Name: Trypsinizing ו Subculturing בתאי יונקים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-06-12T13:28:00.000+00:00
Duration: 5 min 59 s
Description: למד את שיטות הסב-קלטור לתאי יונקים דבקים ותלויים. הסרטון מדגים טכניקות טריפסיניזציה ושמירה על חיות התרביות לצורך מחקר בביולוגיה תאית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

פרוטוקול טקסט מלא לגישה זו ניסיוני זמין <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb0101/current/abstract" target="_blank">הפרוטוקולים נוכחי בביולוגיה של התא</a> .

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

trypsinizing ו subculturing בתאי יונקים

Trypsinizing and Subculturing Mammalian Cells

ככל שהתאים להגיע confluency, הם חייבים להיות subcultured או passaged. אי ומחוברות תאים תוצאות תת במדד mitotic מופחת בסופו של דבר מוות של תאים. הצעד הראשון הוא subculturing לנתק תאים מפני השטח של הכלי העיקרי של תרבות trypsinization או באמצעים מכניים. ההשעיה התא כתוצאה מחולק אז, או reseeded, לתוך תרבויות טריים. תרבויות משני נבדקים לצמיחה והאכילה מעת לעת, והן עשויות להיות subcultured מכן לייצר תרבויות שלישוני. הזמן בין passaging של תאים משתנה עם קו התא תלוי בקצב הצמיחה.

ככל שהתאים להגיע confluency, הם חייבים להיות subcultured או passaged. סרט הווידאו הזה תדגים נוהל subculturing הן חסיד ותאי ההשעיה.

Trypsinizing ו Subculturing בתאי יונקים

כאשר התאים מגיעים למצב של התמזגות (confluency), יש לבצע להם תת-תרבית (subculture) או מעבר (passage). אי-ביצוע תת-תרבית לתאים שהגיעו להתמזגות מוביל לירידה במדד המיטוטי ובסופו של דבר ל...

