Metodi elettrofisiologici per la registrazione Potenziali Synaptic dal NMJ Larve di Drosophila

Summary

Qui si descrivono i metodi elettrofisiologici per la misurazione della trasmissione sinaptica a livello della giunzione neuromuscolare larva di Drosophila. Rilascio evocato è iniziata artificialmente stimolando gli assoni dei motoneuroni, e la trasmissione attraverso il NMJ può essere misurata la risposta postsinaptica evocata nel muscolo.

Abstract

In questo video, si descrivono i metodi elettrofisiologici per la registrazione, la trasmissione sinaptica a livello della giunzione neuromuscolare (NMJ) larva di Drosophila. Il sistema larvale neuromuscolare è una sinapsi modello per lo studio della fisiologia e la neurotrasmissione sinaptica, ed è un valido strumento di ricerca che ha definito la genetica ed è accessibile alla manipolazione sperimentale. Larve possono essere sezionato per mostrare il corpo muro muscolatura, sistema nervoso centrale, e dei nervi periferici. I muscoli di Drosophila e il loro modello di innervazione sono ben caratterizzati e muscoli sono di facile accesso per la registrazione intracellulare. Singoli muscoli possono essere identificati dalla loro posizione e l'orientamento all'interno degli 8 segmenti addominali, ciascuno con 30 muscoli disposti in uno schema che si ripete in segmenti A2 - A7. Sezionato larve drosofila sono i muscoli sottili e individuali e fasci di assoni dei neuroni motori possono essere visualizzati con transilluminazione

Protocol

Prima di iniziare la preparazione:

• Vagando yhird instar Drosophila larve
• HL3.1 (Modificata emolinfa-like) soluzione
• Sylgard (gomma siliconica trasparente) dissezione piatti preparati in piccolo (35 x 10 mm) scatole Petri in plastica usando i metodi descritti da Brent e McCabe (2008) ^3.
• Tagliare perni dissezione breve
• Stimolare pipette elettrodo
• Pipette di registrazione Sharp

HL3 Soluzione:

1. Durante dissezioni ed esperimenti elettrofisiologici, larva sono immersi in HL3.1 soluzione ² che contiene (in mm): 70 NaCl, 5 KCl, 4 MgCl _2, ....

Discussion

I metodi descritti qui forniscono un modo relativamente rapido e ampio per rilevare i cambiamenti nella funzione sinaptica alla NMJ. La possibilità di effettuare registrazioni elettrofisiologiche su animali intatti in vivo, ed eseguire manipolazioni genetiche o farmacologiche, fanno Drosophila un modello animale ideale per indagare gli aspetti fisiologici e genetici della neurotrasmissione.

Dato che le cellule muscolari sono molto grandi, qualcuno potrebbe preferire di aggiungere un ulterior.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Piccole piastre di Petri (35 x 10 mm)	BD Biosciences	1008
SYLGARD 182 Kit di elastomeri siliconici	Dow Corning	3097366-1004
Microscopio da dissezione	Carl Zeiss, Inc.	475002-9902
Lampada per microscopio	Schott AG	KLI500
Perni di dissezione	Strumenti per la scienza fine	26002-10
software pClamp 9	Dispositivi molecolari	PCLAMP 9 STANDARD
Forbici per dissezione: Forbici a molla Vannas da 3 mm	Strumenti per scienze fini	15000-0
Dumont SS Pinze	Strumenti per scienze fini	11200-33
Dumont #5 Forceps	Fine Science Tools	11252-20
Capillari in vetro borosilicato a parete sottile, con filamento (1,0 mm, 4 pollici)	World Precision Instruments, Inc.	TW100F-4
Capillari in vetro borosilicato, con filamento (1,2 mm, 4 pollici)	World Precision Instruments, Inc.	1B120F-4
Estrattore per micropipette basato su laser Sutter Instrument	Co.	Modello P-2000
Lucidatrice per pipette	Narishige International	MF-83
Axon HS-2A stadio di testa	Dispositivi molecolari	Modello HS-2A
Micromanipolatori	Sutter Instrument Co.	MP-85
Axoclamp 2B amplificatore	Molecular Devices	AXOCLAMP 2B
Clampex Software	Molecular Devices	v 8.2.0.235
Mini software di analisi. v 6.0.3	Synaptosoft
Brownlee Amplificatore di precisione	Brownlee	Modello 410
NaCl	Baker/VWR	4058-01
KCl	Sigma-Aldrich	p-9333
NaHCO3	Sigma-Aldrich	s6297-1kg
Trelahose	Sigma-Aldrich	TO167
Saccarosio	Fisher Scientific	bp220-212
HEPES	Sigma-Aldrich	h-3375
MgCl-6H2O	Sigma-Aldrich	m2670-1kg
CaCl2	Fisher Scientific	c79-500
Master-8 Generatore di impulsi	AMPI
Tabella di vibrazione per l'elettrofisiologia impostata	Technical Manufacturing Corp.
			di Faraday