Name: אופטימיזציה של בידוד וטיהור של תאים מזנגיים גלומרולרים של עכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-07T14:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 46 s
Description: למד פרוטוקול מותאם לבידוד וטיפוח תאים מזנגיים גלומרולרים מעכברים לחקר כליות. השיטה מאפשרת מעברים, הקפאה והחייה תוך שמירה על ביטוי חלבונים וצמיחה תקינה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Pollak, M. R., Quaggin, S. E., Hoenig, M. P., Dworkin, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+glomerulus%3A+The+sphere+of+influence%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">The glomerulus: The sphere of influence.</a> Clin J Am Soc Nephrol. 9 (8), 1461-1469 (2014).</li>
<li>Mené, P., Simonson, M. S., Dunn, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+the+mesangial+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Physiology of the mesangial cell.</a> Physiol Rev. 69 (4), 1347-1424 (1989).</li>
<li>Avraham, S., Korin, B., Chung, J. J., Oxburgh, L., Shaw, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mesangial+cell+-+the+glomerular+stromal+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Nephrol%22%5BJournal%5D)">The mesangial cell - the glomerular stromal cell.</a> Nat Rev Nephrol. 17 (12), 855-864 (2021).</li>
<li>Chadban, S. J., Atkins, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerulonephritis%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Glomerulonephritis.</a> Lancet. 365 (9473), 1797-1806 (2005).</li>
<li>Qian, Y., Feldman, E., Pennathur, S., Kretzler, M., Brosius, F. C. 3rd <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+fibrosis+to+sclerosis%3A+Mechanisms+of+glomerulosclerosis+in+diabetic+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">From fibrosis to sclerosis: Mechanisms of glomerulosclerosis in diabetic nephropathy.</a> Diabetes. 57 (6), 1439-1445 (2008).</li>
<li>Zhu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iga+Gut+microbiome+regulates+the+production+of+hypoglycosilated+iga1+via+the+tlr4+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrol+Dial+Transplant%22%5BJournal%5D)">Iga Gut microbiome regulates the production of hypoglycosilated iga1 via the tlr4 signaling pathway.</a> Nephrol Dial Transplant. 39 (10), 1624-1641 (2024).</li>
<li>Kong, L. -L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+murine+models+of+diabetic+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Diabetes+Res%22%5BJournal%5D)">Advances in murine models of diabetic nephropathy.</a> J Diabetes Res. 2013, 797548(2013).</li>
<li>Schiffer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibitory+smads+and+tgf-beta+signaling+in+glomerular+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Inhibitory smads and tgf-beta signaling in glomerular cells.</a> J Am Soc Nephrol. 13 (11), 2657-2666 (2002).</li>
<li>Gyarmati, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sparsentan+improves+glomerular+hemodynamics%2C+cell+functions%2C+and+tissue+repair+in+a+mouse+model+of+FSGS%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Sparsentan improves glomerular hemodynamics, cell functions, and tissue repair in a mouse model of FSGS.</a> JCI Insight. 9 (19), e177775(2024).</li>
<li>Chafin, C. B., Regna, N. L., Hammond, S. E., Reilly, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+urinary+microRNA+alterations+in+NZB%2FW+mice+with+hydroxychloroquine+or+prednisone+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Immunopharmacol%22%5BJournal%5D)">Cellular and urinary microRNA alterations in NZB/W mice with hydroxychloroquine or prednisone treatment.</a> Int Immunopharmacol. 17 (3), 894-906 (2013).</li>
<li>Lucero, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tnf-%CE%B1+plus+il-1%CE%B2+induces+opposite+regulation+of+cx43+hemichannels+and+gap+junctions+in+mesangial+cells+through+a+rhoa%2Frock-dependent+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Tnf-α plus il-1β induces opposite regulation of cx43 hemichannels and gap junctions in mesangial cells through a rhoa/rock-dependent pathway.</a> Int J Mol Sci. 23 (17), (2022).</li>
<li>Schnaper, H. W., Hayashida, T., Hubchak, S. C., Poncelet, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tgf-beta+signal+transduction+and+mesangial+cell+fibrogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Tgf-beta signal transduction and mesangial cell fibrogenesis.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 284 (2), F243-F252 (2003).</li>
<li>Mackay, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+epithelial%2C+mesangial%2C+and+endothelial+cell+lines+from+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Glomerular epithelial, mesangial, and endothelial cell lines from transgenic mice.</a> Kidney Int. 33 (3), 677-684 (1988).</li>
<li>Wilson, H. M., Stewart, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+epithelial+and+mesangial+cell+culture+and+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Glomerular epithelial and mesangial cell culture and characterization.</a> Methods Mol Med. 107, 269-282 (2005).</li>
<li>Menè, P., Stoppacciaro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+propagation+of+glomerular+mesangial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and propagation of glomerular mesangial cells.</a> Methods Mol Biol. 466, 3-17 (2009).</li>
