March 7th, 2025
מחקר זה פיתח פרוטוקול אופטימלי לבידוד תאים מזנגיאלים של עכברים (MCs) ותרבית תאי ex vivo שלהם. ניתן להעביר תאים אלה מספר פעמים, להקפיא, להחיות ולתרבית מבלי לפגוע בצמיחת התאים או בביטוי החלבון.
אחד המחקרים שלנו מתמקד בליקוי כלייתי הקשור למיאלומה נפוצה. כדי לתמוך במחקר שלנו, פיתחנו וכעת אופטימיזציה של פרוטוקולים לתרבית ראשונית של תאים מזנגיאלים של עכברים. הציוד הדרוש להליכים נגיש בקלות, והשלבים הפרוצדורליים פשוטים.
רכישת תאי מטרה דורשת שבועיים-שלושה בלבד. טכניקה זו מקלה על מחקר הכליות ותומכת במחקרים החוקרים את תפקוד התאים המזנגיאלים במודלים של מחלות, פיתוח טיפולי או מחקר העברת אותות. כדי להתחיל בבידוד של תאים מזנגיאלים של עכברים, או MCs, מהחיה שעברה המתת חסד כהלכה, באמצעות מספריים ופינצטה, הסר באופן אספטי את הכליות מהעכבר והניח אותן בצלחת פטרי.
שטפו את הכליות בתמיסת המלח המאוזנת של ארל, ולאחר מכן השתמשו בפינצטה כדי להסיר בזהירות את רקמת החיבור ואת קפסולת הכליה. חצוי אנכית את הכליה באמצעות אזמל. מוסיפים שלושה עד ארבעה מיליליטר תמיסת קולגנאז I לצלחת הפטרי וטוחנים היטב את הרקמה בעזרת עלי תאים מפלסטיק.
פיפטה את כל הרקמות והתמיסה מצלחת הפטרי לתוך צינור צנטריפוגה של 15 מיליליטר. שטפו את צלחת הפטרי עם מיליליטר עד שניים של תמיסת קולגנאז I כדי להבטיח העברת רקמות מלאה. מניחים את הצינור בשייקר בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס, מנערים במהירות של 120 סיבובים לדקה למשך 30 דקות.
לאחר מכן, הוסף נפח שווה של תמיסת עצירה או אמצעי תרבית אחד לתערובת. פיפטו את התמיסה מצינור הצנטריפוגה והעבירו אותה דרך מסננת תאים של 100 מיקרון. אוספים את המסנן בצינור צנטריפוגה של 50 מיליליטר.
העבירו את המסנן דרך מסננת תאים של 40 מיקרון, תוך שמירה רק על התאים על המסננת. שטפו את המסננת שוב ושוב עם אמצעי תרבית אחד כדי למקסם את איסוף התאים. העבירו את התאים שנאספו מהמסננת לצינור צנטריפוגה חדש של 50 מיליליטר.
צנטריפוגה את המתלה ב-600 גרם למשך חמש דקות בטמפרטורת החדר. לאחר הצנטריפוגה, השעו מחדש את התאים בצלחת תרבית תאים בהתאם לצפיפות התאים הרצויה. מניחים את הכלים בחממת תאים של 37 מעלות צלזיוס עם 95% אוויר ו-5% פחמן דו חמצני.
הוסף מיליליטר עד שניים של PBS לאורך הקצה הפנימי של צלחת התרבות כדי לשטוף את התאים. השתמש בפיפטה כדי להסיר את כל ה- PBS מתחתית המנה, ואז הוסף 10 מיליליטר של אמצעי תרבית אחד לאורך הקצה הפנימי של המנה. ברגע שהתאים מגיעים למפגש של 80%, בדרך כלל תוך שבעה עד 10 ימים, שטפו את התאים פעמיים עם PBS סטרילי.
הוסף תמיסת טריפסין של 0.25% למנה כדי לטריפסין את התאים. מניחים את המנה באינקובטור של 37 מעלות צלזיוס. כאשר רוב התאים מציגים מורפולוגיה מעוגלת ומתנתקים מפני השטח, סיים את הטריפסיניזציה על ידי הוספת נפח שווה של מדיה שתיים.
צנטריפוגה של התאים ב-600 גרם למשך חמש דקות בטמפרטורת החדר, ולאחר מכן השעו אותם במדיה שתיים. ה-MCs שבודדו במחקר זה הראו ביטוי גבוה משמעותית של אלפא-SMA, פיברונקטין ווימנטין. צביעה אימונו-פלואורסצנטית של MCs מטוהרים ומתורבתים שבוצעה לאחר 10 ימים של תרבית במדיה 2 הראתה שיותר מ-95% מהתאים ביטאו גם אלפא-SMA וגם וימנטין.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
מחקר זה מתמקד בפיתוח פרוטוקול מותאם לבידוד ותרבית של תאי מזאנגיום מוריני (MCs), אשר חיוניים למחקר הכליות. השיטה מאפשרת מעברים מרובים, הקפאה והחייאת תאים תוך שמירה על צמיחת התאים וביטויי החלבון.
Efficient isolation and purification of murine glomerular mesangial cells (MCs) directly supports early-stage nephrology research and disease modeling. This optimized protocol accelerates access to high-purity MCs, enabling robust target validation and mechanistic studies in renal pathobiology. The approach reduces cycle time and enhances reproducibility, strengthening predictive confidence for downstream therapeutic discovery.
This protocol positions MC isolation at the interface of early discovery and preclinical research, enabling seamless progression from target validation to lead identification in renal disease programs.