Name: טכניקה מהירה עבור ויזואליזציה של תאים חיים שמרים ללא יכולת לזוז (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 2 min 54 s
Description: למד טכניקה מהירה לויזואליזציה של תאי שמרים חיים ללא יכולת תנועה באמצעות דיווחים פלואורסצנטיים. שיטה זו מאפשרת מעקב אחר שינויים אפיגנטיים במהלך חלוקת תאים ומספקת כלי אמין לחקר ביולוגיה תאית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ברצוננו להודות פיט יוסטון יבגניה שו על כל העזרה שלהם.

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים משותקת עבור מיקרוסקופיה כמובן זמן epifluorescence. שים לב כי פרוטוקול זה שימושי רק אם המטרה של עדשות המיקרוסקופ שלך נמצאות מתחת למיקרוסקופ הבמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום התאים בריכוז הרצוי בתקשורת נוזלי על coverslip ארוכה (24x50mm בערך) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גזור לחסום אגר בגודל הרצוי מהצלחת מדיה סינתטיים (אלה autofluorescence התחתון) ואת המקום על התאים. הנח את הצד של גוש אגר לא מטופלים על ידי פינצטה במגע עם התאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקורסים זמן קצר (עד 3 שעות), להגדיר את זה מספיק. אם התאים עוברים כאשר דמיינו על המיקרוסקופ, להקטין נפח של תאים או אזור גידול של לחסום את אגר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקורסים זמן רב יותר, במקום ירידה של התקשורת נוזלי טרי על גבי לחסום את אגר, ומקום שקופיות הזכוכית על גבי לחסום את אגר. שקופיות זה מפחית התאדות דרך החלק העליון של לחסום את אגר. אם תרצה, בקצוות של גוש אגר במגע עם להחליק את מכסה יכול להיות חתום עם וזלין כדי לצמצם עוד יותר לחות. השתמשתי להגדיר עבור סרטים עד 9 שעות ארוכות, עם חלוקת תאים בשיעורים סוג בר. </li></ol>

<ol>
	<li>Xu, E. Y., Zawadzki, K. A., Broach, J. R. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+observations+reveal+intermediate+transcriptional+silencing+states.">Single-cell observations reveal intermediate transcriptional silencing states.</a> Mol. Cell. 23, 219-229 (2006).</li></ol>

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

זוהי טכניקה מהירה שמגביל תאים שמרים תוך מתן צמיחה. יש לנו בעקבות גידול השמרים עד עשר שעות, עם השמרים הצגת בר חלוקה שיעורי ברחבי סוג הניסוי. שים לב התקנה זו מחייבת את העדשה המטרה להיות מתחת לבמה מיקרוסקופ.

טכניקה מהירה עבור ויזואליזציה של תאים חיים שמרים ללא יכולת לזוז

A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells

אנו מציגים כאן טכניקה פשוטה, מהירה, גמישה מאוד עבור immobilization ויזואליזציה של תאים שמרים גדל מיקרוסקופיה epifluorescence. השיטה מתאימה במידה שווה עבור להדמיה של אוכלוסיות שמרים סטטי, או קורסים ניסויים זמן עד עשר שעות אורך. מיקרוסקופיה שלי חוקר ירושה epigenetic ב לוקוסים ההזדווגות שקטה cerevisiae ס. ישנם שני לוקוסים ההזדווגות שקט, HML ו HMR, אשר בדרך כלל לא הביע כפי שהם ארוזים heterochromatin. ב השתקה sir1 רקע מוטנטים הוא נחלש כל כך מוקד יכול להיות במדינה epigenetic הביע או מושתקים, כך באוכלוסייה כולה יש ערבוב של תאים של מדינות שונות הן epigenetic HML ו HMR. מיקרוסקופיה שלי הראו כי אין קשר בין המדינה epigenetic של HML ו HMR בתא בודד. sir1 תאים stochastically הבורר מדינות epigenetic, הקמת ההשתקה על מוקד הביע בעבר או להביע מוקד השתיק בעבר. במהלך הזמן שלי מיקרוסקופיה מעקב אישי sir1 תאים וצאצאיהם להבקיע את התדירות של כל אחד מארבעת מתגים epigenetic אפשרי, ולכן יציבותה של כל אחת מהמדינות epigenetic ב sir1 תאים. ראה גם שו et al. מול. תא 2006.

טכניקה מהירה להדמיה של גידול בתאי שמרים משותקת, מיושם כאן לכתבים פלורסנט בבית לוקוסים שקט ההזדווגות HML ו HMR

אנו מציגים כאן טכניקה פשוטה, מהירה וגמישה ביותר לקיבוע ולהדמיה של תאי שמרים גדלים באמצעות אפי-פלואורסצנציה...

