקאם</td><td>ab9377</td><td>בשימוש באיור 4 ב-1:50</td></tr><tr><td>Reagent PBS (אופציונלי)</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>AAJ61196AP</td><td></td></tr><tr><td>Instrument PhenoImager</td><td>אקויה</td><td></td><td>דימות שקופית שלמה רב-ספקטרלית עם פירוק ספקטרלי מובנה כלול בתוכנה</td></tr><tr><td>Reagent ProLong Gold Antifade</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>P36961</td><td>או מדיה מימית דומה</td></tr><tr><td>נוגדן ProSP-C n-terminal (ProSPC)</td><td>ביוריאג'נטים של שבעת הגבעות</td><td>WRAB-9337</td><td>שימש באיור 4 ב-1:250</td></tr><tr><td>נוגדנים RAGE</td><td>R& D</td><td>MAB1179</td><td>שימש באיור 1 ו-2 ב-1:50</td></tr><tr><td>בופר תגובה Reagent </td><td>רוש</td><td>NC1895692</td><td>לשימוש עם Ventana Autostainer</td></tr><tr><td>נוגדנים SARS-CoV-2-N</td><td>איתות סלולרי</td><td>68344</td><td>שימש באיור 2 ב-1:1000</td></tr><tr><td>סלייד<בר/> TOMO עם מיקרוסקופ CC הידבק - WH</td><td>אבנטיק</td><td>SKUSL6519-1</td><td>אם היצמדות לרקמה היא דאגה</td></tr><tr><td>Instrument ונטנה דיסקברי אולטרה</td><td>רוש</td><td></td><td>בטקסט מכונה "אוטוסטיינר 2". ודאו שכל התגובות הנלווות זמינות גם כן, כולל קופסאות צביעה ותמיסות בתפזורת.&nbsp;</td></tr><tr><td>בופר שטיפה Reagent </td><td>Leica Biosystems</td><td>AR9590</td><td>לשימוש עם אוטוסטיינר Leica Bond</td></tr><tr><td>ריאגנט<בר/> מים</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>15-230-147</td><td>DI הוא הטוב ביותר, לא מיליפור</td></tr><tr><td>Tool אמבט מים</td><td>Leica Biosystems</td><td>140607020C1</td><td>או משהו דומה</td></tr></tbody></table>

הלבנה איטרטיבית מרחיבה את הריבוי עם שימוש באוטומציה של צביעה עבור מתקני ליבה

Iterative Bleaching Extends Multiplicity with Use of Staining Automation for Core Facilities

Iterative Bleaching Extends Multiplicity (IBEX) is a highly sensitive tyramide signal amplification (TSA)-based multi-round fluorescence imaging technique ...

iterative-bleaching-extends-multiplicity-with-use-staining-automation

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

הרכבות גנום המבוססות על טכנולוגיות ריצוף DNA מקבילי מאסיבי הן בדרך כלל מקוטעות מאוד. פיתוח מפות כרומוזומים פיזיות עשוי לשפר את הרכבות הגנום. כאן, אנו מציגים גישות חדשניות להכנת כרומוזומים, היברידיזציה פלואורסצנטית in situ ודימוי, המגבירות משמעותית את התפוקה של פיתוח המפה הפיזית.

תפוקה גבוהה מיפוי פיזי של הכרומוזומים באמצעות אוטומטי<em&gt; באתרו</em&gt; הכלאה

בכתב יד זה, אנו מציגים פלטפורמת קריוהיסטולוגיה אוטומטית למחצה בעלת תפוקה גבוהה להפקת תמונות מרוכבות מיושרות של מדדי תגובה מרובים ממספר סבבים של הדמיה פלואורסצנטית על חלקים קפואים של רקמות מינרליות.

תפוקה גבוהה, Multi-תמונה Cryohistology של רקמות Mineralized

פרוטוקול מפורט עבור לוח שש-marker immunofluorescence מולטיפלקס אופטימיזציה שבוצעו, באמצעות הוספת גוון לסמלים אוטומטיות עבור תוצאות עקביות יותר זמן הליך קצר יותר. גישה זו ניתן להתאים ישירות על ידי כל מעבדה לחקר חיסונית-אונקולוגיה.

