Name: ES תאים אנושיים: תרבות החל מ תאים קפואים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 2 min 47 s
Description: למדו את פרוטוקול ההקפאה וההפשרה של תאי גזע עובריים אנושיים HuES לצורך מחקר בתחומי הנוירוביולוגיה והביולוגיה ההתפתחותית. השיטה מבטיחה שכפוליות ואמינות בתוצאות הניסוי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

הפשירי ממלאי קפוא: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני ההפשרה התאים גוונים, להבטיח את הצלחת MEF יש לך כבר מוכנה היא מצופה כראוי במצב טוב. אל תנסה להשתמש פחות רצוי צלחת, או אחד כי הוא יותר מבוגר שלושה ימים. מומלץ לסמן מראש את כל צינורות חרוטי ובארות בשימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טרום גוונים חמים מדיה 37 ° C. גוונים Aliquot התקשורת לתוך צינור חרוטי סטרילי עבור כל שורה. הסר גוונים בקבוקון / s מ -80 ומיד להטביע את החצי התחתון של הצינור בתוך אמבט מים 37 מעלות צלזיוס. זה אמור לקחת בערך 45-60 שניות לפני התאים הם 80% מופשר (חלק קפוא קטן משמאל). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מהר להביא את הצינור אל מכסה המנוע לזרום למינרית, ספריי עם אלכוהול 70%, בעדינות העברת התאים של טרום חימם התקשורת. ספין הצינור, להסיר התקשורת, resuspend בנפח מתאים של טרי, מחומם מראש מדיה גוונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב את התקשורת MEF מן כמו בארות רבות ככל שאתה תהיה הפשרה לתוך. מהר, לפני חימם aliquot גוונים התקשורת בחזרה היטב כל הצלחת, נזהר לא להפריע MEFs המצורפת. הגדר את הצלחת הצידה מכסה המנוע. כמו MEFs, התוצאות הטובות ביותר מושגות כאשר טיפות מופצים באופן שווה על הצלחת. בזהירות להחזיר את צלחת 37 ° C חממה לילה כדי לאפשר את הגוונים התאים הזרע MEFs. שינוי מדיה ~ 48 שעות לאחר ההפשרה, להחליף עם התקשורת גוונים טרי. </li></ol>

<ol><li>Cowan, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+Embryonic+Stem+Cells+from+Human+Blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Derivation of Embryonic Stem Cells from Human Blastocysts.</a> , 1650-1656 (2004).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודים להצהיר עליהם.

בסרטון הזה, אנו מראים כיצד במעבדה שלנו שגרתי קובעת גוונים אנושיים עובריים תרבות נובעות המניות קפוא. תהליך זה הוא נוח לשימוש כללי עם תא יונקים אם קפוא בפתרון DMSO. יעיל הפשרה הוא חיוני לכינון תרבות חדשה של תאים גוונים ממלאי קפוא, ואת חשובה העקביות ניסיוני.

גוונים מדיה 651.5 מ&quot;ל KO-DMEM 500 מ&quot;ל PenStrep 6.5 מ&quot;ל Glutamin 6.5 מ&quot;ל NEAA 6.5 מ&quot;ל בטא mercaptoethanol 0.5ul KO החלפת סרום 65 מ&quot;ל 65 מ&quot;ל Plasmanate bFGF2 (10 ng / mL הסופי) 0.65 מ&quot;ל

es תאים אנושיים: תרבות החל מ תאים קפואים

Human ES cells: Starting Culture from Frozen Cells

כאן אנו מדגימים כיצד במעבדה שלנו מתחיל גוונים תא גזע עובריים אנושיים תרבות קו ממלאי קפוא. ראשית, 01:59 זקנה ביום העשירי של כ ס&quot;מ צלחת אחת (שני) מוקרן מיליון תאים עובריים בעכבר פיברובלסטים מזין הוא שטף את התקשורת עם גוונים להסיר שאריות ופסולת בסרום התא, ולאחר מכן הוסיף גוונים התקשורת ועזב לאזן בתא תרבות חממה. בקבוקון קפוא של תאים לאחסון חנקן נוזלי לטווח ארוך או במקפיא-80C היא שמקורו ו שקוע במהירות באמבט מים 37C עבור הפשרה מהירה. תאים בתקשורת הקפאת יוסרו אז מן הבקבוקון והושמו כמויות גדולות של אמצעי התקשורת גוונים. נפח גדול של גוונים התקשורת מאפשר הסרת בסרום עודף DMSO, אשר יכול לגרום גוונים בתאי גזע עובריים אנושיים להבדיל. תאים הם טווה בעדינות מתוך ההשעיה, ולאחר מכן מחדש תלויה בנפח קטן של התקשורת גוונים טרי המשמש מכן זרע את הצלחת MEF. זה נחשב חשוב הזרע צלחת MEF בעדינות על ידי הוספת תאים גוונים בצורה טיפה חכם כדי לפזר אותם באופן שווה לאורך כל הצלחת. הגוונים שהוקם צלחת תרבות מוחזר בחממה במשך 48 שעות לפני התקשורת מוחלף, ואז מוזן כל 24 שעות לאחר מכן.

כאן אנו מדגימים כיצד במעבדה שלנו מתחיל גוונים תא גזע עובריים אנושיים תרבות קו ממלאי קפוא.

