Name: גישה טרנס-לחמית להזרקה לעצב הראייה של החולדה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 2 min 33 s
Description: למדו גישה טרנס-לחמית להזרקה לעצב הראייה של החולדה. שיטה זו מאפשרת הזרקת וירוס AAV-EGFP תחת ויזואליזציה ישירה ומפחיתה פולשנות לטיפול בנוירופיברומטוזיס מסוג 1.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Korn, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+neuroprotective+effects+of+methylprednisolone+and+surgical+decompression+in+a+rodent+model+of+traumatic+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the neuroprotective effects of methylprednisolone and surgical decompression in a rodent model of traumatic optic neuropathy.</a> Curr Eye Res. 47 (3), 461-467 (2022).</li>
<li>Lim, J. Y., Utzschneider, D. A., Sakatani, K., Kocsis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+attenuation+of+GABA+sensitivity+in+the+maturing+myelin-deficient+rat+optic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Dev+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">The attenuation of GABA sensitivity in the maturing myelin-deficient rat optic nerve.</a> Brain Res Dev Brain Res. 72 (1), 15-20 (1993).</li>
<li>Singh, D., Dromel, P. C., Perepelkina, T., Baranov, P., Young, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C6+cell+injection+into+the+optic+nerve+of+long-evans+rats%3A+A+short-term+model+of+optic+pathway+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">C6 cell injection into the optic nerve of long-evans rats: A short-term model of optic pathway gliomas.</a> Cell Transplant. 29, 963689720964383(2020).</li>
<li>Schwaner, S. A., Feola, A. J., Ethier, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+optic+nerve+head+biomechanics+in+a+rat+model+of+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+R+Soc+Interface%22%5BJournal%5D)">Factors affecting optic nerve head biomechanics in a rat model of glaucoma.</a> J R Soc Interface. 17 (165), 20190695(2020).</li>
<li>Ellouze, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+allotopic+expression+of+the+human+mitochondrial+ND4+prevents+blindness+in+a+rat+model+of+mitochondrial+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Optimized allotopic expression of the human mitochondrial ND4 prevents blindness in a rat model of mitochondrial dysfunction.</a> Am J Hum Genet. 83 (3), 373-387 (2008).</li>
<li>Kwon, H., Park, M., Nepali, S., Lew, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia-preconditioned+placenta-derived+mesenchymal+stem+cells+rescue+optic+nerve+axons+via+differential+roles+of+vascular+endothelial+growth+factor+in+an+optic+nerve+compression+animal+model%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Hypoxia-preconditioned placenta-derived mesenchymal stem cells rescue optic nerve axons via differential roles of vascular endothelial growth factor in an optic nerve compression animal model.</a> Mol Neurobiol. 57 (8), 3362-3375 (2020).</li>
<li>Pang, I. H., Clark, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+for+glaucoma+retinopathy+and+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Glaucoma%22%5BJournal%5D)">Rodent models for glaucoma retinopathy and optic neuropathy.</a> J Glaucoma. 16 (5), 483-505 (2007).</li>
<li>Raykova, K., Jones, M. V., Huang, H., Hoffman, P. F., Levy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimally-invasive+Technique+for+Injection+into+Rat+Optic+Nerve%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Minimally-invasive Technique for Injection into Rat Optic Nerve.</a> J Vis Exp. (99), e52249(2015).</li>
<li>Hallas, B. H., Wells, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+technique+for+mulitple+injections+into+the+mamallian+optic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Kopf+Carrier%22%5BJournal%5D)">A novel technique for mulitple injections into the mamallian optic nerve.</a> Kopf Carrier. 54, 1-10 (2000).</li>
<li>Yan, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+optic+nerve+transection+in+rats%3A+A+model+established+with+a+new+operative+approach+to+assess+secondary+degeneration+of+retinal+ganglion+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Partial optic nerve transection in rats: A model established with a new operative approach to assess secondary degeneration of retinal ganglion cells.</a> J Vis Exp. (128), e56272(2017).</li>
