Gli studi genetici nel lievito può essere impiegato per studiare le funzioni cellulari e molecolari dei geni umani nel metabolismo del DNA cellulare. I metodi sono descritti per la caratterizzazione genetica della persona umana WRN Prodotto del gene difettoso nella sindrome di invecchiamento precoce disordine Werner nel funzionalmente percorsi conservate usando lievito come sistema modello trattabili.
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Articolo metodologico
Studi genetici di proteine umane di riparazione del DNA Utilizzando lievito come sistema modello
In questo articolo
Sommario
Abstract
Comprendere il ruolo delle proteine di riparazione del DNA umano nei percorsi genetica è una sfida formidabile per molti ricercatori. Studi genetici nei sistemi di mammiferi sono stati limitati a causa della mancanza di strumenti facilmente reperibili anche definito le linee di cellule mutanti genetici, sistemi di espressione normativi e appropriati marcatori selezionabili. Per aggirare queste difficoltà, sistemi modello genetico in eucarioti inferiori sono diventati una scelta interessante per lo studio delle proteine DNA funzionalmente conservato riparazione e percorsi. Abbiamo sviluppato un sistema di lievito modello per studiare le funzioni mal definiti genetici della sindrome di Werner elicasi-nucleasi (
Protocollo
1. Ceppi di lievito
I ceppi di tipo selvaggio SGS1 TOP3 (WT; W303-1A, genotipo, MAT uno ade2-1 LCan-100 his3-11, 15 leu2-3, 112 TRPL-l ura3-1) [2], un sgs1 mutante (W1292-3C ; genotipo MAT uno SUP4-o:: URA3 sgs1-25 ade2-1 CAN1-100 his3-11, 15 leu2-3, 112 TRP1-1 ura3-1 rad5-535) ed una top3 sgs1 mutante (W1058-11C, genotipo, MAT uno SUP4-o:: URA3 sgs1-25 top3-2:: HIS3 ade2-1 CAN1-100 his3-11, 15 leu2-3, 112 TRP1-1 ura3-1 rad5-535) sono stati caratterizzati [3] e sono stati gentilmente forniti dal Dr....
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Discussione
Uno dei punti di forza di usare lievito come sistema modello è la disponibilità di mutanti nella replicazione del DNA definiti e meccanismi di riparazione che si conservano tra il lievito e gli esseri umani. Ulteriore selezione dei trasformanti ospitare i geni specifici è facile e affidabile come i ceppi mutanti di laboratorio sono auxotrophic e vettori con marcatori auxotrophic sono facilmente disponibili. L'utilizzo di questi vettori l'espressione di prodotti genici possono essere regolati ponendoli sotto il c.......
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Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto in pieno dal programma di ricerca intramurale del NIH, National Institute on Aging. Ringraziamo il Dott. Rodney Rothstein (Columbia University) per i ceppi di lievito e il Dr. Brad Johnson (University of Pennsylvania School of Medicine, Philadelphia, Pennsylvania) per l'espressione SGS1 plasmide.
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Riferimenti
- Aggarwal, M., Brosh, R. M. Jr WRN helicase defective in the premature aging disorder Werner Syndrome genetically interacts with Topoisomerase 3 and restores the top3 slow growth phenotype of sgs1 top3. Aging. 1, 219-233 (2009).
- Gangloff, S., McDonald, J. P., Bendixen, C., Arthur, L., Rothstein, R.
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Ristampe e permessi
