Name: בידוד ניתוח בתאי גזע hematopoietic מן השליה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-06-24T16:25:00.000+00:00
Duration: 14 min 42 s
Description: למדו לבודד ולנתח תאי גזע hematopoietic מהשליה העכברית. שיטות אלו מאפשרות לחקור את התפתחות תאי הדם והנישות המיקרו-סביבתיות הייחודיות בתקופת העוברות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. העובר הסרת לנתיחה השליה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להתחיל, עוברים תחילה יש לבודד סכרים בהריון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעלי חיים מומתים על פי הנהלים שאושרו - במקרה שלנו אנחנו הולכים להשתמש מנה קטלנית של חומר הרדמה isoflurane </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ראשית, לרסס את הבטן עם אתנול לעשות חתך קטן עם זוג מספריים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקרוע את העור בשתי הידיים כדי לחשוף את הבטן וחותכים לפתוח את הצפק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים, להרים את קרני הרחם ולאסוף אותם באמצעות מספריים בכל קצה דיסטלי. מניחים את הקרניים הרחם בצלחת פטרי מלאות PBS ומניחים על קרח. כמו כן, זכרו לשטוף מספר פעמים עם PBS לפני לבודד את השליה. כעת אנו יכולים לבודד את השליה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם שני מלקחיים, להתחיל בזהירות קילוף רקמת רירית הרחם סביב conceptuses העובר. אדם צריך להיזהר לא לנקב או בכל דרך אחרת לגרום נזק מבני העוברים, כמו זה יסבך צעדים לנתיחה שלאחר מכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את conceptuses מבודד בצלחת פטרי חדש עם PBS על הקרח וממשיכים עד שכל conceptuses שוחררו מן רירית הרחם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברה חד conceptus כדי בצלחת פטרי חדש עם PBS תחת מיקרוסקופ עם שני מלקחיים הקליפה decidua מן השליה. הסר כמה שיותר decidua ככל האפשר לתאים decidua יפריע ההשעיה תא בודד ו cytometry הזרימה. תנועה חלקה פילינג מתמשך מומלץ כדי להשיג את התוצאות הטובות ביותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את שק החלמון מן השליה בצומת בין שני איברים ומשוך בעדינות את שק החלמון וכלי vitelline מן השליה. יש להקפיד לא לשבש את הצלחת כוריוני של השליה, במיוחד עם עוברי מוקדם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות מחזיק את צלחת כוריוני של השליה עם זוג אחד מלקחיים וחבל הטבור עם אחר, למשוך את חבל הטבור עובר המצורפת מן השליה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את תא עודף רקמה ענק בשולי השליה כדי למזער תא clumping במהלך הכנת ההשעיה תא בודד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אסוף את השליה במיכל מתאים, כגון צינור פלקון 15 מ&quot;ל, עם PBS 5% FCS ועל קרח. האם זה עבור כל השליות גזור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב זה, אתה יכול להמשיך עם הכנת מתלה יחיד תא עבור cytometry זרימה, מבחני פונקציונליים, כגון במבחנה תרבות או השתלה, או להכין השליה שלמה קיבעון רקמות לחסום קפוא קבוע הטבעה עבור אימונוהיסטוכימיה בסופו של דבר. </li></ol> 2. הכנת ההשעיה תא בודד של רקמות השליה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אנו כעת להראות לך איך ליצור השעיה תא יחיד מן השליה לניתוח FACS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להכין ההשעיה תא יחיד מן השליה, מכני דיסוציאציה האנזימטית נדרשת. ראשית להכין פתרון collagenase 0.1% ב-PBS עם FCS 10% ו 1% פתרון פניצילין / סטרפטומיצין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת נפח מתאים של תמיסת collagenase את השליות, תלוי כמה יש לך. נפח זה פעמיים את נפח השליה בין 5 מ&quot;ל-2 מומלץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במחט 16-G מצויד על מזרק 5 מ&quot;ל ל מכנית לשבש את רקמת ידי passaging הפתרון collagenase ואת השליה באמצעות מחט 3 פעמים. חזור עם מחט 18-G. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הדוגמה 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 באינקובטור במשך 45 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר דגירה 45 דקה, collagenase פתרון מעבר התא באמצעות מחט 20-G, ואת דגירה של 45 דקות נוספות, ב 37 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר דגירה hr 1.5 הכולל, collagenase פתרון מעבר לתא באמצעות 22-G ו-G 25 מחטים 3 פעמים עם מחט אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סינון דרך פילטר מדגם 50-מיקרומטר מחוברת צינורית חדש פלקון 15 מ&quot;ל, לשטוף עם PBS FCS 5% ו צנטריפוגות ב 4 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות ב 300 × ז </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב זה, יש לנו ההשעיה תא בודד מתאים לניתוח FACS או מבחני תפקודית. </li></ol> 3. רקמות קיבוע עבור סעיפים קפוא <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיד לאחר לבודד את השליה מעובר אחד, הם ממוקמים קר 1X PBS. בדרך כלל צלחת 96, עובד הכי טוב עבור השליות צעירים (E8.5-11.5), אך עם השליות מבוגרים, E12.5 ומעלה, צלחת 24 גם עשוי להיות יותר נוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השליה כל מועבר לתוך חדש מלא היטב עם paraformaldahyde 4% טרי או מופשר PFA. עבור E12.5 שליה, הרקמה מועברת היטב חדשה ביד, אבל עבור E10.5 תוכל להסיר את PBS בזהירות עם טפטפת ולהוסיף את PFA. חשוב השליה הוא שקוע לגמרי בשעה 4 מעלות צלזיוס במשך 2-4 שעות, בהתאם לגיל וגודל הרקמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת רקמה לתוך סוכרוז 30%, או אם הרקמות קטנים מאוד שביר, לשאוב PFA ולהוסיף את סוכרוז ישירות. בשלב זה, השליות יהיה צף פתרון. בואו הרקמות ללון בבית 4 ° C.</li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר השלב לילה סוכרוז 30%, רקמות צריך בסופו של דבר לשקוע לתחתית הבאר, מעיד על cryopreservation הנכון. הסר מחצית הפתרון סוכרוז להחליף את נפח עם אוקטובר והמקום רקמות בחזרה 4 מעלות צלזיוס במשך 1-2 שעות. זה מאפשר חדירה אוקטובר </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת רקמות 100% עבור אוקטובר 1 שעה, לאחר מכן זה יכול להיות מוטבע. </li></ol> 4. הטבעת רקמות קבוע <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תבניות פלסטיק עם תווית זיהוי רקמות המתאים (למשל עובש להראות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך את רקמת מתוך הפתרון אוקטובר וחתך את השליה במחצית המכוונת על ידי השליה בצורת דיסק עם הצד חבל הטבור כלפי מטה בזהירות לחתוך עם סכין גילוח נקי ולוודא כדי להזיז את הלהב קדימה ואחורה לפני שחרור הלחץ על מנת להבטיח לחתוך אפילו. השליה היא בחצי כדי להשיג את הטוב ביותר prientation מאוחר יותר לדמיין את HSCs השליה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקום אחד השליה וחצי בתחתית התבנית עם סף לחתוך במגע עם המשטח התחתון של התבנית. חזור עם עובש חדש החצי השני. עבור E10.5 השליות, חצאים שניהם יוטלו לתוך תבנית זהה שימוש באותה טכניקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר מוזג אוקטובר לתוך התבנית, זה יכול להיות קשה כדי לשמור על השליות בכיוון הנכון. אבטח את השליה במקום על ידי החזקת מחצית רקמת עם מלקחיים. לאט לאט שופכים פתרון אוקטובר לתבנית ולהימנע ייצור כל הבועות. עבור E10.5 השליות, להחזיק חצי רקמה על ידי מלקחיים והשאר חצי רקמות אחרות נגד הצד החיצוני של מלקחיים. לאט לאט שופכים פתרון אוקטובר כפי שתואר עבור E12.5 השליות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר עובש מלא אוקטובר, במהירות למקום עובש על קרח יבש, אוקטובר יהפוך פלאש לבן הקפאת רקמת </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את התבנית לתוך שקית פלסטיק קטן המכיל Drierite ומיד חנות ב -80 ° C במקפיא. </li></ol>

