Name: פרוטוקול מעודכן להרכבה ושימוש במערך המיני-ביו-ריאקטור (MBRA) (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-05T14:10:00.000+00:00
Duration: 9 min 38 s
Description: חקור דינמיקה של קהילות מיקרוביות באמצעות מערך המיני-ביו-ריאקטור (MBRA). שיטה זו מאפשרת ניסויים בקנה מידה גדול תוך שמירה על שכפוליות גבוהה של התנהגות מיקרוביאלית מורכבת.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Gilbert, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+understanding+of+the+human+microbiome%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Current understanding of the human microbiome.</a> Nat Med. 24 (4), 392-400 (2018).</li>
<li>Sarkar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perspective%3A+simple+state+communities+to+study+microbial+interactions%3A+examples+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Perspective: simple state communities to study microbial interactions: examples and future directions.</a> Front Microbiol. 13, 801864(2022).</li>
<li>Van de Wiele, T., Van den Abbeele, P., Ossieur, W., Possemiers, S., Marzorati, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVan+de+Wiele%2C+T+%22The+impact+of+food+bioactives+on+health%3A+in+vitro+and+ex+vivo+models%22">The impact of food bioactives on health: in vitro and ex vivo models</a>. , Springer. Cham. (2015).</li>
<li>McDonald, J. A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+microbial+community+reproducibility%2C+stability+and+composition+in+a+human+distal+gut+chemostat+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microbiol+Methods%22%5BJournal%5D)">Evaluation of microbial community reproducibility, stability and composition in a human distal gut chemostat model.</a> J Microbiol Methods. 95 (2), 167-174 (2013).</li>
<li>Feria-Gervasio, D., Denis, S., Alric, M., Brugère, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+maintenance+of+a+human+proximal+colon+microbiota+using+the+continuous+fermentation+system+P-ECSIM%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Microbiol+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">In vitro maintenance of a human proximal colon microbiota using the continuous fermentation system P-ECSIM.</a> Appl Microbiol Biotechnol. 91 (5), 1425-1433 (2011).</li>
<li>Auchtung, J. M., Robinson, C. D., Farrell, K., Britton, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MiniBioReactor+arrays+%28MBRAs%29+as+a+tool+for+studying+C.+difficile+physiology+in+the+presence+of+a+complex+community%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">MiniBioReactor arrays (MBRAs) as a tool for studying C. difficile physiology in the presence of a complex community.</a> Methods Mol Biol. 1476, 235-258 (2016).</li>
<li>Robinson, C. D., Auchtung, J. M., Collins, J., Britton, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemic+Clostridium+difficile+strains+demonstrate+increased+competitive+fitness+compared+to+nonepidemic+isolates%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Epidemic Clostridium difficile strains demonstrate increased competitive fitness compared to nonepidemic isolates.</a> Infect Immun. 82 (7), 2815-2825 (2014).</li>
<li>Auchtung, J. M., Robinson, C. D., Britton, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cultivation+of+stable%2C+reproducible+microbial+communities+from+different+fecal+donors+using+minibioreactor+arrays+%28MBRAs%29%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiome%22%5BJournal%5D)">Cultivation of stable, reproducible microbial communities from different fecal donors using minibioreactor arrays (MBRAs).</a> Microbiome. 3 (1), 42(2015).</li>
<li>Auchtung, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+simplified+microbial+communities+that+inhibit+Clostridioides+difficile+infection+through+dilution%2Fextinction%5BTitle%5D)+AND+%22mSphere%22%5BJournal%5D)">Identification of simplified microbial communities that inhibit Clostridioides difficile infection through dilution/extinction.</a> mSphere. 5 (4), e00387-e00320 (2020).</li>