טכנולוגיית תרביות רקמה מצאה יישומים נרחבים בתחום הביולוגיה של התא. עם זאת, תאים בתרבית דורשים תחזוקה שוטפת כדי להישאר בריאים. כאשר התאים מגיעים למצב של התמלאות (confluency), יש לבצע להם תת-תרבית (subculture) או מעבר (passage).אי-ביצוע פעולה זו יגרום לצמיחה מופחתת ובסופו של דבר למות התאים. בסרטון זה, אנו מדגימים כיצד לתחזק תרביות תאים הן עבור שורות תאים נצמדות והן עבור שורות תאים תלויים. שלום, אני ריקי, כאן במעבדתו של Dr.LAN ב-Molecular Pathology Laboratories Network במזרח טנסי.היום אני רוצה להראות לכם שתי טכניקות להעברה של תאי התליה ותאים נצמדים. כדי להעביר פלטה של תאים, נרצה להתחיל בתרבית ראשונית שגדלה עד למצב של התכנסות (confluency) בצלחת פטרי של 60 מילימטר או בבקבוק לתרביות רקמה של 25 סנטימטר רבוע המכיל 5 מיליליטר של מצע לתרביות רקמה.נתחיל בהסרה של כל המצע מהתרבית הראשונית באמצעות פיפטה סטרילית. לאחר מכן, נשטוף את שכבת התאים הדבוקה פעם אחת או פעמיים בנפח קטן של HBSS בטמפרטורה של 37 degrees Celsius ללא סידן ומגנזיום. זאת כדי להסיר שאריות של סרום עגל עוברי (fetal bovine serum) שעלולות לעכב את פעולתו של אנזים ה-trypsin שנוסיף בשלב הבא.בשלב הבא, הוסיפו לתרבית כמות מספקת של תמיסת trypsin EDTA חמה כך שתכסה את שכבת התאים הדבקים. לאחר מכן, ניתן להניח את הצלחת על מגש חימום בטמפרטורה של 37 °C למשך דקה עד שתי דקות. לאחר הדגירה, הקשו על תחתית הצלחת על משטח שטוח כדי לשחרר את התאים.בדקו את התרבית באמצעות מיקרוסקופ הפוך כדי לוודא שהתאים קיבלו צורה עגולה, דבר המעיד על כך שהם ניתקו מהמשטח. אם התאים אינם מנותקים מספיק, החזירו את הצלחת למגש החממה לדקה או שתיים נוספות. לאחר הבדיקה במיקרוסקופ, שטפו את הצלחת במצע מלא והעבירו בעזרת פיפטה את התוך למבחנה קונית של 15 ml המכילה 2 ml של מצע מלא.סובב את התאים בצנטריפוגה כדי להשקיע אותם, ותלה את המשקע במדיום מלא. כעת, הוסף נפח שווה של תגסוס תאים לכל אחת מהצלחות החדשות שסומנו כראוי. לחלופין, ניתן לספור את התאים באמצעות המוציטומטר (hemo cytometer) ולדלל אותם לצפיפות הרצויה, כדי שניתן יהיה להוסיף מספר ספציפי של תאים לכל צלחת.יש לוודא שכל צלחת מסומנת בתאריך התת-תרבית ובמספר המעבר. לאחר הוספת תרחיף התאים, יש להוסיף 1 ml של מצע טרי לכל תרבית חדשה. כעת יש להדגיר את הצלחות באינקובטור לח עם 37 °C ו-5% CO2.לאחר דגירה של התאים למשך לילה, הוסיפו מצע טרי לצלחות והחזירו אותן ל-37 מעלות. ברגע שהצלחת הגיעה לצפיפות מקסימלית (confluency), ניתן לבצע מעבר תאים (passage) נוסף על ידי חזרה על הליך זה, ולהמשיך במעברים לפי הצורך. כעת נראה לכם כיצד לבצע מעבר תאים בתרבית סספנסיה.אריזת תאים בתרבית סספנסיון היא פשוטה יותר מאשר אריזת תאים נצמדים. לפני אריזת תרביות סספנסיון, יש לתחזק את התאים באמצעות הזנה מדי יומיים עד שלושה ימים עד שהם מגיעים לקונפלואנסיות (confluency), מצב שבו התאים נצמדים זה לזה בסספנסיון והתווך נראה עכור בעת סיבוב הבקבוק.לביצוע פעולה זו, הוציאו את הבקבוק עם תרחיף התאים מהאינקובטור, תוך הקפדה לא להפריע לתאים שהשקיעו לתחתית הבקבוק. באופן אסיפטי, הסירו והשליכו כשליש מהמצע מהבקבוק והחליפו אותו בנפח שווה של מצע שחומם מראש ל-37 degrees Celsius. לאחר החלפת המצע, סובבו את הבקבוק בתנועות סיבוביות והחזירו אותו לאינקובטור, המכוון ל-37 degrees Celsius ו-5%CO2.אם יש פחות מ-15 mL של מצע בבקבוק, הדגרירו את הבקבוק במצב אופקי כדי להגביר את המגע של התאים עם המצע. אחרת, ניתן להדגריר את הבקבוק במצב אנכי בימים שבהם אינם מזינים את התרביות. בדקו אותן על ידי סיבוב הבקבוקים כדי להחזיר את התאים לתליה.יש להקפיד לעקוב אחר שינויי צבע במצע המעידים על צמיחה מטבולית תקינה. ברגע שהתרביות מגיעות למצב של התלכדות (confluency), מה שצפוי לקרות בריכוז של כ-2.5 million cells per mil, ניתן לבצע להן מעבר (passage). פעם נוספת, הדגמנו בפניכם כיצד לבצע מעבר לתרביות תאים, הן עבור תרביות נצמדות והן עבור תרביות בתליה.זהו זה. תודה שצפיתם ובהצלחה בכל הניסויים שלכם.

trypsinizing-and-subculturing-mammalian-cells

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

מיקרו גזור טכניקה explants היא שיטה חזקה ואמינה לבידוד שגשוג התאים שריר השלד מן, השרירים נוער למבוגרים או עובריים כמקור לתאי גזע שרירי השלד. באופן ייחודי, התאים האלה כבר נגזר clonally לייצר גזע שריר השלד שורות תאים המשמשים in vivo השתלה.

למבוגרים עובריים שרירי השלד Microexplant התרבות בידוד בתאי גזע שרירי השלד

בדו"ח זה, אנחנו מדגימים מערכת לבודד התורם התרבות תאים מבלוטת החלב העכבר, ו orthotopically השתלת תאים אלה בעכברים הנמען לנתח סטרומה: אינטראקציות אפיתל במהלך התפתחות הגידול החלב.