לוח Immunofluorescence מולטיפלקס אוטומטיות חיסונית-אונקולוגיה במחקרים על דגימות רקמה קרצינומה פורמלין-קבוע

נתאר פרוטוקול מקיף ומעשי פלורסצנטיות שחזור לאחר photobleaching ניסויים עם חיים תאים. למרות הפרוטוקול שימש כדי למדוד את הניידות של צהוב הניאון מתויג חלבון p62 במבנים המושרה, כמו aggresome, ניתן להחיל אותה למגוון רחב של מערכות מיקרוסקופ וחלבונים פלורסנט.

קרינה פלואורסצנטית התאוששות לאחר Photobleaching של צהוב הניאון חלבון מתויג p62 במבנים המושרה כמו Aggresome

אנו מתארים שיטת הצביעה מהירה לביצוע הדמיה רב ספקטראלית על רקמות קפואות.

שיטה מהירה לדימות מרובה ספקטרלי של רקמות קפואות

דוח זה מתאר פרוטוקול אוטומטי לבדיקות אימונופלואורסצנטיות מרובות (mIF) על מכתים שקופיות אוטומטי. זה מדגים את יכולת השחזור הגבוהה של פרוטאומיקה מרחבית על צביעות רקמות סטנדרטיות בתפוקה גבוהה ומצלמות פלואורסצנטיות שלמות, שהיא אידיאלית עבור מבחני mIF מותאמים אישית על פני מספר רב של שקופיות רקמה במחקר תרגומי.

מבחני אימונופלואורסצנציה אוטומטיים מרובים בתפוקה גבוהה למחקר תרגומי

השילוב של איטרטיבי-הלבנה-הרחבה-ריבוי (IBEX) ובדיקת תיוג נוקלאוטידים מסחרית (Click-iT EdU) מאפשר זיהוי וסיווג של סוגי תאים מתחלקים בתהליכים דינמיים ביותר בקטעי רקמת עכברים קפואים קבועים. יתר על כן, צינור עיבוד תמונה חדש בקוד פתוח מספק רכישה וניתוח של תמונות בתפוקה גבוהה.

זרימת עבודה של הדמיה וניתוח בתפוקה גבוהה להערכת פנוטיפים של תאי עור ומצבי התפשטות בדגימות רקמה

מאמר זה מתאר פרוטוקול לאימונופלואורסצנציה מרובה המותאם לאפיון הארכיטקטורה התלת מימדית של גרורות צפק.

הדמיה תלת מימדית של רקמה נושאת גידול באמצעות הלבנה איטרטיבית מרחיבה את גישת המולטיפלקסיות

היישום של טכניקת הקרנה פוטו-ארבלית בעלות נמוכה בשיטת IBEX הידנית מאפשר הדמיה אופטימלית של רקמות אנושיות עם אוטופלואורסצנציה טבעית משמעותית. פרוטוקול זה מפרט כיצד להשיג תמונות מרובות ושקופיות שלמות מדגימות קליניות בארכיון באמצעות מיקרוסקופ הפוך, ריאגנטים זמינים באופן נרחב ותוכנת קוד פתוח ליישור ועיבוד תמונה.

זרימת עבודה אופטימלית להלבנה איטרטיבית מרחיבה את ההדמיה המרובה של דגימות קליניות אוטו-פלואורסצנטיות מאוד

הלבנה איטרטיבית ספקטרלית מרחיבה ריבוי (IBEX) מתבססת על טכניקת IBEX הבסיסית על ידי הוספת חסימת הפרין כדי למזער קשירה לא ספציפית ומינוף זיהוי ספקטרלי עם פירוק חישובי כדי לדכא אוטופלואורסצנטיות. גישה זו מאיצה את רכישת התמונה תוך הפחתת מקורות הרקע, ומאפשרת ניתוחים פרוטאומיים מרחביים רב-עגולים ובעלי פרמטרים גבוהים.

הדמיה גבוהה באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית ספקטרלית כדי למזער פלואורסצנטיות רקמות לא ספציפיות

למדו את שיטת IBEX להלבנה איטרטיבית המרחיבה ריבוי בתאי עצב. השיטה משתמשת בצביעה אוטומטית ומגברי טיראמיד לשיפור איכות הדמיה והסתברות גבוהה יותר.

הלבנה איטרטיבית מרחיבה את הריבוי עם שימוש באוטומציה של צביעה עבור מתקני ליבה

גלה סרטונים נוספים