<ol><li>Gekas, C., Dieterlen-Lievre, F., Orkin, S. H., Mikkola, H. K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+placenta+is+a+niche+for+hematopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">The placenta is a niche for hematopoietic stem cells.</a> Dev Cell. 8, 365-375 (2005).</li>
<li>Rhodes, K. E., Gekas, C., Wang, Y., Lux, C. T., Francis, C. S., Chan, D. N., Conway, S., Orkin, S. H., Yoder, M. C., Mikkola, H. K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Emergence+of+Hematopoietic+Stem+Cells+Is+Initiated+in+the+Placental+Vasculature+in+the+Absence+of+Circulation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">The Emergence of Hematopoietic Stem Cells Is Initiated in the Placental Vasculature in the Absence of Circulation.</a> Cell Stem Cell. 2, 252-263 (2008).</li>
</ol>

הפרוצדורות המתוארות פרוטוקול זה יאפשר בידוד הדמיה של רקמות השליה גזע hematopoietic ו ובתאים. לסיכום מקיף על תשואה מספר הסלולר צפוי של HSCs בשליה ושאר איברים hematopoietic העובר לאורך התפתחות העובר אנו מתייחסים Gekas, et al. 2005. עבור לוקליזציה של HSCs בפיתוח תאים hematopoietic אחרים השליה אנו מתייחסים רודוס, et al. 2008.

