Name: מבחן אימונופלואורסצנציה מרובה לצורך הערכה מרחבית של סמני הזדקנות ב-vivo (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-07-24T12:25:00.000+00:00
Duration: 9 min 38 s
Description: למדו שיטת צביעת אימונופלואורסצנציה מרובה לזיהוי תאים מזדקנים בדגימות רקמה אנושיות. פרוטוקול זה מאפשר ניתוח מרחבי וכימות מדויק של סמני הזדקנות במיקרוסקופיה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Gorgoulis, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+senescence%3A+Defining+a+Path+Forward%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cellular senescence: Defining a Path Forward.</a> Cell. 179 (4), 813-827 (2019).</li>
<li>Hernandez-Segura, A., Nehme, J., Demaria, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hallmarks+of+cellular+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Hallmarks of cellular senescence.</a> Trends Cell Biol. 28 (6), 436-453 (2018).</li>
<li>De Souza, N., Zhao, S., Bodenmiller, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+protein+imaging+in+tumour+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Multiplex protein imaging in tumour biology.</a> Nat Rev Cancer. 24 (3), 171-191 (2024).</li>
<li>Teo, Y. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notch+signaling+mediates+secondary+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Notch signaling mediates secondary senescence.</a> Cell Rep. 27 (3), 997-1007 (2019).</li>
<li>Ogrodnik, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+minimal+information+on+cellular+senescence+experimentation+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Guidelines for minimal information on cellular senescence experimentation in vivo.</a> Cell. 187 (16), 4150-4175 (2024).</li>
<li>Sharpless, N. E., Sherr, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forging+a+signature+of+in+vivo+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Forging a signature of in vivo senescence.</a> Nat Rev Cancer. 15 (7), 397-408 (2015).</li>
<li>Schürch, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coordinated+cellular+neighborhoods+orchestrate+antitumoral+immunity+at+the+colorectal+cancer+invasive+front%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Coordinated cellular neighborhoods orchestrate antitumoral immunity at the colorectal cancer invasive front.</a> Cell. 182 (5), 1341-1359.e19 (2020).</li>
<li>Lin, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+multiplexed+immunofluorescence+imaging+of+human+tissues+and+tumors+using+t-CyCIF+and+conventional+optical+microscopes%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Highly multiplexed immunofluorescence imaging of human tissues and tumors using t-CyCIF and conventional optical microscopes.</a> eLife. 7, e31657(2018).</li>
<li>Tomimatsu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+immunofluorescence+cancelling+for+highly+multiplexed+imaging+to+capture+specific+cell+states%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Precise immunofluorescence cancelling for highly multiplexed imaging to capture specific cell states.</a> Nat Commun. 15, 3657(2024).</li>
<li>Kiessling, P., Kuppe, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+multi-omics%3A+novel+tools+to+study+the+complexity+of+cardiovascular+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Med%22%5BJournal%5D)">Spatial multi-omics: novel tools to study the complexity of cardiovascular diseases.</a> Genome Med. 16 (1), 14(2024).</li>
<li>Chaib, S., Tchkonia, T., Kirkland, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+senescence+and+senolytics%3A+the+path+to+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Cellular senescence and senolytics: the path to the clinic.</a> Nat Med. 28, 1556(2022).</li>
<li>Freund, A., Laberge, R. M., Demaria, M., Campisi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lamin+B1+loss+is+a+senescence-associated+biomarker%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Lamin B1 loss is a senescence-associated biomarker.</a> Mol Biol Cell. 23 (11), 2066-2075 (2012).</li>
<li>Eng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+framework+for+multiplex+imaging+optimization+and+reproducible+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">A framework for multiplex imaging optimization and reproducible analysis.</a> Commun Biol. 5 (1), 1-11 (2022).</li>
<li>Wallis, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescence-associated+morphological+profiles+%28SAMPs%29%3A+an+image-based+phenotypic+profiling+method+for+evaluating+inter-+and+intra-model+heterogeneity+of+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+%28Albany+NY%29%22%5BJournal%5D)">Senescence-associated morphological profiles (SAMPs): an image-based phenotypic profiling method for evaluating inter- and intra-model heterogeneity of senescence.</a> Aging (Albany NY). 14, 1-27 (2022).</li>
