Name: טכניקה אוסף טורי של הנוזל השדרתי מן ציסטרנה מגנה על עכבר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-11-10T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 8 s
Description: למדו טכניקה משופרת לאיסוף טורי של נוזל שדרתי מצ'יסטרנה מגנה בעכברים טרנסגניים לחקר מחלת אלצהיימר. שיטה זו מאפשרת מדידה מדויקת של רמות Aβ וטאו לאורך זמן ותומכת במחקרים לוואליים של התקדמות המחלה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

העבודה שלנו היא נתמכת על ידי NIH מענקים NS048447 ו AG017216to KD. לי ליו רוצה להודות לד&quot;ר הייקי Tanila (מאוניברסיטת קופיו, Kuopio, פינלנד) על הפיקוח שלו ואת התמיכה במהלך הפיתוח של הפרוטוקול המקורי.

משיכת צינור זכוכית נימי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צינור זכוכית נימי היא לרכוש את המכשיר סאטר Inc (בורוסיליקט זכוכית, B100-75-10). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך את צינורות נימי על סאטר P-87 Flaming micropipette חולץ, עם מדד חום להגדיר 300 ומדד הלחץ נקבע על 330. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חתוך את קצה צינור זכוכית נימי במספריים, כך קצה קוני בעל קוטר פנימי של כ - 0.5 מ"מ. </li></ol> צ'יסטרנה magna לנקב טכניקה CSF דגימות CSF לקוחים צ'יסטרנה magna (איור 1) בשיטה התפרסם בעבר 1. <img src="/files/ftp_upload/old/960_2008_10_13_2/960_Figure-01.png" alt="דיאגרמת אנטומיה של המוח: המוח הקטן, ציסטרנה מגנה, קליפת המוח, תוויות גזע המוח." width="432" height="184" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="איור 1"> איור 1 1. עכברים הם anesthesized ידי קטמין (100mg/kg) ו xylazine (10mg/kg), intraperitoneally מנוהל. במהלך תקופה של אינדוקציה הרדמה, העכברים מוחזקים 37 מעלות צלסיוס חממה. 2. העור של הצוואר הוא מגולח, ואת העכבר ממוקם אז נוטה על המכשיר stereotaxic עם מגע ישיר של כרית חימום. בדיקה רקטלית טמפרטורה מוכנס לתוך פי הטבעת, כך החום המיוצר על ידי כרית חימום מותאם בתגובה לשינויים בטמפרטורת הגוף. ראש מאובטח עם מתאמי הראש. האתר כירורגית הוא ניקה עם יוד povidone 10%, ואחריו אתנול 7 0% (חוזר 3 פעמים), וכן חתך sagittal של העור נעשה נחות העורף. 3. תחת המיקרוסקופ לנתיחה, הרקמה התת עורית והשרירים (מ biventer cervicis ומ rectus capitis dorsalis הגדולות) מופרדים באמצעות דיסקציה קהה עם מלקחיים. צמד של microretractors משמש להחזיק את השרירים בנפרד. 4. העכבר הוא הניח כך שהראש יוצר זווית כמעט 135 o עם הגוף. 5. תחת המיקרוסקופ לנתיחה, מאטר הדורה של צ'יסטרנה magna מופיע משולש הפוך נוצצים ברור שדרכו הלשד המוארך וכלי הדם הגדולים (arteria spinalis dorsalis), ואת החלל CSF גלויים (איור 2). <img src="/files/ftp_upload/old/960_2008_10_13_3/960_Figure-02.png" alt="הדגמת אנטומיה כירורגית; הליך דיסקציה; חשיפה לרקמות; למטרות חינוכיות." width="304" height="307" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="איור 2"> איור 2 6. מאטר הדורה נמחקת יבש עם מטלית כותנה סטרילי. לחדור לתוך צינור נימי citerna magna דרך מאטר דורה, לרוחב spinalis dorsalis arteria (איור 2). בעקבות שינוי ניכר התנגדות החדרת צינור נימי, CSF זורם לתוך צינור נימי. 7. הסר בזהירות את צינור נימי, ולחבר אותו מזרק 3 מ"ל דרך צינורות פוליאתילן בעל קוטר 1 מ"מ פנימי. להזריק את CSF לתוך צינור מראש המסומנים Eppendorf 0.5 מ"ל, ולהקפיא את הצינור מיד על קרח יבש ולאחר מכן להעביר אותו למקפיא -80 מעלות צלזיוס. 8. CSF לאחר הדגימה, את השרירים מחדש מיושר, והעור הוא sutured (4-0, Ethicon, חברת Johnson &amp; Johnson). אודות 1 מ"ל של 0.9% NaCl מוזרק מתחת לעור כדי למנוע דה הידרציה. העכבר הוא שמר על האינקובטור כדי לשמור על טמפרטורת הגוף עד שהוא מתאושש; את משקל העכבר מנוטר 1 יום, 1 שבוע לאחר הניתוח. תוצאות ודיון אנו תיאר פרוטוקול אמין הדגימה הסידורי של CSF מעכברים ללא זיהום פלזמה לזיהוי. 1. ההליך כולו אורך בדרך כלל 10 דקות לכל עכבר (כולל הרדמה). נפח CSF שהושגו תלויה זנים העכבר. בעכברים PS / APP Tg כפול השתמשנו 2, הנפח הממוצע הוא כ - 5 μl (3-7 μl), ואילו (JNPL3) עכברים P301L 3 נותן תשואה של כ μl μl-15 10. עבור דגימה סדרתי, לכל היותר 7-8 μl יכול להילקח בבטחה כל פעם בהפרש של 2-3 חודשים. 2. במהלך הניתוח, חשוב למקם את הראש ואת הגוף של העכבר כראוי על המסגרת stereotaxic כך מאטר הדורה של צ'יסטרנה magna יכולים להיחשף מספיק. בזהירות למנוע את כלי הדם, כאשר חודר מאטר הדורה עם צינור נימי על מנת למנוע זיהום של חלבונים פלזמה, אשר ניתן לנטר במדגם CSF על ידי immunoblotting עבור ApoB 4. 3. צמצום נזק לרקמות במהלך הניתוח כל חשוב, כמו conglutination רקמות יכולים להגדיל את הקושי על ידי דימום predisposing הדגימה הבאה. 4. טמפרטורת הגוף צריך להיות מטופח במהלך הניתוח כי היפותרמיה הנגרמת על ידי הרדמה יכולים להשפיע משמעותית על רמות טאו phosphorylated במוח במהירות רבה 5. 5. ELISA Ab פרוטוקול נוגדנים השתמשנו תוארו בפירוט Refolo et al. 6. שני μl של CSF מעכברים PS / APP ייתן תוצאות משביעות רצון כאשר בדילול 1:50-1:60. עבור ELISA טאו, 4-5 CSF μl מ P301L (JNPL3) בעכברים יהיה מספיק עבורזיהוי מוחלט של טאו, או טאו זרחן ylated ב תראונין 231 (ערכות נרכשים מן המקור-Bio). 6. טכניקה זו ניתן ליישם מודלים העכבר אחרים של מחלות נוירולוגיות, אשר נפח קטן של CSF היא משביעת רצון עבור מבחני הרצוי.

