גישה טרנס-לחמית להזרקה לעצב הראייה של החולדה

פרוטוקול זה מתאר טכניקה ייחודית המשתמשת בגישה טרנס-לחמית לגישה לעצב הראייה של החולדה לצורך זריקות.

מחקר זה נועד לפתח שיטות יעילות יותר למתן טיפול לעצב הראייה בחולים עם נוירופיברומטוזיס מסוג 1. הפרוטוקול שלנו מתמקד בחקר טכניקות טובות יותר לגישה לעצב הראייה של החולדה למחקר ניסיוני. פרוטוקול זה מציע את היתרון של היותו זעיר פולשני, ומבטל את הצורך בחתך עורי.

[מדגים] כדי להתחיל, אחוז בלחמית ברביע התחתון-טמפורלי באמצעות מלקחיים עם שיניים. השתמש במספריים של Westcott כדי ליצור חתך לחמית רדיאלי, ולאחר מכן פתח את הגידים פאשיה ברביע האינפרונזלי. השתמש בדיסקציה קהה כדי להסיר רקמת מסלול מעל. סובב את העין דרך האף באמצעות מלקחיים עם שיניים. בקש מהעוזר להכניס וו חוט שדרה לרביע התחתון כדי לבודד את עצב הראייה. בעזרת דיסקציה קהה עם מלקחיים או אפליקטור עם קצה כותנה, הסר את רקמת המסלול הנותרת ואת הגידים כדי לחשוף את עצב הראייה והמעטפת. בעזרת מחט בגודל 33 המחוברת למזרק של 10 מיקרוליטר או 1 מיליליטר, חודרים את מעטפת עצב הראייה. הזרקו ריכוזים משתנים של נגיף EGFP הקשור לאדנו, או צבע דיו הודי לעצב הראייה תחת הדמיה ישירה כדי להבטיח שהחומר מוזרק ישירות לעצב. העריכו מחדש את הלחמית ללימבוס כדי לכסות את מקום החתך. איור זה ממחיש את התוצאות של העברת EGFP מוצלחת ולא מוצלחת של נגיף הקשור לאדנו-לעצב הראייה של החולדה באמצעות טכניקת הזרקה דרך הלחמית. ההזרקה המוצלחת של עצב הראייה הביאה לאות פלואורסצנטי ירוק נרחב בתוך רקמת העצב, מה שמצביע על חדירה יעילה של וקטור ה-EGFP של הנגיף הקשור לאדנו. ההזרקה הלא מוצלחת הראתה אות ירוק רק לאורך הקצה החיצוני של עצב הראייה, מה שמרמז על כך שהחומר דלף ולא נכנס לרקמת העצב.