<li>González-Gualda, E., Baker, A. G., Fruk, L., Muñoz-Espín, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+assessing+cellular+senescence+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">A guide to assessing cellular senescence in vitro and in vivo.</a> FEBS J. 288 (1), 56-80 (2021).</li>
<li>O’Sullivan, E. A., Wallis, R., Mossa, F., Bishop, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+paradox+of+senescent-marker+positive+cancer+cells%3A+challenges+and+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Aging%22%5BJournal%5D)">The paradox of senescent-marker positive cancer cells: challenges and opportunities.</a> NPJ Aging. 10 (1), 1-11 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>30% Hydrogen Peroxide (H2O2)</td><td>Merck</td><td>H1009</td><td></td></tr><tr><td>Antigen unmasking solution 1 (H3300) (ARS1)</td><td>Vector Labs.</td><td>H-3300</td><td>הכן עם 12.5 מ"ל תמיסת הסרת אנטיגן + 237.5 מ"ל ddH2O</td></tr><tr><td>Antigen unmasking solution 2 (ARS2)</td><td>Sigma</td><td>T6066 / E5134</td><td>הכן מלאי 10x (12.9 גרם Trizma base, 3.7 גרם EDTA, 5 מ"ל Tween 20, 995 מ"ל ddH20).&nbsp;</td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td><td>Merck</td><td>A2153</td><td></td></tr><tr><td>Bulk Dewaxing Solution</td><td>Leica</td><td>AR9222</td><td></td></tr><tr><td>Bulk Epitope Retrieval 1 (ER1)</td><td>Leica</td><td>AR9961</td><td></td></tr><tr><td>Bulk&nbsp; Epitope Retrieval (ER2)</td><td>Leica</td><td>AR9640</td><td></td></tr><tr><td>Bulk Wash Solution</td><td>Leica</td><td>AR9590</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Merck</td><td>D3571</td><td></td></tr><tr><td>Doubled distilled water (ddH20)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Merck</td><td>472301</td><td></td></tr><tr><td>Donkey Serum</td><td>Merck</td><td>D9663</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Merck</td><td>E5134</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Merck</td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Merck</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td><td>Merck</td><td>BP399</td><td></td></tr><tr><td>Propyl Gallate</td><td>Merck</td><td>P3130</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Bicarbonate</td><td>Merck</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>Triton X 100</td><td>Merck</td><td>H5141</td><td></td></tr><tr><td>Trizma Base</td><td>Merck</td><td>T6066</td><td></td></tr><tr><td>Tween20</td><td>Merck</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>Other consumables or Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Decloaking chamber</td><td>BioCare</td><td>DC2012</td><td></td></tr><tr><td>Steam strips</td><td>BioCare</td><td>613QC</td><td></td></tr><tr><td>Bond RXm Auto Slide Stainer</td><td>Leica</td><td>HIS2330</td><td>מכונה צביעה אוטומטית של שקפים&nbsp;</td></tr><tr><td>Cell DIVE</td><td>Leica</td><td>29429159</td><td>מכונה מערכת הדמיית פלואורסנטיות מרובת ערוצים&nbsp;</td></tr><tr><td>Click Well slide holders</td><td>Leica</td><td>29463259</td><td>מכונה מחזיק שקפים ללא כיסוי Well&nbsp;</td></tr><tr><td>Antibody List</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD31 (Pecam-1)</td><td>Cell Signalling</td><td>61255</td><td>Clone: 89C2 Fluorophore: AF555 Dilution: 1 in 50</td></tr><tr><td>CD8a</td><td>BioLegend</td><td>372906</td><td>Clone: C8/144B Fluorophore: Alexa 647 Dilution: 1 in 100</td></tr><tr><td>CDKN2A/p16</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-56330 AF647</td><td>Clone: jc8 Fluorophore: Alexa 647 Dilution: 1 in 200</td></tr><tr><td>FOXP3</td><td>BioLegend</td><td>320114</td><td>Clone: 206D Fluorophore: Alexa 647 Dilution: 1 in 50</td></tr><tr><td>Keratin 15</td><td>Abcam</td><td>ab194065</td><td>Clone: EPR1614Y Fluorophore: AF_488 Dilution: 1 in 200</td></tr><tr><td>Ki67</td><td>Abcam</td><td>ab215226</td><td>Clone: EPR3610 Fluorophore: AF555 Dilution: 1 in 50</td></tr><tr><td>Lamin B1</td><td>Abcam</td><td>ab194106</td><td>Clone: EPR8985(B) Fluorophore: AF_488 Dilution: 1 in 100</td></tr><tr><td>PanCK_AE1/AE3</td><td>Thermofisher</td><td>53-9003-82</td><td>Clone: AE1/AE3 Fluorophore: AF_488 Dilution: 1 in 100</td></tr><tr><td>SMA</td><td>R&amp;D systems</td><td>IC1420S</td><td>Clone: 1A4 Fluorophore: Alexa 750 Dilution: 1 in 100</td></tr><tr><td>Vimentin</td><td>Cell Signalling</td><td>69227</td><td>Clone: D21H3 Fluorophore: Alexa 750 Dilution: 1 in 100</td></tr></tbody></table>