<ol><li>Liu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+observation+on+CSF+Abeta42+levels+in+young+to+middle-aged+amyloid+precursor+protein%2Fpresenilin-1+doubly+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Longitudinal observation on CSF Abeta42 levels in young to middle-aged amyloid precursor protein/presenilin-1 doubly transgenic mice.</a> Neurobiol Dis. 17, 516- (2004).</li>
<li>Holcomb, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+Alzheimer-type+phenotype+in+transgenic+mice+carrying+both+mutant+amyloid+precursor+protein+and+presenilin+1+transgenes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Accelerated Alzheimer-type phenotype in transgenic mice carrying both mutant amyloid precursor protein and presenilin 1 transgenes.</a> Nat Med. 4, 97(1998).</li>
<li>Lewis, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurofibrillary+tangles%2C+amyotrophy+and+progressive+motor+disturbance+in+mice+expressing+mutant+%28P301L%29+tau+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Neurofibrillary tangles, amyotrophy and progressive motor disturbance in mice expressing mutant (P301L) tau protein.</a> Nat Genet. 25, 402- (2000).</li>
<li>DeMattos, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plaque-associated+disruption+of+CSF+and+plasma+amyloid-beta+%28Abeta%29+equilibrium+in+a+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Plaque-associated disruption of CSF and plasma amyloid-beta (Abeta) equilibrium in a mouse model of Alzheimer's disease.</a> J Neurochem. 81, 229(2002).</li>
<li>Planel, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anesthesia+leads+to+tau+hyperphosphorylation+through+inhibition+of+phosphatase+activity+by+hypothermia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Anesthesia leads to tau hyperphosphorylation through inhibition of phosphatase activity by hypothermia.</a> J Neurosci. 27, 3090(2007).</li>
<li>Refolo, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cholesterol-lowering+drug+reduces+beta-amyloid+pathology+in+a+transgenic+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">A cholesterol-lowering drug reduces beta-amyloid pathology in a transgenic mouse model of Alzheimer's disease.</a> Neurobiol Dis. 8, 890(2001).</li>
</ol>