<li>Gilbert, S. F., Migeon, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((D-valine+as+a+selective+agent+for+normal+human+and+rodent+epithelial+cells+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">D-valine as a selective agent for normal human and rodent epithelial cells in culture.</a> Cell. 5 (1), 11-17 (1975).</li>
<li>Kreisberg, J. I., Venkatachalam, M., Troyer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contractile+properties+of+cultured+glomerular+mesangial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Contractile properties of cultured glomerular mesangial cells.</a> Am J Physiol. 249 (4 Pt 2), F457-F463 (1985).</li>
<li>Adam, M., Potter, A. S., Potter, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychrophilic+proteases+dramatically+reduce+single-cell+rna-seq+artifacts%3A+A+molecular+atlas+of+kidney+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Psychrophilic proteases dramatically reduce single-cell rna-seq artifacts: A molecular atlas of kidney development.</a> Development. 144 (19), 3625-3632 (2017).</li>
<li>Sadovnic, M. J., Brand-Elnaggar, J., Bolton, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+chicken+mesangial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nephron%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of chicken mesangial cells.</a> Nephron. 58 (1), 75-84 (1991).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>100 ומיקרו; m מסננת תאים</td><td>Biosharp</td><td>BS-100-CS</td><td></td></tr><tr><td>100 מ"מ צלחת פטרי</td><td>Sorfa</td><td>230301</td><td></td></tr><tr><td>צינור צנטריפוגה 15 מ"ל</td><td>Sorfa</td><td>411000</td><td></td></tr><tr><td>15 מ"מ צלחת תרבית תאים תחתונה זכוכית</td><td>Sorfa</td><td>201200</td><td></td></tr><tr><td>180 kDa Plus סמן חלבון מוכתם</td><td>מראש Vazyme</td><td>MP201-01</td><td></td></tr><tr><td>2 מ"מ L-גלוטמין</td><td>BasalMedia</td><td>S210JV</td><td></td></tr><tr><td>4% פרפורמלדהיד</td><td>Biosharp</td><td>BL539A</td><td></td></tr><tr><td>40 ומיקרו; m מסננת תאים</td><td>Biosharp</td><td>BS-40-XBS</td><td></td></tr><tr><td>50 מ"ל צינור צנטריפוגה</td><td>Sorfa</td><td>41000</td><td></td></tr><tr><td>60 מ"מ צלחת פטרי</td><td>סורפה</td><td>230201</td><td></td></tr><tr><td>75% אלכוהול</td><td>נואלס</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>96 צלחות תרבית תאים באר, טיפול TC</td><td>Servicebio</td><td>CCP-96H</td><td></td></tr><tr><td>אנטיביוטיקה (10 &mu; גרם/מ"ל צפטריאקסון בתוספת 100 &mu; גרם/מ"ל גנטמיצין)</td><td>NCM</td><td>C100C5</td><td></td></tr><tr><td>BCA (חומצה ביצינצ'ונינית) ערכת בדיקת חלבון</td><td>CWBIO</td><td>CW0014S</td><td></td></tr><tr><td>ערכת ספירת תאים-8</td><td>Oriscience</td><td>CB101</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ קונפוקלי</td><td>FV-3000</td><td>אולימפוס</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>סיגמא</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>סיגמא</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>ארל'ס תמיסת מלח מאוזנת (1x EBSS)&nbsp;</td><td>ביוטיים</td><td>&nbsp; C0213</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי (FBS)</td><td>Excell</td><td>FSP500</td><td></td></tr><tr><td>מנתח תאים פלואורסצנטיים</td><td>Mira FL&nbsp;</td><td>Countstar</td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount media</td><td>Southern Biotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>אינסולין, טרנספרין, תמיסת סלניום 100x (ITS -G)</td> <td>Gibco</td><td>41400045</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ פלואורסצנטי הפוך</td><td>אולימפוס</td><td>IX83</td><td></td></tr><tr><td>מאגר ליזה</td><td>Adilab</td><td>PP1101</td><td></td></tr><tr><td>ערכת הכנת PAGE בשלב אחד (10%)</td><td>Oriscience</td><td>PB102</td><td></td></tr><tr><td>ערכת הכנת PAGE בשלב אחד (7.5%)</td><td>Oriscience</td><td>PB101</td><td></td></tr><tr><td>PE נגד עכבר CD140b נוגדן</td><td>Biolegend</td><td>323605</td><td></td></tr><tr><td>פוספט חוצץ מלח (PBS)</td><td>Servicebio</td><td>G4202</td><td></td></tr><tr><td>עלי תאי פלסטיק</td><td>Biofil</td><td>&nbsp; CC-4090</td><td></td></tr><tr><td>מעכב פרוטאינאז קוקטייל</td><td>רוש</td><td>4693159001</td><td></td></tr><tr><td>PVDF ממברנה</td><td>Vazyme</td><td>E802-01</td><td></td></tr><tr><td>אינסולין אנושי רקומביננטי</td><td>Solarbio</td><td>11061-68-0</td><td></td></tr><tr><td>מכון רוזוול פארק ממוריאל (RPMI) 1640</td><td>קורנינג</td> בינוני <td>10-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>SDS-PAGE מאגר טעינת דגימה (5x)</td> <td>Servicebio</td><td>G2013</td><td></td></tr><tr><td>מכון הזיכרון רוזוול פארק (RPMI) 1640 בינוני בהתאמה אישית (D-valine במקום L-valine)</td><td>Procell</td><td>WH3923U222</td><td></td></tr><tr><td>TBS (Tris Buffered Saline)&nbsp;</td><td>Servicebio</td><td>G0001-2L</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Biosharp</td><td>BS084</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0.25%)</td><td>Gibco</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Biosharp</td><td>BS100</td><td></td></tr><tr><td>סוג I קולגנאז</td><td>Solarbio</td><td>&nbsp; סי.בי.140</td><td></td></tr></tbody></table>