רשימת חומרים: 100mm גלוקוז 10mm NaN3 15 מ&quot;ל חרוטי צינורות (BD) 16-G, 18-G, 20-G, G ו-22-25-G מחטים (BD) סוכרוז 30% הפתרון צלחות פטרי 35mm (BD) 4% Paraformaldehyde 50 - מ &#39;מסננים תא (Celltrics) 5 מ&quot;ל מזרקים (BD) אלקליין תשתית phosphatase קיט אני (וקטור האדום, וקטור) אלקליין תשתית phosphatase Kit III (וקטור כחול, וקטור) פתרון לאנטיביוטיקה (פניצילין / סטרפטומיצין, P / S) Collagenase סוג אני (Sigma) Cryomold פנויה הדגימה ויניל תבניות (10mm x 10mm x 5 מ&quot;מ, רקמות-Tek) Cytokeratin נוגדן ראשוני (DakoCytomation) מלקחיים Dissection, פלדה אל חלד או טיטניום, מספר 5 או 55 Drierite עוברית שור סרום (FBS) מיקרוסקופ Fisherbrand פלסטיק שקופיות מיילר (פישר) גלוקוז אוקסידאז 1000u/ml Levamisole (וקטור) הרכבה התקשורת, מימיות מבוססי הרכבה בינונית (VectamountTM א.ק.) סרום סוס רגיל (וקטור) חיתוך טמפרטורה אופטימלית (אוקטובר, רקמות-Tek) התשתית peroxidase ערכת DAB (וקטור) בופר פוספט (PBS) עם סידן / מגנזיום (w Ca2 + / Mg2 +) בופר פוספט (PBS) ללא סידן / מגנזיום (w / o Ca2 + / Mg2 +) Slide קופסת פלסטיק (מחזיקה 100 שקופיות) צינורות פלסטיק (PVC Nalgene 180 אינו רעיל Autoclavable) פוליפרופילן Round-Bottom מבחנה, 5 מ&quot;ל (12x75 מ&quot;מ, BD פלקון) Proteinase K 20mg/ml פתרון (Amresco) מחקר בינלאומי מוצרים קורפ סופר פאפ פן HT * סמנים שקופיות (2,5 מ&quot;מ, פישר) רקמות תרבות שטופלו בצורת U (מסביב למטה) צלחות 96-24-טוב או טוב (BD פלקון) Tween20, SigmaUltra (Sigma) קיט הגברה Tyramide (Invitrogen) Vectastain ABC phosphatase אלקליין רגילה Kit (וקטור) Vectastain ABC רגיל עלית Kit (וקטור)

בידוד ניתוח בתאי גזע hematopoietic מן השליה

Isolation and Analysis of Hematopoietic Stem Cells from the Placenta

בתאי גזע hematopoietic (HSCs) יש את היכולת העצמית לחדש וליצור כל סוגי תאים של שושלות דם במהלך חייו של הפרט. HSCs כל לצוץ במהלך ההתפתחות העוברית, שלאחריו גודל הבריכה שלהם מתוחזק על ידי עצמית חידוש חלוקות תא. זיהוי המקור האנטומי של HSCs והאירועים התפתחותי קריטי בוויסות תהליך של התפתחות HSC כבר מסובך כמו באתרים אנטומיים רבים להשתתף במהלך hematopoiesis העובר. לאחרונה זיהינו את השליה כגוף hematopoietic העיקריים שבהם HSCs נוצרות והורחב נישות microenvironmental ייחודי (Gekas, et al 2005, רודוס, et al 2008). כתוצאה מכך, השליה מהווה מקור חשוב של HSCs במהלך הופעתה שלהם והרחבת הראשונית. במאמר זה, אנו מראים טכניקות לנתיחה עבור בידוד של השליה Murine מ E10.5 ו E12.5 עוברים, התואמת את שלבי ההתפתחות של תחילת HSCs ואת שיא בגודל של הבריכה HSC את השליה, בהתאמה. בנוסף, אנו מציגים פרוטוקול אופטימיזציה עבור ניתוק האנזימטית מכנית של רקמת השליה לתוך ההשעיה תא יחיד לשימוש cytometry זרימה או מבחני תפקודית. מצאנו כי השימוש collagenase להשעיה תא בודד של השליה נותן תשואות מספיק HSCs. גורם חשוב המשפיע תשואה HSC מן השליה היא מידת הניתוק מכני לפני, ומשך טיפול אנזימטי. אנו מספקים גם פרוטוקול להכנת קבוע קפוא סעיפים רקמת השליה להדמיה של פיתוח HSCs ידי אימונוהיסטוכימיה בתוך נישות הסלולר המדויק שלהם. כמו אנטיגנים ספציפיים hematopoietic אינם נשמרים במהלך הכנת סעיפים פרפין מוטבע, אנו משתמשים באופן שגרתי חלקים קפואים קבוע localizing HSCs השליה אבות.