<li>Hobson, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MiniBioReactor+array+%28MBRA%29+in+vitro+gut+model%3A+A+reliable+system+to+study+microbiota-dependent+response+to+antibiotic+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22JAC+Antimicrob+Resist%22%5BJournal%5D)">MiniBioReactor array (MBRA) in vitro gut model: A reliable system to study microbiota-dependent response to antibiotic treatment.</a> JAC Antimicrob Resist. 4 (4), dlac077(2022).</li>
<li>Auchtung, T. A., Lerma, A. I., Schuchart, K., Auchtung, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+effects+of+antibiotics+across+preclinical+models+of+the+human+gastrointestinal+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiologyopen%22%5BJournal%5D)">Evaluating effects of antibiotics across preclinical models of the human gastrointestinal microbiota.</a> Microbiologyopen. 14 (4), e70030(2025).</li>
<li>Naimi, S., Viennois, E., Gewirtz, A. T., Chassaing, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+impact+of+commonly+used+dietary+emulsifiers+on+human+gut+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiome%22%5BJournal%5D)">Direct impact of commonly used dietary emulsifiers on human gut microbiota.</a> Microbiome. 9 (1), 66(2021).</li>
<li>Bolyen, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((interactive%2C+scalable+and+extensible+microbiome+data+science+using+QIIME+2%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">interactive, scalable and extensible microbiome data science using QIIME 2.</a> Nat Biotechnol. 37 (8), 852-857 (2019).</li>
<li>Hobson, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microbiota-dependent+response+to+anticancer+treatment+in+an+in+vitro+human+microbiota+model%3A+a+pilot+study+with+hydroxycarbamide+and+daunorubicin%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Infect+Microbiol%22%5BJournal%5D)">A microbiota-dependent response to anticancer treatment in an in vitro human microbiota model: a pilot study with hydroxycarbamide and daunorubicin.</a> Front Cell Infect Microbiol. 12, 886447(2022).</li>
<li>Jensen, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+fiber+monosaccharide+content+alters+gut+microbiome+composition+and+fermentation%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Dietary fiber monosaccharide content alters gut microbiome composition and fermentation.</a> Appl Environ Microbiol. 90 (8), e00964-e01024 (2024).</li>
<li>Ghimire, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+synergistic+effects+of+quercetin+and+rice+bran+on+human+gut+microbiota+reduces+Enterobacteriaceae+family+abundance+and+elevates+propionate+in+a+bioreactor+model%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Positive synergistic effects of quercetin and rice bran on human gut microbiota reduces Enterobacteriaceae family abundance and elevates propionate in a bioreactor model.</a> Front Microbiol. 12, 751225(2021).</li>
<li>Hu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minibioreactor+arrays+to+model+microbiome+response+to+alcohol+and+tryptophan+in+the+context+of+alcohol-associated+liver+disease%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Biofilms+Microbiomes%22%5BJournal%5D)">Minibioreactor arrays to model microbiome response to alcohol and tryptophan in the context of alcohol-associated liver disease.</a> NPJ Biofilms Microbiomes. 10 (1), 132(2024).</li>
<li>Jens, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MBRA-2%3A+A+modified+chemostat+system+to+culture+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Spectr%22%5BJournal%5D)">MBRA-2: A modified chemostat system to culture biofilms.</a> Microbiol Spectr. 11 (1), e02928-e03022 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>&nbsp; מדריך V-Tap, גדלים סטנדרטיים 0-80 עד 5/8 אינץ'</td><td>כלי ביג גטור</td><td>STD500NP&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>0.22 &mu; מסנן מזרק M</td><td>פישר</td><td>SLGVR33RS</td><td></td></tr><tr><td>כונן ערבוב 2mag MIXdrive 60 (כונן בלבד)</td><td>2MAG</td><td>מ.