אנו תיאר פרוטוקול אמין הדגימה הסידורי של CSF מעכברים ללא זיהום פלזמה לזיהוי. 1. ההליך כולו אורך בדרך כלל 10 דקות לכל עכבר (כולל הרדמה). נפח CSF שהושגו תלויה זנים העכבר. בעכברים PS / APP Tg כפול אנו used2, הנפח הממוצע הוא כ - 5 μl (3-7 μl), ואילו (JNPL3) עכברים P301L 3 נותן תשואה של כ - 10 μl μl-15. עבור דגימה סדרתי, לכל היותר 7-8 μl יכול להילקח בבטחה כל פעם בהפרש של 2-3 חודשים. 2. במהלך הניתוח, חשוב למקם את...

טכניקה אוסף טורי של הנוזל השדרתי מן צ&#39;יסטרנה מגנה על עכבר

A Technique for Serial Collection of Cerebrospinal Fluid from the Cisterna Magna in Mouse 

מחלת אלצהיימר (AD) היא מחלה ניוונית מתקדמת מאופיינת על ידי פתולוגית בתצהיר של תאי β עמילואיד פפטיד (Aβ) והצטברות intraneuronal של חלבון טאו hyperphosphorylated. בגלל נוזל המוח והשדרה (CSF) נמצא בקשר ישיר עם המרחב תאי המוח, הוא מספק השתקפות של שינויים ביוכימיים במוח בתגובה תהליכים פתולוגיים. CSF מחולים לספירה מראה ירידה בצורת חומצה אמינית 42 של Aβ (Aβ42), ועלייה טאו טאו סך hyperphosphorylated, אם כי המנגנונים האחראים שינויים אלה עדיין אינם מובנים במלואם. טראנסגנטי (TG) מודלים העכבר לספירה לספק הזדמנות מצוינת לחקור כיצד ומדוע רמות Aβ או טאו בשינוי CSF עם התקדמות המחלה. כאן, אנו מדגימים מעודן צ&#39;יסטרנה magna טכניקה לנקב הדגימה CSF מן העכבר. טכניקה זו מאפשרת דגימה עדין מאוד סדרתי דגימות CSF להיות המתקבל עכבר באותו חודש 2-3 במרווחים אשר מאוד מצמצם את ההשפעה של השתנות מבלבלים בין העכבר ברמות Aβ או טאו, כך שניתן לזהות שינויים עדינים לאורך זמן. בשילוב עם Aβ ו טאו ELISA, טכניקה זו יהיה שימושי עבור מחקרים שנועדו לבחון את היחס בין רמות של CSF Aβ42 ו טאו, חילוף החומרים שלהם במוח במודלים של העכבר לספירה. מחקרים בעכברים Tg יכול לספק אימות חשוב לגבי הפוטנציאל של Aβ CSF או רמות טאו לשמש סמנים ביולוגיים על התקדמות המחלה ניטור, כדי לפקח על ההשפעה של התערבויות טיפוליות. כמו עכברים אפשר להקריב את המוח ניתן לבחון שינויים ביוכימיים או היסטולוגית, המנגנונים שבבסיס השינויים CSF ניתן להעריך טוב יותר. נתונים אלה צפויים להיות אינפורמטיבי לפרשנות של שינויים CSF האדם לספירה.

טראנסגנטי (TG) מודלים העכבר לספירה לספק הזדמנות מצוינת לחקור כיצד ומדוע רמות Aβ או טאו בשינוי CSF התקדמות המחלה בחולים אנושיים. כאן, אנו מדגימים מעודן צ&#39;יסטרנה magna טכניקה לנקב הדגימה CSF סדרתי של העכבר.

מחלת אלצהיימר (AD) היא מחלה נוירודגנרטיבית פרוגרסיבית המאופיינת פתולוגית בשיקוע חוץ-תאי של &#946;-amyloid...

