Qui vi mostriamo come fare retro-orbitale iniezione in zebrafish adulti.
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Articolo metodologico
Retro-orbitale iniezione in Zebrafish adulti
In questo articolo
Sommario
Abstract
Trattamento farmacologico degli animali tutto è uno strumento essenziale in qualsiasi sistema modello per studi di genetica e chimica farmacologica. Per via endovenosa (ev) è spesso la forma più efficace e non invasiva di consegna di un agente di interesse. Nel pesce zebra (
Protocollo
Parte 1. Preparazione del materiale di iniezione
- Tg (globina: GFP) celle:
- Bleed pesce adulto donatore utilizzando punta della pipetta 10ul rivestito in eparina (1unit/ul) a pescare puntura dietro branchia.
- Aspirare globuli rossi e dispensare nel buffer di cella (0.9x PBS + 5% FBS + 1% Pen / Strep).
- Cellula sospensione filtro su mesh 40uM e determinare la concentrazione di cellule utilizzando emocitometro come precedentemente descritto da LeBlanc et al.
- Spin down e risospendere in buffer cella a concentrazione desiderata in modo tale che il volume di iniezione finale non è più di 5UL. Qui iniettare 1,5-200000....
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Discussione
Retro-orbitale iniezione in zebrafish adulto offre la massima efficienza della consegna del materiale iniettato alla circolazione sanguigna con la più bassa incidenza di mortalità. A causa della natura del punto di iniezione, la puntura sembra guarire in fretta, diminuendo l'insorgenza di infezioni e la quantità di perdita di sangue. Il sito può anche essere iniettato ripetutamente nel corso di un breve periodo di tempo per iniezioni giornaliere di farmaci, per esempio.
Grandi quantità d.......
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Ringraziamenti
Questo lavoro è supportato da Howard Hughes Medical Institute e una borsa di studio del NIH per lo studio della ematopoiesi embrionale.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Sale sodico di eparina da mucosa intestinale suina | Sigma-Aldrich | 2106 | Vial prepesato di 300 unità USP |
| Tricaine-S | Western Chemical | MS-222 | |
| Dulbecco’s Soluzione salina tamponata al fosfato | Invitrogen | 14190-144 | |
| Destrano, Texas Red® | Molecular Probes, Life Technologies | D1830 | |
| E3 | 5 mM NaCl 0,17 mM KCl 0,33 mM CaCl2 0,33 mM MgSO₄2 | ||
| Siringa microlitrica | Hamilton Co | 80300 | 701N 10 µL SYR (26s/2”/2) |
Riferimenti
- Steel, C. D., Stephens, A. L., Hahto, S. M., Singletary, S. J., Ciavarra, R. P. Comparison of the lateral tail vein and the retro-orbital venous sinus as route of intravenous drug delivery in a transgenic mouse model. Lab Animal. 37, 26-32 (2008).
- Pinkerton, W., Webber, M.
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Ristampe e permessi