<li>Han, I. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biocompatibility+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+retinal+progenitor+cell+grafts+in+immunocompromised+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Biocompatibility of human induced pluripotent stem cell-derived retinal progenitor cell grafts in immunocompromised rats.</a> Cell Transplantation. 31, 1-25 (2022).</li>
<li>Tang, Y., Gutmann, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurofibromatosis+Type+1-associated+optic+pathway+gliomas%3A+Current+challenges+and+future+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Manag+Res%22%5BJournal%5D)">Neurofibromatosis Type 1-associated optic pathway gliomas: Current challenges and future prospects.</a> Cancer Manag Res. 15, 667-681 (2023).</li>
<li>Pan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implantation+of+biomimetic+polydopamine+nanocomposite+scaffold+promotes+optic+nerve+regeneration+through+modulating+inhibitory+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nanobiotechnol%22%5BJournal%5D)">Implantation of biomimetic polydopamine nanocomposite scaffold promotes optic nerve regeneration through modulating inhibitory microenvironment.</a> J Nanobiotechnol. 22 (1), 683(2024).</li>
<li>Gokoffski, K. K., Peng, M., Alas, B., Lam, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuro-protection+and+neuro-regeneration+of+the+optic+nerve%3A+recent+advances+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurol%22%5BJournal%5D)">Neuro-protection and neuro-regeneration of the optic nerve: recent advances and future directions.</a> Curr Opin Neurol. 33 (1), 93-105 (2020).</li>
<li>Negishi, H., Dezawa, M., Oshitari, T., Adachi-Usami, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optic+nerve+regeneration+within+artificial+Schwann+cell+graft+in+the+adult+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">Optic nerve regeneration within artificial Schwann cell graft in the adult rat.</a> Brain Res Bull. 55 (3), 409-419 (2001).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>4',6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride (DAPI)</td><td>MilliporeSigma</td><td>D9542</td><td>1:10,000 דילול, המשמש לצביעה של קריוקטורים</td></tr><tr><td>AAV חלקיקים נגיפיים</td><td>Vectorbuilder</td><td>N/A</td><td>וקטור המשמש להזרקת עצב ראייה</td></tr><tr><td>Aqua-Mount הרכבה בינונית</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14-390-5</td><td>משמש להרכבת קריוסחתים מוכתמים</td></tr><tr><td>סרום בקר אלבומין&nbsp;</td><td>מוצרי מחקר בינלאומיים</td><td>9048-46-8</td><td>משמש בתהליך לצביעה של קריוקטורים</td></tr><tr><td>עזים נגד חולדות Alexa Fluor 488&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11006</td><td>דילול 1:1000, המשמש לצביעה קריוסקציה</td></tr><tr><td>גז איזופלורן</td><td>Primal Healthcare</td><td>66794-017-10</td><td>גז להרדמה</td></tr><tr><td>Leica TCS SPE מערכת מיקרוסקופ קונפוקלי זקוף&nbsp;</td><td>Leica Microsystems</td><td>N/A</td><td>מיקרוסקופ קונפוקלי</td></tr><tr><td>מזרק נעילת לואר</td><td>BD</td><td>מזרק 309628</td><td>להזרקה</td></tr><tr><td>Microm HM505E cryostat&nbsp;</td><td>Microm</td><td>M-HM360 fom Marshall Scientific</td><td>משמש לחיתוך דגימות חולדה</td></tr><tr><td>נגד GFP&nbsp;</td><td>BioLegend</td><td>338002</td><td>דילול של 1:500, המשמש לצביעה של קריוקטורים</td></tr><tr><td>וו חוט השדרה</td><td>FST</td><td>10162-12</td><td>וו המשמש לבידוד עצב הראייה</td></tr><tr><td>מזרק עשרה מיקרוליטר</td> מזרק <td>המילטון</td><td>CAL 803901</td><td>להזרקה</td></tr><tr><td>מחט JBP JBP3308B שלושים ושלוש מחטים</td><td></td><td></td><td>להזרקה</td></tr><tr><td>תרכובת OCT Tissue-Tek&nbsp;</td><td>VWR International</td><td>25608-930</td><td>משמש לעיבוד קריומולד</td></tr><tr><td>מלקחיים עם שיניים</td><td>Bausch ו- Lomb</td><td>E1809</td><td>מלקחיים לאחיזת הלחמית</td></tr><tr><td>Westcott מספריים מעוקלים של טנוטומיה</td><td>Bausch ו- Lomb</td><td>E3323-R</td><td>מספריים ליצירת פריטומיה</td></tr></tbody></table>