אופטימיזציה של בידוד וטיהור של תאים מזנגיים גלומרולרים של עכברים

Optimizing Isolation and Purification of Murine Glomerular Mesangial Cells

מחקר זה פיתח פרוטוקול אופטימלי לבידוד MCs של עכברים ותרבית תאים ex vivo. למיטב ידיעתנו, לא קיימת שיטה סטנדרטית לאימות MCs ראשוניים ex vivo. על פי פרסומים קודמים, MCs מאופיינים בביטוי של αSMA, וימנטין ופיברונקטין 3,14,15. ניתוח כתמים מערביים שימש לאיתור רמות הביטוי של MCs. ה-MCs שבודדו במחקר זה הראו ביטוי גבוה משמעותית של αSMA, פיברונקטין ווימנטין (איור 4A). התמונה המלאה של הכתם המע...

Mesangial cells (MCs) are stromal cells located in the middle space of the glomerulus, with pivotal functions in glomerular homeostasis. Methods for ...

optimizing-isolation-purification-murine-glomerular-mesangial

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

בדו"ח זה אנו מתארים שיטה לבידוד והתרבות של נישה הקדמון התא הכליות עכבר עובריים שניתן להשתמש בהם כדי ללמוד מסלולי איתות ויסות גזע / ובתאים של הכליה המתפתחת. אלו תאים בתרבית נגישים מאוד מולקולה קטנה וטיפול חלבון רקומביננטי, והוא חשוב גם התמרה ויראלית, המאפשרת מניפולציה יעילה של המסלולים מועמד.

בידוד והתרבות של תאים מאזור nephrogenic של הכליה עכבר עובריים

סרטון זה מתאר את השיטה לבידוד גלומרולי שלם מכליות עכבר. הגלומרולי העטוף והמכוסה המתקבל כך יכול לשמש גם לטיפוח גידולי תאי אפיתל קודקודיים מהכליה המורין.

