Name: Trypsinizing ו Subculturing בתאי יונקים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-06-12T13:28:00.000+00:00
Duration: 5 min 59 s
Description: למד את שיטות הסב-קלטור לתאי יונקים דבקים ותלויים. הסרטון מדגים טכניקות טריפסיניזציה ושמירה על חיות התרביות לצורך מחקר בביולוגיה תאית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

פרוטוקול טקסט מלא לגישה זו ניסיוני זמין <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb0101/current/abstract" target="_blank">הפרוטוקולים נוכחי בביולוגיה של התא</a> .

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

trypsinizing ו subculturing בתאי יונקים

Trypsinizing and Subculturing Mammalian Cells

ככל שהתאים להגיע confluency, הם חייבים להיות subcultured או passaged. אי ומחוברות תאים תוצאות תת במדד mitotic מופחת בסופו של דבר מוות של תאים. הצעד הראשון הוא subculturing לנתק תאים מפני השטח של הכלי העיקרי של תרבות trypsinization או באמצעים מכניים. ההשעיה התא כתוצאה מחולק אז, או reseeded, לתוך תרבויות טריים. תרבויות משני נבדקים לצמיחה והאכילה מעת לעת, והן עשויות להיות subcultured מכן לייצר תרבויות שלישוני. הזמן בין passaging של תאים משתנה עם קו התא תלוי בקצב הצמיחה.

ככל שהתאים להגיע confluency, הם חייבים להיות subcultured או passaged. סרט הווידאו הזה תדגים נוהל subculturing הן חסיד ותאי ההשעיה.

Trypsinizing ו Subculturing בתאי יונקים

כאשר התאים מגיעים למצב של התמזגות (confluency), יש לבצע להם תת-תרבית (subculture) או מעבר (passage). אי-ביצוע תת-תרבית לתאים שהגיעו להתמזגות מוביל לירידה במדד המיטוטי ובסופו של דבר ל...

טכנולוגיית תרביות רקמה מצאה יישומים נרחבים בתחום הביולוגיה של התא. עם זאת, תאים בתרבית דורשים תחזוקה שוטפת כדי להישאר בריאים. כאשר התאים מגיעים למצב של התמלאות (confluency), יש לבצע להם תת-תרבית (subculture) או מעבר (passage).אי-ביצוע פעולה זו יגרום לצמיחה מופחתת ובסופו של דבר למות התאים. בסרטון זה, אנו מדגימים כיצד לתחזק תרביות תאים הן עבור שורות תאים נצמדות והן עבור שורות תאים תלויים. שלום, אני ריקי, כאן במעבדתו של Dr.LAN ב-Molecular Pathology Laboratories Network במזרח טנסי.היום אני רוצה להראות לכם שתי טכניקות להעברה של תאי התליה ותאים נצמדים. כדי להעביר פלטה של תאים, נרצה להתחיל בתרבית ראשונית שגדלה עד למצב של התכנסות (confluency) בצלחת פטרי של 60 מילימטר או בבקבוק לתרביות רקמה של 25 סנטימטר רבוע המכיל 5 מיליליטר של מצע לתרביות רקמה.נתחיל בהסרה של כל המצע מהתרבית הראשונית באמצעות פיפטה סטרילית. לאחר מכן, נשטוף את שכבת התאים הדבוקה פעם אחת או פעמיים בנפח קטן של HBSS בטמפרטורה של 37 degrees Celsius ללא סידן ומגנזיום. זאת כדי להסיר שאריות של סרום עגל עוברי (fetal bovine serum) שעלולות לעכב את פעולתו של אנזים ה-trypsin שנוסיף בשלב הבא.בשלב הבא, הוסיפו לתרבית כמות מספקת של תמיסת trypsin EDTA חמה כך שתכסה את שכבת התאים הדבקים. לאחר מכן, ניתן להניח את הצלחת על מגש חימום בטמפרטורה של 3

trypsinizing-and-subculturing-mammalian-cells

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

מיקרו גזור טכניקה explants היא שיטה חזקה ואמינה לבידוד שגשוג התאים שריר השלד מן, השרירים נוער למבוגרים או עובריים כמקור לתאי גזע שרירי השלד. באופן ייחודי, התאים האלה כבר נגזר clonally לייצר גזע שריר השלד שורות תאים המשמשים in vivo השתלה.

למבוגרים עובריים שרירי השלד Microexplant התרבות בידוד בתאי גזע שרירי השלד

בדו"ח זה, אנחנו מדגימים מערכת לבודד התורם התרבות תאים מבלוטת החלב העכבר, ו orthotopically השתלת תאים אלה בעכברים הנמען לנתח סטרומה: אינטראקציות אפיתל במהלך התפתחות הגידול החלב.