זיהינו את השליה כגוף hematopoietic העיקריים במהלך ההתפתחות. מצאנו כי בתאי גזע hematopoietic (HSCs) הן שנוצר הרחיב בשליה בתוך נישות microenvironmental ייחודי. כאן אנו מתארים ניסיוני בטכניקות נדרש בידוד להדמיה של HSCs את השליה העכבר.

לתאי גזע המטופואטיים (HSCs) יש את היכולת להתחדש באופן עצמי ולהוליד את כל סוגי התאים של שושלות הדם לאורך כל חיי הפרט. ...

שלום, אני מיקולה וברוכים הבאים למעבדה שלי. המיקוד העיקרי של המעבדה שלנו הוא חקירת התפתחות תאי גזע המטופואטיים. במהלך העוברגנזה, זיהינו את השליה כאיבר המטופואטי מרכזי ומצאנו כי תאי גזע המטופואטיים נוצרים ומתרבים בשליה בתוך נישות של מיקרוסביבה ייחודית.כך, לשליה ערך עצום כמקור לתאי גזע המטופואטיים במהלך הופעתם והתרחבותם הראשונית. כיום, חברי המעבדה שלי יציגו את הטכניקות הניסיוניות הדרושות לבידוד תאי גזע המטופואטיים מהשליה ולהדמיות של HCS בנישות המיקרו-סביבתיות הייחודיות שלהם. שלום, אני כריס גקה מהמעבדה של ד"ר חנה מולה במחלקה לביולוגיה של תאים מולקולרית והתפתחותית ב-UCLA.היום אראה לכם כיצד לבצע דיסקציה של שליית עכבר וכיצד להכין תרחיף של תאים בודדים מרקמת השליה לצורך אנליזה ב-fax עבור תאי גזע המטופואטיים עובריים. אני קטרינה רודס, ואני אראה לכם כיצד להכין רקמת שליה עבור אימונוהיסטוכימיה. אז בואו נתחיל.ראשית, יש לבודד את העוברים מהאמהות ההריות. בעלי החיים מושמדים בהתאם לנהלים המאושרים. במקרה שלנו, נשתמש במינון קטלני של חומר ההרדמה isof fluorine.ראשית, רססו את הבטן באתנול ובצעו חתך קטן בעזרת מספריים. קרעו את העור בעזרת שתי הידיים כדי לחשוף את חלל הבטן ופתחו את הפריטוניאום בעזרת פינצטה. הרימו את קרני הרחם ואספו אותן באמצעות מספריים בכל קצה דיסטלי.הניחו את קרני הרחם בצלחת פטרי מלאה ב-PBS והני

isolation-and-analysis-of-hematopoietic-stem-cells-from-the-placenta

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

סרט הווידאו הזה מראה כיצד מיקרו לנתח את שק החלמון ואת אבי העורקים, בלוטת המין, כלית בינים האזור מעוברים ולהשתמש cytometry זרימה למיין בתאי גזע hematopoietic.

בידוד מוקדם בתאי גזע hematopoietic מ Murine חלמון Sac ו AGM

שיטה לנתח את התפלגות אבות היווצרות הדם במח העצם ב cytometry זרימה, כמו גם ביעילות לבודד מטוהרים מאוד בתאי גזע hematopoietic (HSCs) מתואר. הליך הבידוד מבוסס בעיקרו על העשרת המגנטי של כ-Kit תאים + תא מיון לטהר HSCs ללימודי תאית ומולקולרית.