בידוד גלומרולי: טכניקה להשגת גלומרולי שלם מכליה מורין

בסרטון זה, אנו מדגימים את השלבים לבידוד וטיהור תאי אפיתל צינוריים של הכליה עבור מגוון רחב של מחקרים בביולוגיה מולקולרית ובתרביות תאים.

בידוד תאי כליות מורין: טכניקה לבודד וליצור תרבית ראשונית של תאי אפיתל צינורית הכליה

טכניקות אמינות ויעילות לבידוד תאי חיסון כליות נחוצות ליישומים במורד הזרם. זה דורש תיוג נוגדנים על פני השטח של מספר קטן של תאי חיסון כליות. כאן אנו מתארים שיטה תמציתית לבידוד תאי חיסון בכליות שלכאורה משיגה מטרה זו.

הפקת יעילות אמינה גבוהה של תאים מכליות חיסון

פרוטוקול עבור בידודו של ראשי מיקרוגלייה מן המוח מאתר מוצג. טכניקה זו מסייעת בהבנה הנוכחי של מחלות נוירולוגיות. צנטריפוגה הדרגתיות צפיפות הפרדה מגנטית משולבים כדי לייצר תשואה מספקת של מדגם מאוד טהור. יתר על כן, אנו חלוקה לרמות את השלבים עבור אפיון מיקרוגלייה.

אפיון ובידוד של העכבר מיקרוגלייה העיקרי על ידי צנטריפוגה הדרגתיות צפיפות

המוקד העיקרי של פרוטוקול זה הוא לבודד ביעילות glomeruli העיקרי קיימא תרבויות עם מזהמים מינימלית לשימוש במגוון רחב של יישומים במורד הזרם. Glomeruli מבודד שומרים על קשרים מבניים בין סוגי תאים רכיב וניתן בתרבית שמחוץ לזמן קצר.

דרך יעילה Sieving כדי לבודד Glomeruli ללא פגע מן החולדה למבוגרים כליות

כאן אנו מציגים עבור מאתר ויוו תיוג של חלבונים פני שטח התא glomerular עם ביוטין פרוטוקול. פרוטוקול זה מכיל מידע על אופן perfuse העכבר הכליות, לבודד glomeruli, ולבצע immunoprecipitation אנדוגני של החלבון עניין.

בידוד של Glomeruli, In Vivo תיוג של חלבונים פני שטח התא Glomerular

על מנת לבודד ולטהר את קרום הלב למחקרים בסיסיים ולחקור את הפוטנציאל הטיפולי של הביולוגיה שלהם.

בידוד וטיהור של קרום הלב של מורלין

מאמר זה מתאר שיטה עבור culturing וניתוח החוצה הקודקוד הקודקודית תא האפיתל של פקולי כדורית מבודדים מכליה העכבר. שיטה זו יכולה לשמש לחקר מסלולים המעורבים התפשטות התא הקודקודית והגירה.

בלתי מימדית כמו לשעבר שיטת Vivo לנתח מסלולים מעורב הקודקוד הקודקודית התא ההפעלה

המאמר מתאר את השיטה לבידוד תאי אנדותל גלומרולריים מותנים מכליות של עכברים מהונדסים המבטאים את נגיף סימיאן התרמולבילי 40 ואת המיטוכונדריה הניתנת להפעלה פוטו-אקטיבית, PhAMנכרת. אנו מתארים את ההליך לבידוד גלומרולי מכליות שלמות באמצעות חרוזים, שלבי עיכול, זריעה וגידול של GECs-CD31 חיובי.

בידוד של תאי אנדותל גלומרולריים של עכברים מותנים עם מיטוכונדריה פלואורסצנטית

למד פרוטוקול מותאם לבידוד וטיפוח תאים מזנגיים גלומרולרים מעכברים לחקר כליות. השיטה מאפשרת מעברים, הקפאה והחייה תוך שמירה על ביטוי חלבונים וצמיחה תקינה.

אופטימיזציה של בידוד וטיהור של תאים מזנגיים גלומרולרים של עכברים

גלה סרטונים נוספים