פ 41060</td><td></td></tr><tr><td>מחטים היפודרמיות Air-tite, 22 גרם x3 אינץ'</td><td>VWR</td><td>89219-274</td><td></td></tr><tr><td>BD 1mL קצה החלקה מזרקים סטריליים סטריליים</td><td>פישר</td><td>14-823-434</td><td></td></tr><tr><td>ביו-ריאקטור</td><td>מעבדות פרוטו</td><td>נה</td><td>מודפס בתלת מימד מתוך DMS Somos Watershed Plastic. ראה קובץ משלים 1 לתבנית</td></tr><tr><td>מחזיקי ביו-ריאקטור</td><td>מעבדות פרוטו</td><td>נה</td><td>הדפסת תלת מימד מתוך PA 12 Black. ראה קובץ משלים 2 לתבנית.</td></tr><tr><td>פקק בקבוק ממס מסדרת Q של Diba, GL38/38-430 (זכוכית), 2 יציאות UNF(F) ללא שסתומים, כחול</td><td>קול פארמר</td><td>EW-21942-86</td><td></td></tr><tr><td>צינורות Diba Omnifit, PTFE, קוטר חיצוני בגודל 1/8 אינץ' (3.2 מ"מ) x קוטר פנימי 1.5 מ"מ</td><td>קול פארמר</td><td>EW-21942-76</td><td></td></tr><tr><td>מתאם Dibafit, 1/4 אינץ'-28 UNF(M) תחתון שטוח עד 3.2 מ"מ פנימי, מבט מהיר</td><td>קול פארמר</td><td>EW-21941-49</td><td></td></tr><tr><td>מפתח ברגים IRWIN 12001ZR #0-1/4 אינץ' ידית T</td><td>אמזון</td><td>B00004YOB0</td><td></td></tr><tr><td>אירווין הנסון פלדת פחמן גבוהה SAE ברז שבר 1/4 אינץ'. 1 יח '</td><td>זורו</td><td>G7695682</td><td></td></tr><tr><td>Loctite כבד חובה אפוקסי סט מהיר 8-נוזל אונקיות בקבוק</td><td>אמזון</td><td>B0044F59N0</td><td></td></tr><tr><td>מחבר נעילת Luer זכר לזכר</td><td>דרווין מיקרופלואידיקס</td><td>DM-MM-LUER-PP&nbsp;</td><td>אלטרנטיבה: Strategic Applications Inc מחבר Luer זכר לזכר - 10/pk - Fisher - NC9876577</td></tr><tr><td>אביזרי מתאם Masterflex, Luer to Luer, ניילון, אוונטור</td><td>VWR</td><td>MFLX45502-56</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex אביזרים, ניילון, ישר, נקבה מתאם דוקרני לצינור, מזהה 1/16 אינץ'</td><td>VWR</td><td>MFLX45502-00</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex אביזרים, ניילון, ישר, נקבה Luer למתאם דוקרני צינור, מזהה 3/32 אינץ'</td><td>VWR</td><td>MFLX45502-02</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex אביזרים, ניילון, ישר, נקבה מתאמי דוקרנים לצינור, 1/8 אינץ'</td><td>VWR</td><td>MFLX45502-04</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex אביזרים, ניילון, ישר, זכר Luer Lock למתאם דוקרני צינור, 1/8</td><td>VWR</td><td>MFLX45505-04</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex אביזרים, ניילון, ישר, זכר Luer x 1/4-28 UNF</td><td>VWR</td><td>MFLX45505-82</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex הולם, פוליפרופילן, מרפק, נקבה Luer לנקבה Luer Adapter</td><td>VWR</td><td>MFLX45508-26</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex Ismatec צינורות משאבה, 2 מצבים, Tygon S3 E-Lab, קוטר פנימי 0.89 מ"מ</td><td>VWR</td><td>MFLX96460-26</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex Ismatec צינורות משאבה, 2 מצבים, Tygon S3 E-Lab, קוטר פנימי 1.14 מ"מ</td><td>VWR</td><td>MFLX96460-30</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex&reg; צינורות העברה, C-Flex, לבן אטום, קוטר פנימי בגודל 1/8 אינץ' × קוטר חיצוני בגודל 1/4 אינץ'; 25 רגל</td><td>VWR</td><td>MFLX06424-67</td><td></td></tr><tr><td>מוהר' s פינצ'קוק לצינורות&nbsp;</td><td>VWR</td><td>470201-374</td><td></td></tr><tr><td>מנקי פגוש גומי ניאופרן ו-frac12; &rdquo; OD x ו-frac14; &rdquo; מזהה x 1/16 אינץ' עובי&nbsp;</td><td>אמזון</td><td>B01A29F1R0</td><td></td></tr><tr><td>מחיצת גומי חותם מדויקת</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>Z553905</td><td></td></tr><tr><td>שפינבר מיקרו מוטות סטיג</td><td>VWR</td><td>58948-375</td><td></td></tr><tr><td>טטרה-תחריט</td><td>חברת R.S. Hughest</td><td>TE-500</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק צינורות</td><td>מעבדות פרוטו</td><td>נה</td><td>הדפסת תלת מימד מתוך PA 12 Black. ראה קובץ משלים 3 לתבנית.</td></tr><tr><td>משאבת מחסנית רב-ערוצית Watson-Marlow 205S</td><td>ווטסון-מרלו</td><td>020.3724.00א</td><td>מוזל, אלטרנטיבה: משאבות פריסטלטיות דיגיטליות Ismatec IPC MFLX7800142 - FISHER - 113-200-014 או משאבה פריסטלטית Masterflex Ismatec IPC, 0.1 עד 11.25 סל"ד, 24 ערוצים, 115/230 VAC, Avantor, VWR, MFLX78006-48-CH</td></tr></tbody></table>