ניתוח בידוד פנוטיפי של Murine בתאי גזע hematopoietic ו-Lineage מחויבים אבות

שתי טכניקות לבידוד טיפות שומנים סלולריות מ1) תאי שמרים ו2) שליות אדם מוצגות. במרכזו של שני ההליכים הוא צנטריפוגה שיפוע הצפיפות, שבו השכבה הצפה וכתוצאה מכך המכילה טיפות ניתן דמיינו בקלות על ידי העין, שחולצה, ולכמת על ידי ניתוח כתם מערבי לטוהר.

בידוד של טיפות שומנים נייד: שתי טכניקות טיהור החל מתאי שמרים ושליות אדם

מתואר כאן פרוטוקול לבידוד ומחקר נוסף של הלויקוציטים החודרים של ה-decidua basalis ו-decidua parietalis - הממשק האם-עובר האנושי. פרוטוקול זה שומר על שלמות סמני פני התא ומניב מספיק תאים ברי קיימא ליישומים במורד הזרם, כפי שהוכח על ידי ניתוח זרימה ציטומטרית.

בידוד של לויקוציטים מממשק האדם-האימהי העוברי

המתואר כאן הוא פרוטוקול לבידוד וניתוח הלויקוציטים החודרים של רקמות בממשק האם-עובר (רחם, דצידואה ושליה) של עכברים. פרוטוקול זה שומר על שלמותם של רוב סמני פני התא ומניב מספיק תאים ברי קיימא ליישומים במורד הזרם, כולל ניתוח זרימה ציטומטרית.

בידוד של לויקוציטים מרקמות Murine בממשק האם והעובר

גזע אבות היווצרות הדם תאים (HSPC) נובעים מתאי אנדותל מיוחדים (hemogenic) במהלך הפיתוח, עדיין מעט מאוד ידוע על התהליך שבו כמה תאי אנדותל לציין להפוך להרכיב דם. אנו מדגימים שיטה המבוססת זרימת cytometry המאפשרת בידוד סימולטני של תאי hemogenic האנדותל HSPC מרקמות עובריות בעכברים.

בידוד של Murine העוברי Hemogenic לתאי אנדותל

בזאת אנו מתארים שיטות לנתיחה של רקמות יולדות ועובר מן שלית מונח אנושית, ואחריו בידוד והרחבת גזע mesenchymal / בתאי סטרומה (MSC) מרקמות אלה.

בידוד הרחבת גזע mesenchymal / תאי סטרומה נגזרו רקמה אנושית שליה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לנתיחה של חבל טבור האנושי (UC) ו מדגם שליה העובר לתוך חוט קרונית (CL), ג'ל וורטון (WJ), צומת חבל-שליה (CPJ), ואת השליה עוברת (FP) עבור הבידוד ואפיון של תאי סטרומה mesenchymal (MSCs) באמצעות טכניקת תרבות explant.

בידוד ואפיון של תאי סטרומה mesenchymal מן טבורי אדם העובר שליה

המטרה של פרוטוקול זה נועד לבודד ובתאים אנדותל של דם טבורי. חלק מהיישומים כוללות שימוש תאים אלה כמו סמן לזיהוי חולים עם הסיכון למחלות לב, במחלות איסכמי, ובונה יצירת שסתום כלי הדם והלב רקמות מהונדסים.

בידוד של אנדותל ובתאים של דם טבורי אנושי

פרוטוקול זה מדגים שיטת הבידוד של תאים אנושיים decidual הראשית שנאסף בקרום עוברי של המונח placentae אשר יכול לשמש למגוון רחב של יישומים (קרי immunocytochemistry, cytometry זרימה, וכו ') מכוון ללמוד את התפקיד של אוכלוסיות תאים שונים בסיבוכים בהריון.

בידוד של ראשי תאים Decidual האנושי בקרום עוברי של המונח Placentae

אנו מציגים פרוטוקול שלב אחר שלב לבידוד תאי גזע המטופויטיים ארוכי טווח (LT-HSCs) ותאי HSC לטווח קצר (ST-HSCs) באמצעות מערכת הדיווח Hoxb5.

שיטת בידוד לתאי גזע המטופויטיים לטווח ארוך וקצר

למדו לבודד ולנתח תאי גזע hematopoietic מהשליה העכברית. שיטות אלו מאפשרות לחקור את התפתחות תאי הדם והנישות המיקרו-סביבתיות הייחודיות בתקופת העוברות.

בידוד ניתוח בתאי גזע hematopoietic מן השליה

גלה סרטונים נוספים