ההליך מתחיל בהרדמתו של העכבר ובהכנת אתר הניתוח. לאחר מכן, העכבר מונח במצב שכיבה על הבטן על המכשיר הסטריאוטקסי. חריץ סגיטלי בעור בוצע נחית לעורף, והרקמה התת-עורית ושרירי הצוואר הופרדו בעזרת הפרדה קהה לאורך קו האמצע.לאחר מכן, החלק האחורי של הגוף מונח כך שהגוף יוצר זווית של 135 מעלות ביחס לראש המקובע, הקפסולה של ה-cisterna magna נחודרת באמצעות הנימי זכוכית ונוזל ה-CSF נאסף. לאחר דגימת ה-CSF, השרירים מוחזרים למקומם והעור נתפר; כ-1 מיליליטר של תמיסת NaCl 0.9% מוזרקת תת-עורית כדי למנוע התייבשות, והעכבר נשמר בחום עד להחלמתו. שלום, שמי ליו מהמעבדה של ד"ר קארן דאף במכון The Top של אוניברסיטת קולומביה.היום אראה לכם כיצד לאסוף נוזל חוט שדרה (CSF) מה-cisterna magna של העכבר. באמצעות טכניקה זו, ניתן לאסוף דגימות CSF סדרתיות עד שלוש פעמים מאותו עכבר, במרווחים של חודשיים עד שלושה חודשים. במעבדה שלנו, אנו משתמשים בטכניקה זו כדי לקבוע את רמות ה-A beta או ה-tau ב-CSF בגילאים שונים של מודלים טרנסגניים של עכברים למחלת אלצהיימר, ואנו מקיימים קורלציה בין ערכים אלו לבין ערכים במוח.לבסוף, אנו מעוניינים לבחון את הפוטנציאל של רמות beta או tau ב-CSFA כסממנים ביולוגיים פוטנציאליים להתקדמות המחלה וכן עבור ניסויים טיפוליים בעכברים. אם כן, נתחיל. לצורך הליך זה, יש להכין קפילרות באמצעות מיקרו-פיפט פולארי.הנימים ש

a-technique-for-serial-collection-cerebrospinal-fluid-from-cisterna

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

מקור: Joshi, K., et al. גישה כירורגית סטריאוטקסית להזרקת מיקרו-גזע המוח הזנבי וחוט השדרה הצווארי העליון דרך ה-Cisterna Magna בעכברים. J. Vis. Exp. (2022)סרטון זה מדגים את הגישה הסטריאוטקסית של ציסטרנה מגנה לאספקה ממוקדת לגזע המוח ולחוט השדרה העליון. על ידי גישה למאגר המים המלא בנוזל השדרה, גישה זו מאפשרת הזרקות מדויקות לאזורים שקשה להגיע אליהם בשיטות סטריאוטקסיות סטנדרטיות.

גישת Stereotaxic Cisterna Magna לאספקה טיפולית במודל עכבר

מקור: Zamboni, M., et al., אינדוקציה של שינוי תאי לפטומנינגיאלי באמצעות הזרקה תוך-ציסטרנלית. J. Vis. Exp. (2020)סרטון זה מדגים את ההליך של העברת תרופה משרה לבור המים של עכבר מורדם. ההזרקה גורמת באופן סלקטיבי לביטוי סמן פלואורסצנטי בתאי פני המוח הנגישים באמצעות נוזל מוחי שדרתי, שאושר על ידי הדמיה פלואורסצנטית.

מתן תרופות ממוקד במודל עכבר באמצעות הזרקת Cisterna Magna

מקור: Xavier, A. L. R., et al. השתלת צינורית בבור המים של מכרסמים. J. Vis. Exp. (2018)סרטון זה מדגים את הליך השתלת צינורית בבור המים של עכבר מורדם. הטכניקה כוללת הנחיית צינורית המותקנת על מחט דרך הדורה לתוך הבור המשולש ההפוך ואבטחתה לאספקה ממוקדת לנוזל השדרה.

השתלת צינורית לתוך Cisterna Magna במודל עכבר

בסרטון זה אנו מתארים את ההליך להעברת תאים סרטניים שמקורם בבני אדם לתוך עצם העצם במוחו של עכבר. מודל העכבר האורתוטופי יכול לשמש לחקר התפשטות גרורתית של סרטן לקרומי המוח הגולגולתיים.