פרוטוקול מעודכן להרכבה ושימוש במערך המיני-ביו-ריאקטור (mbra)

Updated Protocol for the Assembly and Use of the Minibioreactor Array (MBRA)

כדי להקל על צמיחתם של חיידקים אנאירוביים, כמו אלה הנמצאים במערכת העיכול, ניתן להגדיר ולהפעיל את ה-MBRA בתוך תאים אנאירוביים. כדי להדגים את היכולת לגדל קהילות חיידקים מורכבות ישירות מאתרים רלוונטיים בגוף האדם, הוכנה וגדלה דגימת צואה אנושית במערכת זו. כל העבודה בוצעה בתא אנאירובי שהוגדר ל-37 מעלות צלזיוס, ותרביות גודלו במדיה הביוריאקטורית שלנו, BRM37.
תרחיץ צואה הוכן על ידי הפשרת צואה אנושית באופן אנאירובי ולאחר מכן ערבוב עם מי מלח חוצץ פוספט (PBS) לריכוז סופי של 25% משקל/נפח. לאחר אישור הסטריליות, חוסנו תשעה תאי ביו-ריאקטור כל אחד ב-3 מ"ל של אותה תרחיץ צואה. קהילות מיקרוביאליות גודלו בן לילה ללא קלט מדיה או פינוי פסולת, וכתוצאה מכך תרביות אצווה נפרדות במשך תקופה של 16 שעות. לאחר מכן, משאבות ההזנה הופעלו והוגדרו לקצב זרימה של 1.92 מ"ל לשעה. לאחר ארבעה ימים של זרימה רציפה, נאספו דגימות מהביו-ריאקטורים ונותחו להרכב הקהילה המיקרוביאלית באמצעות ריצוף גנים 16S rRNA ואחריו הפחתת רעשים עם Deblur וסיווג טקסונומי עם מסד הנתונים SILVA 138 SSU ב-QIIME 213. בסך הכל זוהו 65 סוגים בכל תשעת החזרים, אך ביו-ריאקטורים נשלטו על ידי 18 סוגים בלבד, שכל אחד מהם מהווה לפחות 2% שכיחות בכל אחד מתשעת החזרות (איור 5). הביוריאקטורים הראו יכולת שחזור גבוהה כך ש-22 מתוך 65 הסוגים זוהו בכל תשעת החזרות, ו-17 סוגים נוספים זוהו לפחות במחצית מהשכפולים. רוב הסוגים שנעדרו מכור אחד לפחות (37 מתוך 43 סוגים) היו מינים נדירים, כל אחד עם שכיחות יחסית של פחות מ-2% בביו-ריאקטורים. לסיכום, תרביות ה-MBRA בזרימה רציפה תמכו בקהילות מיקרוביאליות מורכבות וניתנות לשחזור שמקורן באותה דגימת צואה, גם לאחר תרביות אצווה נפרדות למשך 16 שעות בכל תא ביו-ריאקטור.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68788/68788fig1.jpg"> 
איור 1: מערך המיני-ביו-ריאקטור (MBRA). MMRA מורכב במלואו, כולל תוויות לעץ צינורות קו ההזנה והפסולת, תאי הביוריאקטור ורצועת הביוריאקטור. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68788/68788fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68788/68788fig2.jpg"> 
איור 2: מדריך תחריט PTFE ופריסת יציאת MBRA. (A) תרשים זרימה לעקוב אחר תחריט המדיה ופסולת קשיות PTFE. (B) כל תא ביו-ריאקטור מכיל יציאה לקשית מדיה + לואר זכר מושחל, קש פסולת + לואר זכר מושחל, ומחיצה + לואר זכר מושחל. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68788/68788fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68788/68788fig3.jpg"> 
איור 3: עצי הזנה וקווי פסולת של MBRA. תמונות מייצגות שיש לעקוב אחריהן בהרכבה של (A) עץ קו הזנה ו-(B) עץ קו פסולת. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68788/68788fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68788/68788fig4.jpg"> 
איור 4: פקק בקבוק מדיה ומערכת שכבות פסולת. (A) דוגמה לפקק בקבוק מורכב מסדרת Q המשמש למשיכת מדיה לתוך ה-MBRAs. (ב) תמונה של מערכת איסוף הפסולת המדורגת. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68788/68788fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68788/68788fig5.jpg"> 
איור 5: שפע יחסי של סוגי חיידקים. (A) גרף עמודות מוערם מראה את השפע היחסי של כל הסוגים שמהווים לפחות 2% שפע בכל אחת מהדגימות המוצגות. (B) מדדי גיוון אלפא של OTUs נצפים ומגוון שאנון בין כל תשעת תאי הביוריאקטור. כל תשעת תאי הביוריאקטור חוסנו באותה תרחיץ צואה שהוכן מצואה אנושית. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68788/68788fig5large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
טבלה 1: רכיבי MBRA. תמונות ותיאורים של כל החלקים הבודדים הנדרשים להרכבה מלאה של ה-MBRA, יחד עם הכמות הדרושה לכל רכיב. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68788/Table1.xlsx" target="_blank">אנא לחץ כאן להורדת טבלה זו.</a>
טבלה 2: מדריך לפתרון בעיות. בעיות נפוצות שנתקלו בהן בהפעלת ה-MBRA, יחד עם הסיבות הפוטנציאליות והפתרונות המומלצים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68788/Table2.xlsx" target="_blank">אנא לחץ כאן להורדת טבלה זו.</a>
קובץ משלים 1: Stl file להדפסת תלת מימד של רצועות Minibioreactor Array. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68788/Supplementary%20File%201.stl" target="_blank">אנא לחץ כאן להורדת קובץ זה.</a>
קובץ משלים 2: Stl להדפסת תלת מימד של מחזיקי הביוריאקטורים המשמשים לעיגון הביוריאקטורים ללוחות הערבוב. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68788/Supplementary%20File%202.stl" target="_blank">אנא לחץ כאן להורדת קובץ זה.</a>
קובץ משלים 3.: Stl file להדפסת תלת מימד של מחזיקי הצינורות המשמשים לארגון פסולת C-flex וצינורות הזנה המשתרעים מה-MBRAs. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68788/Supplementary%20File%203.stl" target="_blank">אנא לחץ כאן להורדת קובץ זה.</a>