מטרת הניסוי היא היכולת לעקוב אחרי אוכלוסייה של תאי providing sir one תחת המיקרוסקופ, כדי שניתן יהיה לראות כיצד המצבים האפיגנטיים משתנים ובאיזו תדירות הם משתנים עם כל חלוקה עוקבת של התאים. קחו כיסוי זכוכית ארוך, קחו כ-7 µL של תאים, הניחו אותם על כיסוי הזכוכית הארוך והשתמשו בצלחת מדיום סינתטי. קחו להב תער ובצעו חתכים בתוך האגר. קחו בלוק אגר, הרימו אותו והניחו אותו מעל התאים.בסדר, עבור ניסויים לטווח קצר, עד שלוש שעות. הדבר הזה כשלעצמו מספיק. התאים יעגנו עבור ניסויים לטווח ארוך יותר; אני מוסיף מצע נוזלי לראש פד האגר, ואז מניח עלתה זכוכית מעל למכלול כולו.המצע ישמש כמעין אטם בין השניים. השקופית נועדה אך ורק למנוע התאיידות מחלקו העליון של בלוק האגר. בסידור זה, בלוק האגר יישאר לח והתאים ימשיכו להתחלק למשך שמונה שעות, לפחות שמונה שעות.

a-rapid-technique-for-visualization-live-immobilized-yeast

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

המחיקה ין overexpression חלבון שיטות משותף ללימוד פונקציות של חלבונים. במאמר זה, אנו מתארים פרוטוקול לניתוח התפתחות פנוטיפ כפונקציה של ריכוז החלבון על האוכלוסייה תא בודד...

ניתוח ופיתוח של הפנוטיפ מורפולוגי כפונקציה של ריכוז חלבון שמרים הנצה

שיטה להטבעת מושבות שמרים המאפשר חתך של מיקרוסקופ אור אלקטרונים. פרוטוקול זה מאפשר קביעה של חלוקת תאים sporulated ותאי pseudohyphal בתוך מושבות מתן כלי חדש לקראת הבנת הארגון של סוגי תאים בתוך קהילה פטרייתי.

במושבה שמרים והטבעה שיטה

גישה חזקים כדי לפקח על משלוח של האברונים את לומן חומצי של vacuole את השמרים במשך השפלה ומיחזור מתואר. השיטה מסתמכת על תיוג הספציפי של האברונים היעד עם פלואורסצנטי כפול פליטת מקודדים גנטית pH-biosensor, ויזואליזציה של תאים בודדים באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

Assay מיקרוסקופ פלואורסצנטי עבור Mitophagy ניטור השמרים Saccharomyces cerevisiae

כמותי תא חי פלואורסצנטי, מיקרוסקופ ניתוח של שמרים ביקוע

אנו מציגים פרוטוקול פשוט להשיג סרטי הקרינה מיקרוסקופיה של תאי שמרים גדלו, וחבילת תוכנה מבוססת GUI כדי לחלץ את נתוני זמן סדרת תא בודד. הניתוח כולל שושלת אוטומטית והקצאת זמן החלוקה משולבת עם בדיקה חזותית ואוצרות ידני של נתונים מסומנים.

רכישת זמן לשגות סרטים הקרינה של שמרים להנץ וניתוח Dynamics תא בודד באמצעות שתלי

מוצגת שיטה לכרומוזומים המתפשטים על פני השטח משמרים ניצנים. שיטה זו נגזרת משיטה שתוארה בעבר על ידי לוידל וקליין. בנוסף, אנו מדגימים הליך לצביעה חיסונית של כרומוזומים מפוזרים.

משטח הפצת וImmunostaining של כרומוזומים שמרים

אנו מספקים שיטה בסיסית הניתנת לשחזור למיקרוסקופיה ארוכת טווח של מחזור החיים המיני של שמרי ביקוע. עם התאמות קלות שתוארו, הפרוטוקול המוצג מאפשר התמקדות מחקרית בשלבים שונים של תהליך הרבייה.

מיקרוסקופי של שמרי ביקוע Lifecycle המיני

פרוטוקול זה מתאר את הניתוח של מסומן בתוך התאים התאיים בתוך שמרים באמצעות מרובת צבעים 4d (זמן הפקיעה 3d) קונפוקלית מיקרוסקופ. הפרמטרים הדמיה נבחרים כדי ללכוד אותות הולמים תוך הגבלת photodamage. תוספים מותאמים אישית של ImageJ מאפשרים מבנים עם תוויות למעקב וניתוח כימות.

4D מיקרוסקופ של שמרים

כאן, אנו מציגים הדמיה תא חי שהיא שיטת מיקרוסקופ לא רעיל המאפשר לחוקרים ללמוד התנהגות החלבון הדינמיקה הגרעינית בתוך חי ביקוע תאים שמרים במהלך מיטוזיס ו meiosis.

בחינת Mitotic ומיוטיק ביקוע הדינמיקה הגרעינית על ידי הזריחה לחיות-מיקרוסקופ התא

צבעי פלורסנט חיוניים הם כלים חיוניים לניתוח הדמיה של תא חי בביולוגיה מודרנית של תאים פטרייתיים. נייר זה מפרט את היישום של צבעי פלורסנט ידוע פחות ידועים עבור מעקב הדינמיקה קרום הפלזמה, אנדו-/אקסוציטוזה וקיר התא מורגנזה בפטריות filamentous.

יישום של ממברנה וקיר תא צבעי פלורסנט סלקטיבית עבור הדמיה בשידור חי התא של פטריות Filamentous

למד טכניקה מהירה לויזואליזציה של תאי שמרים חיים ללא יכולת תנועה באמצעות דיווחים פלואורסצנטיים. שיטה זו מאפשרת מעקב אחר שינויים אפיגנטיים במהלך חלוקת תאים ומספקת כלי אמין לחקר ביולוגיה תאית.

טכניקה מהירה עבור ויזואליזציה של תאים חיים שמרים ללא יכולת לזוז

גלה סרטונים נוספים