מבחן אימונופלואורסצנציה מרובה לצורך הערכה מרחבית של סמני הזדקנות ב-vivo

Multiplexed Immunofluorescence Assay for Spatial Assessment of Senescence Markers in vivo

Multiplexed immunofluorescence (IF) staining represents a step-change in sophistication over traditional IF imaging allowing sequential detection of ...

multiplexed-immunofluorescence-assay-for-spatial-assessment

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

הזדקנות תאית היא הגורם העיקרי בפיתוח של הפתווגיות הקשורות לגיל כרונית. זיהוי של הtherapeutics שתאי היעד מציגים הבטחה להרחבת הזדקנות בריאה. כאן, אנו מציגים את הבקשה הרומן על המסך לזיהוי של senotherapeutics מבוסס על מדידה של פעילות ביולוגית β-גלטוסידאז הקשורים בתאים בודדים.

א-β-גלטוסידאז-מבוסס על הקרנת ההקרנה לזיהוי תרופות הסאותרפיה

אנו מתארים שיטת הצביעה מהירה לביצוע הדמיה רב ספקטראלית על רקמות קפואות.

שיטה מהירה לדימות מרובה ספקטרלי של רקמות קפואות

פרוטוקול זה מתאר שיטה לשילוב הכלאה פלואורסצנטית באתרו (FISH) ואימונוהיסטוכימיה פלואורסצנטית (IHC) באזורי מוח עכבר טריים קפואים וקבועים, במטרה להשיג FISH רב-תוויות ואות IHC פלואורסצנטי. IHC התמקד בחלבונים ציטופלזמיים וחלבונים המחוברים לממברנה.

שילוב של הכלאה פלואורסצנטית באתרו עם אימונוהיסטוכימיה פלואורסצנטית על חלקי מוח טריים של עכברים קפואים או קבועים

כאן אנו מציגים שיטה מבוססת ציטומטריית זרימה להדמיה וכימות של סמנים מרובים הקשורים לסנסנציה בתאים בודדים.