הזרקת Cisterna Magna כירורגית: שיטה למתן תאי גידול ישירות למערכת העצבים המרכזית של מודל Murine

מקור: Sweeney, A. M., et al. הדמיה in vivo של הובלת נוזל מוחי שדרתי דרך גולגולת העכבר השלמה באמצעות מקרוסקופיה פלואורסצנטית. J. Vis. Exp. (2019)סרטון זה מדגים את תהליך הדמיית זרימת נוזל המוח השדרתי (CSF) במוח עכבר באמצעות הדמיה פלואורסצנטית. עוקב פלואורסצנטי מוזרק לתוך בור המים (CM), ומאפשר לעקוב אחר תנועתו עם CSF דרך החללים התת-עכבישיים והפרי-וסקולריים. הדמיית זמן-lapse לוכדת את מסעו של העוקב, ומדגישה את התפשטותו לרקמת המוח דרך העורקים.

הדמיה in vivo של הובלת נוזל מוחי שדרתי במוח עכבר באמצעות מקרוסקופיה פלואורסצנטית

פרוטוקול זה מתאר שיטת משופרת עבור אוסף עשיר של נוזל מוחי שדרתי (CSF) עם שום זיהום מדם. עם אוסף מדגם גדול יותר, טוהר, ניתוחים נוספים ניתן לבצע באמצעות נוזל מוחי-שדרתי כדי לקדם את ההבנה שלנו של מחלות המשפיעות על המוח ואת חוט השדרה.

שיטה משופרת עבור אוסף של נוזל של עכברים מורדם

כאן נתאר פרוטוקול לבצע cisterna מגנה תעלות (CMc), דרך פולשנית כדי לספק קליעים נותבים, מצעים, מולקולות איתות לתוך נוזל מוחי שדרתי (CSF). CMc בשילוב עם שיטות הדמיה שונות, מאפשרת המערכת glymphatic CSF dynamics הערכה, וכן משלוח המוח ברוחב של תרכובות שונות.

השרשה בצינורית לתוך המלון Cisterna של מכרסמים

Transcranial הדמיה אופטית מאפשרת הדמיה בשדה רחב של הובלה נוזל מוחי שדרתי בקליפת עכברים חיים דרך הגולגולת שלם.

ב Vivo הדמיה של התחבורה נוזל שדרתי דרך הגולגולת העכבר ללא שינוי באמצעות זריחה מאקרוסקופיה

רמת החלבון של נוזל השדרה הגבוה יכול להיות תוצאה של דיפוזיה של חלבון פלזמה על פני מחסום דם-מוח שונה או סינתזה התוך. פרוטוקול בדיקה מיטבי מוצג במאמר זה, המסייע להפלות את שני המקרים ומספק מדידות כמותית של חלבונים מסונתז באופן פנימי.

מדידה כמותית של מתוך מסונתז חלבונים בעכברים

ניתוח סטריאוטקסי למיקוד אתרי מוח בעכברים כולל בדרך כלל גישה דרך עצמות הגולגולת ומונחה על ידי ציוני דרך בגולגולת. כאן אנו מתווים גישה סטריאוטקסית חלופית כדי להתמקד בגזע המוח הקאודלי ובחוט השדרה הצווארי העליון באמצעות ה-cisterna magna המסתמך על הדמיה ישירה של ציוני דרך של גזע המוח.

גישה כירורגית סטריאוטקסית למיקרו-איניג'קט גזע המוח הקאודלי וחוט השדרה הצווארי העליון באמצעות ציסטרנה מגנה בעכברים

כאן מוצג פרוטוקול להערכת כלי הלימפה של קרום המוח בעכברים (MLVs), הממלאים תפקיד חשוב במחלות נוירולוגיות מרובות. מטרת הפרוטוקול היא לספק שיטה משולבת המאפשרת הן הערכה פונקציונלית של ניקוז העוקבים והן אפיון מורפולוגי מפורט של רשת ה-MLV הגב.

פרוטוקול משולב להערכת לימפות מנינגיאל: הזרקת סיסטרנה מגנה, הדמיית בלוטות לימפה, כריתת מנינגיאל וצביעה שלמה

למדו טכניקה משופרת לאיסוף טורי של נוזל שדרתי מצ'יסטרנה מגנה בעכברים טרנסגניים לחקר מחלת אלצהיימר. שיטה זו מאפשרת מדידה מדויקת של רמות Aβ וטאו לאורך זמן ותומכת במחקרים לוואליים של התקדמות המחלה.

טכניקה אוסף טורי של הנוזל השדרתי מן צ'יסטרנה מגנה על עכבר

גלה סרטונים נוספים