השתלה של תאים סטרומה החלב ותאי קרצינומה של עכברים C57BL/6J

סרטון זה מדגים טכניקה לחקר לוקליזציה in vivo של נוגדנים ספציפיים לגידול במודל xenograft של גידול עכבר. עם הזרקה תת-עורית של תאים סרטניים לעכברים לצורך היווצרות גידולים, מוזרקים נוגדנים בעלי תווית פלואורסצנטית הנקשרים לקולטנים ספציפיים לגידול, ומאפשרים הערכה in vivo של לוקליזציה של נוגדנים באמצעות הדמיה.

טכניקה להערכת לוקליזציה in vivo של נוגדנים ספציפיים לגידול

הסרטון מדגים בדיקה להערכת פעילות קיבוע אוטופגית בתפזורת בתאי יונקים. הוא משתמש באלקטרופורציה כדי לשחרר חלבונים ציטוסוליים, כולל לקטט דהידרוגנאז (LDH). שברי ה-LDH המבודדים וה-LDH התאי הכולל נקבעים כדי להעריך את תפיסת ה-LDH, ומספקים תובנות לגבי הפעילות הכוללת של קיבוע בתפזורת.

כימות פעילות קיבוע אוטופגית בתפזורת בתאי יונקים

סרטון זה מדגים פרוטוקול לבידוד וטיפוח תאי קליפת המוח הראשוניים מהטלנספלון הדורסולטרלי של עוברי עכברים.

בידוד וגידול תאים מעובר עכבר טלנספלונים דורסולטרליים

טכניקה זו מספקת שיטה לקצור, לנרמל ולכמת צמיחה תאית של חיידקים פתוגנים כי הם מראש מעובדים בתאי פונדקאי protozoan טבעיים לפני הזיהומים של תאי יונקים. שיטה זו יכולה להיות שונה כדי להתאים מגוון רחב של תאי מארח לבמה יחול כמו גם סוגי תאי היעד.

זיהומים של תאי יונקים צייתנים עם חיידקי protozoan דרוך-

אנו מתארים נהלים לתיוג וgenotyping עכברי יילוד ויצירת תרבויות עצביות עיקריות מהם. Genotyping הוא מהיר, יעיל ואמין, ומאפשר למיצוי גרעין חומצה אוטומטי. זה שימושי במיוחד עבור עכברי neonatally קטלניים והתרבויות שלהם שדורשות השלמה מוקדמת של genotyping.

המהיר Genotyping של בעלי חיים ואחרי הקמת תרבויות עיקריות של נוירונים במוח

המטרה של פרוטוקול זה היא לבודד keratinocytes עוריות מן העור העורבי של עכברים מבוגרים עבור מגוון של יישומים במורד הזרם כגון ביולוגיה מולקולרית, ביוכימיה, מיון תא מופעל פלואורסצנטית, ו העיקרי בשימוש בלתי מתורבת (למשל, clonogenic keratinocytes).

בידוד של העכבר Keratinocytes באפידרמיס ושלהם בתרבות הclonogenic של מבחנה

אנו מציגים טכניקה לייצוב מהיר של מתחמים תרגומיים (ביוסינטזה של חלבונים) עם קשרים צולבים פורמלדהידים בתאי שמרים ויונקים חיים. הגישה מאפשרת לנתח מתווכים ארעיים ואינטראקציות דינמיות של RNA:חלבון. ניתן להשתמש במתחמים המקושרים ביישומים מרובים במורד הזרם, כגון בשיטות פרופיל מבוססות רצף עמוק, מיקרוסקופיה וספקטרומטריית מסה.

קיבוע מהיר ב- Vivo ובידוד מתחמים תרגומיים מתאי אוקריוטיים

ALIBi (ALIBi) היא שיטה חדשה שמופעלת אופטוגנטית שפותחה לתיוג וטיהור אוכלוסיות תת-תאיות של ריבוזומים לצורך ריצוף וניתוח פרוטאומי במורד הזרם וניתוח פרוטאומי.

בידוד תת-אוכלוסיות ריבוזום תת-תאיות בהתבסס על ביוטינילציה מוגברת במיקום ספציפי לתג פפטיד רקומביננטי - תאורה מוגבלת -

למד את שיטות הסב-קלטור לתאי יונקים דבקים ותלויים. הסרטון מדגים טכניקות טריפסיניזציה ושמירה על חיות התרביות לצורך מחקר בביולוגיה תאית.

Trypsinizing ו Subculturing בתאי יונקים

גלה סרטונים נוספים