גישה טרנס-לחמית להזרקה לעצב הראייה של החולדה

Transconjunctival Approach for Injection into the Rat Optic Nerve

תוצאות ניסוי מייצגות המשתמשות בטכניקה זו להזרקת עצב ראייה לחולדה מוצגות באיור 2. בדוגמה זו, וירוס-eGFP הקשור לאדנו (AAV-eGFP) הוזרק לעצב הראייה של החולדה באמצעות הטכניקה הטרנס-לחמית שתוארה לעיל עם מחט 33 G המחוברת למזרק של 10 מיקרוליטר. תוצאות אלה היו חלק מניסוי המשתמש בטכניקה זו כדי לחקור הזרקת עצב ראייה כחלק מהמטרה הסופית להשתמש ב-AAV כדי לספק תיקון CRISPR לעצבי הראייה במודל חולדה של נוירופיברומטוזיס 1 (NF1). שילוב של צבע וקטור AAV שימש לפיתוח טכניקת ההזרקה. בעלי חיים הוקרבו שבעה ימים לאחר ההזרקה לעצב הראייה. לאחר מכן נותחו העצבים ותויגו בנוגדנים נגד GFP כדי לאפשר הדמיה של עצב הראייה במיקרוסקופיה קונפוקלית כדי לאשר שהחומר חדר בהצלחה למעטפת עצב הראייה ונכנס לעצב הראייה. ההחדרה המוצלחת של חומר לעצב הראייה אושרה על ידי צביעת נוגדנים, והוא נראה ירוק במיקרוסקופיה קונפוקלית, כפי שניתן לראות באיור 2A. במקרים שבהם החדירה דרך מעטפת עצב הראייה לא הייתה מלאה, או שהייתה שטף של חומר ממסלול המחט, נצפה כתמים לאורך קצה מעטפת עצב הראייה ולא בתוך רקמת העצב, כפי שניתן לראות באיור 2C.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68048/68048fig01.jpg"> 
איור 1: רצף השלבים הכירורגיים. (A) הלחמית נתפסת עם מלקחיים עם שיניים, ומספריים של Westcott משמשים ליצירת היקף לימבלי. (B) אחרי שהפאשיה של הטנון נפתחת ומנותחת בצורה בוטה, המסלול נחשף בעזרת מספריים של ווסטקוט. (C) וו חוט השדרה מוחדר ומשמש לבידוד עצב הראייה. (D) אחרי דיסקציה קהה של רקמת המסלול שמעליו, עצב הראייה נחשף באמצעות וו חוט השדרה. (E) מחט 33G משמשת לניקוב מעטפת עצב הראייה ולהזרקת אדנו-וירוס או צבע לעצב הראייה. (F) הגלובוס ממוקם במסלול, והלחמית ממוקמת מחדש מעל אתר הפריטומיה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68048/68048fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68048/68048fig02.jpg"> 
איור 2: תמונה פנורמית קונפוקלית פלואורסצנטית מייצגת של עצב הראייה של חולדה 7 ימים לאחר הזרקה מוצלחת עם AAV-eGFP (ירוק) שבה וקטור התמיר נוירונים ליד הכיאזמה האופטית. (A) גרעיני עצב הראייה מסומנים ב-DAPI (כחול). ONH עם חץ מציין את ראש עצב הראייה או קצה המסלול של העצב, בעוד שקצה הכיאזמה האופטית מסומן כ"כיאזמה". (B) תצלום של עצב ראייה של חולדה ממסלול לכיאזמה משובץ בבלוק קריוסקציה קפוא. העצב מוזרק עם דיו הודי מיד מאחורי המסלול (אתר ההזרקה המסומן בחץ שחור) על מנת לכוון את עצב הראייה. (C) תמונה פלואורסצנטית פנורמית של עצב הראייה של חולדה 7 ימים לאחר הזרקה לא מוצלחת עם AAV-eGFP (ירוק) שבה רוב התרחיף הווקטורי ככל הנראה נפלט ממערכת העצבים, והופך את המעטפת האופטית. גרעיני עצב הראייה מסומנים ב-DAPI (כחול). ONH מציין את ראש עצב הראייה מיד מאחורי הרשתית העצבית ואתר ההזרקה המסומן על ידי חץ לבן. כיאזמה וחץ לבן תוחמים לכיוון הכיאזמה האופטית. פסי קנה מידה = 400 מיקרומטר ב-(A) ו-200 מיקרומטר ב-(C). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68048/68048fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>משתנה</td>
			<td colspan="3">גישה</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>טרנס-לחמית</td>
			<td>מעולה</td>
			<td>לרוחב</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>חתך בעור</td>
			<td>לא</td>
			<td>כן</td>
			<td>כן</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>חתך הלחמית</td>
			<td>כן</td>
			<td>לא</td>
			<td>לא</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>מיקרוסקופ</td>
			<td>כן</td>
			<td>כן</td>
			<td>כן</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>חתך של שריר המסלול העליון</td>
			<td>לא</td>
			<td>כן</td>
			<td>לא</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>תפר מתיחה</td>
			<td>לא</td>
			<td>כן</td>
			<td>כן</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>וו חוט השדרה</td>
			<td>כן</td>
			<td>לא</td>
			<td>לא</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>תפר עור</td>
			<td>לא</td>
			<td>כן</td>
			<td>כן</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
טבלה 1: השוואה לטכניקות שפורסמו בעבר לבידוד עצב הראייה של חולדה למחקר ניסיוני. משתנים, כולל הצורך בחתך בעור, חתך הלחמית, מיקרוסקופ ניתוח, חתך של שריר המסלול העליון, תפר המתיחה, וו חוט השדרה ותפר העור, מושווים באמצעות הגישות הטרנס-לחמית, העליונה והרוחבית.