פרוטוקול מעודכן להרכבה ושימוש במערך המיני-ביו-ריאקטור (MBRA)

The human microbiome comprises diverse and dynamic microbial communities that play essential roles in host health. Understanding these communities and ...

updated-protocol-for-assembly-use-minibioreactor-array

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

מקור: המריך, ג'. ואחרים. פרוטוקול לאופטימיזציה של ייצור חלבונים הטרולוגיים באמצעות טכנולוגיית מיקרוביוריאקטור אוטומטית. J. Vis. Exp. (2017).הסרטון הזה מדגים את השימוש במיקרוביוריאקטור אוטומטי לניטור צמיחת חיידקים והפרשת חלבון פלואורסצנטי בתגובה לפורמולות מדיה משתנות. חיידק מהונדס גנטית המבטא חלבון פלואורסצנטי מהפריש מתרבתים תחת ברירה אנטיביוטית ומחוסן לבארות מגוונות מבחינת תזונה. מדידות אופטיות בזמן אמת של צפיפות תאים ופלואורסצנציה מאפשרות ניתוח השוואתי של ייצור חלבונים בתנאי גדילה שונים.

ניטור צמיחת חיידקים בנוסחאות מדיה נפרדת באמצעות מיקרוביוריאקטור אוטומטי

בפרוטוקול זה מוצג הייצור, ההתקנה והתפעול הבסיסי של ביו-ריאקטור פיקוליטר מיקרופלואידי (PLBR) לניתוח תאים בודדים של מיקרואורגניזמים פרוקריוטיים. מיקרואורגניזמים רלוונטיים מבחינה תעשייתית נותחו כהוכחה עקרונית המאפשרת תובנות לגבי קצב גדילה, מורפולוגיה והטרוגניות פנוטיפית על פני תקופות זמן מסוימות, בקושי אפשרי בשיטות קונבנציונליות.

ביו-ריאקטור מיקרו-נוזלי פיקוליטר לניתוח מיקרוביאלי של תאים בודדים: ייצור, הגדרת מערכת ותפעול

באמצעות ביו-ריאקטור פנאומטי, אנו מדגימים את ההרכבה, התפעול והביצועים של מערכת ביו-ריאקטור חד-פעמית זו לגידול תאי יונקים.

טיפוח של תאי יונקים באמצעות מערכת פניאומטיים Bioreactor יחיד שימוש

תכנון כור חדשני, שנטבע ביו-ריאקטור בצפיפות גבוהה (HDBR), מוצג לגידול ומחקר של קהילות מיקרוביאליות בצפיפות גבוהה. כאן, ה-HDBR מיושם בהצלחה בתצורת פוטו-ביו-ריאקטור (PBR) לחקר חילוף החומרים של חנקן על ידי קהילת אצות מעורבת בצפיפות גבוהה.

