מודל עכבר ייחודי להערכה כמותית של היווצרות ביופילם על שתלים כירורגיים במורסה תת עורית

מטרת המחקר שלנו היא לפתח טיפול חדשני לזיהומים הקשורים לשתלים. כדי להעריך ביו-חומרים חדשים בעלי תכונות אנטי-מיקרוביאליות פוטנציאליות, אנו מפתחים גישת בדיקה יקרה יותר in vivo. מודלים קודמים של בעלי חיים מוגבלים בדרך כלל לייצור זיהום יחיד הקשור לשתל לכל בעל חיים, מה שיכול להוביל לשונות משמעותית בתוצאות הממוצעות המתקבלות ממספר בעלי חיים.

מודל העכברים שלנו מאפשר השוואה ישירה של שני הטביעות, הנתונים לתנאים זיהומיים זהים בתוך בעל חיים אחד, ובכך מספק הערכה יקרת ערך של הפעילות האנטיבקטריאלית. המתודולוגיה הניסיונית שלנו in vivo תאיץ את המחקר על ביו-חומרים אנטי-מיקרוביאליים פוטנציאליים, ותתרום לפיתוח טיפול חדש לזיהומים הקשורים לשתלים בעתיד. הגישה הניסויית שלנו ניתנת לשכפול עם ציוד סטנדרטי והליכים פשוטים בסביבת מחקר קונבנציונלית, ובכך משפרת את ההבנה של המנגנונים מאחורי הפעילות האנטיבקטריאלית.

כדי להתחיל, מקם את העכבר המורדם על מיטת הניתוח. מלאו מזרק של 10 מיליליטר באוויר סטרילי והצמידו לשקע מחט בגודל 27. כעת, צבטו בעדינות והרימו את בסיס צוואר העכבר כדי ליצור מרווח בין הרקמה התת עורית לפאשיה.

הנח את המחט בקו האמצע בין עצם השכמה של העכבר והזריק שלושה מיליליטר אוויר סטרילי תת עורי ליצירת שקית האוויר. לאחר מכן החזר את העכבר לכלוב שחומם עם כרית תרמית. הזריקו שלושה מיליליטר אוויר סטרילי כל יומיים כדי לשמור על ניפוח החלל וליצור כיס בוגר.

לאחר הרדמת החיה, יש להזריק לה בופיבקאין תת עורית. בצע חתך אורכי של קו אמצע של שלושה מילימטר בחלק העליון של השקית והכנס מחט בגודל 18 המכילה את החוטים המחוברים לתוך השקית דרך החור. דחוף החוצה את החוטים באמצעות מזרק פנימי של מחט עמוד שדרה בגודל 25.

השאר את קצה המחט בגודל 18 בתוך השקית, הסר בעדינות את הגליל הפנימי והזריק תרבית Xen36 באמצעות המזרק בזהירות. הסר את כל המחטים, סגור את העור באמצעות קליפ פצע ואטום עם דבק עור מקומי. לבסוף, החזר את העכבר לכלוב שחומם עם כרית תרמית לניטור.

צביעת קריסטל סגול הראתה היווצרות ביופילם עקבית על שני החוטים ללא הבדלים נצפים. מדידות ספיגה מבדיקת סגול הגביש המומס לא הראו הבדלים מובהקים סטטיסטית בעומס החיידקים בין שני החוטים. ספירת יחידות יוצרות מושבה וניתוח PCR כמותי של 16s RNA ריבוזומלי וגנים LuxA לא הראו הבדלים מובהקים סטטיסטית בעומס החיידקים בין שני החוטים.