The rat serves as an important model for studying disorders of the optic nerve, including heritable, traumatic, neoplastic, and autoimmune conditions. ...

transconjunctival-approach-for-injection-into-the-rat-optic-nerve

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

הזרקת Intravitreous היא טכניקה בשימוש נרחב במחקר מדעי חזותיים מחלות עיניים או כיישום ישירה של טיפול מקומי. סרט הווידאו הזה הוכיח פרוטוקול להזרקה intravitreous שימוש במזרק 1ml עם כוס פיפטה. טיפים שימושיים לגבי מניעת דימום מסיבי נזק העדשה מקבלים.

הזרקת Intravitreous להקמת Ocular דגם מחלות

חיתוך רוחב עצב הראייה הוא מודל בשימוש נרחב של פגיעה במערכת העצבים המרכזית מבוגר. מודל זה הוא אידיאלי עבור ביצוע מספר מניפולציות ניסיוני כי היעד של הרשתית גלובלי או ישירות ליעד אוכלוסייה של תאים עצביים נפצעו הגנגליון ברשתית.

שיטות מניפולציות ניסויית, לאחר חיתוך רוחב עצב הראייה של מערכת העצבים המרכזית היונקים

סרטון זה מדגים השראת גלאוקומה בחולדה מורדמת על ידי הזרקת מלח היפרטוני לווריד האפיסקלרלי. המלח נכנס לרשת הטרבקולרית דרך תעלת שלם, גורם לצלקות רקמות, החוסמות את זרימת ההומור המימית ומעלה את הלחץ התוך עיני. הלחץ הגבוה פוגע בתאי גנגליון ברשתית, מה שמוביל לגלאוקומה.