Bioreactor רומן לטיפוח צפיפות גבוה של קהילות חיידקים מגוונות

הפיתוח של קהילות חיידקים תלוי בשילוב של גורמים, כולל אדריכלות סביבתית, שפע חבר, תכונות, ואינטראקציות. פרוטוקול זה מתאר סביבה סינתטי, microfabricated למעקב בו זמנית של אלפי קהילות הכלול בארות femtoliter, שבו גורמים מרכזיים כגון גודל נישה כליאה ניתן בקירוב.

העצרת ומעקב אחר פיתוח הקהילה מיקרוביאלית בתוך פלטפורמת מערך Microell

כתב יד זה מתאר גישה כללית לעיצוב בהתאמה אישית של טיפוח מיקרוביאלי מדיה. זה מופעל על-ידי זרימת עבודה איטרטיבי שילוב Kriging ניסיוני microbioreactor ועיצוב טכנולוגיה מבוססת על תפוקת טיפוח מספיקות, אשר נתמך על ידי מעבדת רובוטיקה כדי לשפר את האמינות ואת מהירות בנוזל טיפול מדיה הכנה.

פרוטוקול גנרי עבור אופטימיזציה של ייצור החלבון Heterologous באמצעות טכנולוגיית Microbioreactor אוטומטיות

פרוטוקול מפורט עבור הפעולה בו-זמניות של תרביות תאים מקבילים 48 בתנאים מגוונים במערכת microbioreactor מוצג. תהליך התרבות תאים, קציר וניתוח כייל נוגדנים הבאים מתוארים.

השימוש תפוקה גבוהה אוטומטית Microbioreactor מערכת לייצור של מודל IgG1 בתאים צ'ו

כאן, אנו מציגים הליך מפורט כדי להריץ עיצוב של ניסוי במיקרו-bioreactor חקן אוטומטי ואחריו הקציר התאים וכימות החלבון באמצעות חלבון A עמודה.

מיטוב תהליכים באמצעות תפוקה גבוהה מיקרו-Bioreactors שחקנים בסינית טיפוח תא שחלה אוגר

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להשגת ייצור בקנה מידה גדול של תאים דבקים באמצעות מערכת סגורה לחלוטין המבוססת על מיקרו-נשאים נמסים ברמת GMP. הטיפוח של תאי גזע מזנכימליים אנושיים, תאי HEK293T ותאי ורו אומת ועמד הן בדרישות הכמות והן בקריטריוני האיכות של תעשיית התרפיה התאית והגנטית.

ייצור תאים בקנה מידה גדול המבוסס על מיקרו-נשאים נקבוביים נמסים ברמת GMP (תנאי ייצור נאותים)

פרוטוקול זה מפרט את הרכבת מערכי מיני-ביו-ריאקטור שישמשו לתרבית זרימה רציפה של קהילות צואה מורכבות בתנאים אנאירוביים. אנו דנים גם בשיטות ההרכבה, החיסון והדגימה של הכורים להמשך ניתוח.

מכלול ביו-ריאקטור לתרבית מתמשכת של קהילות צואה מורכבות

מתואר פרוטוקול לייצור מיקרו-נשא-מיקרוביוריאקטור של תאים התלויים בעיגון כטיפולים פוטנציאליים מבוססי תאים. בהתמקדות במקרה שימוש של תסמונת מצוקה נשימתית חריפה, מוצגים תפוקת תאים דומה וביטוי גנים חיובי ביחס לתנאי תהליך מבוססי בקבוקון. פרוטוקול זה ניתן להרחבה לתאים תלויי עיגון אחרים ולסימני יעד.

ייצור מבוסס מיקרוביוריאקטורים של תאי סטרומל מזנכימיים התלויים בעיגון, המוכנים לתסמונת מצוקה נשימתית חריפה

חקור דינמיקה של קהילות מיקרוביות באמצעות מערך המיני-ביו-ריאקטור (MBRA). שיטה זו מאפשרת ניסויים בקנה מידה גדול תוך שמירה על שכפוליות גבוהה של התנהגות מיקרוביאלית מורכבת.

פרוטוקול מעודכן להרכבה ושימוש במערך המיני-ביו-ריאקטור (MBRA)

גלה סרטונים נוספים