In questo video-articolo vi presentiamo un passo-passo dimostrazione su come raccogliere e crioconservare gli ovociti di criceto con elevate post-disgelo tassi di sopravvivenza. La stessa procedura può anche essere applicato con successo per congelare e scongelare embrioni di topo a diversi stadi di sviluppo preimpianto.
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Articolo metodologico
Raccolta e Crioconservazione degli ovociti e di embrioni di topo criceto
In questo articolo
Sommario
Abstract
Embrioni e ovociti crioconservati con successo sono stati più di 30 anni fa, quando Whittingham
Protocollo
La cura degli animali e le procedure sono state condotte secondo le linee guida e regolamenti approvati dal Comitato Etico per animali e la ricerca umana della Universitat Autònoma di Barcellona, in Spagna.
I. ovociti collezione
- Controllare e selezionare criceti femmina (Mesocricetus auratus; 8-12 settimana di età) del ceppo d'oro siriano per la presenza di uno scarico di spessore vaginale (scarica fase postovulatoria).
- Indurre femmine selezionati per superovulate mediante iniezione intraperitoneale di 40 UI di PMSG (Pregnant Mare Serum gonadotropina), seguita da 40 UI di hCG (gonadotropina corionica umana) 60 o....
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Discussione
Con questo protocollo e ovociti di criceto embrioni di topo possono essere crioconservati con successo. Una volta congelati, gli ovociti / embrioni possono essere conservati in serbatoi di azoto liquido a tempo indeterminato e recuperato in qualsiasi momento o luogo desiderato. Questo offre il vantaggio di avere campioni quasi pronto per l'uso in caso di necessità. D'altra parte, questo protocollo può essere utilizzato anche per generare criobanche embrione di ceppi di topi di valore (come linee transgeniche), come alternativa econo.......
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Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto dal Ministerio de Educación y spagnolo Ciencia (BIO 2006-11792) e la Generalitat de Catalunya (2005-SGR00437). Gli autori ringraziano Marc Puigcerver e Jonatan Lucas per la loro assistenza tecnica per la preparazione dei mezzi. Tutto il personale da d'Servei Estabulari è riconosciuto per la stabulazione degli animali, e soprattutto Juan Jose Martin e Javier Benito per il loro contributo supplementare a registrare parte di questo video. BCN è un collega del portoghese Fundação para a Ciência e Tecnologia e SG è un compagno dello spagnolo Ministerio de Educación y Ciencia.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti | |
|---|---|---|---|---|
| Nome del materiale | Tipo | Azienda | Numero di catalogo | Commento |
| Mini-cannette tipo francese 0,25 ml | Mini-tub | 13407/0010 | ||
| hCG | Farma-Lepori, Spagna | 749036.4 | ||
| Ialuronidasi | Sigma | H-3884 | ||
| Mezzo KSOM-H | Rif. [11] | |||
| Azoto liquido | Air Liquide | |||
| Tappi di plastica | Mini-tub | 19046 | ||
| PMSG | Intervet, Spagna | 1.614/8447 | ||
| Propilenglicole | Fluka | 82280 | ||
| Saccarosio | Merck | 107687 | ||
| Forbici chirurgiche | Aesculap | BC-060R; BG-061R | ||
| Termosaldatore | SIZ | 220 | ||
| Piastre di coltura da 35 e 90 mm | Nunc | 153066; 150350 | ||
| Provette da 10 ml | Greiner Bio-one | 163160 | ||
| Contenitore di azoto | MVE, Cryogenics | XC 43/28 | ||
| Congelatore programmabile | Planner Products Ltd. | Kryo-10 Series III | ||
| Pinze | Aesculap | BD-331R; BD-053R; OC-020R |
Riferimenti
- Whittingham, D. G., Leibo, S. P., Mazur, P. Survival of mouse embryos frozen to -196 and -269 °C. Science. 178, 411-414 (1972).
- Wilmut, I. The effect of cooling rate, warming rate, cryoprotective agent and stage of develo....
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Ristampe e permessi