טכניקת הזרקת מי מלח היפרטוניים לגרימת גלאוקומה בחולדות

הזרקה ישירה לעצב הראייה של החולדה שימושית למחקר רגנרטיבי. אנו מדגימים טכניקה זעיר פולשנית להזרקה ישירה לעצב הראייה של חולדה שאינה כרוכה בפתיחת הגולגולת. בשיטה זו, סיבוכים כירורגיים ממוזערים וההחלמה מהירה יותר.

טכניקה זעיר-פולשני להזרקה לתוך עצב העכברוש אופטי

הדו"ח הבא מתאר כיצד לשכפל את מודל המכרסמים של נוירופתיה אופטית איסכמית קדמית לא-עורקית (rNAION), תוך שימוש בפרמטרים המתאימים של צבע, עדשות מגע ולייזר. אנו גם חושפים את השלבים המתאימים להערכת נגע rNAION in vivo.

המודל המכרסם של Nonarteritic Anterior Ischemic Optic נוירופתיה (rNAION)

זריקות תת-רשתית הן הטכניקה הנפוצה ביותר להעברת חומרים טיפוליים גדולים כגון חלבונים ווקטורים נגיפיים לקולטני האור ולאפיתל הפיגמנט ברשתית. שיטה חלופית בעכברים המכוונת בהצלחה לחלל התת-רשתית עם נזק אגבי מינימלי וזמני התאוששות מהירים מתוארת כאן.

שיטת הזרקה אלטרנטיבית והמאומתת עבור גישת שטח subretinal<i&gt; דרך</i&gt; בגישה אחורית Transcleral

פרוטוקול זה נועד להדגים מסלול מתן ורידי הניתן לשחזור שניתן להשתמש בו בחולדות ובעכברים לאורך תקופת היילוד. הליך זה חשוב למחקרי מכרסמים פרה-קליניים המעוניינים לשקף מתן תרופתי ביחידות לטיפול בילודים בעיקר באמצעות מתן תוך ורידי.

מודל מכרסם יילוד של הזרקת ורידים רטרואורביטלית

פרוטוקול זה מתאר טכניקה להזרקה תוך-מצלמה בחולדות באמצעות חתך מרכזי בקרנית ומנהרה ארוכה לתוך החדר הקדמי. שיטת הזרקה זו ממזערת את הסיכון לגרימת נזק לא מכוון לרקמות ובכך משפרת את הדיוק והשחזור.

הזרקה תוך-מצלמה בחולדות עם סיכון נמוך לתופעות לוואי

מאמר זה מתאר שיטות להזרקה תת-רשתית בחולדות, תוך שימוש בהדמיה תוך ניתוחית כדי לשלוט הן באתר ההזרקה והן באזור היפרדות הרשתית.

הדמיה תוך ניתוחית של הזרקה תת-רשתית והיפרדות רשתית בחולדות

מחקר זה מציג מתודולוגיה להעברת טיפולים לרשתית ולעצבי הראייה של החולדה הבוגרת. בנוסף, מוצגת שיטה ייחודית לאחזור רקמות לאיסוף מלמעלה למטה של עצב הראייה והרשתית בחולדה בוגרת.

מתן טיפולי בעיניים ושליפת רקמות מתקדמת בחולדות בוגרות

למדו גישה טרנס-לחמית להזרקה לעצב הראייה של החולדה. שיטה זו מאפשרת הזרקת וירוס AAV-EGFP תחת ויזואליזציה ישירה ומפחיתה פולשנות לטיפול בנוירופיברומטוזיס מסוג 1.

גישה טרנס-לחמית להזרקה לעצב הראייה של החולדה

גלה סרטונים נוספים