ES תאים אנושיים: תרבות החל מ תאים קפואים

כאן אנו מדגימים כיצד המעבדה שלנו מתחילה תרבית של שורת תאי גזע עובריים אנושיים מסוג HuES מתוך מלאי קפוא. ראשית, צלחת בת 10 ס"מ בת יום או יומיים של...

human-es-cells-starting-culture-from-frozen-cells

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

כאן אנו מדגימים כיצד במעבדה שלנו קופא גוונים האדם עובריים קווי גזע.

הקפאת ES תאים אנושיים

מאז ג'יימס תומסון ואח' פיתח טכניקה בשנת 1998 לבודד ולגדל הס בתרבות, הקפאת תאים לשימוש מאוחר יותר, מפשיר והרחבת תאים ממלאי קפוא הפכו נהלים חשוב לבצע בתרבות הס שגרה התא. מכיוון שתאי הס רגישים מאוד הלחצים של מקפיא הפשרה, טיפול מיוחד חייב לנקוט. כאן אנו וידגים עבור מפשיר במהירות תאים הס ממניות חנקן נוזלי, ציפוי אותם על תאים עובריים של עכבר מזין, ולאט לאט הקפאת אותם לצורך אחסון לטווח ארוך.

מקפיא הפשרה בתאי גזע עובריים אנושיים

אנו מציגים פרוטוקול תכנות מחדש יעיל של האדם התאים הסומטיים אל האדם המושרה בתאי גזע pluripotent (hiPSC) באמצעות וקטורים retroviral קידוד Oct3 / 4, Sox2, Klf4 ו-c-myc (OSKM) וזיהוי של hiPSC לתכנות מחדש בצורה נכונה על ידי צביעה חיה עם Tra למוצרי 1-81 נוגדנים.

בחירה בידוד מושבות של בתאי גזע pluripotent מושרה לתכנות מחדש של Fibroblasts למבוגרים

אנו מתארים פרוטוקול לבידוד ותרבית תאי אפיתל מי שפיר אנושיים (hAECs) באמצעות ריאגנטים ללא מוצרים מן החי בהתאם להנחיות הנוכחיות של תנאי ייצור נאותים (cGMP).

בידוד, Cryopreservation ותרבות של תאי אפיתל amnion אדם ליישומים קליניים

כתב יד זה מספק נוהל שלב אחר שלב לגזירה ותחזוקה של קרטינוציטים אנושיים משיער מרוט ויצירת תאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים ללא אינטגרציה (hiPSCs) על ידי וקטורים אפיזומליים.

דור של תאי גזע האינטגרציה נטול האדם המושרה pluripotent שימוש קרטינוציטים נגזר שיער

פרוטוקול זה מספק דרך פשוטה ויעילה להפצת תאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים (hPSCs) באמצעות מדיה מותנית בלבד שמקורה בשליה האנושית בצלחת מצופה ג'לטין ללא תוספת אקסוגנית נוספת או שכבות סינתטיות ספציפיות ל-hPSC.

תרבות דגם חדשני לpluripotent אדם תאי גזע רביה בטין במדיה מזגן שליה

העור האנושי פועל כשורה הראשונה של הגנה מפני הסביבה החיצונית. אנו מציגים שיטה לבודד את ראשי keratinocytes האדם מן העור למבוגרים. Keratinocytes מבודדים אלה שימושיים רבים setups ניסיוני, הם מודל המתאים מאוד ללמוד המנגנונים המולקולריים ב ביולוגיה עורית במבחנה.

דור, Culturing של ראשי Keratinocytes האדם מן העור למבוגרים

פרוטוקול מוצג להכין hydrogels אסיד פוליוויניל אלכוהול-co-itaconic עם נוקשות בדרגות שונות, אשר היו הושתל עם ובלי oligopeptides, לחקור את השפעת הנוקשות של biomaterials על בידול והתפשטות תאי גזע. הנוקשות של hydrogels היה בשליטת הזמן crosslinking.

התרבות תאי גזע Pluripotent אנושי על פוליויניל אלכוהול-Co-Itaconic Hydrogels חומצה עם קשיות שונות בתנאים קסנו-חופשית

פרוטוקול זה מאפשר שמירה על תאי גזע המטטופיאטיים אנושיים רגיעה במבחנה על ידי חיקוי microenvironment מח העצם באמצעות חומצות שומן בשפע, כולסטרול, ריכוזים נמוכים יותר של ציטוקינים, והיפוקסיה.

שיטת תרבות לשמירה על תאי גזע ההמטוטופיאטיים האנושיים

הפרוטוקול הנוכחי מפרט שלבים לאיתור תאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים (iPSC) מתאי דם מונו-גרעיניים היקפיים (PBMCs) של דגימות מטופלים, שקשה היה לתכנת מחדש בהתאם להוראות היצרן. פרוטוקול זה ייחודי לדגימות שכבת באפי קפואה, אך ניתן ליישמו גם לתכנות מחדש של PBMCs מטוהרים.

תכנות מחדש של קווי תאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים מדגימות מעילי באפי קפוא

למדו את פרוטוקול ההקפאה וההפשרה של תאי גזע עובריים אנושיים HuES לצורך מחקר בתחומי הנוירוביולוגיה והביולוגיה ההתפתחותית. השיטה מבטיחה שכפוליות ואמינות בתוצאות הניסוי.

ES תאים אנושיים: תרבות החל מ תאים קפואים

גלה סרטונים נוספים