Invecchiamento cronologico di lievito si riferisce alla perdita di vitalità cellulare associato con il tempo in fase stazionaria. Qui si descrivono un elevato throughput metodo per determinare quantitativamente la durata della vita cronologico lievito.
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Articolo metodologico
Quantificare cronologica Span lievito Life di conseguenza di cellule invecchiate
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il lievito in erba
Protocollo
Parte 1: Preparazione delle colture invecchiamento
- Ceppi striscia di interesse da parte scorte congelate su piastre di agar YEPD (1 estratto di lievito%, 2% bacto-peptone, 2% agar, 2% di glucosio).
- Incubare le cellule a 30 ˚ C per 48 ore o fino a singole colonie appaiono.
- Scegli singole colonie e inoculare in 5 ml di liquido YEPD (1 estratto di lievito%, 2% bacto-peptone, 2% di glucosio) in provetta.
- Grow culture notte a 30 ˚ C, mantenendo costante agitazione utilizzando uno shaker o Rullo.
- Inoculare 5 ml di sintesi completa (SC), medio (Tabella 1) con 50 microlitri della cultura durante la notte. Generalmente tre cu....
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Discussione
L'high-throughput vita saggio arco cronologico qui descritto è un metodo efficace per quantificare il potenziale di invecchiamento di un gran numero di ceppi con elevata accuratezza e precisione. L'anticipo principale di questo metodo rispetto ai metodi classici per stabilire la sopravvivenza contando unità formanti colonie (ad esempio vedi 3) è l'uso di un dispositivo di lettura shaker / incubatore / piastra, come la macchina Bioscreen C MBR di ottenere alta risoluzione curve di crescita a ogni e.......
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Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto da NIH di Grant 1R21AG031965-01A1. MK è una Ellison Medical Foundation Scholar Nuove invecchiamento.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti | |
|---|---|---|---|---|
| Bacto Peptone | Reagente | BD Biosciences | 211677 | |
| Estratto di lievito Bacto | Reagente | BD Biosciences | 288620 | |
| Agar Difco | Reagente | BD Biosciences | 214530 | |
| Base di azoto per lieviti senza A.A. e A.S. | Reagente | MidSci | J630-500G | |
| Aminoacidi | Reagente | Sigma-Aldrich | ||
| Solfato di ammonio | Reagente | Spectrum | AM185 | |
| Destrosio | Reagente | Fisher Scientific | D16-10 | |
| Apparecchio Bioscreen C MBR | Strumento | Growth Curves USA | 5101370 | |
| Piastra Honeycomb da 100 pozzetti Bioscreen | Strumento | Growth Curves USA | 9502550 |
Riferimenti
- Steinkraus, K. A., Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. Replicative aging in yeast: the means to the end. Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 29(2008).
- Kaeberlein, M. Handbook of models for human aging. Conn, P. M. , Elsevier Press. Boston. 109(2006).
- Fabrizio, P., Longo, V. D.
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Ristampe e permessi
