In questo articolo vi presentiamo un protocollo generale per la misurazione della durata di nematodi mantenuto su un supporto solido con UV ucciso cibo batterica.
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Articolo metodologico
Misura Caenorhabditis elegans Life Span su terreni solidi
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'invecchiamento è un processo degenerativo caratterizzato da un progressivo deterioramento delle componenti cellulari e gli organelli con conseguente mortalità. Il nematode
Protocollo
Parte 1: Preparare nematode crescita media (NGM) piastre
Questa sezione descrive la preparazione dei piatti NGM solido per l'uso nella sperimentazione durata della vita. Un esperimento di base durata della vita richiede due tipi di piastre: piastre NGM standard, che non contengono additivi, e Amp / FUDR piatti, che hanno entrambi ampicillina (Amp) e fluorodeoxyuridine (FUDR) aggiunto al NGM. L'ampicillina è usata per prevenire la contaminazione batterica stranieri. FUDR inibisce la divisione cellulare, riduce la produzione di uova, e previene le uova da cova. L'uso di FUDR per l'analisi longevità non influisce durata vita adulta ed elimina ....
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Discussione
Il controllo genetico della longevità è stato studiato estensivamente in C. elegans, in gran parte dovuto alla facilità e rapidità con cui durata può essere determinata. Il protocollo descritto in questo articolo descrive un quadro di base per ottenere dati riproducibili durata della vita in C. elegans e può essere applicato anche alle specie relatednematode 2. Facendo alcune modifiche semplici queste procedure possono essere adattati per misurare la durata della vita sotto una varietà di co.......
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Ringraziamenti
Questo lavoro è stato supportato da una Glenn / AFAR scoperte nel Premio Gerontologia e NIH di Grant 1R01AG031108-01 a MKGS è supportato dal NIH formazione concedere P30AG013280. MK è una Ellison Medical Foundation Scholar Nuove invecchiamento.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti | |
|---|---|---|---|---|
| Agar | Reagente | Fisher Scientific | DF0145-17-0 (214530) | |
| Ampicillina | Reagente | MidSci | 0339 | |
| BactoTryptone | Reagente | Fisher Scientific | DF0123-17-3 (211705) | |
| BactoPeptone | Reagente | Fisher Scientific | DF0118-17-0 (211677) | |
| CaCl2 | Reagente | Fisher Scientific | NC9699248 (1332-01) | |
| Carbenicillina | Reagente | Gold Biotechnology | C0109 | |
| Colesterolo | Reagente | Sigma-Aldrich | C75209 | |
| Fluorodesossiuridina (FUDR) | Reagente | Sigma-Aldrich | F0503 | |
| Isopropilico β-d-Tiogalattopiranoside (IPTG) | Reagente | Gold Biotechnology | I2481C5 | |
| KPi dibasico | Reagente | Fisher Scientific | 5087862 (3252-01) | |
| KPi monobasico | Reagente | Fisher Scientific | 5087861 (3246-01) | |
| MgSO₄4 | Reagente | Fisher Scientific | NC9561800 (2500-01) | |
| NaCl | Reagente | Fisher Scientific | S251 | |
| Tris | Reagente | Sigma-Aldrich | T1503 | |
| Estratto di lievito | Reagente | Fisher Scientific | DF0886-17-0 (288620) |
Riferimenti
- Wood, W. B. The Nematode Caenorhabditis elegans. Wood, W. B. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, NY. 1-16 (1988).
- Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. Dietary restriction by bacterial deprivation increases life span in wild-derived nematodes. Exp Gerontol. 43, 130-135 (2008).....
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Ristampe e permessi