השתלה של תאים סטרומה החלב ותאי קרצינומה של עכברים C57BL/6J

הסרטון מדגים בדיקה להערכת פעילות קיבוע אוטופגית בתפזורת בתאי יונקים. הוא משתמש באלקטרופורציה כדי לשחרר חלבונים ציטוסוליים, כולל לקטט דהידרוגנאז (LDH). שברי ה-LDH המבודדים וה-LDH התאי הכולל נקבעים כדי להעריך את תפיסת ה-LDH, ומספקים תובנות לגבי הפעילות הכוללת של קיבוע בתפזורת.

כימות פעילות קיבוע אוטופגית בתפזורת בתאי יונקים

סרטון זה מדגים פרוטוקול לבידוד וטיפוח תאי קליפת המוח הראשוניים מהטלנספלון הדורסולטרלי של עוברי עכברים.

בידוד וגידול תאים מעובר עכבר טלנספלונים דורסולטרליים

טכניקה זו מספקת שיטה לקצור, לנרמל ולכמת צמיחה תאית של חיידקים פתוגנים כי הם מראש מעובדים בתאי פונדקאי protozoan טבעיים לפני הזיהומים של תאי יונקים. שיטה זו יכולה להיות שונה כדי להתאים מגוון רחב של תאי מארח לבמה יחול כמו גם סוגי תאי היעד.

זיהומים של תאי יונקים צייתנים עם חיידקי protozoan דרוך-

אנו מתארים נהלים לתיוג וgenotyping עכברי יילוד ויצירת תרבויות עצביות עיקריות מהם. Genotyping הוא מהיר, יעיל ואמין, ומאפשר למיצוי גרעין חומצה אוטומטי. זה שימושי במיוחד עבור עכברי neonatally קטלניים והתרבויות שלהם שדורשות השלמה מוקדמת של genotyping.

המהיר Genotyping של בעלי חיים ואחרי הקמת תרבויות עיקריות של נוירונים במוח

אנו מתארים שיטת תיוג יציב של xenografts נגזרות החולות (PDXs) עם חלקיקי lentiviral להביע כתבי חלבון בלוציפראז ירוקים-ניאון. שיטה זו מאפשרת מעקב צמיחת PDXs המצוי באתר הראשי, כמו גם באיתור גרורות ספונטניות ניסיון באמצעות במערכות הדמית vivo.

תיוג של xenografts הנגזר חולה סרטן השד עם כתבים לעקיבים עבור צמיחת גידולים וגרורים מחקרים

המטרה של פרוטוקול זה היא לבודד keratinocytes עוריות מן העור העורבי של עכברים מבוגרים עבור מגוון של יישומים במורד הזרם כגון ביולוגיה מולקולרית, ביוכימיה, מיון תא מופעל פלואורסצנטית, ו העיקרי בשימוש בלתי מתורבת (למשל, clonogenic keratinocytes).

בידוד של העכבר Keratinocytes באפידרמיס ושלהם בתרבות הclonogenic של מבחנה

אנו מציגים טכניקה לייצוב מהיר של מתחמים תרגומיים (ביוסינטזה של חלבונים) עם קשרים צולבים פורמלדהידים בתאי שמרים ויונקים חיים. הגישה מאפשרת לנתח מתווכים ארעיים ואינטראקציות דינמיות של RNA:חלבון. ניתן להשתמש במתחמים המקושרים ביישומים מרובים במורד הזרם, כגון בשיטות פרופיל מבוססות רצף עמוק, מיקרוסקופיה וספקטרומטריית מסה.

קיבוע מהיר ב- Vivo ובידוד מתחמים תרגומיים מתאי אוקריוטיים

ALIBi (ALIBi) היא שיטה חדשה שמופעלת אופטוגנטית שפותחה לתיוג וטיהור אוכלוסיות תת-תאיות של ריבוזומים לצורך ריצוף וניתוח פרוטאומי במורד הזרם וניתוח פרוטאומי.

בידוד תת-אוכלוסיות ריבוזום תת-תאיות בהתבסס על ביוטינילציה מוגברת במיקום ספציפי לתג פפטיד רקומביננטי - תאורה מוגבלת -

למד את שיטות הסב-קלטור לתאי יונקים דבקים ותלויים. הסרטון מדגים טכניקות טריפסיניזציה ושמירה על חיות התרביות לצורך מחקר בביולוגיה תאית.

Trypsinizing ו Subculturing בתאי יונקים

גלה סרטונים נוספים