הדמיה סימולטנית וזיהוי מבוסס זרימה-ציטומטריה של סמני סנסנציה פלואורסצנטיים מרובים בתאי סרטן סנסנטיים המושרים על ידי טיפול

פרוטוקול לכימות ציטומטרי פלואורסצנטי, זרימה של תאים סרטניים סנסנטיים המושרים על ידי תרופות כימותרפיות בתרבית תאים או במודלים של גידולי מורין. הליכים אופציונליים כוללים co-immunostaining, קיבוע דגימה כדי להקל על אצווה גדולה או ניתוח נקודת זמן, והעשרה של תאים senescent קיימא על ידי מיון ציטומטרי זרימה.

בדיקה פלואורסצנטית פלואורסצנטית β-גלקטוזידאז הקשורה לזיהוי והעשרה של תאי גידול סנסנטיים על ידי ציטומטריה של זרימה

במאמר זה מתואר פרוטוקול להגברת אות טירמיד ידנית (TSA) מולטיפלקס אימונופלואורסנציה (mIF) בשילוב עם ניתוח תמונה וניתוח מרחבי. ניתן להשתמש בפרוטוקול זה עם מקטעים משובצי פרפין קבועים פורמלין (FFPE) לצביעה של שניים עד שישה אנטיגנים לכל שקופית, בהתאם לסורק השקופיות הזמין במעבדה.

מולטיפלקס אימונופלואורסנציה בשילוב עם ניתוח תמונה מרחבית להערכה קלינית וביולוגית של מיקרו-סביבה של הגידול

דוח זה מתאר פרוטוקול אוטומטי לבדיקות אימונופלואורסצנטיות מרובות (mIF) על מכתים שקופיות אוטומטי. זה מדגים את יכולת השחזור הגבוהה של פרוטאומיקה מרחבית על צביעות רקמות סטנדרטיות בתפוקה גבוהה ומצלמות פלואורסצנטיות שלמות, שהיא אידיאלית עבור מבחני mIF מותאמים אישית על פני מספר רב של שקופיות רקמה במחקר תרגומי.

מבחני אימונופלואורסצנציה אוטומטיים מרובים בתפוקה גבוהה למחקר תרגומי

פרוטוקול זה מציג מיקרוסקופיה קונפוקלית מוחזרת באור לזיהוי אובייקטיבי של פעילות בטא-גלקטוזידאז (SA-β-gal) הקשורה להזדקנות בחלק הווסקולרי סטרומלי שבודד מרקמת שומן אנושית. השיטה תואמת לאימונוציטוכימיה, משלבת בקרות pH להערכה כמותית, ומספקת גם חלופה רגישה ופחות סובייקטיבית לצביעת SA-β-gal המסורתית.

זיהוי הזדקנות באמצעות אור מוחזר בחלק הווסקולרי סטרומלי שומני

ניתוח מיקרוסקופי של γH2AX מוקדים, אשר הטופס הבא זירחון של H2AX ב Ser-139 בתגובה פעמיים גדיל הדנ"א נשבר, הפך להיות כלי רב ערך בביולוגיה קרינה. כאן השתמשנו נוגדנים מונו מפוגל היסטון H3 ב ליזין 4 כסמן epigenetic של euchromatin פעיל לתעתוק, כדי להעריך את הפריסה המרחבית של היווצרות γH2AX קרינה הנגרמת בתוך הגרעין.

הערכת התפלגות מרחבית של γH2AX הבאים בקרינה מייננת

אנו מתארים שיטה ישירה למדידת כוח שרירים, כוח שרירים, התכווצות וקינטיקה עיפנות של שרירי שלד מבודדים...

הערכת Vivo לשעבר של התכווצות, ועיפנות Alternans בשרירי שלד מבודדים

למדו שיטת צביעת אימונופלואורסצנציה מרובה לזיהוי תאים מזדקנים בדגימות רקמה אנושיות. פרוטוקול זה מאפשר ניתוח מרחבי וכימות מדויק של סמני הזדקנות במיקרוסקופיה.

מבחן אימונופלואורסצנציה מרובה לצורך הערכה מרחבית של סמני הזדקנות ב-vivo

גלה סרטונים נוספים